王亞恒,姚寧,王龍,石巧巧,白吉慶,王小平
(陜西中醫(yī)藥大學 藥學院,陜西 咸陽 712046)
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連翹葉提取工藝優(yōu)選
王亞恒,姚寧,王龍,石巧巧,白吉慶,王小平
(陜西中醫(yī)藥大學 藥學院,陜西 咸陽 712046)
目的 優(yōu)化連翹葉提取工藝,為制備連翹葉速溶茶奠定基礎。方法 采用正交試驗,考察乙醇體積分數(shù)、料液比、回流時間和回流次數(shù)4個因素對連翹苷、連翹酯苷A、蘆丁的質量分數(shù)和出膏率的影響。結果 優(yōu)選的工藝為:6倍量體積分數(shù)50%乙醇,提取2次,每次0.5 h;其中回流次數(shù)對連翹葉提取工藝的影響具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 優(yōu)化后的提取工藝穩(wěn)定可靠,可為進一步制備連翹葉速溶茶提供參考。
連翹葉; 提取工藝; 正交試驗; 連翹苷; 連翹酯苷A; 蘆??; 出膏率
連翹葉為木犀科植物連翹Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的干燥葉,夏、秋季采集,鮮用或曬干,具有清熱解毒之功效[1]。連翹葉與連翹果實化學成分基本相同[2],且有些成分的質量分數(shù)遠高于連翹果實[3],在我國河北、陜西和河南等地常作為保健茶使用,被認為具有良好的保健價值[4]。連翹葉資源豐富,具有抑菌、抗氧化、清除自由基、提高免疫功能、降壓和抗衰老等多種生物活性[5-8],具有廣闊的開發(fā)前景。本文以蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷的質量分數(shù)和出膏率作為評價指標,采用正交試驗優(yōu)選連翹葉提取工藝,為連翹葉速溶茶的開發(fā)奠定基礎。
BT125D型多量程電子分析天平(賽多利斯股份有限公司,d=0.1 mg,0.01 mg);DZF-6050B型真空干燥箱(上海齊欣科學儀器有限公司);戴安UltiMate3000全自動高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器);101-2型電熱鼓風干燥箱(北京科偉永興儀器設備有限公司)。
連翹葉采摘于陜西省洛南市,經陜西中醫(yī)藥大學白吉慶副教授鑒定為木犀科植物連翹Forsythiasuspense(Thunb.) Vahl的葉。連翹苷對照品(110821-200711)、連翹酯苷A對照品(111810-201001)、蘆丁對照品(100080-200707)均由中國生物制品檢定研究院提供。乙腈為色譜純,水為純化水,乙醇、冰醋酸等均為分析純。
2.1 連翹苷、蘆丁和連翹酯苷A質量分數(shù)的測定[9]
2.1.1 混合對照品溶液的制備 分別精密稱取連翹苷對照品、蘆丁對照品和連翹酯苷A對照品0.79、1.06、1.91 mg,置10 mL量瓶中,用甲醇溶解至刻度,即得。
2.1.2 供試品溶液的制備 取樣品粗粉5.0 g,精密稱定,分別加入精密稱定的相應溶劑,進行回流提取,提取液合并減壓濃縮后,置25 mL容量瓶中,加相應溶劑定容至刻度,搖勻,精密吸取1 mL置100 mL的量瓶中,加相應溶劑定容至刻度,搖勻,0.22 μm微孔濾膜濾過,即得供試品溶液。
2.1.3 色譜條件[9]以Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)為色譜柱,乙腈-質量分數(shù)0.4%冰醋酸溶液為流動相,梯度洗脫(0~8 min,10%~15%乙腈;8~18 min,15%~22%乙腈;18~25 min,22%~40%乙腈;25~30 min,40%~95%乙腈;30~35 min,95%~95%乙腈);流速為1.0 mL/min,檢測波長為277 nm,柱溫為25 ℃。理論塔板數(shù)按連翹酯苷A計算應不低于5 000。
2.1.4 標準曲線的繪制 分別精密吸取上述混合對照品溶液1、2、4、5、7、8、10 μL,注入液相色譜儀分析,每個體積進樣2 次,記錄各對照品的峰面積,以峰面積為縱坐標(Y),對照品質量(μg)為橫坐標(X)進行線性回歸,得回歸方程:Y蘆丁=11.38X-0.019 1,r=0.999 9;Y連翹酯苷A=8.919 1X-0.018 9,r=0.999 9;Y連翹苷=6.949 3X+0.037,r=0.999 9;結果表明蘆丁、連翹酯苷A和在連翹苷分別在0.106~1.06、0.191~1.91、0.079~0.79 μg范圍內線性關系良好。
2.1.5 方法學考察 精密度試驗3種成分峰面積的RSD值分別為1.28%、1.33%、1.24%,表明儀器精密度良好;穩(wěn)定性試驗3種成分峰面積的RSD值分別為1.65%、0.93%、0.88%,表明供試品溶液中待測成分在17 h內基本穩(wěn)定;重復性試驗3種成分質量分數(shù)的RSD值分別為2.92%、2.12%、2.99%,表明方法重復性良好;加樣回收試驗3種成分的平均回收率分別為99.45%、99.47%、98.87%,RSD值分別為2.26%、0.87%、1.23%;均符合方法學考察要求。
2.2 正交試驗的設計方法與結果
考察了乙醇體積分數(shù)(A)、回流時間(B)、回流次數(shù)(C)和料液比(D)4個因素,每個因素3個水平。因素水平表見表1。
表1 優(yōu)化連翹葉提取工藝的因素水平表
Table 1 Factors and levels of extraction technology ofForsythiasuspensaleaves
水平因素A乙醇體積分數(shù)/%B回流時間/hC回流次數(shù)D料液比/(g∶mL)1300.511∶62401.021∶83501.531∶10
以蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷的質量分數(shù)和出膏率為評價指標,取連翹葉粗粉5.0 g,精密稱定,按L9(34)正交試驗表安排試驗,并進行極差和方差分析,結果見表2~表4。
因單體成分連翹酯苷A的質量分數(shù)和出膏率的方差分析顯示各因素的影響均無統(tǒng)計學意義,因此只列出具有統(tǒng)計學意義的單體成分蘆丁和連翹苷的質量分數(shù)的方差分析結果,見表3~表4。由表3可見,影響蘆丁提取的因素主次順序為回流次數(shù)>料液比>乙醇體積分數(shù)>回流時間,其中回流次數(shù)對蘆丁提取的影響有統(tǒng)計學意義;由表4可見,影響連翹苷提取的因素主次順序為回流次數(shù)>乙醇體積分數(shù)>料液比>回流時間,其中回流次數(shù)和乙醇體積分數(shù)對連翹苷的提取有統(tǒng)計學意義。綜合考慮,確定較佳提取工藝為A3B1C2D1,即用6倍量的體積分數(shù)50%乙醇,回流2次,每次0.5 h。
2.3 驗證性試驗
取樣品粗粉 5.0 g(6份),精密稱定,按照最佳工藝A3B1C2D1進行回流提取,依法測定指標成分的質量分數(shù),蘆丁、連翹酯苷A、連翹苷峰面積RSD值為1.68%、1.85%、1.53%,質量分數(shù)平均值分別為11.12、17.69、9.93 mg/g,平均出膏率為30.76%。表明該工藝結果穩(wěn)定,重復性好。
表2 優(yōu)化連翹葉提取工藝的正交試驗結果Table 2 The results of orthogonal test of extraction technology of Forsythia suspensa leaves
表3 蘆丁質量分數(shù)的方差分析結果Table 3 ANOVA results of rutin
表4 連翹苷質量分數(shù)的方差分析結果Table 4 ANOVA results of phillyrin
本文對連翹葉提取工藝進行探究,優(yōu)選出較佳提取工藝,為制備連翹葉速溶茶奠定基礎?,F(xiàn)代研究表明蘆丁具有抑菌等生物活性[10];連翹苷、連翹酯苷具有抑菌、抗感染、抗氧化、清除自由基和抗衰老等活性[11-12],與連翹葉的功能主治一致,是連翹葉的主要有效成分,故選定上述3種成分和出膏率作為評價指標,對提取工藝進行多指標綜合評定。
本文以多個活性成分和出膏率為指標,優(yōu)化提取工藝,兼顧各指標的協(xié)同效應,較全面反映提取物有效成分的信息,符合中藥有效成分多樣性的特點。優(yōu)化的提取工藝結果穩(wěn)定可靠,為連翹葉速溶茶的制備奠定了基礎。
[1] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草第十六卷[M].上海:上海科技出版社,1999:157-159.
[2] 陳玲,李曉,李倩,等.連翹屬植物化學成分的研究進展[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2013,28(3):441-445.
[3] 張杲,李發(fā)榮,段飛,等.不同采收期連翹葉中連翹苷、連翹酯苷和蘆丁的含量測定[J].天然產物研究與開發(fā),2005,17(6):790-793.
[4] 張杲,王喆之,李法榮.連翹(Forsythiasuspense)葉藥用價值及藥用活性組分的初步研究[D].西安:陜西師范大學,2006.
[5] 薛愧玲,袁王俊.連翹葉的藥理研究綜述[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(5):1149-1150.
[6] 段飛,張雙民,楊建雄,等.連翹葉提取物抑菌作用的研究[J].西北藥學雜志,2005,20(2):66-67.
[7] 顏禮有,劉明娟,閆慧如,等.連翹苷抗小鼠衰老作用的研究[J].中國藥房,2015,26(1):37-39.
[8] 王燕,田粟.連翹不同部位和不同生長時期連翹葉抗氧化作用的比較與評價[D].石家莊:河北醫(yī)科大學,2011.
[9] 王芳,白吉慶,王小平,等.陰坡、陽坡連翹及連翹葉中不同成分含量的比較[J].中國現(xiàn)代中藥,2016,18(2):185-202.
[10] 王亞男.蘆丁對金黃色葡萄球菌Sortase A抑制作用的初步研究[D].長春:吉林大學,2013.
[11] 顏禮有.連翹苷和連翹酯苷對D-半乳糖致衰老小鼠保護作用的研究[D].西安:陜西師范大學,2014.
[12] 李雙,王東強,李志軍.連翹主要有效成分的提取與藥理作用連翹主要有效成分的提取與藥理作用[J].黑龍江中醫(yī)藥,2011,40(2):46-48.
(責任編輯:陳翔)
Optimization of extraction technology ofForsythiasuspensaleaves
WANG Yaheng,YAO Ning,WANG Long,SHI Qiaoqiao,BAI Jiqing,WANG Xiaoping
(SchoolofPharmacy,ShaanxiUniversityofChineseMedicine,Xianyang712046,China)
Objective To optimize the better extraction technology ofForsythiasuspenseleaves and lay the foundation for the preparation ofForsythiasuspenseleaves instant tea. Methods TheL9(34) orthogonal test was used to evaluate the effects of ethanol concentration,solid-liquid ratio,reflux time and reflux times for phillyrin,forsythoside A,rutin and the yield of dry extract. Results The optimal extraction process was as follows: 6 times the volume fraction of 50% ethanol,extracting 2 times,0.5 h for each time,and the extracting times had significant effect on the extraction technology ofForsythiasuspenseleaves. Conclusions The optimized extraction process was stable and reliable which could provide a reference for further preparation of instant tea leaf Forsythia.
Forsythiasuspensaleaves; extraction technology; orthogonal design; phillyrin; forsythosideA; rutin; yield of dry extract
2016-05-07
科技部項目(11C26216103652);工業(yè)和信息化部項目([2012]369號);陜西省科技廳項目(2014K14-01-01);2014年陜西省大學生創(chuàng)新訓練項目(1571);陜西省教育廳資助項目(2013JK0834)
王亞恒(1991—),男,2015級碩士研究生,Email:1160802809@qq.com;通信作者:王小平(1976—),女,博士,教授,碩士生導師,從事中藥質量評價及新藥開發(fā)研究,電話:029-38185165,Email:wangxiaoping323@126.com。
時間:2016-09-28 10:21
http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160928.1021.001.html
R284.2
A
1006-8783(2016)05-0586-03
10.16809/j.cnki.1006-8783.2016050701