模擬失重和噪聲對(duì)大鼠聽(tīng)功能及耳蝸Corti器損傷的協(xié)同作用*

吳瑋　陳娜　韓浩倫　王剛　王鴻南　周麗斌　李保衛(wèi)　丁瑞英

?

·實(shí)驗(yàn)研究·

模擬失重和噪聲對(duì)大鼠聽(tīng)功能及耳蝸Corti器損傷的協(xié)同作用*

吳瑋1陳娜1韓浩倫1王剛1王鴻南1周麗斌1李保衛(wèi)1丁瑞英1

【摘要】目的探討模擬失重和噪聲對(duì)大鼠聽(tīng)功能及耳蝸Corti器損傷的協(xié)同作用。 方法48只大鼠隨機(jī)分為空白組、失重組、噪聲組和失重+噪聲組，每組12只。失重組以Morey-Holton法模擬失重環(huán)境，噪聲組暴露的噪聲環(huán)境為模擬航天載人飛船內(nèi)復(fù)合噪聲，包括72±2 dB SPL的持續(xù)穩(wěn)態(tài)噪聲和160 dB SPL的脈沖噪聲，失重+噪聲組則同時(shí)暴露于上述失重及噪聲環(huán)境中，空白組常規(guī)飼養(yǎng)，不做任何處理。分別于暴露1周和2周后，每組隨機(jī)選出6只大鼠行ABR閾值檢測(cè)后取材行HE染色、免疫熒光(DAPI)染色及掃描電鏡觀察耳蝸的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果暴露2周后大鼠ABR閾值較暴露1周時(shí)升高，失重+噪聲組ABR閾值最高(P<0.01)，其次為噪聲組。HE染色示暴露1周和2周后除空白組外各組大鼠耳蝸Corti器均有不同程度的損傷，失重+噪聲組最嚴(yán)重。免疫熒光染色示暴露1周后大鼠耳蝸毛細(xì)胞死亡方式以腫脹壞死為主，失重+噪聲組最嚴(yán)重(腫脹率10%)，其次為噪聲組(腫脹率3.33%)；暴露2周后大鼠耳蝸外毛細(xì)胞以核缺失為主，失重+噪聲組缺失率最高(缺失率13.6%)，其次為噪聲組(缺失率12.7%)，失重組毛細(xì)胞缺失以內(nèi)毛細(xì)胞為主。 掃描電鏡示，失重+噪聲組毛細(xì)胞靜纖毛損傷最嚴(yán)重，其次為噪聲組，再次為失重組。結(jié)論模擬失重和噪聲環(huán)境對(duì)大鼠聽(tīng)功能的影響有協(xié)同作用，且這種協(xié)同作用對(duì)耳蝸Corti器有顯著的損傷作用。

【關(guān)鍵詞】模擬失重；噪聲；Corti器；聽(tīng)性腦干反應(yīng)

研究發(fā)現(xiàn)，飛行器內(nèi)噪聲是一個(gè)比較突出的危險(xiǎn)因素，可以造成飛行人員永久性的聽(tīng)力損傷[1，2]。在載人航天飛船中，不僅存在噪聲，失重也是很重要的一種持續(xù)存在的特殊狀態(tài)。失重也可以引起動(dòng)物聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)的損害，并且其與噪聲同時(shí)存在時(shí)，對(duì)聽(tīng)覺(jué)的影響更為明顯[3，4]，但損傷是由于兩者的協(xié)同還是簡(jiǎn)單的疊加作用尚不明確。為此本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)ABR閾值檢測(cè)、耳蝸形態(tài)學(xué)和毛細(xì)胞的免疫熒光、掃描電鏡觀察等，研究模擬失重和噪聲對(duì)大鼠聽(tīng)功能的影響及其對(duì)耳蝸Corti器的損傷，報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 選取健康雄性SD大鼠48只，體重190±10 g，由北京市興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供，耳廓反射靈敏，鼓膜標(biāo)志清晰，無(wú)強(qiáng)噪聲暴露及耳毒性藥物應(yīng)用史。實(shí)驗(yàn)前所有大鼠進(jìn)行聽(tīng)性腦干反應(yīng) (ABR) 閾值測(cè)試無(wú)明顯差異。隨機(jī)分為空白組、失重組、噪聲組和失重+噪聲組，每組12只(24耳)。失重組以持續(xù)頭低位尾吊Morey-Holton法[5]模擬失重環(huán)境，噪聲組暴露于模擬航天載人飛船內(nèi)復(fù)合噪聲環(huán)境，包括72±2 dB SPL的穩(wěn)定噪聲和160 dB SPL的脈沖噪聲，失重+噪聲組同時(shí)暴露于以上兩種環(huán)境，空白組不做任何處理。分別在暴露1周和2周后，每組隨機(jī)選取6只大鼠行ABR閾值，然后取耳蝸HE染色、免疫熒光染色、電鏡檢測(cè)觀察耳蝸的形態(tài)學(xué)變化。

1.2模擬失重方法 采用目前國(guó)際通用的頭低位模擬失重法(Morey-Holton法)[5]，尾部用膠帶纏于懸吊的鐵絲上，保持大鼠頭低位，后肢完全離地，前肢承擔(dān)部分身體重量，身體縱軸與水平面呈30o夾角，懸吊1周或者2周。懸吊期間保證動(dòng)物可以自由活動(dòng)與進(jìn)食。

1.3噪聲暴露方法 采用穩(wěn)態(tài)噪聲與脈沖噪聲的復(fù)合環(huán)境，穩(wěn)態(tài)噪聲由白噪聲信號(hào)發(fā)生器(UZ-3型)，經(jīng)均衡器(MEQ)，功率放大器(PA-1000)傳到揚(yáng)聲器(YZ20-7)，將揚(yáng)聲器放置于大鼠籠前部。穩(wěn)態(tài)噪聲聲強(qiáng)用BK2250手持式分析儀測(cè)量，測(cè)得其聲壓級(jí)為72±2 dB SPL，每天持續(xù)暴露8小時(shí)，暴露1周或2周后給予脈沖噪聲；脈沖噪聲由氣動(dòng)激波管產(chǎn)生傳到傳聲器(BK4136)，峰值聲壓級(jí)為160 dB SPL，有效持續(xù)時(shí)間為30 ms，3次，每次間隔為1 min。脈沖噪聲聲級(jí)由BK2209精密脈沖聲級(jí)計(jì)測(cè)量，用TDS2022數(shù)字示波器記錄波形。

1.4ABR閾值測(cè)試 所有大鼠在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行ABR閾值檢測(cè)，各組大鼠持續(xù)暴露于相應(yīng)環(huán)境1到2周后進(jìn)行ABR閾值測(cè)試，空白組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)1周或2周后行ABR測(cè)試。大鼠給予咪唑安定(80 mg/kg)和鹽酸賽拉嗪注射液(200 mg/kg)進(jìn)行肌肉注射麻醉，應(yīng)用聽(tīng)性腦干反應(yīng)儀在隔聲靜電屏蔽室內(nèi)檢測(cè)雙耳短聲誘發(fā)的ABR反應(yīng)閾值，顱頂為記錄電極，測(cè)試耳為參考電極，鼻尖處為地線。刺激強(qiáng)度為5～97 dB SPL，間隔5 dB(濾波帶寬80～3 000 Hz，疊加次數(shù)1 024 次，掃描10 ms)，以重復(fù)性好、比較穩(wěn)定的波Ⅲ判斷反應(yīng)閾值。測(cè)試及麻醉復(fù)蘇過(guò)程中保持環(huán)境溫度在38℃左右并用熱水瓶保持大鼠體溫恒定。

1.5動(dòng)物取材大鼠ABR閾值檢測(cè)完后隨即斷頭取其耳蝸，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別隨機(jī)選取2只(4耳)行HE染色，2只(4耳)行DAPI染色，2只(4耳)行電鏡觀察。

1.6HE染色 將耳蝸置于4%多聚甲醛液中，在解剖顯微鏡下摘除鐙骨，灌流4%多聚甲醛固定，4℃冰箱過(guò)夜后用10%EDTA脫鈣2周，物理法測(cè)定脫鈣終點(diǎn)。耳蝸石蠟包埋，包埋時(shí)蝸軸與切面平行，連續(xù)切片，片厚3～5 μm，行HE染色。

1.7基底膜鋪片及DAPI染色 取出4%多聚甲醛液中固定的耳蝸，于PBS溶液中在解剖顯微鏡下用游絲鑷剝除蓋膜、螺旋韌帶等部位，取出基底膜。將分離好的基底膜置于EP管中，PBS 漂洗、5%BSA 溶液常溫下封閉30分鐘， PBS 溶液漂洗后放入 4℃冰箱過(guò)夜。第二天取出標(biāo)本，所有操作均在避光條件下進(jìn)行，PBS 溶液漂洗后加入DAPI溶液反應(yīng)10分鐘，以PBS溶液漂洗3 次，每次5分鐘；將基底膜取出，平鋪于潔凈的載玻片上，滴加兩滴甘油，蓋上蓋玻片，將玻片置于共聚焦顯微鏡(Zeiss LSM 880)下，在60倍下觀察，DAPI激發(fā)波長(zhǎng)為405 nm，410～490 nm接收。實(shí)驗(yàn)中對(duì)所觀察區(qū)域的毛細(xì)胞進(jìn)行序列掃描，掃描層距設(shè)定為2.0 μm。

1.8掃描電鏡檢查 大鼠處死即刻取耳蝸，用2.5%戊二醛固定液進(jìn)行離體耳蝸灌注。固定4 h后，采用硬剝法暴露出基底膜。處理后的內(nèi)耳標(biāo)本進(jìn)行脫水、干燥、鍍金等處理。置于掃描電鏡(Hitachi S4800)下觀察，拍照。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，各組ABR閾值比較采用單因素方差分析和Post-Hoe方法聯(lián)合應(yīng)用，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1ABR閾值各組實(shí)驗(yàn)前ABR反應(yīng)閾值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。暴露1周大鼠的ABR反應(yīng)閾值較同等環(huán)境下暴露2周的大鼠低。暴露1周和2周后，空白組與噪聲組、失重+噪聲組，失重組與噪聲組、失重+噪聲組，噪聲組與失重+噪聲組之間均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，噪聲組、失重+噪聲組比空白組和失重組ABR閾值高(P<0.01)，失重+噪聲組比噪聲組ABR閾值高(P<0.01)(表1)。

(n=12耳)

注：*與空白組和失重組比較，P<0.01；△與噪聲組比較，P<0.01

2.2耳蝸HE染色觀察結(jié)果空白組大鼠耳蝸Corti器清晰，外毛細(xì)胞排列整齊且無(wú)明顯缺失(圖1a、1e)；暴露后各組大鼠均有不同程度的毛細(xì)胞缺失：失重組內(nèi)毛細(xì)胞缺失，螺旋器形狀改變(圖1b、1f)；噪聲組螺旋器萎縮，外毛細(xì)胞位置錯(cuò)亂，排列不齊，前庭膜向前庭階略突出(圖1c、1g)；失重+噪聲組螺旋器萎縮，外毛細(xì)胞排列不齊(圖1d)，暴露2周組大鼠耳蝸鼓階內(nèi)可見(jiàn)血性物(圖1h)。

2.3毛細(xì)胞核DAPI染色結(jié)果

2.3.1暴露1周后空白組內(nèi)外毛細(xì)胞排列整齊，無(wú)核異常(圖2a)；失重組內(nèi)毛細(xì)胞排列略雜亂但無(wú)明顯核異常(圖2b)；噪聲組內(nèi)外毛細(xì)胞排列雜亂，外毛細(xì)胞存在較多腫脹，腫脹率為3.33%，尤以最外層外毛細(xì)胞為重(圖2c)；失重+噪聲組外毛細(xì)胞排列紊亂，存在更多核腫脹，腫脹率為10%(圖2d)。噪聲組大鼠外毛細(xì)胞腫脹率明顯高于失重組和空白組(P<0.01)，失重+噪聲組大鼠外毛細(xì)胞腫脹率明顯高于其余三組(P<0.01)。

2.3.2暴露2周后空白組內(nèi)外毛細(xì)胞排列整齊，無(wú)核異常(圖3a)；失重組內(nèi)毛細(xì)胞存在核缺失，外毛細(xì)胞排列整齊且無(wú)明顯核異常(圖3b)；噪聲組毛細(xì)胞排列雜亂，外毛細(xì)胞存在核缺失，缺失率約為12.7%，尤以最外層外毛細(xì)胞為重(圖3c)；失重+噪聲組外毛細(xì)胞排列紊亂，存在更多核缺失，缺失率為13.6%，最外層毛細(xì)胞缺失最嚴(yán)重(圖3d)。噪聲組大鼠外毛細(xì)胞缺失率明顯高于失重組和空白組(P<0.01)，失重+噪聲組大鼠外毛細(xì)胞缺失率高于其余三組(P<0.05)。

2.4電鏡觀察結(jié)果空白組大鼠基底膜底回毛細(xì)胞纖毛呈V型排列整齊，完整清晰(圖4a、4e)；失重組大鼠基底膜底回靜纖毛輕度散亂，偶有融合現(xiàn)象，內(nèi)毛細(xì)胞纖毛倒伏伴有缺失，內(nèi)層外毛細(xì)胞偶有缺失，暴露2周時(shí)比暴露1周時(shí)損傷大(圖4b、4f)；噪聲組靜纖毛明顯散亂，內(nèi)毛細(xì)胞纖毛倒伏明顯，最外層外毛細(xì)胞部分缺失(圖4c、4g)；失重+噪聲組靜纖毛散亂且有倒伏，外毛細(xì)胞靜纖毛大片缺失，以最外層最為明顯，暴露2周時(shí)比暴露1周時(shí)損傷明顯(圖4d、4h)。

3討論

Roller[1]、Buckey[6]等認(rèn)為，噪聲是造成宇航員聽(tīng)損傷的主要原因，載人航天器中都持續(xù)存在高強(qiáng)度噪聲，嚴(yán)重影響著工作人員的身體健康，其中以聽(tīng)覺(jué)功能損傷最為嚴(yán)重。長(zhǎng)時(shí)間暴露于噪聲中可能導(dǎo)致緩慢的進(jìn)行性聽(tīng)損傷，其損傷程度與噪聲強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間等因素有關(guān)[7]。失重作為飛行過(guò)程中同樣持續(xù)存在的環(huán)境，對(duì)聽(tīng)力的損傷作用也不容忽視[8，9]。因此研究模擬失重和復(fù)合噪聲環(huán)境因素對(duì)聽(tīng)損傷的作用有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

本研究通過(guò)檢測(cè)ABR反應(yīng)閾值判斷模擬失重和復(fù)合噪聲對(duì)大鼠聽(tīng)功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，噪聲組、失重+噪聲組比空白組和失重組ABR閾值高(P<0.01)，失重+噪聲組比噪聲組ABR閾值高(P<0.01)?？瞻捉M與噪聲組、失重+噪聲組，失重組與噪聲組、失重+噪聲組，噪聲組與失重+噪聲組之間ABR反應(yīng)閾均有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)?？梢?jiàn)，單獨(dú)的模擬失重和單獨(dú)的復(fù)合噪聲對(duì)大鼠的聽(tīng)力均有影響，其中復(fù)合噪聲影響較大。而綜合模擬失重和復(fù)合噪聲雙重因素的失重+噪聲組ABR閾值變化更大(P<0.01)，且失重+噪聲組的ABR閾值并不是失重組和噪聲組ABR閾值的簡(jiǎn)單疊加，因此綜合因素對(duì)聽(tīng)力造成的影響不是失重和噪聲兩種因素的簡(jiǎn)單疊加，可能是兩種因素的協(xié)同作用。

Corti器是耳蝸的聽(tīng)覺(jué)感受器，位于基底膜上，由毛細(xì)胞和支持細(xì)胞組成。本研究形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模擬失重和復(fù)合噪聲對(duì)大鼠耳蝸毛細(xì)胞均有一定程度的損傷作用，主要表現(xiàn)在Corti器上。HE染色結(jié)果示暴露于失重和噪聲因素使得Corti器發(fā)生萎縮、紊亂。DAPI是一種特異性染料，能與DNA強(qiáng)力結(jié)合并區(qū)分凋亡和壞死細(xì)胞，凋亡細(xì)胞發(fā)生染色質(zhì)濃縮或核碎裂，染色后共聚焦顯微鏡下表現(xiàn)為胞核致密濃染或缺失，而壞死細(xì)胞表現(xiàn)為核腫脹，熒光顏色變淡。從文中毛細(xì)胞核的DAPI染色結(jié)果看，在復(fù)合噪聲環(huán)境下，外毛細(xì)胞較內(nèi)毛細(xì)胞更易受到損傷，損傷多發(fā)生于外毛細(xì)胞的最外層；而在單純的失重環(huán)境下，內(nèi)毛細(xì)胞更易發(fā)生缺失，與之前本課題組對(duì)豚鼠耳蝸的研究相符[4]。掃描電鏡觀察結(jié)果也支持以上結(jié)論：噪聲首先損傷Corti器的外毛細(xì)胞，可進(jìn)一步累及內(nèi)毛細(xì)胞，暴露1周后的大鼠耳蝸毛細(xì)胞損傷以腫脹為主，暴露2周后毛細(xì)胞損傷以核缺失為主，可見(jiàn)，暴露于失重+噪聲復(fù)合環(huán)境下毛細(xì)胞存在壞死和凋亡兩種死亡方式，而暴露1周后毛細(xì)胞死亡以腫脹壞死為主，此時(shí)可能存在核凋亡但未超過(guò)生理過(guò)程中的正常凋亡水平；暴露于失重+噪聲復(fù)合環(huán)境2周后出現(xiàn)明顯的毛細(xì)胞核缺失，此時(shí)核缺失為毛細(xì)胞的非正常死亡，可能是由于高于生理過(guò)程中正常的凋亡水平造成的，也可能與強(qiáng)噪聲暴露后核的直接崩解壞死有關(guān)。國(guó)外有研究證實(shí)噪聲性(105～115 dB SPL)聽(tīng)損傷與毛細(xì)胞的缺失密切相關(guān)，實(shí)驗(yàn)中受損的毛細(xì)胞可能直接崩解死亡[10]，本文結(jié)果與此相符。本實(shí)驗(yàn)中的形態(tài)學(xué)檢查與ABR閾值檢測(cè)結(jié)果相一致，因此，失重和噪聲均能造成毛細(xì)胞的非正常死亡，表現(xiàn)為核的腫脹或缺失。推測(cè)本研究中毛細(xì)胞的損傷主要由噪聲造成，失重使這種損傷更加嚴(yán)重，但毛細(xì)胞核的異常具體是由于凋亡還是壞死引起及凋亡的詳盡機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

圖1　各組大鼠暴露1周和2周后耳蝸HE染色圖片(HE×100)

圖2　各組大鼠暴露1周后毛細(xì)胞核的免疫熒光染色圖片(DAPI×60)　↓示毛細(xì)胞腫脹

圖3　各組大鼠暴露2周后毛細(xì)胞核的免疫熒光染色圖片(DAPI×60)↓示毛細(xì)胞缺失

圖4　各組大鼠Corti器底回電鏡結(jié)果

a～d分別為暴露1周的空白組、失重組、噪聲組和失重+噪聲組；e～h分別為暴露2周的空白組、失重組、噪聲組和失重+噪聲組

4參考文獻(xiàn)

1Roller CA, Clark JB. Short-duration space flight and hearing loss[J]. Otolaryngol Head Neck Surg, 2003, 129: 98.

2程浩, 徐怡萍, 李宏. 噪聲對(duì)飛行人員聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)影響的調(diào)查分析[J]. 中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué), 2011,20:6.

3吳瑋, 韓浩倫,王鴻南,等. 模擬失重條件下飛船內(nèi)噪聲對(duì)豚鼠耳蝸與功能的影響[J].中華耳科學(xué)雜志,2010,8:95.

4楊光華, 溫秀蘭, 王寶珍,等. 模擬失重 (HDT-30°) 和噪聲復(fù)合因素對(duì)大鼠神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫功能的影響[J]. 空間科學(xué)學(xué)報(bào), 1994,14:210.

5Morey-Holton ER, Globus RK. The hindlimb unloading rodentmodel: technical aspects[J]. J Appl Physiol, 2002,92:1367.

6Buckey JC, Musiek FE, Kline-Schoder R, et al. Hearing loss in space[J]. Aviat Space Environ Med,2001,72: 1121.

7楊建，劉博，韓德民. 航天性聽(tīng)損傷及其機(jī)制探討[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)耳鼻咽喉科學(xué)分冊(cè), 2004, 28:374.

8閻露,錢(qián)維權(quán),李道德．噪聲、模擬失重復(fù)合作用對(duì)豚鼠腦干聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位的影響(英)[J]. 航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程, 1994, 7(增刊)：s52.

9Sandler H, Vernikos J, Wegmann HM, et al. Introduction to counter measures：extended manned space flight[J]．Acta Astronaut，1995，35：247.

10Chen GD，F(xiàn)echter LD. The relationship between noise-induced hearing loss and hair cell loss in rats[J]．Hear Res，2003，177:81.

(2015-07-17收稿)

(本文編輯周濤)

The Synergistic Effects of Simulated Microgravity and Noise Exposure on Damage of Auditory Function and Corti Organs in Rat

Wu Wei, Chen Na, Han Haolun, Wang Gang, Wang Hongnan,Zhou Libin, Li Baowei, Ding Ruiying

(Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, 306thHospital of PLA, Beijing, 100010, China)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the synergistic effects of simulated microgravity and noise on the auditory functions and corti organs in rats. MethodsA total of 48 healthy rats were randomly divided into 4 groups (n=12)：control group (Group A), microgravity only group (Group B), noise only group (Group C) and microgravity+noise group (Group D). The microgravity environment was simulated by suspending the posterior limb using Morey-Holton method. The noise exposure was the simulation of the noise environment in spaceship including steady-state noise (72±2) dB SPL and impulse noise up to 160 dB SPL. The control group was kept in normal conditions without any exposure. Auditory brainstem responses (ABRs) , HE stainings, immunofluorescence stainings and scanning electron microscopes (SEMs) were tested after 1week and 2 weeks exposure respectively (n=6). ResultsThe average of ABR threshold shifts of 2 weeks exposure were higher than those of 1 week in each group. Group D showed the highest ABRs (P<0.01).The HE stainings showed different degrees of injury in corti organs in all experimental groups; which Group D being the most serious, followed by Group C.The results of immunefluorescence in hair cells showed that swelling necrosis was the main damage of cochlear hair cell after 1 week's exposure.The swelling rate of Group D was the highest, followed by Group C.Nucleus missing in hair cells was observed after 2 weeks' exposure. Group D had the highest missing rate and the main missing of Group B happened in the inner hair cells.SEM showed that the most serious damage of stereociliums in Group D,followed by Group C, then Group B.ConclusionThe synergistic effects of simulated microgravity and noise lead to significant damage of the auditory function and cochlea Corti organs in rat.

【Key words】Simulated microgravity;Noise;Corti organ;Auditory Brainstem Response (ABR)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R764.43+3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1006-7299(2016)02-0163-05

DOI：10.3969/j.issn.1006-7299.2016.02.013

作者簡(jiǎn)介：吳瑋，女，山東人，博士，主任醫(yī)師，研究方向?yàn)樘胤N耳科學(xué)及臨床。

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-2-116:18

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/42.1391.R.20160201.1618.008.html

*全軍十二五重大課題子課題(AWS11J003)資助

1解放軍306醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科(北京100101)