復(fù)方利血平氨苯蝶啶片采用RH-HPLC法同時(shí)測定其4種有效成分的含量

韋玲 高淑紅

（山東信誼制藥有限公司 山東德州 253100）

復(fù)方利血平氨苯蝶啶片采用RH-HPLC法同時(shí)測定其4種有效成分的含量

韋玲 高淑紅

（山東信誼制藥有限公司 山東德州 253100）

目的：通過RH-HPLC法準(zhǔn)確并同時(shí)測定復(fù)方利血平氨苯蝶啶片中4種有效成分（包括氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平）的含量。方法：通過RH-HPLC法測定其4種有效成分含量，色譜柱 Eclipse XDB-C18；流動相：0.01 mol/L 庚烷磺酸鈉溶液（用冰醋酸將其PH值調(diào)整為3.0）；甲醇（40：60）；檢測波長：265nm；流速： 0.8 ml/min。結(jié)果：氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶線性范圍為0.04 ～0.25 mg/ml， 利血平線性范圍為0.5～2μg/ ml；4種有效成分回收率96%～105%，平均回收率102%。結(jié)論：采用RH-HPLC法能夠準(zhǔn)確、簡單、迅速的同時(shí)測定復(fù)方利血平氨苯蝶啶片中氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的含量，因此該種方法能夠用于測定復(fù)方利血平氨苯蝶啶片的含量。

復(fù)方利血平氨苯蝶啶片 RH-HPLC 氫氯噻嗪 硫酸雙肼屈嗪 氨苯蝶啶 利血平

復(fù)方利血平氨苯蝶啶片是一種復(fù)方制劑,它的主要成分包括氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平等,該制劑主要用于治療輕中度高血壓。按照國家藥典委員會頒布的國家藥品標(biāo)準(zhǔn),采用不同波長和溶劑測定氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的方法難度大且費(fèi)用昂貴。本文旨在研究通過采用RH-HPLC法同時(shí)測定復(fù)方利血平氨苯蝶啶片中4種有效成分的含量,具體情況報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Empower色譜工作站；MettlerXP-205電子天平；Agilent 1200高效液相色譜儀；MODEL HN1006 超聲波清潔器。

1.2 試藥

氫氯噻嗪（批號：100309-200702）、硫酸雙肼屈嗪（批號：100514-200301）、氨苯蝶啶（批號： 100429-200401）和利血平（批號：100041-200311）對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供,除氫氯噻嗪純度為99.5%外,其余三種成分純度均為100%。水為二次蒸餾水,庚烷磺酸鈉為分析純,甲醇為色譜純。

2 色譜條件

2.1 確定檢測波長

溶解氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶及利血平,觀察外波長200 ～400 nm的掃描圖譜發(fā)現(xiàn)159nm,310nm,272nm,265nm附近均有強(qiáng)吸收。由于利血平含量很少,但在265nm波長附近仍有強(qiáng)吸收,因此確定檢測波長為265nm。

2.2 色譜柱

色譜柱 Eclipse XDB-C18；流動相：0.01 mol/L 庚烷磺酸鈉溶液（用冰醋酸將其PH值調(diào)整為3.0）；甲醇（ 40：60）；流速： 0.81 ml/min；進(jìn)樣量： 10μl、50μl；柱溫：30℃。

3 制備溶液

3.1 對照品溶液制備

對照品溶液1：精密稱取氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶各12.5mg,置于100ml的量瓶中,向量瓶中加入40ml甲醇,進(jìn)行15min超聲處理,加入40ml 5%的醋酸溶液后進(jìn)行15min超聲處理,冷卻至室溫?；旌蠈φ掌穬湟海壕芊Q取10mg利血平置于100ml量瓶中,加入適量乙醇后進(jìn)行15min超聲處理,冷卻至室溫后用甲醇稀釋,精密量取2ml該溶液倒入對照品溶液1中后用5%的醋酸溶液稀釋至刻度。

3.2 供試品溶液制備

精密稱取復(fù)方利血平氨苯蝶啶片1片量,置于100ml量瓶中,加入40ml甲醇后進(jìn)行15min的超聲處理,將其冷卻至室溫,用5%醋酸溶液進(jìn)行稀釋后搖勻并過濾。

3.3 專屬性試驗(yàn)

根據(jù)上述色譜條件,對比對照品溶液和供試品溶液的分離度,結(jié)果供試品溶液中各組分間的分離度更好。

3.4 線性試驗(yàn)

精密量取適量的對照品混合儲備液,用5%的醋酸溶液稀釋成氫氯噻嗪、硫酸雙肼屈嗪、氨苯蝶啶0. 05、0.0625、0.10、0.125、0.15、0.25 mg / ml 及利血平0.4、0.5、0.8、1.0、1.2、2μg / ml 的混合對照品溶液,分別吸取10μg / ml、50μg / ml注入高效液相色譜儀,詳細(xì)測定并繪制峰面積。線性回歸方程的縱坐標(biāo)為峰面積,橫坐標(biāo)為對照品進(jìn)樣量。氫氯噻嗪 y =39 115 + 250.92,r = 0. 999 5； 硫酸雙肼屈嗪 y= 9 545 6x - 41.353,r = 0.9996； 氨苯蝶啶 y = 37 831x+ 117.73,r = 0. 9999； 利血平 y = 100. 66x - 2.5421,r = 1。

3.5 精密度及穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率試驗(yàn)

通過測量溶液RSD（氫氯噻嗪為0. 08% ,硫酸雙肼屈嗪0.22% ,氨苯蝶啶0.05% ,利血平 0.38%）,表明RP-HPLC方法精密度良好；通過測定峰值RSD（氫氯噻嗪為0.23%,硫酸雙肼屈嗪0. 44% ,氨苯蝶啶0.29% ,利血平 0.71%）,表明該樣品溶液具有良好的穩(wěn)定性；通過測定計(jì)算,樣品中氫氯噻嗪含量為99. 17% ； 硫酸雙肼屈嗪含量為109.29% ； 氨苯蝶啶含量為98.23% ； 利血平含量為92.63%,表明該方法重復(fù)性較好；4種有效成分96%～105%,平均回收率102%（利血平均回收率105.22%,氫氯噻嗪平均回收率99.6%,硫酸雙肼屈嗪平均回收率101.04%,氨苯蝶啶平均回收率99.46%）

3.8 測定樣品含量

隨機(jī)選取批號為 101101A、110105A、101006C 的3批樣品進(jìn)行測定。

氫氯噻嗪：（12.87±0.21）mg/g；硫酸雙肼屈嗪（12.39±0.11）mg/g；氨苯蝶啶（11.47±0.03）mg/g；利血平（0.093±0.002）mg/ g。

4 討論

采用復(fù)方利血平氨苯蝶啶片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)對相同批號為 101101A、110105A、101006C 的3批樣品進(jìn)行測定,鑒定結(jié)果平均偏差較小,測定結(jié)果基本一致。

綜上所述,RH-HPLC方法能夠用于有效、快速的測定復(fù)方利血平氨苯蝶啶片的含量。

［1］金鵬飛，鄺詠梅，鄒定，等.HPLC 同時(shí)測定復(fù)方利血平氨苯蝶啶片中 3 種活性成分的含量［J］.中國藥學(xué)雜志，2011，46（ 02） ： 152 -155.

［2］WS-10001-（HD-1285）-20021Drug Standard of China by SFDA（國家藥品標(biāo)準(zhǔn)：化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)第十三冊）［S］12002： 256-2571.

［3］潘靜嵐.HPLC 法同時(shí)測定復(fù)方利血平氨苯蝶啶片中3種活性成分含量［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24（03）：238-246.

R9

A

1674-2060（2016）03-0228-01