3種缺血修飾清蛋白試劑盒分析性能的驗(yàn)證試驗(yàn)

何　謙，楊銳華，王　琪

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西西安 710004)

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·論著·

3種缺血修飾清蛋白試劑盒分析性能的驗(yàn)證試驗(yàn)

何謙，楊銳華，王琪

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,陜西西安 710004)

摘要:目的驗(yàn)證3種缺血修飾清蛋白(IMA)檢測(cè)試劑盒的主要分析性能。方法在Olympus AU5800全自動(dòng)生化分析儀上對(duì)上海艾康生物技術(shù)有限公司、浙江夸克生物科技有限公司和北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司的比色法IMA試劑(試劑A、B、C)進(jìn)行性能驗(yàn)證，參考美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)EP6-A、EP15-A、EP7-A文件和《WS/T 420-2013臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》要求對(duì)3種試劑的精密度、線性范圍、正確度、抗干擾能力進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果試劑A、B、C的批內(nèi)變異系數(shù)(CV)分別為0.59%～0.82%，0.27%～0.54%,0.62%～0.69%，批間CV分別為0.98%～1.74%，0.99%～1.01%,0.71%～0.78%,均小于試劑盒聲明的不精密度；線性范圍分別為11～142 U/mL(相關(guān)系數(shù)r2=0.993)、10～120 U/mL(r2=0.996)、14～123 U/mL(r2=0.992)，試劑A、B、C的線性范圍均良好。當(dāng)干擾物維生素C小于或等于10 mg/dL，血紅蛋白小于或等于200 mg/dL，總膽紅素小于或等于40 mg/dL,三酰甘油小于或等于500 mg/dL時(shí)，3種IMA試劑檢測(cè)結(jié)果偏差均不超過(guò)±10%，對(duì)3種試劑無(wú)明顯干擾。結(jié)論3種IMA檢測(cè)試劑盒均具有較高的精密度，可滿足臨床要求，但抗干擾能力存在一定的差異。

關(guān)鍵詞:缺血修飾清蛋白；比色法；自動(dòng)分析

缺血修飾清蛋白(IMA)是美國(guó)食品藥品管理局(FDA)認(rèn)可的第一個(gè)檢測(cè)心肌缺血的生化標(biāo)志物[1-2]，它在心肌缺血早期患者的血液中就有變化，且在一次缺血后24 h內(nèi)血中的濃度恢復(fù)至基礎(chǔ)水平，因此能夠檢測(cè)復(fù)發(fā)性缺血。隨著IMA臨床應(yīng)用的逐步推廣，已有較多實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展了血清IMA的檢測(cè)。本室在Olympus AU5800全自動(dòng)生化分析儀上對(duì)3種清蛋白-鈷結(jié)合比色法IMA試劑盒的精密度、線性范圍、正確度、抗干擾能力等性能進(jìn)行了分析評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源(1)干擾試驗(yàn)血清：收集患者混合血清用于干擾試驗(yàn)。(2)精密度驗(yàn)證混合血清：將已知IMA濃度的患者血清混合，制備高、低濃度兩份混合血清，各分裝20份于-20 ℃ 凍存，用于精密度試驗(yàn)。

1.2儀器與試劑(1)儀器：Olympus AU5800全自動(dòng)生化分析儀。(2)試劑A：上海艾康生物技術(shù)有限公司出品的IMA試劑(批號(hào)20150204)及其配套校準(zhǔn)品；試劑B：浙江夸克生物科技有限公司出品的IMA試劑(批號(hào)150317 )及其配套校準(zhǔn)品；試劑C：北京九強(qiáng)生物技術(shù)有限公司出品的IMA試劑(批號(hào)14-0814)及其配套校準(zhǔn)品。干擾物維生素C(VitC)由美國(guó)Sigma公司提供(批號(hào)080M0097V)，血紅蛋白(Hb)由美國(guó)Merck公司提供(批號(hào)D00121602)，總膽紅素(TBIL)由美國(guó)Frontier Scientific公司提供(批號(hào)JH12-6936)，三酰甘油(TG)由華瑞制藥提供(批號(hào)80GK041)。

1.3方法

1.3.1批內(nèi)不精密度用3種試劑分別檢測(cè)低值、高值兩份新鮮血清樣品，重復(fù)20次，計(jì)算各試劑兩水平的批內(nèi)變異，并確認(rèn)其不精密度范圍是否與廠商標(biāo)注的不精密度符合。

1.3.2批間不精密度依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)EP15-A文件[3]提供的方案，用3種試劑分別測(cè)定高、低兩個(gè)水平的混合血清，連續(xù)檢測(cè)5 d，每天測(cè)4次，計(jì)算批間變異，并確認(rèn)其不精密度范圍是否與廠商標(biāo)注的不精密度符合。

1.3.3線性范圍評(píng)價(jià)根據(jù)NCCSL EP6-A文件[4]選擇接近線性范圍上限值的血清標(biāo)本2～3份，接近下限值的血清標(biāo)本2～3份，分別混勻，得到本實(shí)驗(yàn)所需的低值樣品(L)和高值樣品(H)。按照0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H的方法配制混合樣品，每份樣品連續(xù)測(cè)定3次，并求平均值。判定結(jié)果：計(jì)算均值與理論值的差異，并將均值曲線與理論曲線進(jìn)行相關(guān)性分析，若相關(guān)系數(shù)r2>0.95，斜率(b)在0.97～1.03范圍內(nèi)，則可直接判斷測(cè)定方法在實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度范圍內(nèi)成線性。

1.3.4干擾試驗(yàn)參考NCCSL EP7-A文件[5]提供的方案并進(jìn)行部分調(diào)整后，將干擾物進(jìn)行配制，在患者混合血清中加入一定體積的干擾物，干擾物濃度梯度1、1/2、0,按照比例在患者血清中加入VitC、Hb、TBIL、TG；用試劑A、B、C分別測(cè)定每個(gè)濃度混合血清，計(jì)算添加干擾物后測(cè)量的偏差(Bias)。超過(guò)±10%則判為存在干擾。

1.3.5正確度驗(yàn)證根據(jù)《WS/T 420-2013臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》[6]這一行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，檢測(cè)廠家提供的定值IMA質(zhì)控品，計(jì)算偏差。超過(guò)±10%則判為存在偏差。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Excel2003及SPSS16．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，線性回歸采用簡(jiǎn)單線性回歸分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1批內(nèi)不精密度3種試劑的實(shí)測(cè)精密度均小于各自試劑盒標(biāo)注的5%～10%，變異較小，可滿足臨床應(yīng)用。低值與高值血清檢測(cè)結(jié)果及批內(nèi)變異系數(shù)(CV)，見(jiàn)表1。

表1　　3種試劑的批內(nèi)不精密度

2.2批間不精密度實(shí)測(cè)批間精密度均小于各自試劑盒標(biāo)注的5%～10%，可滿足臨床應(yīng)用。低值與高值血清檢測(cè)結(jié)果及批間CV，見(jiàn)表2。

表2　　3種試劑的批間不精密度

2.3線性范圍試劑A、B、C評(píng)價(jià)的樣品濃度范圍分別為11～142 U/mL、10～120 U/mL、14～123 U/mL，預(yù)期值與實(shí)測(cè)值擬合相關(guān)方程Y=bX+a中b分別為0.982、0.993、1.007，r2分別為0.993、0.996、0.992，試劑A、B、C的線性范圍均良好。

2.4干擾試驗(yàn)VitC≤10 mg/dL，Hb≤200 mg/dL，TBIL≤40 mg/dL，TG≤500 mg/dL時(shí)，3種IMA試劑檢測(cè)結(jié)果偏差均不超過(guò)±10%，但抗干擾能力存在一定差異。見(jiàn)表3。

表3　　不同濃度干擾物對(duì)IMA檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生的Bias(%)

2.5正確度檢測(cè)各試劑廠家提供的定值質(zhì)控品，靶值偏差分別為-8.82%、9.30%、-4.49%，均在質(zhì)控范圍內(nèi)。

3討論

按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)發(fā)布的ISO15189要求，臨床實(shí)驗(yàn)室在使用新試劑之前需要對(duì)多項(xiàng)重要性能進(jìn)行驗(yàn)證。性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)需要簡(jiǎn)明、可操作性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)方案，使用盡可能少的標(biāo)本數(shù)，并得到能夠代表臨床檢測(cè)真實(shí)情況的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正法案(CLIA′88)明確提出臨床實(shí)驗(yàn)室可只對(duì)正確度、精密度和可報(bào)告范圍進(jìn)行驗(yàn)證。為證實(shí)3種IMA定量試劑盒基本性能的可靠性，筆者依據(jù)NCCLS發(fā)布的EP15-A、EP6-A文件及《WS/T 420-2013臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》的要求，對(duì)3種試劑盒的上述主要分析性能進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示：3種試劑精密度、線性范圍及正確度等基本檢測(cè)性能均可以滿足臨床檢測(cè)需求。

本室還參考NCCLS EP7-A文件對(duì)3種IMA試劑的抗干擾能力進(jìn)行了分析評(píng)價(jià)。本研究采用外源添加VitC、TBIL、Hb及TG 4種常見(jiàn)干擾物的方法對(duì)IMA試劑進(jìn)行了干擾測(cè)試，結(jié)果顯示：3種試劑的抗干擾能力不一，試劑A抗干擾能力最強(qiáng)，試劑B對(duì)VitC的抗干擾能力最弱。

根據(jù)《WS/T 420-2013臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證》要求，采用患者標(biāo)本與其他檢驗(yàn)方法的試劑盒進(jìn)行比較，或者采用參考物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證試驗(yàn)。由于目前無(wú)法購(gòu)得其他檢驗(yàn)方法的試劑盒，且室間質(zhì)評(píng)物質(zhì)、第三方提供的賦值物質(zhì)均無(wú)法得到，筆者使用了文件推薦的各廠家提供的驗(yàn)證正確性的質(zhì)控物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果均低于廠家聲明的允許Bias范圍(10%)。

綜上所述，3種測(cè)定IMA的試劑盒均具有較高的精密度、正確度，線性范圍良好，可滿足臨床要求，但抗干擾能力存在一定的差異。

干擾能力存在一定的差異。

參考文獻(xiàn)

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Performance verification of three ischemia-modified albumin reagents

HeQian，YangRuihua，WangQi

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondAffiliatedHospitalofXi′anJiaotongUniversity,Xi′an,Shaanxi710004,China)

Abstract:ObjectiveTo verify the performance of three kinds of ischemia-modified albumin(IMA) reagents.MethodsThe performance of three IMA reagents(labeled as reagent A,B,C) using colorimetric method from Shanghai Aikang Biotechnology Co.,Ltd.,Zhejiang Kuake Bioscience Technology Co.ltd.and Beijing Jiuqiang Biotechnology Co.,Ltd.were assessed by using Olympus AU5800 automatic biochemistry analyzer.According to the National Committee for Clinical Laboratory(NCCLS) EP6-A,EP15-A and EP7-A documents and WS/T 420-2013 verification of analytical performance of quantitative kits by clinical laboratory,the precision,linearity range,accuracy and anti-interference capability were assessed.ResultsThe within-run coefficient of variations(CVs) of reagent A,B and C were 0.59%-0.82%,0.27%-0.54% and 0.62%-0.69% respectively.The between-run CVs of reagent A,B and C were 0.98%-1.74%,0.99%-1.01% and 0.71%-0.78%,respectively,which were lower than declarations of these reagent kits.The linearity range of reagent A,B and C were 11-142 U/mL(r2=0.993),10-120 U/mL(r2=0.996),14-123 U/mL(r2=0.992) respectively,which showed good linearities.About interference tests,no remarkable interferences(all Bias were less than ±10%) of reagent A,B and C were detected when Vitamin C≤10 mg/dL,hemoglobin≤200 mg/dL,bilirubin≤40 mg/dL and triglyceride≤500 mg/dL.ConclusionThe three IMA reagents show high precision,which could meet clinical requirements,nevertheless,differences of anti-interference capabilities are observed in these three reagents.

Key words:ischemia-modified albumin；colorimetric method；autoanalysis

(收稿日期：2016-01-12)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.011

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)05-0606-03

作者簡(jiǎn)介：何謙，女，主任技師，主要從事臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)研究。