IgG4相關(guān)疾病與人類白細(xì)胞抗原-DR、DQ等位基因的相關(guān)性

于立杰，陳　雨，張盼盼，張　文

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科 風(fēng)濕免疫病學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 北京 100730)

ChinJAllergyClinImmunol，2016，10(4)：346- 350

IgG4相關(guān)疾病(IgG4-related disease，IgG4-RD)是一種新近被命名的慢性炎癥性自身免疫性疾病，主要表現(xiàn)為受累臟器的腫大，血清中IgG4漿細(xì)胞增多，組織中IgG4陽(yáng)性漿細(xì)胞浸潤(rùn)為主要特點(diǎn)，其臨床疾病譜廣泛，可累及淋巴結(jié)、鼻竇、淚腺，頜下腺，腮腺、肺臟、胰腺、腹膜后組織、膽管、前列腺等多個(gè)器官或組織[1- 3]。該病的病因尚不清楚，目前認(rèn)為包括三方面：基因易感性、感染的分子模擬機(jī)制、免疫系統(tǒng)(包括固有免疫和適應(yīng)性免疫)紊亂[4]。對(duì)疾病相關(guān)易感基因的研究較少，日本報(bào)道 人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)-DRB1*0405和DQB1*0401可能與疾病發(fā)病相關(guān)[5]。本研究擬探討我國(guó)IgG4-RD患者HLA-DR、HLA-DQ基因與疾病的相關(guān)性。

對(duì)象和方法

對(duì)象

北京協(xié)和醫(yī)院IgG4-RD前瞻性隊(duì)列研究患者91例，診斷符合2011年IgG4-RD全面診斷標(biāo)準(zhǔn)(Comprehensive diagnostic criteria for IgG4-RD 2011)[6]：(1)臨床檢查顯示一個(gè)或多個(gè)器官特征性彌漫/局灶性增大或腫塊；(2)血清IgG4水平增高(≥1.35 g/L)；(3)組織病理學(xué)檢查顯示大量淋巴、漿細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化，以及IgG4陽(yáng)性漿細(xì)胞浸潤(rùn)(IgG4陽(yáng)性漿細(xì)胞/IgG陽(yáng)性漿細(xì)胞>40%，IgG4陽(yáng)性漿細(xì)胞>10個(gè)/高倍視野)。明確診斷：(1)+(2)+(3)；很可能診斷：(1)+(3)；可能診斷：(1)+(2)[6]，并除外其他自身免疫性疾病和惡性腫瘤。對(duì)照組為年齡和性別匹配的100例健康查體者。該研究經(jīng)北京協(xié)和醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入組者簽署知情同意書(shū)。

方法

采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)法檢測(cè)。

DNA提?。喝?00 μl抗凝全血，采用離心柱法提取全血DNA。

序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)基因分型：按照上海偉和生物公司HLA-DR、DQ試劑盒操作步驟進(jìn)行。

儀器：ABI 9700 基因擴(kuò)增儀、Thermo Heraeus Pico 17離心機(jī)、大龍掌上離心機(jī)D1008E、其林貝爾掌上離心機(jī)LX- 100、SBP Select旋渦振蕩器、奧豪斯先行者CP512型電子天平、天能EPS300電泳儀、天能2500凝膠成像系統(tǒng)、Eppendorf可調(diào)式移液器、Thermo NanoDrop 2000分光光度計(jì)、Milli-Q Advantage A10超純水機(jī)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件分析，HLA-DR、DQ出現(xiàn)頻率通過(guò)累計(jì)每個(gè)等位基因出現(xiàn)的次數(shù)計(jì)算；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組基因出現(xiàn)頻率比較采用卡方檢驗(yàn)，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)　　果

一般情況

91例IgG4-RD患者，男64例，女27例，平均年齡(52±13)歲；對(duì)照組男性57例，女性43例，平均年齡(48±15)歲；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

91例IgG4-RD患者臟器受累情況

最常見(jiàn)受累器官為頜下腺、淋巴結(jié)，均為58%；其次為淚腺和胰腺，分別為51%和32%；垂體、胃腸道受累較少，為1%(表1)。

HLA-DR、DQ在IgG4-RD及對(duì)照組中表達(dá)情況

與對(duì)照組比較，IgG4-RD患者中HLA-DRB1*03(13%vs. 5%，χ2=3.94，P=0.047)表達(dá)率顯著增高；HLA-DRB1*09 表達(dá)率顯著降低(16%vs. 33%，χ2=6.91，P=0.009)；按照器官受累部位比較，29例IgG4相關(guān)自身免疫性胰腺炎(autoimmune pancreatitis，AIP)患者HLA-DRB1*03(28%vs. 5%，χ2=10.29，P=0.001)、HLA-DRB1*08(31%vs. 13%，χ2=3.97，P=0.046)表達(dá)率顯著升高，HLA-DRB1*09(0vs. 33%，χ2=12.86，P=0.04)表達(dá)率顯著下降；19例膽道受累患者中，HLA-DRB1*09(0vs. 33%，χ2=8.68，P=0.002)表達(dá)率顯著下降；53例頜下腺受累患者中HLA-DRB1*07(32%vs. 17%，χ2=4.55，P=0.033)、HLA-DQB1*02(36%vs. 20%，χ2=4.58，P=0.032)表達(dá)率顯著升高；HLA-DRB1*09(15%vs. 33%，χ2=5.66，P=0.017)、HLA-DRB1*14(3%vs. 15%，χ2=4.42，P=0.036)表達(dá)率顯著下降；46例淚腺受累患者中，HLA-DRB1*03(17%vs. 5%，χ2=4.53，P=0.033)、HLA-DQB1*02(37%vs. 20%，χ2=4.79，P=0.029) 表達(dá)率顯著升高；26例腮腺受累患者中HLA-DRB1*04(38%vs. 19%，χ2=4.41，P=0.008)、HLA-DRB1*07(35%vs. 17%，χ2=3.91，P=0.048)、HLA-DQB1*02(38%vs. 20%，χ2=3.88，P=0.049)表達(dá)率顯著升高，HLA-DRB1*09(12%vs. 33%，χ2=4.66，P=0.031)表達(dá)率顯著下降；20例腹膜后受累患者中HLA-DRB1*08(35%vs. 13%，χ2=4.33，P=0.037)表達(dá)率顯著升高；HLA-DRB1*09(10%vs. 33%，χ2=4.27，P=0.039)表達(dá)率顯著下降；20例肺部受累患者中HLA-DRB1*04(40%vs. 19%，χ2=10.74，P=0.001)表達(dá)率顯著升高；19例泌尿系統(tǒng)受累患者中HLA-DRB1*08(37%vs. 13%，χ2=4.90，P=0.027)表達(dá)率顯著升高；HLA-DRB1*09(11%vs. 33%，χ2=3.88，P=0.049)表達(dá)率顯著下降；16例前列腺受累患者中HLA-DRB1*09(6%vs. 33%，χ2=6.02，P=0.014)表達(dá)率顯著下降；53例淋巴結(jié)受累患者中HLA-DRB1*09(11.3%vs. 33%，χ2=8.57，P=0.003)表達(dá)率顯著下降；26例鼻竇受累患者中HLA-DRB1*03(23%vs. 5%，χ2=6.35，P=0.012)、HLA-DRB1*07(46%vs. 17%，χ2=9.90，P=0.002)、HLA-DRQ1*02(54%vs. 20%，χ2=6.59，P=0.001)表達(dá)率顯著升高；HLA-DRB1*09(8%vs. 33%，χ2=12.0，P=0.01)表達(dá)率顯著下降；余HLA-DR、DQ基因亞型表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　IgG4-RD患者臟器受累情況Table 1　Organ involvement in patients with IgG4-RD

討　　論

本研究發(fā)現(xiàn)IgG4-RD患者中HLA-DRB1*03表達(dá)率顯著增加，考慮為疾病易感基因；DRB1*09 表達(dá)率顯著降低，考慮為疾病保護(hù)基因，按照臟器損害分組，發(fā)現(xiàn)HLA-DRB1*09在IgG4相關(guān)胰腺、膽道、頜下腺、腮腺、腹膜后、泌尿系、前列腺、淋巴結(jié)及鼻竇受累患者中表達(dá)率顯著下降，考慮該基因亞型為上述臟器保護(hù)基因；HLA-DRB1*14在IgG4相關(guān)頜下腺受累中表達(dá)率顯著下降，考慮為頜下腺損傷保護(hù)基因；HLA-DQB1*02在IgG4相關(guān)頜下腺、淚腺、腮腺、鼻竇受累患者中表達(dá)率顯著升高，考慮與頜下腺、淚腺、腮腺、鼻竇損傷易感基因；HLA-DRB1*03在IgG4相關(guān)胰腺、淚腺、鼻竇受累中表達(dá)率顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；HLA-DRB1*04在IgG4相關(guān)腮腺、肺部受累中表達(dá)率顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；HLA-DRB1*07在IgG4相關(guān)頜下腺、腮腺、鼻竇受累患者中表達(dá)率顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；HLA-DRB1*08在IgG4相關(guān)胰腺、腹膜后、泌尿系受累中顯著升高，考慮為該臟器損傷易感基因；由此得出，在國(guó)內(nèi)人群中，DRB1*03高表達(dá)，DRB1*09基因的表達(dá)缺失考慮可能與IgG4-RD的易感性有關(guān)，且基因表達(dá)頻率的不同，其損傷臟器亦不相同。其他HLA-DR、DQ基因亞型分析尚未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

IgG4-RD的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，可能有多因素參與本病的發(fā)生和發(fā)展，包括基因、環(huán)境、遺傳機(jī)制。在該病與HLA基因相關(guān)性研究方面，早在2002年，日本學(xué)者Kawa等[5]對(duì)IgG4相關(guān)AIP進(jìn)行了研究，該研究納入AIP患者40例，健康對(duì)照201例，發(fā)現(xiàn)HLA-DRB1*0405和DQB1*0401表達(dá)頻率顯著升高，認(rèn)為該基因增加了疾病的易感性。但2013年同樣一項(xiàng)來(lái)自日本的研究發(fā)現(xiàn)，在1對(duì)患有AIP的兄妹中，并未發(fā)現(xiàn)DRB1*0405和DQB1*0401的表達(dá)，得出AIP可能是由多種基因參與的疾病[7]。一項(xiàng)關(guān)于AIP的研究發(fā)現(xiàn)[8]，HLA-DRB1*0701和DQB1*0202增加了該疾病的易感性；來(lái)自中國(guó)中臺(tái)灣的研究報(bào)道顯示，在中國(guó)患者中CTLA- 4 49A 多態(tài)性和-318C/+49A/CT60G單倍體與AIP 相關(guān)[9]。然而，以上兩項(xiàng)研究均集中在AIP易感基因的研究，且研究例數(shù)較少，有一定的局限性。本研究以IgG4-RD不同臟器損傷分類，探討了IgG4-RD相關(guān)疾病不同臟器損傷可能的易感基因，而這種分類方法在國(guó)內(nèi)外尚未有報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)IgG4相關(guān)疾病HLA-DR、DQ基因亞型國(guó)外報(bào)道不一致，考慮與種族差異有關(guān)。

目前針對(duì)HLA個(gè)別基因?qū)τ诩膊∥ｋU(xiǎn)性方面尚缺乏基于人口基數(shù)遺傳免疫學(xué)的研究，但該研究策略可在嚙齒類動(dòng)物體中實(shí)現(xiàn)[10]，且在AIP的小鼠模型HLA易感基因方面已有大量的研究[11- 14]，但由于小鼠HLA等位基因與人類存在差異，因此這些研究所得結(jié)論與人類實(shí)際情況也有差異。

本研究發(fā)現(xiàn)IgG4相關(guān)疾病HLA-DR、DQ基因亞型與國(guó)外報(bào)道不一致，考慮有以下可能：(1)種族差異；(2)既往報(bào)道主要針對(duì)AIP患者，而本研究是收集多種器官受累的患者；(3)本研究樣本量相對(duì)較少。

本研究從免疫遺傳學(xué)角度初步探討了IgG4-RD與人類白細(xì)胞抗原-DR、DQ等位基因的相關(guān)性，為進(jìn)一步研究IgG4-RD發(fā)病機(jī)制提供了初步理論依據(jù)，但本研究納入病例數(shù)較少，存在一定的局限性，且尚未對(duì)有意義的基因亞型進(jìn)行高分辨分析，需要進(jìn)一步探討。

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