納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠的胃黏膜保護(hù)作用

沈艷婷， 闕任燁， 陶智會(huì)， 林柳兵， 錢(qián)春美， 李 勇*

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科，上海200071；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心，上海200071）

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納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠的胃黏膜保護(hù)作用

沈艷婷， 闕任燁1， 陶智會(huì)1， 林柳兵1， 錢(qián)春美2， 李 勇1*

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科，上海200071；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心，上海200071）

摘要:目的 本實(shí)驗(yàn)旨在觀察納達(dá)合劑（北沙參，麥冬，黃連等）對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜的保護(hù)作用。方法利用反流液建立大鼠膽汁反流性胃炎模型，將60只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、納達(dá)低劑量組、納達(dá)中劑量組、納達(dá)高劑量組和麥滋林組，每組10只。通過(guò)病理切片HE染色觀察大鼠胃黏膜層及肌層厚度，阿利新蘭-糖蛋白結(jié)合法（AB/PAS）染色觀察胃黏膜上皮細(xì)胞分泌功能，ELISA法檢測(cè)大鼠血清胃泌素、胃黏膜前列腺素E2、氨基己糖以及磷脂的量變化。結(jié)果 HE染色顯示納達(dá)合劑可以顯著增加膽汁反流性大鼠胃黏膜層厚度（P＜0.05），對(duì)肌層厚度無(wú)顯著影響；AB/PAS染色顯示納達(dá)合劑可以明顯提高大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞分泌功能，恢復(fù)黏膜屏障的完整性；ELISA法顯示納達(dá)合劑能夠顯著增加血清胃泌素、胃黏膜前列腺素E2、氨基己糖及磷脂的量（P＜0.05）。結(jié)論 納達(dá)合劑具有保護(hù)模型大鼠胃黏膜，促進(jìn)胃黏膜修復(fù)的作用。

關(guān)鍵詞:納達(dá)合劑；膽汁反流性胃炎；胃黏膜；胃泌素；胃黏膜前列腺素E2；氨基己糖；磷脂

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.004

KEY W 0RDS: Nada Mixture；bi1e ref1ux gastritis（BRG）；gastric mucosa；gastrin（GAS）；Prostag1andin E2（PGE2）；hexosamine（HEX）；PhosPho1iPid（PHOS）

膽汁反流性胃炎（bi1e ref1ux gastritis，BRG），是由于多種原因?qū)е率改c胃反流（duodenogastric ref1ux，DGR）現(xiàn)象異常增多，引起胃黏膜損傷的一種疾?。?］。臨床上根據(jù)發(fā)病原因是否與胃腸術(shù)相關(guān)而分為繼發(fā)性和原發(fā)性膽汁反流性胃炎［2］。

十二指腸胃反流作為一種存在于機(jī)體內(nèi)的常見(jiàn)生理現(xiàn)象，其發(fā)生及反流量與胃十二指腸動(dòng)力異常以及幽門(mén)括約肌功能失常密切相關(guān)［3］。胃十二指腸動(dòng)力異常主要表現(xiàn)在胃竇清除能力下降以及十二指腸逆蠕動(dòng)的增加，當(dāng)幽門(mén)括約肌存在自身缺陷或遭受內(nèi)外源性刺激因素導(dǎo)致幽門(mén)括約肌功能異常，出現(xiàn)關(guān)閉不全情況時(shí)，十二指腸胃反流增加，其內(nèi)容物與胃黏膜長(zhǎng)時(shí)間接觸，最終導(dǎo)致胃黏膜損傷的發(fā)生，隨著病情的持續(xù)和進(jìn)展，引起胃黏膜的慢性炎癥、糜爛，更有甚者可以進(jìn)展為胃潰瘍［4］。

納達(dá)合劑是我院余莉芳老中醫(yī)臨床經(jīng)驗(yàn)方，本方功效為養(yǎng)陰清胃、降逆理氣，是治療慢性胃炎的常用方，廣泛應(yīng)用于慢性胃炎患者，包括慢性淺表性胃炎、膽汁反流性胃炎、非潰瘍性消化不良等疾病。大量的臨床實(shí)踐證明具有良好的作用，能夠明顯緩解慢性胃炎患者胃脹、胃痛、反酸、噯氣、燒心、嘈雜等癥狀。因此，為了進(jìn)一步驗(yàn)證納達(dá)合劑的療效并深入探討其作用機(jī)制，本研究通過(guò)大鼠膽汁反流性胃炎模型，觀察納達(dá)合劑對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

1.1.1 主要試劑 納達(dá)合劑由上海市中醫(yī)醫(yī)院制劑科提供（滬藥制字Z05190757，批號(hào)14061901）；麥滋林（日本壽制藥株式會(huì)社生產(chǎn)）；牛膽酸鈉（上海源葉生物科技有限公司）；胰酶（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；卵磷脂（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；AB/PAS染色試劑盒（上海源葉生物科技有限公司）；大鼠前列腺素E2、胃泌素、磷脂、氨基己糖ELISA試劑盒（上海西塘生物科技有限公司）。

1.1.2 主要儀器 DM2500型正置熒光顯微鏡（德國(guó)Leica公司）；Neofuge 15R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（香港Hea1 force公司）；Varioskan F1ash熒光酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo scientific公司）；We11wash 4mk2型洗板機(jī)（美國(guó)Labsystems dragon公司）；JX-FSTPRP-48型電動(dòng)勻漿機(jī)（上海凈信公司）；KD-BM22型電腦生物組織包埋機(jī)（科迪儀器設(shè)備有限公司）；KD1508型輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)（科迪儀器設(shè)備有限公司）。

1.1.3 動(dòng)物 SD大鼠，清潔級(jí)，雄性，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。清潔級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，恒溫（25±2）℃恒濕，人工光照12 h，黑暗12 h，自由進(jìn)食飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)步驟

1.2.1 試劑配制 反流液的配制［5］:以牛膽酸鈉5 g，胰酶3 g，卵磷脂0.5 g溶于生理鹽水200 mL中，充分?jǐn)嚢璨⒒靹颍糜诖笫蠊辔?，現(xiàn)用現(xiàn)配。

納達(dá)合劑配制:納達(dá)合劑以臨床成人用量的5、10、15倍濃縮成低、中、高劑量（12.75、25.50、38.25 g/kg）用于大鼠灌胃，現(xiàn)用現(xiàn)配。

麥滋林的配制:將麥滋林（1袋0.67 g）溶于30 mL生理鹽水中，配制成約22 mg/mL的麥滋林藥液用于大鼠灌胃，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.2 模型制備、分組及給藥方法 取62只雄性SD大鼠，11只為對(duì)照組，給予生理鹽水15 mL/kg灌胃，每天1次，連續(xù)8周。其余51只大鼠給予反流液造模，15 mL/kg灌胃，每天1次，連續(xù)8周。

4周后隨機(jī)抽取對(duì)照組和造模組各一只頸椎脫臼處死，開(kāi)腹取胃，在胃竇和胃體部各取一塊組織，用10％福爾馬林固定，光鏡觀察。光鏡觀察發(fā)現(xiàn)造模組毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，黏膜下層水腫，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。對(duì)照組為正常胃黏膜。

模型復(fù)制成功后，造模組隨機(jī)分為模型組，納達(dá)合劑高、中、低劑量組，麥滋林組，每組10只。模型對(duì)照組，納達(dá)合劑高、中、低劑量組，麥滋林組以15 mL/kg分別灌胃生理鹽水，高、中、低劑量納達(dá)合劑，麥滋林溶液。每天1次，連續(xù)4周。

末次給藥后，禁食不禁水24 h，烏拉坦腹腔麻醉后開(kāi)腹，于腹主動(dòng)脈采血并摘取全胃，用生理鹽水漂洗后濾紙吸干剩余血液，并沿胃大彎側(cè)將胃剪開(kāi)，去除胃內(nèi)容物后，做常規(guī)標(biāo)本取材，胃體及左側(cè)胃竇黏膜分別用4％多聚甲醛固定后用于石蠟切片的制作，右側(cè)胃竇黏膜在液氮中浸泡30 min后，置入-80℃冰箱長(zhǎng)期儲(chǔ)存，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 胃黏膜固有層、黏膜肌層厚度的測(cè)定胃組織石蠟切片后，采用HE染色法，高倍生物顯微鏡下（100×）測(cè)量胃黏膜固有層厚度、黏膜肌層厚度，每個(gè)樣本胃體部及胃竇部各5個(gè)視野。

1.2.4 胃黏膜上皮細(xì)胞分泌功能的測(cè)定 胃組織石蠟切片后，釆用AB/PAS染色，高倍生物顯微鏡下（200×），記錄胃竇部各病理切片各5個(gè)視野。顯微鏡及軟件觀察上皮細(xì)胞粘蛋白分泌狀態(tài)，其中酸性黏液呈藍(lán)色（IPP軟件以紅色標(biāo)記），混合性粘液呈紫紅色（IPP軟件黃色標(biāo)記）和上皮細(xì)胞呈淡紅色（IPP軟件以綠色標(biāo)記）。按以下公式計(jì)算上皮細(xì)胞黏蛋白指數(shù)和酸性粘蛋白指數(shù):

上皮細(xì)胞粘蛋白指數(shù)（％）=（酸性黏液面積+混合黏液面積/上皮細(xì)胞面積）×100％；

酸性黏蛋白指數(shù)（％）=酸性黏液面積/上皮細(xì)胞面積×100％。

1.2.5 胃黏液層磷脂、氨基己糖含有量的測(cè)定胃黏膜勻漿后，按照試劑盒說(shuō)明（大鼠磷脂、氨基己糖檢測(cè)試劑盒），用ELISA法測(cè)定大鼠胃黏液層磷脂、氨基己糖的含有量。

1.2.6 胃黏膜前列腺素E2及血清胃泌素含有量的測(cè)定 胃黏膜勻漿后，按照大鼠前列腺素E2試劑盒說(shuō)明，用ELISA法測(cè)定大鼠胃黏膜前列腺素E2；血清分離后，按照大鼠胃泌素檢測(cè)試劑盒，用ELISA法測(cè)定大鼠血清胃泌素的含有量。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組組間比較采用單因素方差分析及SNK檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 納達(dá)合劑對(duì)BRG大鼠胃黏膜固有層、黏膜肌層厚度的影響 胃黏膜固有層、黏膜肌層厚度可直接反映胃黏膜的損傷及修復(fù)狀況。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察大鼠胃黏膜固有層、黏膜肌層厚度變化來(lái)證實(shí)納達(dá)合劑對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠胃體與胃竇部均存在黏膜固有層的變薄，黏膜固有層的厚度與對(duì)照組比較，差異呈顯著性（P＜0.05）。給予麥滋林與納達(dá)合劑28 d后，大鼠胃黏膜固有層的厚度逐漸恢復(fù)（P＜0.05）。各組黏膜肌層厚度變化無(wú)顯著性差異。結(jié)果表明，納達(dá)合劑具有保護(hù)和修復(fù)胃黏膜的作用。見(jiàn)表1和圖1。

圖1　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜固有層及肌層厚度的影響（HE，×100）Flg.1 Effects of Nada M lxture on the thlckness of gastrlc mucosa and muscularls mucosae ln BRG rats（HE，×100）

表1　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜固有層、黏膜肌層厚度的影響（±s，n=1 0）Tab.1 Effects of Nada M lxture on the thlckness of gastrlc mucosa and m uscu larlsmucosae ln BRG rats（±s，n=10）

表1　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜固有層、黏膜肌層厚度的影響（±s，n=1 0）Tab.1 Effects of Nada M lxture on the thlckness of gastrlc mucosa and m uscu larlsmucosae ln BRG rats（±s，n=10）

注:每個(gè)樣本隨機(jī)取5個(gè)視野計(jì)算厚度（Pix）。與對(duì)照組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

黏膜固有層厚度組別　　劑量/ （g·kg-1/Pix　　黏膜肌層厚度/Pix胃體部　　胃竇部　　胃體部　　胃竇部正常對(duì)照組）663.4±66.1　655.6±67.4　64.9±10.4　66.2±9.4模型組　-　379.4±58.1**　337.8±68.6**　62.7±11.5　63.3±11.3納達(dá)合劑低劑量組　12.75　483.5±106.9#　460.0±80.1##　61.3±14.0　61.0±13.0納達(dá)合劑中劑量組　25.50　536.3±104.7##　526.8±69.0##　63.5±12.0　60.1±14.1納達(dá)合劑高劑量組　38.25　600.1±89.8##　628.8±87.5##　61.4±11.8　62.0±12.6麥滋林組　0.33　564.0±96.2##　570.1±108.1##-64.1±13.3　64.1±10.8

2.2 納達(dá)合劑對(duì)BRG大鼠胃黏液層磷脂及氨基己糖含有量的影響 胃黏液層磷脂及氨基己糖是胃黏膜-黏液屏障保護(hù)的重要組成部分，故我們采用ELISA法測(cè)定胃黏液層磷脂及氨基己糖的量，進(jìn)而評(píng)估胃黏膜-黏液屏障的結(jié)構(gòu)與功能是否完好。

結(jié)果顯示，模型組較之于對(duì)照組，大鼠胃黏液層磷脂及氨基己糖含有量顯著降低，差異呈顯著性（P＜0.01）。納達(dá)合劑呈劑量依賴性提高BRG大鼠胃黏液層磷脂及氨基己糖含有量（P＜0.01）。陽(yáng)性對(duì)照藥物麥滋林亦能提高BRG大鼠胃黏液層磷脂及氨基己糖含有量（P＜0.01）。

結(jié)果表明，納達(dá)合劑的胃黏膜保護(hù)作用與其維持胃黏膜-黏液屏障結(jié)構(gòu)與功能的完整性密切相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏液層磷脂、氨基己糖含有量的影響（±s，n=10）Tab.2 Effects of Nada M lxture on the content of HEX，PH 0 S ln gastrlc mucosa tlssue ln BRG rats（x± s，n=10）

表2　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏液層磷脂、氨基己糖含有量的影響（±s，n=10）Tab.2 Effects of Nada M lxture on the content of HEX，PH 0 S ln gastrlc mucosa tlssue ln BRG rats（x± s，n=10）

注:與對(duì)照組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01

組別　　劑量/ （g·kg-1）動(dòng)物數(shù)/n磷脂/ （nmo1·mg Prot-1）氨基己糖/ （mmo1·mg Prot-1）正常對(duì)照組-　 10 58.01±4.52　 0.107±0.015模型對(duì)照組　-　 10 18.68±3.20**0.024±0.005**納達(dá)合劑低劑量組12.75　 10 28.20±3.91##0.035±0.007##納達(dá)合劑中劑量組25.50　 10 37.42±6.16##0.060±0.008##納達(dá)合劑高劑量組38.25　 10 50.05±4.94##0.083±0.008##麥滋林組　0.33　 10 41.40±5.51##0.072±0.008##

2.3 納達(dá)合劑對(duì)BRG大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞分泌功能的影響 胃黏膜酸性黏液層、混合性黏液層由上皮細(xì)胞分泌并附著于胃黏膜膜細(xì)胞表面起屏障保護(hù)作用，其完整性與機(jī)體防御胃酸侵蝕功能密切相關(guān)。因此，我們通過(guò)AB-PAS染色法測(cè)定上皮細(xì)胞黏液蛋白及酸性黏液蛋白含有量。

結(jié)果顯示，模型組較之于對(duì)照組，大鼠酸性黏液層被破壞，藍(lán)染面積減少且不連續(xù)，差異呈顯著性（P＜0.05）。與模型組比較，納達(dá)合劑中、高劑量組黏膜屏障完整性逐漸恢復(fù)，上皮細(xì)胞分泌粘蛋白指數(shù)增加，差異呈顯著性（P＜0.05）。與模型組比較，納達(dá)合劑呈劑量依賴性提高酸性粘蛋白指數(shù)，差異呈顯著性。（P＜0.05）。陽(yáng)性對(duì)照藥麥滋林亦能顯著提高酸性粘蛋白指數(shù)（P＜0.05）。

結(jié)果表明，納達(dá)合劑促進(jìn)胃黏膜修復(fù)的作用與其增加胃黏膜上皮細(xì)胞分泌黏蛋白以及酸性黏液蛋白的作用相關(guān)。見(jiàn)表3和圖2。

表3　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠上皮細(xì)胞分泌功能的影響（±s，n=10）Tab.3 Effects of Nada M lxture on secretory functlon of gastrlc mucosal ep lthellal cells ln BRG rats（±s，n=10）

表3　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠上皮細(xì)胞分泌功能的影響（±s，n=10）Tab.3 Effects of Nada M lxture on secretory functlon of gastrlc mucosal ep lthellal cells ln BRG rats（±s，n=10）

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別　　劑量/ （g·kg-1）動(dòng)物數(shù)/n上皮細(xì)胞粘蛋白指數(shù)/％酸性粘蛋白指數(shù)/％正常對(duì)照組-　 10　 14.59±2.51 3.13±0.48模型對(duì)照組　-　 10　 16.81±3.36 1.48±0.25*納達(dá)合劑低劑量組12.75　 10　 16.78±3.48 2.35±0.37#納達(dá)合劑中劑量組25.50　 10　 33.97±5.38##2.52±0.29#納達(dá)合劑高劑量組38.25　 10　 26.54±3.62##3.00±0.16#麥滋林組　0.33　 10　 17.64±5.51 2.53±0.34#

注:酸性粘液層為藍(lán)色，混合粘液層為紫紅色（5視野/樣本）圖2　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜上皮細(xì)胞功能的影響（AB/PAS，×200）Flg.2 Effects of Nada M lxture on secretory functlon of gastrlc mucosal ep lthellal cells ln BRG rats （AB/PAS，×200）

2.4 納達(dá)合劑對(duì)BRG大鼠胃黏膜前列腺素E2及血清胃泌素的影響 前列腺素E2是重要的黏膜保護(hù)因子。它主要通過(guò)增加黏膜血流量促進(jìn)黏膜的修復(fù)再生。胃泌素具有促進(jìn)胃腸黏膜上皮細(xì)胞增殖更新及新陳代謝的作用，能夠很好的保護(hù)與營(yíng)養(yǎng)胃腸道黏膜。因此，我們采用ELISA法測(cè)定胃黏膜前列腺素E2及血清胃泌素，旨在觀察納達(dá)合劑對(duì)BRG大鼠胃黏膜的修復(fù)功能的影響。

結(jié)果顯示，模型組較之于對(duì)照組，大鼠胃黏膜前列腺素E2及血清胃泌素顯著降低，差異呈顯著性（P＜0.01）。納達(dá)合劑呈劑量依賴性提高BRG大鼠胃黏膜前列腺素E2及血清胃泌素（低劑量組與模型組比較P＜0.05，中、高劑量組與模型組比較P＜0.01）。陽(yáng)性對(duì)照藥物麥滋林具有相同的作用（P＜0.01）。

結(jié)果表明，納達(dá)合劑促進(jìn)胃黏膜修復(fù)的作用與其增加胃黏膜前列腺素E2及血清胃泌素分泌的作用相關(guān)。見(jiàn)表4。

表4　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜前列腺素E 2、血清胃泌素的影響（±s，n=10）Tab.4 Effects of Nada M lxture on the content of PGE2ln gastrlc mucosa tlssue and GAS ln serum ln BRG rats（±s，n=10）

表4　納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜前列腺素E 2、血清胃泌素的影響（±s，n=10）Tab.4 Effects of Nada M lxture on the content of PGE2ln gastrlc mucosa tlssue and GAS ln serum ln BRG rats（±s，n=10）

注:與對(duì)照組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別　　劑量/ （g·kg-1）動(dòng)物數(shù)/n PGE2/ （Pg·mg Prot-1）胃泌素/ （Pg·mL1）正常對(duì)照組-　 10 159.86±8.45　 207.23±7.94模型對(duì)照組　-　 10 92.56±10.97**162.61±9.92**納達(dá)低劑量組　12.75　 10 104.60±9.64#　174.07±11.50#納達(dá)中劑量組　25.50　 10 122.60±10.80##184.12±10.62##納達(dá)高劑量組　38.25　 10 143.32±12.70##207.00±9.78##麥滋林組　0.33　 10 128.66±10.30##186.77±11.67##

3 討論

膽汁反流性胃炎是由于十二指腸內(nèi)容物反流至胃，且未得到立即清除，造成胃黏膜損傷、炎癥發(fā)生的一種疾病。因此，十二指腸逆行蠕動(dòng)的增加、幽門(mén)功能下降，胃竇清除能力降低都提高了膽汁反流的可能性［6］。另外，胃排空延遲增加了膽汁與胃黏膜的接觸時(shí)間，從而引起B(yǎng)RG的發(fā)生。胃壁屏障是由兩部分組成的，分別是胃黏液屏障和胃黏膜屏障［7］。胃黏液屏障的主要組成物質(zhì)是碳酸氫鹽及凝膠黏液，因此它又被稱作為黏液-碳酸氫鹽屏障，其主要功能是將氫離子中和，防止胃黏膜被氫離子腐蝕，并且能夠避免胃黏膜被胃蛋白酶損害。胃黏膜屏障主要是由胃黏膜上皮細(xì)胞與相鄰細(xì)胞所組成的，此二者緊密相接形成生理屏障。其主要的生理作用是避免氫離子從胃腔逆向彌散至胃黏膜，防止鈉離子從黏膜分散至胃腔。胃黏液屏障能夠防止胃黏膜的損傷，主要原因之一是因?yàn)槠渚哂械氖杷?。黏液凝膠內(nèi)的脂類物質(zhì)以及糖蛋白是構(gòu)成胃黏膜疏水性的主要物質(zhì)［8］，而磷脂與氨基己糖是構(gòu)成脂類物質(zhì)和糖蛋白的主要成分。因而，這兩種物質(zhì)的量可作為間接評(píng)價(jià)胃黏膜保護(hù)屏障作用的指標(biāo)之一［9］。

在膽汁反流性胃炎的形成中，膽汁酸是造成黏膜損傷的主要成分。膽汁酸是親脂性類固醇，它具有很強(qiáng)的“皂化”特性，使胃黏膜屏障被損壞［10］。當(dāng)胃黏膜受損時(shí)，胃黏膜組織可以通過(guò)分泌前列腺素、胃泌素等物質(zhì)來(lái)促進(jìn)胃黏膜損傷后的修復(fù)。前列腺素E2（PGE2）在維持胃黏膜保護(hù)屏障、上皮細(xì)胞再生及修復(fù)等方面具有十分重要的地位，是一種生理性保護(hù)物質(zhì)。其具有提高胃黏液屏障功能、提高胃黏膜血流供應(yīng)、營(yíng)養(yǎng)保護(hù)上皮細(xì)胞［11］、減輕炎癥反應(yīng)［12］、促進(jìn)胃黏膜自身修復(fù)等作用［13］。因此，檢測(cè)胃黏膜PEG2有助于了解黏膜血流量變化及其自身修復(fù)功能。胃泌素（gastrin，GAS）是機(jī)體內(nèi)一種重要的胃腸激素，其具有促進(jìn)胃酸分泌［14］、調(diào)節(jié)胃黏膜的營(yíng)養(yǎng)與血供［15］、加快胃黏膜上皮細(xì)胞及壁細(xì)胞的增殖［16］、調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力［17］等生理作用。胃泌素雖然能刺激壁細(xì)胞與主細(xì)胞分泌胃酸以及胃蛋白酶，但是其主要的作用是加快胃腸道黏膜的生長(zhǎng)以及加速黏膜的更新。因此，檢測(cè)胃黏膜胃泌素含有量變化，有助于了解胃黏膜的自身修復(fù)功能。

當(dāng)前，西醫(yī)學(xué)治療BRG的常用藥物有質(zhì)子泵抑制劑、H2受體拮抗劑、促動(dòng)力藥、胃黏膜保護(hù)劑等。臨床上，應(yīng)用以上這幾類藥物，可以在一定程度上緩解癥狀，但療效單一，往往需要配合使用，增加了出現(xiàn)藥物毒副作用的可能性。而中醫(yī)藥在治療BRG上具有其特有的優(yōu)勢(shì)及療效。

膽汁反流性胃炎本病歸屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)之“胃脘痛”、“嘈雜”、“嘔吐”、“膽癉”等范疇。本病病因主要與外感邪氣、飲食失調(diào)、七情失和、久病體虛等因素有關(guān)，氣機(jī)不利、胃失和降是發(fā)病的基本病機(jī)。而余老認(rèn)為情志失調(diào)，氣郁而化火灼津，以致胃陰不足，胃失和降，膽汁隨胃氣上逆灼傷胃絡(luò)，此為導(dǎo)致本病的主要原因之一。因此，余莉芳老中醫(yī)以胃陰不足型BRG的基本病因病機(jī)為切入點(diǎn)，綜合歷代醫(yī)家的治療經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合20余年對(duì)大量患者的臨床驗(yàn)證，形成經(jīng)驗(yàn)方納達(dá)合劑。其成分為北沙參、麥冬、黃連、天花粉、黃芩、元胡、甘草、制半夏、廣木香、玉竹、海螵蛸、枳殼、蒲公英、芙蓉葉、代赭石。本方由吳鞠通《溫病條辨》中益胃湯化裁而來(lái)，方中加入制半夏、枳殼、木香、延胡索等理氣健脾，使補(bǔ)而不膩；代赭石降逆制酸和胃；黃連、黃芩清解郁熱；全方共奏“養(yǎng)陰清胃、降逆理氣”之功效。本科室自1993年起對(duì)該方進(jìn)行臨床研究，發(fā)現(xiàn)納達(dá)合劑治療非潰瘍性消化不良62例總有效率達(dá)到95.2％，并且發(fā)現(xiàn)加味納達(dá)合劑對(duì)膽汁反流性胃炎合并黃疸亦具有良好的臨床療效［18 -19］。因此，本研究擬采用大鼠膽汁反流性胃炎模型進(jìn)一步研究納達(dá)合劑治療慢性胃炎的療效基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，納達(dá)合劑能夠顯著提高膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜固有層的厚度、粘蛋白指數(shù)、酸性粘蛋白指數(shù)、胃黏液層磷脂及氨基己糖的量、胃黏膜PGE2及血清GAS的量。

綜上所述，納達(dá)合劑具有明顯的胃黏膜保護(hù)作用，并且能夠促進(jìn)胃黏膜的自身修復(fù)功能。這為臨床上納達(dá)合劑治療BRG提供了現(xiàn)代藥理學(xué)依據(jù)，為我們進(jìn)一步擴(kuò)大納達(dá)合劑臨床適應(yīng)癥、加速納達(dá)合劑的臨床推廣提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為現(xiàn)代中藥復(fù)方的發(fā)展提供了技術(shù)方法學(xué)的支撐。

參考文獻(xiàn):

［1］ Chan D C，F(xiàn)an YM，Lin C K，et al.Roux-en-Y reconstruction after dista1 gastrectomy to reduce enterogastric ref1ux and He1icobacter Py1ori infection［J］.J Gastrointest Surg，2007，11（12）: 1732-1740.

［2］ Gire11i CM，Cuve11o P，Limido E，et al.Duodenogastric ref1ux: an uPdate［J］.Am JGastroenterol，1996，91（4）: 648-653.

［3］ Dai F，Gong J，Zhang R，et al.Assessment of duodenogastric ref1ux by combined continuous intragastric PH and bi1irubin monitoring［J］.World JGastroenterol，2002，8（2）: 382-384.

［4］ Maev IV，Samsonov A A，Vorob'ev L P，et al.Motor and secretion function of stomach and duodenum，duodenogastric ref1ux in Patients with duodena1u1cer［J］.Klin Med，2000，78 （6）: 39-42.

［5］ 楊牧祥，蘇鳳哲，于文濤，等.胃炎飲對(duì)實(shí)驗(yàn)性膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜TNF-α、IL-8含量的影響［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2009，15（10）: 738-740.

［6］ 馮瑞兵.膽汁反流性胃炎的發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展［J］.臨床合理用藥雜志，2010，03（15）: 140-142.

［7］ 季國(guó)忠，朱人敏.胃黏膜屏障在消化性潰瘍中作用的研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代消化及介入診療，2006，11（2）: 89-90.

［8］ 李兆申，湛先保，許國(guó)銘.胃黏膜損傷與保護(hù)—基礎(chǔ)與臨床［M］.上海:上海科技出版社，2004: 107-111.

［9］ Kao Y C，Lichtenberger LM.Loca1ization of PhosPho1iPid-rich zones in ratgastricmucosa: Possib1e origin of a Protective hydro-Phobic 1umina1 1ining［J］.J Histochem Cytochem，1987，35 （11）: 1285-1298.

［10］ 郭偉強(qiáng)，姚 萍.原發(fā)性膽汁反流性胃炎的發(fā)病機(jī)制及相關(guān)因素［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2009，12（6）: 511-513.

［11］ 鄭芝田.消化性潰瘍?。跰］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1998: 293-230.

［12］ Baumeister B，Schmidt C，Schiermeyer-Dunkhase B，et al. Decreased gastric Prostag1andin E2synthesis in Patients with gastric u1cers and in smokers［J］.HePatogastroenterology，1995，42（6）: 851-855.

［13］ 林壽寧，李延華，陳 洋.中醫(yī)藥對(duì)胃潰瘍防御因子相關(guān)作用研究進(jìn)展［J］.新中醫(yī)，2013，45（6）: 144-146.

［14］ 房殿春，彭志紅.胃黏膜屏障功能研究概況［J］.現(xiàn)代消化及介入診療，2007，12（1）: 48-52.

［15］ 孫鳳蓬，宋于剛，程 蔚，等.大鼠胃潰瘍及自愈過(guò)程中胃泌素、生長(zhǎng)抑素與G、D細(xì)胞變化關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中華消化雜志，2002，22（1）: 57-58.

［16］ 朱方石，王良靜，姒健敏，等.云母單體顆粒對(duì)萎縮性胃炎大鼠胃泌素、生長(zhǎng)抑素及胃竇黏膜G，D細(xì)胞的影響［J］.中國(guó)中藥雜志，2004，29（6）: 554-558.

［17］ Chen Q，Camara A K，An J，et al.Cardiac Preconditioning with 4-h，17 degrees C ischemia reduces［Ca（2 +）］（i）1oad and damage in Part via K（ATP）channe1 oPening［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol，2002，282（6）: H1961-H1969.

［18］ 余莉芳.納達(dá)合劑治療非潰瘍性消化不良62例臨床觀察［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，1995，3（2）: 92-93.

［19］ 劉 晏，吳堅(jiān)炯，李 瓊，等.加味納達(dá)合劑治療膽汁反流性胃炎合并黃疸的臨床觀察［J］.中成藥，2012，34 （12）: 2462-2464.

Protectlve effect of Nada M lxture on gastrlcmucosas ln ratsw lth blle reflux gastrltls

SHEN Yan-ting1， QUE Ren-ye1， TAO Zhi-hui1， LIN Liu-bing1， QIAN Chun-mei2， LIYong1*
（1.DePartment of Gastroenterology，ShanghaiMuniciPal HosPital of Traditional ChineseMedicine Affiliated to ShanghaiUniversity of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200071，China；2.DePartment of Central Laboratory，Shanghai MuniciPal HosPital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai200071，China）

ABSTRACT:AIM To observe the Protective effectof Nada Mixture（Radix Glehniae，Radix OPhioPogonis，Rhizoma coPtidis，etc.）on gastric mucosas in rats with bi1e ref1ux gastritis（BRG）.METH 0DS The ref1ux f1uid was used tomakemode1 for bi1e ref1ux gastritis.Sixty SD rats were random1y divided into the contro1 grouP，the mode1grouP，Nada Mixture 1ow-，midd1e-，and high-dose grouPs and Marzu1ene grouP（n =10）.HE staining was used tomeasure the thickness of gastricmucosa；AB/PAS stainingwas used to observe secretory function of gastric mucosa1ePithe1ia1ce11s；ELISA testwas used to detect the 1eve1s of PGE2，hexosamine（HEX），and PhosPho1iPid （PHOS）in gastric mucosa tissue and gastrin（GAS）in serum.RESULTS Nada Mixture cou1d significant1y increase the thickness of gastricmucosa of BRG rats，but it had no significant effect on the thickness ofmuscu1aris mucosae.AB/PAS staining resu1ts showed that Nada Mixture cou1d marked1y imProve secretory function of gastric mucosa1ePithe1ia1ce11s and restored the integrity of the mucosa1 barrier.ELISA tests showed that Nada Mixture cou1d increase the 1eve1s of PGE2，HEX，and PHOS in gastricmucosa tissue and GAS in serum.C0NCLUSI0N Nada Mixture can Protect and he1P rePair damaged gastric mucosas.

*通信作者:李 勇（1968—），男，博士，主任醫(yī)師，主要從事消化病臨床與基礎(chǔ)研究。Te1: 18116070688，E-mai1: 1iyong8256@ 126.com

作者簡(jiǎn)介:沈艷婷（1990—），女，碩士生，主要從事消化病臨床與基礎(chǔ)研究。Te1: 13917795032，E-mai1: 378689506@qq.com

基金項(xiàng)目:上海市衛(wèi)生局資助項(xiàng)目（2011ZJ006）；第二批上海市衛(wèi)生系統(tǒng)優(yōu)秀學(xué)科帶頭人和優(yōu)秀青年人才培養(yǎng)計(jì)劃基金資助項(xiàng)目（滬衛(wèi)計(jì)委科教［2013］9號(hào)-50）

收稿日期:2015-05-27

中圖分類號(hào):R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001-1528（2016）02-0246-06