補腎益氣養(yǎng)血法對慢性再生障礙性貧血患者的血象、骨髓象及IL-17的影響

劉現(xiàn)輝， 郭曉娜

（1.河南省中醫(yī)院血液科，河南鄭州450002；2.黃河科技學院醫(yī)學院，河南鄭州450063）

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補腎益氣養(yǎng)血法對慢性再生障礙性貧血患者的血象、骨髓象及IL-17的影響

劉現(xiàn)輝1， 郭曉娜2

（1.河南省中醫(yī)院血液科，河南鄭州450002；2.黃河科技學院醫(yī)學院，河南鄭州450063）

摘要:目的 探討補腎益氣養(yǎng)血法對慢性再生障礙性貧血（CAA）患者的血象、骨髓象及白細胞介素-17（IL-17）的影響。方法 抽選我院2010年2月—2014年7月收治的59例CAA患者，采用隨機數(shù)字分為對照組（n =29例，予以西藥常規(guī)治療）和觀察組（n =30例，在對照組基礎上聯(lián)合中藥補腎益氣養(yǎng)血法治療），比較兩組治療前后血象指標；對比骨髓增生程度及百分率、非造血細胞百分率等骨髓象指標；并對比血清白IL-17及IL-17 mRNA水平。結果 觀察組治療總有效率為86.67％，明顯高于對照組的62.07％（P＜0.05）；觀察組治療后血紅蛋白（Hb）、白細胞計數(shù)（WBC）、血小板計數(shù)（PLT）、中性粒細胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細胞（ReT）明顯升高（P＜0.05），淋巴細胞百分率（Ly）、轉鐵蛋白飽和度、血清鐵蛋白明顯降低（P＜0.05），且升高或降低幅度顯著大于對照組（P＜0.05）；治療后，觀察組骨髓增生程度及百分率明顯改善（P＜0.05），且改善程度優(yōu)于對照組（P＜0.05；觀察組非造血細胞百分率（40.87±8.05）％，明顯低于對照組的（50.72±7.94）％（P＜0.05）。IL-17:治療后，兩組IL-17以及IL-17 mRNA水平降低（P＜0.05），且觀察組IL-17以及IL-17 mRNA水平明顯低于對照組（P＜0.05）。結論 補腎益氣養(yǎng)血法治療CAA，可顯著改善患者血象和骨髓象，提高療效，其機制可能與降低IL-17及IL-17 mRNA細胞因子表達有關。

關鍵詞:血象；補腎益氣養(yǎng)血法；IL-17；再生障礙性貧血

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.055

慢性再生障礙性貧血（CAA）是臨床常見的一種血液系統(tǒng)疾病，以貧血、感染以及出血為臨床表現(xiàn)［1］。CAA的臨床發(fā)病率較高，且病情反復、病程長，很難完全根治，嚴重影響病人的日常生活質(zhì)量。目前，西醫(yī)治療CAA多以雄激素、免疫抑制以及細胞刺激等為主，雖然短期療效明顯，但遠期療效不穩(wěn)定、副作用大，并且治療費用昂貴，大大限制了其臨床應用［2］。國家級名老中醫(yī)陳安民教授認為中醫(yī)治療CAA從腎論治為主，臨床辨證發(fā)現(xiàn)腎陽虛型CAA患者較多，因此，多采用補腎益氣法?！把a腎益氣活血”法是陳安民教授近年來的臨床經(jīng)驗總結方，在治療CAA方面取得了良好的療效?，F(xiàn)就其對CAA患者血象、骨髓象及IL-17方面的影響報道如下。

1 資料和方法

1.1 臨床資料 抽選我院2010年2月—2014年7月收治的59例CAA患者，納入標準①符合《血液病診斷及療效標準》［3］關于CAA的診斷標準，并符合《中藥新藥臨床研究指導原則》試行版中腎分型標準［4］，中醫(yī)辨證分型分為腎陰虛型、腎陽虛型和腎陰陽虛型，其腎陰虛型:主癥為心悸，頭暈，周身乏力，面色口唇指甲蒼白，盜汗，出血；次癥為低熱，手足心熱，口渴思飲，大便干結，舌質(zhì)淡或舌尖紅，苔薄，脈細數(shù)。腎陽虛型:主癥為心悸，頭暈，周身乏力，面色口唇指甲蒼白，形寒肢冷，腰膝酸軟；次癥為性功能減退，大便塘，多無出血或出血輕微，舌質(zhì)淡，脈沉細或虛大。腎陰陽虛型:兼有腎陰虛型及腎陽虛型癥候。②年齡18～65歲；③自愿服用中藥，簽署知情同意書。排除合并嚴重感染，心腦、肝、腎、造血、免疫系統(tǒng)等原發(fā)病者，并排除出血者、妊娠或哺乳期婦女。采用隨機數(shù)字分為對照組（n =29例）和觀察組（n =30例）。對照組:男17例，女12例，年齡20～64歲，平均（39.5± 8.7）歲，平均病程（20.1±3.6）月；觀察組:男15例，女15例，年齡18～65歲，平均（38.8±8.6）歲，平均病程（19.8±4.1）月。兩組臨床一般資料比較差異無顯著性（P＞0.05），見表1。

1.2 方法 （1）對照組:采用雄激素藥康力龍（規(guī)格為2 mg×100片，廣西南寧百會藥業(yè)集團有限公司，國藥準字H45020728），2 mg/次，3次/d；環(huán)孢素（10 mg×50粒，杭州中美華東制藥有限公司，國藥準字H10960121），4～6 mg/（kg·d），分2次服用，依據(jù)患者血液中環(huán)孢素水平進行劑量調(diào)整，使其保持在200～400 mg/L水平；連續(xù)治療3個月一療程，治療2個療程。治療期間予以對癥支持治療，對于有細菌感染者，采用抗生素抗感染；對于血紅蛋白＜50 g/L，貧血者，予以紅細胞輸注；對于血小板＜10×109/L者，輸注血小板。（2）觀察組:在上述基礎上聯(lián)合中醫(yī)辨證治療。①腎陽虛型:溫腎壯陽、益氣補血，采用我院自制的再障1號方，黃芪30 g，仙茅、巴戟天以及仙靈脾各18 g，當歸20 g，菟絲子、淫羊藿以及鹿角膠各15 g，骨碎補、白術以及白芍12 g，熟地黃20 g，雞血藤30 g。②腎陰虛型:滋陰補腎、涼血補血，采用我院自制的再障2號方進行治療，黃芪30 g，旱蓮草以及熟地黃20 g，黃精、巴戟天12 g，當歸12 g，桑椹子、龜板膠、何首烏以及阿膠各15 g，女貞子18 g，白芍12 g，雞血藤30 g。（3）腎陰陽兩虛型:滋陰壯陽、健脾養(yǎng)血，采用我院自制的再障3號方治療，黃芪、雞血藤各30 g、熟地黃、旱蓮草各20 g，當歸、何首烏、巴戟天以及淫羊藿各15 g，仙靈脾、女貞子各18 g，鹿角膠以及龜板膠各20 g，黃精12 g。每日1劑，分2次溫服，連續(xù)治療6個月。

表1　兩組一般臨床資料對比

1.3 觀察指標 ①臨床療效，參照《血液病診斷及療效標準》［5］。治愈:患者貧血、出血癥狀治療后消失，血紅蛋白（Hb）男性、女性分別達到120 g/L、110 g/L，白細胞計數(shù)（WBC）達4×109/L，血小板計數(shù)（PLT）達100×109/L，并且進行1年的觀察隨訪，未見復發(fā)。顯效:患者貧血、出血癥狀治療后均消失，Hb男性、女性分別達到120 g/L、100 g/L，WBC達3.5×109/L左右，PLT也有一定提升，進

行3個月的隨訪觀察，患者病情穩(wěn)定或者是繼續(xù)進步。有效:患者貧血、出血癥狀治療后有明顯好轉，不需輸血，Hb水平較治療前增長30 g/L以上，并可保持3個月。無效:患者經(jīng)治療后，臨床癥狀以及血象均未達標。②血象指標:采用F-800型血細胞計數(shù)儀對患者血象情況進行檢查，分別并取2次結果，進行平均值計算。血象指標包括Hb、WBC、PLT、中性粒細胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)（ReT）、淋巴細胞百分率（Ly）、轉鐵蛋白飽和度、血清鐵蛋白（SF）水平。③骨髓象［5］:觀察骨髓增生程度，計算骨髓增生程度百分率和非造血細胞百分率。④IL-17及IL-17 mRNA表達:采用人IL-17 ELISA試劑盒對兩組患者治療前后血清中IL-17含有量進行檢測。應用RT-PCR技術測定T淋巴細胞IL-17 mRNA水平，試劑盒購自上海信然實業(yè)，PE9600型PCR擴增儀由美國PE公司生產(chǎn)。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，組間采用t檢驗，計數(shù)資料以n％表示，采用x2檢驗，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床療效比較 觀察組治療總有效率為86.67％，明顯高于對照組的62.07％，差異有統(tǒng)計學意義（x2= 4.706，P=0.030＜0.05），詳見表2。

表2　兩組臨床療效比較［n（％）］

2.2 兩組治療前后血象指標變化 治療前，兩組的血象指標對比，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；觀察組治療后Hb、WBC、PLT、中性粒細胞計數(shù)、RBC等血象指標明顯

表3　兩組治療前后血象指標1變化（±s）

表3　兩組治療前后血象指標1變化（±s）

注:與治療前比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05

組別　　時間　Hb/（g·L-1）　WBC/（×109·L-1）　PLT/（×109·L-1）　　中性粒細胞計數(shù)/（×109·L-1）觀察組　　治療前49.96±12.14　2.47±0.63　30.39±8.09　0.56±0.48治療后　96.48±11.86*#　3.58±0.68*#　57.43±8.58*#　2.11±1.13*#對照組　　治療前　49.93±12.15　2.46±0.60　30.33±8.01　0.54±0.41治療后　82.33±12.94*　2.98±0.59*　46.02±8.63*　1.58±1.03*

升高（P＜0.05），Ly、轉鐵蛋白飽和度、SF明顯降低（P＜0.05），且升高或降低幅度顯著大于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），詳見表3和表4。

表4　兩組治療前后血象指標2變化（±s）

表4　兩組治療前后血象指標2變化（±s）

注:與治療前比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05

組別　　時間　ReT/（×109·L-1）　Ly/％　　轉鐵蛋白飽和度/％　SF/（μg·L-1）觀察組對照組治療前治療后治療前治療后12.34±6.93 38.94±20.51*#12.56±8.27 30.12±18.64*64.01±11.92 41.82±10.74*#65.98±13.91 48.72±9.73*58.52±9.74 40.63±8.06*#56.95±11.23 48.12±8.96*311.34±115.38 187.92±82.34*#298.93±109.23 238.13±120.71*

2.3 兩組治療前后骨髓象變化 治療前，兩組的骨髓增生程度及百分率、非造血細胞百分率對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后，觀察組骨髓增生程度及百分率明顯改善（P＜0.05），且改善程度優(yōu)于對照組，差異顯著（P＜0.05）。觀察組治療后的非造血細胞百分率（40.87± 8.05）％，明顯低于對照組的（50.72±7.94）％，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表5。

表5　兩組治療前后骨髓象變化

2.4 兩組治療前后IL-17以及IL-17 mRNA水平比較 兩組治療前IL-17以及IL-17 mRNA水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；治療后，兩組的IL-17以及IL-17 mRNA水平降低（P＜0.05），且觀察組IL-17以及IL-17 mRNA水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），詳見表6。

表6　兩組治療前后I L-1 7以及IL-1 7 mRNA水平比較（±s）

表6　兩組治療前后I L-1 7以及IL-1 7 mRNA水平比較（±s）

注:與治療前比較，*P＜0.05；與對照組比較，#P＜0.05

組別　　時間　IL-17/（ng·L-1）　IL-17 mRNA觀察組對照組治療前治療后治療前治療后192.71±31.19 60.09±21.01*#202.72±31.21 89.69±17.05*2.63±0.23 1.27±0.24*#2.61±0.22 1.61±0.21*

3 討論

慢性再生障礙性貧血（CAA）是某些因素引起的造血功能低下，全血細胞明顯下降的一種難治性血液系統(tǒng)疾病。近年來多數(shù)學者認為免疫功能異常是CAA的主要發(fā)病機制: T細胞亢進，造血干細胞凋亡過度導致骨髓衰竭。造血微環(huán)境以及干祖細胞水平改變是由于異常免疫功能損傷所引起的［6］。中醫(yī)治療CAA主要以補腎為本，近年來補腎中藥的研究發(fā)現(xiàn)，補腎中藥能夠顯著提高患者骨髓造血功能，調(diào)節(jié)機體應激及陰陽平衡，治療符合西醫(yī)CAA發(fā)病機理［7］。

研究［8］證實，CAA發(fā)病與CD4+輔助T淋巴細胞紊亂關系密切。輔助性T淋巴細胞17（Th17）是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種CD4 +T細胞亞群，具有免疫調(diào)節(jié)效應。研究發(fā)現(xiàn)Th17在自身免疫疾病、腫瘤以及移植排斥反應中起著重要作用。IL-17是Th17分泌的一種細胞因子，促進炎癥反應，誘導TNF-α、IL-12、IL-6以及IL-8等炎性因子分泌，還有利于Th17細胞分化、誘導活化產(chǎn)生Tc細胞。有研究［9］發(fā)現(xiàn)，CAA患者外周血以及骨髓中Th17表達水平明顯高于正常人，而治療完全緩解者Th17表達水平較治療前降低，提示Th17參與CAA發(fā)病過程。另有研究［10］表明，與健康患者相比，CAA病人骨髓以及外周血IL-17 mRNA表達明顯上調(diào)，血清IL-17水平升高，且與Th17細胞呈正相關。由此可見，血清IL-17及外周血IL-17 mRNA表達可作為評定CAA治療療效的指標之一。

“補腎益氣養(yǎng)血”法是我院近年來的臨床實踐總結。經(jīng)日:血之于氣，異名同類。補腎益氣養(yǎng)血方以補腎生血為基本法則，補腎使先天之精得充，骨髓充盈，血液化生有源以治其本；補氣生血，使周身得養(yǎng)，改善患者的癥狀是為治其標；兼用固表實衛(wèi)之品，使衛(wèi)表得固，免受外邪侵襲，能使已病之正氣得安。方中多味中藥能對造血干細胞的增殖有促進作用，刺激骨髓造血；部分中藥能調(diào)節(jié)機體免疫，改善機體的免疫紊亂，減少對造血的抑制；還有能通過對造血微環(huán)境的調(diào)整，為正常造血提供良好的“土壤”。本研究采用黃芪為補氣要藥，藥理研究發(fā)現(xiàn)黃芪能夠調(diào)節(jié)免疫功能，且具有促巨核細胞成熟的作用；黃精具有益氣養(yǎng)陰、滋腎養(yǎng)脾的作用；白術健脾益氣，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其能提高免疫功能低下動物細胞在體外培養(yǎng)的存活率，增加TH細胞，糾正T細胞亞群紊亂，提升IL-2水平，起到免疫調(diào)節(jié)作用［11］。女貞子、龜板膠、熟地黃以及何首烏合用具有補腎養(yǎng)陰的功效；當歸、雞血藤以及白芍合用養(yǎng)血活血；現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)巴戟天能增加小鼠血中皮質(zhì)醇水平、抑制其胸腺萎縮，激發(fā)骨髓造血功能，改善白細胞功能障礙；仙茅以及仙靈脾均具有雄激素樣作用；女貞子能夠提升白細胞；熟地有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用；雞血藤能夠起到保護造血系統(tǒng)的作用，改善患者骨髓微環(huán)境，提升白細胞水平，促進造血干細胞增生以及分化。

本研究結果表明，觀察組治療后，Hb、WBC、PLT、中性粒細胞計數(shù)、ReT等血象指標升高幅度顯著大于對照組，Ly、轉鐵蛋白飽和度、血清鐵蛋白降低幅度顯著小于對照組（P＜0.05）；觀察組治療總有效率明顯高于對照組（P＜0.05）。由此可見，補腎益氣養(yǎng)血法治療CAA療效顯著，能明顯改善CAA患者臨床癥狀，促進骨髓造血功能恢復，升高外周血象。其機制可能與抑制Th17細胞分泌，降低血清IL-17等炎性因子表達，避免骨髓自身免疫破壞造血干細胞以及影響微環(huán)境，從而發(fā)揮治療作用。

參考文獻:

［1］ Peffau1t de Latour R，Visconte V，Takaku T，et al.Th17 immuneresPonses contribute to the PathoPhysio1ogy of aP1astic anemia［J］.Blood，2010，116（20）: 4175-4184.

［2］ 王西閣，王丹鳳，周玉潔.慢性再生障礙性貧血患兒血清IL-17、IL-23的變化及臨床意義［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（45）: 58-60.

［3］ 趙永健，王占聚，王海英.IL-17在再生障礙性貧血患者外周血變化的臨床意義［J］.現(xiàn)代臨床醫(yī)學，2012，36（3）: 176-177.

［4］ 鄭筱英.中藥新藥臨床研究指導原則（試行）［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2002: 156-163.

［5］ 陳志爐，周郁鴻，魏克民，等.補腎益氣法治療慢性再生障礙性貧血的臨床研究［J］.醫(yī)學研究雜志，2010，6 （39）: 55-57.

［6］ 王 敏，王寧玲，王會平.Th17細胞研究進展［J］.國際兒科學雜志，2011，38（2）: 181-185.

［7］ 郭靜雅，邱玉華.Th17細胞的分化調(diào)控與自身免疫性疾?。跩］.國際免疫學雜志，2010，33（4）: 249-252.

［8］ 陳慧莉，李建華，郝桂蘭，等.自制愈障湯對再生障礙性貧血大鼠骨髓造血細胞線粒體形態(tài)及跨膜電位的影響［J］.山東醫(yī)藥，2009，49（11）: 7-9.

［9］ 陳 朋，王海霞.愈障散神闕穴灸療對腎陽虛型慢性再生障礙性貧血患者外周血IL-17 mRNA影響的臨床研究［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2015，49（1）: 30-32.

［10］ 祝佳嘉，周郁鴻.補腎益氣法與單純補腎法治療慢性再生障礙性貧血的臨床療效比較［J］.浙江中醫(yī)藥大學學報，2012，36（1）: 17-19.

［11］ 莊海峰，陳美玲，魏麗萍，等.補腎法治療慢性再生障礙性貧血的臨床研究［J］.中華中醫(yī)藥學刊，2014，32（1）: 105-107.

作者簡介:劉現(xiàn)輝（1978—），男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向為中西醫(yī)結合對血液系統(tǒng)疾病的診斷和防治。Te1: 13938231534，E-mai1: hxyk1xh@126.com

收稿日期:2015-05-10

中圖分類號:R287

文獻標志碼:B

文章編號:1001-1528（2016）02-0467-04