中醫(yī)溫陽健脾法對瀉藥性便秘的治療作用及其機(jī)制探究

程 輝，李艷茹

(山東萬杰醫(yī)學(xué)院，山東淄博 255213)

中醫(yī)溫陽健脾法對瀉藥性便秘的治療作用及其機(jī)制探究

程 輝，李艷茹

(山東萬杰醫(yī)學(xué)院，山東淄博 255213)

目的:探究中醫(yī)溫陽健脾法治療瀉藥性便秘的治療作用及其機(jī)制。方法:復(fù)制便秘大鼠模型，通過溫陽健脾顆粒對模型組大鼠進(jìn)行治療，1個療程后比較實驗組、模型組以及健康組大鼠腸道的運(yùn)輸功能以及c-kit、SCF蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:3種不同劑量治療均有療效，其中大劑量療效最佳，健康組c-kit蛋白及SCF蛋白的表達(dá)均比模型組高。c-kit蛋白方面，小、中劑量組與陽性對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義;SCF蛋白方面，治療后蛋白表達(dá)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:中醫(yī)溫陽健脾法治療瀉藥性便秘的治療效果確切，能夠使c-kit及SCF蛋白表達(dá)提高。

溫陽健脾法;瀉藥性便秘;療效;機(jī)制

瀉藥性便秘的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，可以確定的是與腸神經(jīng)系統(tǒng)生理病理條件的變化密切相關(guān)［1］。已有眾多臨床研究以及實驗研究表明，長時間服用瀉藥會造成藥物依賴性只是一個方面，更嚴(yán)重的會導(dǎo)致瀉劑結(jié)腸從而使病情加重，此外還會嚴(yán)重影響腸部神經(jīng)系統(tǒng)，造成不良后果，產(chǎn)生瀉藥性便秘［2］。目前西醫(yī)對瀉藥性便秘治療尚無較理想的方法，而中醫(yī)中藥治療瀉藥性便秘的優(yōu)勢十分明顯［3］。本研究通過溫陽健脾法對便秘型大鼠進(jìn)行治療，以研究其療效及機(jī)制，現(xiàn)具體總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 動物分組

80只SD大鼠隨機(jī)分為16只健康組，64只模型組。造模成功后，取8只健康鼠、8只造模鼠實驗判定是否造模成功。剩余8只健康鼠，56只造模鼠，將造模大鼠分為12只大劑量組，12只中劑量組，11只小劑量組，11只陽性對照組，10只空白對照組。造模方法參考文獻(xiàn)［5］。

1.2 主要藥物、試劑與儀器

治療藥物為30 g生白術(shù)的配方顆粒，15 g肉蓯蓉的配方顆粒;CMC購自西安裕華生物科技有限公司;Bradford蛋白定量所用試劑盒購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司;Western Blot中所用抗體均購自Gibco公司(美國)。

1.3 造模方法

64只模型組大鼠體質(zhì)量為180～200 g，不同性別分籠飼養(yǎng)，室溫保持在18～27℃，相對濕度保持在40%～70%，且通風(fēng)良好，安靜清潔。對照組大鼠喂飼普通干飼料，實驗組喂飼含大黃粉干飼料。第1次給藥劑量是每天200 mg/kg，之后劑量每日增加1倍，到劑量為1600 mg/kg時，一半動物糞便出現(xiàn)變稀，保持劑量至80%大鼠稀便消失，然而于此基礎(chǔ)加倍給藥，再出現(xiàn)近半數(shù)大鼠糞便變稀。循環(huán)3次，等到最后1次有80%大鼠的稀便消失7 d后終止給藥，并飼以普通飼料。

1.4 治療方法

模型組大鼠治療1個療程為4周，治療藥物用量為成人用量，按照《中藥藥理研究方法學(xué)》對中藥人鼠的等效劑量進(jìn)行計算，分成小、中、大劑量，于4 mlCMC中溶解并灌胃，每日1次;陽性對照組使用溶于4 mlCMC的莫沙比利進(jìn)行灌胃，每日1次，1個療程為4周;空白對照組使用4 mlCMC灌胃，每日1次，1個療程為4周。

1.5 實驗方法

1.5.1 腸道的傳輸功能檢測 大鼠停藥1周之后禁食24 h，使用10%活性炭混懸液1～2 ml進(jìn)行灌胃，30 min之后處死(頸椎脫臼)。即刻解剖，將幽門至直腸末端全部腸道摘出，于松弛狀態(tài)對腸道全長和腸道內(nèi)混懸液推進(jìn)長度進(jìn)行測量，計算混懸液的推進(jìn)長度與腸道全長比值。

1.5.2 c-Kit蛋白及SCF蛋白表達(dá)測定 留取大鼠的結(jié)腸組織，液氮中凍存樣本研成粉末，然后加500 ul裂解液及10 ul蛋白酶抑制劑，使用超聲破碎液體澄清為止，14000×g離心 40 min取上清。Bradford蛋白定量后Western blot進(jìn)行檢測。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，非正態(tài)分布計量資料和計數(shù)資料采用非參數(shù)檢驗，計數(shù)資料之間采用卡方檢驗進(jìn)行比較分析，使用t檢驗比較分析計量資料之間的差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 各組大鼠腸道的傳輸功能、c-kit蛋白及SCF蛋白的表達(dá)比較

表1顯示，3種不同劑量治療均有療效，其中大劑量療效最佳，且優(yōu)于陽性對照組;健康組c-kit蛋白及SCF蛋白的表達(dá)均比模型組高，治療后模型組2種蛋白表達(dá)有所增高。c-kit蛋白中，小劑量組、中劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);SCF蛋白中，治療后蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 各組大鼠腸道傳輸功能、c-kit蛋白及SCF蛋白表達(dá)比較

3 討論

瀉藥性便秘是指長時間服用瀉藥造成的結(jié)腸運(yùn)動狀態(tài)出現(xiàn)紊亂，患者排便無法自然解決，而需依靠瀉藥使排便功能得以維持的一種疾病，也稱作瀉藥依賴性便秘或瀉劑結(jié)腸［6］。

歷代中醫(yī)文獻(xiàn)并無瀉藥性便秘記載，然而對瀉藥所導(dǎo)致的便秘認(rèn)識很深刻。金元時期的李東垣［7］明確提出，瀉藥性便秘的表現(xiàn)為反復(fù)瀉下、反復(fù)秘結(jié)而最終瀉下藥失效的一個過程。此外《雜病源流犀燭·大便秘結(jié)源流》［8］提出，老人使用硝黃類有刺激性的瀉藥，其氣血津液更易受損，便秘癥狀進(jìn)而加重，也就更容易導(dǎo)致瀉藥性便秘。中醫(yī)認(rèn)為，瀉藥性便秘的主要病因為苦寒瀉藥的過度使用，使脾胃受損、化源不足，進(jìn)而虧虛氣血津液，日久則累及腎造成陽氣不足，因而瀉藥性便秘應(yīng)屬脾陽虛型。

瀉藥性便秘病理特點是由于長期服用瀉藥，患者的病程較長，且排便間隔時間延長，可能導(dǎo)致不服泄藥則無法排便、無明顯便意，或者完全無便意，患者大便干結(jié)、排便困難，有時需要通過洗腸或灌腸以排便，常伴隨腹部不適、腹脹等癥狀［9］。

本藥方以生黃芪、生白術(shù)健脾益氣升陽，其中白術(shù)溫、甘、苦，歸脾胃經(jīng)，可以益氣補(bǔ)中健運(yùn)脾胃，乃治療脾虛諸證的要藥，因此重用白術(shù)益氣健脾運(yùn)轉(zhuǎn)中焦，從而有助于大腸運(yùn)動［10］;益智仁、肉蓯蓉、附子補(bǔ)脾陽溫腎陽，其中肉蓯蓉溫、咸、甘，歸腎大腸經(jīng)，具有益精血、補(bǔ)腎陽、通便潤腸之功效;黑芝麻、何首烏通便潤腸，當(dāng)歸、白芍養(yǎng)血滋陰，甘草調(diào)和諸藥，使配伍得當(dāng)故而療效較好［11］。

Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells of cajal，ICC)最初于胃腸道中被人們所了解?，F(xiàn)已證實，ICC為胃腸道起搏細(xì)胞，其功能包括產(chǎn)生和傳播慢波以及對腸神經(jīng)系統(tǒng)起到平滑肌信號的傳導(dǎo)。ICC細(xì)胞膜可對酪氨酸的激酶受體(C-kit)進(jìn)行特異表達(dá)，同時與同配體的干細(xì)胞因子(stem cell factor，SCF)相結(jié)合后啟動的SCF/c-kit信號通路特異表達(dá)，對ICC的分化、發(fā)育和胃腸道的節(jié)律活動穩(wěn)定有著重要作用。因此我們選擇檢測c-kit和SCF蛋白表達(dá)以評估中醫(yī)溫陽健脾法的療效及機(jī)制。

大鼠實驗結(jié)果表明，3種不同劑量治療均有療效，其中大劑量療效最佳且優(yōu)于陽性對照組，說明中醫(yī)溫陽健脾顆粒存在一定的劑量依賴性。健康組ckit蛋白及SCF蛋白的表達(dá)均比模型組高，治療后模型組2種蛋白表達(dá)有所增高。c-kit蛋白中，小、中劑量組表達(dá)均高于陽性對照組;SCF蛋白中，治療后蛋白表達(dá)有上升但差異不夠顯著，可能是由于樣本量不足。研究表明，大鼠瀉藥性便秘產(chǎn)生的原因可能是C-kit、SCF蛋白表達(dá)量的下降，而中藥溫陽健脾法能夠使c-kit及SCF蛋白表達(dá)提高，從而達(dá)到改善便秘的效果。

綜上所述，使用中醫(yī)溫陽健脾法治療瀉藥性便秘療效確切，能使c-kit及SCF蛋白表達(dá)提高。

［1］吳至久，代淵，王飛．益氣養(yǎng)血溫陽方對瀉藥性便秘大鼠結(jié)腸SP、NOS-1的影響［J］．遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2012，14 (9):70-72．

［2］曾華，田社清．肛管松解術(shù)配合養(yǎng)陰湯治療瀉藥性便秘的療效觀察［J］．中西醫(yī)結(jié)合研究，2014，6(2):57-60．

［3］馮碩，劉紹能．中醫(yī)藥治療功能性便秘機(jī)制的研究進(jìn)展［J］．世界華人消化雜志，2013，21(6):459-463．

［4］任馳，周思遠(yuǎn)，牟建蛟，等．針刺對功能性便秘ENS-ICC調(diào)節(jié)機(jī)制的研究進(jìn)展［J］．世界華人消化雜志，2012，20(19): 1758-1762．

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［7］金·李杲．蘭室秘藏［M］．劉更生，臧守虎，點校．天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社，2000:75．

［8］清·沈金鰲．雜病源流犀燭［M］．李占永，李曉林，校注．北京:中國中醫(yī)藥出版社，1994:144-145．

［9］方?。怨δ苄员忝鼗颊叩娜探】到逃跩］．護(hù)理學(xué)雜志:綜合版，2012，27(8):77-78．

［10］劉薇，劉仍海．溫陽健脾法治療瀉藥性便秘30例的臨床研究［J］．中國臨床醫(yī)生，2013(11):61-63．

［11］劉仍海，劉薇，王蓬文，等．溫陽健脾法對慢傳輸型便秘模型大鼠結(jié)腸神經(jīng)遞質(zhì)影響的研究［J］．北京中醫(yī)藥，2013，32(9):698-701．

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