抗鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1抗體和抗肽?；彼崦搧啺访?抗體與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)性的研究進(jìn)展

劉亞莉，盛君，陸進(jìn)明

（皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，安徽蕪湖241001）

抗鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1抗體和抗肽?；彼崦搧啺访?抗體與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)性的研究進(jìn)展

劉亞莉，盛君，陸進(jìn)明?

（皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，安徽蕪湖241001）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是以關(guān)節(jié)滑膜炎為主要特征的慢性、侵蝕性自身免疫病，其早期臨床癥狀隱匿且多不典型，如不早期治療，病情反復(fù)發(fā)作，最終可導(dǎo)致關(guān)節(jié)的破壞，可致畸甚至喪失勞動(dòng)能力，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。RA的發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為抗原抗體反應(yīng)在其發(fā)展過程中起著重要作用，因而尋找特異性及敏感性較高、在RA發(fā)病早期即可檢測到的自身抗體對于RA的診斷是十分必要的，同時(shí)也可用于RA的預(yù)后及對RA病情活動(dòng)度的監(jiān)測，以便臨床醫(yī)生更好地掌握病情并指導(dǎo)治療。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1；肽?；彼崦搧啺访?；抗體

［Abstract］Rheumatoid arthritis（RA）is a joint synovial inflammation which is a prominent feature of chronic，erosive autoimmune disease.Early clinical symptoms are occult and atypical.If not for the early treatment，an illness will break out repeatedly，ultimately lead to the destruction of the joints，can be deformed or even lose labor ability，seriously affect the patients quality of life.RA pathogenesis is not clear，the antigen-antibody reaction plays an important role in the process of its development.Autoantibodies with higher specificity and sensitivity detected in the early RA disease for the diagnosis of RA is very necessary，can also be used for RA prognosis and monitoring of RA disease activity.

［Key words］rheumatoid arthritis；vraf murine sarcoma viral oncogene homologue B1；peptidylarginine deiminase 4；antibody

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種慢性自身免疫性疾病，早診斷、早治療是延緩RA病情發(fā)展及改善預(yù)后的重要手段。目前診斷RA臨床常用的方法為檢查類風(fēng)濕因子（RF）和抗環(huán)瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide，CCP）抗體，RF敏感性較高，但其特異性較低，在干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、感染甚至正常人都可檢測到RF的存在；而抗CCP抗體對于RA診斷的特異性明顯高于RF，已成為RA臨床診斷較為常用的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。盡管如此，仍有抗CCP抗體及RF均陰性的而導(dǎo)致RA不能早期診斷而延誤治療的情況，因此需要尋找其他可能抗體更好地輔助診斷RA。本文就近幾年來研究較多的RA自身抗體——抗鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1（vraf murine sarcomaviral oncogene homologue B1，BRAF）抗體和抗肽?；彼崦搧啺访?（peptidylarginine deiminase 4，PADI4）抗體作一簡要介紹。

1　抗BRAF抗體

1.1BRAF結(jié)構(gòu)BRAF定位于人染色體7q34，是一個(gè)能轉(zhuǎn)染特定細(xì)胞且具有活性的DNA序列，由Ikawa等［1］在人類尤文肉瘤中首次發(fā)現(xiàn)，并發(fā)現(xiàn)其能誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化，相對分子質(zhì)量在67 000～99 000，主要在神經(jīng)、組織和睪丸中表達(dá)［2］，其編碼的BRAF蛋白為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，由783個(gè)氨基酸組成，在絲裂原蛋白活化激酶（MAPK）信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用，而MAPK通路在RA的關(guān)節(jié)炎癥和骨質(zhì)破壞中起著非常重要的作用［3-5］。張霞等［6］檢測了RA患者關(guān)節(jié)滑液中的BRAF蛋白水平，結(jié)果顯示RA患者BRAF蛋白在關(guān)節(jié)滑液中高表達(dá)，推測其可能在RA病理過程中發(fā)揮作用。2009年Auger等［7］發(fā)現(xiàn)抗BRAF抗體存在于RA患者血清中，提示抗BRAF抗體可能在RA的發(fā)病中起作用。

1.2抗BRAF抗體與RA的發(fā)病機(jī)制目前學(xué)者認(rèn)為BRAF蛋白與抗BRAF抗體結(jié)合后激活MAPK通路導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥的產(chǎn)生，推測在細(xì)胞凋亡的過程中，BRAF蛋白得以釋放，并作為抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生抗BRAF抗體，抗BRAF抗體與BFAF蛋白結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物并沉積在關(guān)節(jié)部位，一方面通過內(nèi)吞等形式進(jìn)入成纖維樣滑膜細(xì)胞，通過一系列反應(yīng)，激活MAPK通路，促進(jìn)細(xì)胞的異常增殖及炎性細(xì)胞因子的釋放，一方面免疫復(fù)合物通過激活補(bǔ)體等途徑激發(fā)炎癥應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致RA的炎癥反應(yīng)并最終造成關(guān)節(jié)破壞。

1.3抗BRAF抗體與抗CCP抗體、病程、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系A(chǔ)uger等［7］研究發(fā)現(xiàn)RA患者血清中抗BRAF抗體陽性率為47.4%，同時(shí)發(fā)現(xiàn)有33%抗BRAF抗體陽性的患者抗CCP抗體陰性，說明抗BRAF抗體可能作為抗CCP陰性的RA診斷的補(bǔ)充檢測手段。此后國內(nèi)也有抗BRAF水平與RA相關(guān)性的研究，張霞等［6］研究顯示抗BRAF抗體水平和抗體陽性率在RA患者中明顯高于其他疾病及健康對照組，其對診斷RA的敏感性和特異性分別為53.6%和84.3%，從而推測抗BRAF抗體可作為RA的特異性抗體應(yīng)用于臨床診斷。在抗CCP抗體及RF均陰性的情況下，RA的診斷較為困難，可能出現(xiàn)假陰性的結(jié)果，因而需要一種新的抗體彌補(bǔ)這一缺陷。李揚(yáng)等［8］發(fā)現(xiàn)RF及抗CCP抗體均陰性與RF或抗CCP抗體陽性的RA患者血清中抗BRAF抗體水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因而推測抗BRAF抗體可有助于血清RF及抗CCP抗體陰性RA患者的診斷。

張霞等［6］在抗BRAF抗體與病程的研究中發(fā)現(xiàn)抗BRAF抗體水平與RA患者的病程呈負(fù)相關(guān)，特別是在病程3個(gè)月極早期的RA患者中，其抗體水平明顯高于病程大于3個(gè)月的RA患者，與李揚(yáng)等［8］研究結(jié)果一致，提示抗BRAF抗體可能更多地在RA的早期發(fā)病，可作為RA早期診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

相關(guān)文獻(xiàn)顯示抗BRAF抗體水平、血沉與RA患者的血紅蛋白水平呈負(fù)相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道的RA患者的病情活動(dòng)度與血紅蛋白呈負(fù)相關(guān)一致，故推測抗BRAF抗體水平與RA患者的病情活動(dòng)度有一定的相關(guān)性，抗BRAF抗體水平越高則提示RA病情活動(dòng)度越高；而張霞等［6］研究結(jié)果則顯示抗BRAF抗體水平與C反應(yīng)蛋白（CRP）水平呈負(fù)相關(guān)，CRP作為反映RA活動(dòng)度的一項(xiàng)指標(biāo)，CRP水平較高的RA患者抗BRAF水平反而越低，這與李揚(yáng)等［8］研究結(jié)果提示的抗BRAF抗體水平越高，RA活動(dòng)度越高相矛盾，可能由于地域、研究樣本、所采用統(tǒng)計(jì)方法的差異所致，因此尚需進(jìn)一步研究抗BRAF抗體與RA病情活動(dòng)度的關(guān)系。

Weisbart等［9］研究發(fā)現(xiàn)BRAF基因突變可能在RA成纖維樣滑膜細(xì)胞異常增殖分化的過程中發(fā)揮重要作用，并認(rèn)為阻斷BRAF剪接變異體中的C末端結(jié)合位點(diǎn)可能成為防止RA患者關(guān)節(jié)侵蝕及破壞的潛在靶點(diǎn)，為RA的治療提供一個(gè)新的方向。

2　抗PADI4　抗體

PADI4基因位于人染色體上的NT-034367.1區(qū)域，共有2 238個(gè)堿基對，相對分子量74 000，其上有16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子，主要在骨髓和外周血細(xì)胞上表達(dá)，擁有核定位信號(hào)（NLS）的酶，PADI4依賴其的介導(dǎo)進(jìn)入細(xì)胞核［10］。PADI4在細(xì)胞核內(nèi)組蛋白的瓜氨酸化和基因表達(dá)調(diào)控方面都發(fā)揮重要作用。

2.1PADI4基因多態(tài)性與RA的易感性PADI4基因5'端至3'端已發(fā)現(xiàn)17個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)，其中PADI4-89、90、92、104是SNP研究的熱點(diǎn)，特別是與RA易感性的關(guān)系。Suzuki等［11］2003年研究發(fā)現(xiàn)PADI4在RA患者滑膜液中呈高度表達(dá)狀態(tài)，進(jìn)一步對PADI4行SNP分析發(fā)現(xiàn)PADI4基因多態(tài)性與RA的易感性顯著相關(guān)，與韓國、德國學(xué)者等研究結(jié)果［12-13］一致，然而英國與法國學(xué)者的研究則發(fā)現(xiàn)PADI4基因多態(tài)性和RA易感性并無明顯相關(guān)［14-15］。2007年Lee等［16］通過對相關(guān)研究進(jìn)行Meta分析，結(jié)果顯示PADI4基因在亞洲人與歐洲人中和RA易感性均具有相關(guān)性，而2010年另外一項(xiàng)對于歐洲人關(guān)于此基因的Meta分析則得出相反的結(jié)論［17］。Fre-denberg等［18］認(rèn)為其結(jié)果的不同可能由于種族的差異及多個(gè)共有的易感基因位點(diǎn)。國內(nèi)對于PADI4基因多態(tài)性與RA易感性的研究也存在分歧，仍需進(jìn)一步研究以明確其相關(guān)性。

2.2PADI4基因多態(tài)性與抗瓜氨酸化蛋白抗體（anti citrullinated protein antibodies，ACPA）ACPA是RA的自身抗體，在RA患者炎性關(guān)節(jié)滑液中異常表達(dá)的ACPA瓜氨酸化的水平與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)，已證實(shí)滑膜組織中ACPA瓜氨酸化水平在RA免疫耐受機(jī)制紊亂中發(fā)揮重要作用。PADI4催化蛋白質(zhì)中的瓜氨酸后產(chǎn)生大量瓜氨酸化蛋白或多肽，針對血清中此類蛋白或多肽的抗體稱為ACPA，其中抗CCP抗體因其敏感性及特異性均較高已廣泛應(yīng)用于RA的診斷。Suzuki等［11］研究發(fā)現(xiàn)ACPA的陽性率與PADI4基因多態(tài)性有關(guān)。但Kapiteny等［19］研究則顯示ACPA的產(chǎn)生與PADI4基因多態(tài)性無相關(guān)性。Cha等［20］研究結(jié)果顯示PADI4可能在RA的早期（發(fā)病≤34周）影響抗CCP抗體的產(chǎn)生。劉翼等［21］也研究了PADI4基因多態(tài)性與抗CCP抗體的相關(guān)性，研究結(jié)果顯示其與抗CCP抗體的水平無明顯相關(guān)性。各學(xué)者研究結(jié)果的差異性可能是由于種族、環(huán)境、遺傳等各方面的原因，需進(jìn)一步加大樣本量行更深入研究。

2.3PADI4與RA發(fā)病機(jī)制PADI可在Ca2+存在的情況下將蛋白多肽中的精氨酸殘基轉(zhuǎn)化為瓜氨酸殘基，瓜氨酸化后的蛋白質(zhì)可改變其分子構(gòu)象，導(dǎo)致其生化活性的改變，并參與許多病理生理反應(yīng)。關(guān)于PADI4導(dǎo)致RA的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確。Vossenaar等［22］認(rèn)為感染、創(chuàng)傷等因素造成關(guān)節(jié)的炎癥，導(dǎo)致含有PADI4的細(xì)胞凋亡，Ca2+水平增加從而激活PADI4，催化細(xì)胞內(nèi)蛋白的瓜氨酸化，蛋白瓜氨酸化的過程中丟失一個(gè)正電荷，且相對分子質(zhì)量發(fā)生改變，使隱藏在分子內(nèi)部的基團(tuán)暴露出來，正電荷減少，致蛋白抗原性增強(qiáng)，易被HLA-DR分子識(shí)別并引發(fā)T細(xì)胞免疫反應(yīng)，形成ACPA，與瓜氨酸化蛋白形成免疫復(fù)合物，激活炎癥細(xì)胞因子，參與RA的發(fā)生和發(fā)展。

2.4抗PADI4抗體與RA的診斷和評估價(jià)值研究發(fā)現(xiàn)RA患者體內(nèi)PADI4分子在自身脫亞胺酶的作用下產(chǎn)生瓜氨酸化殘基，從而誘發(fā)PADI4自身抗體的產(chǎn)生。Takizawa等［23］研究發(fā)現(xiàn)RA患者血清中抗PADI4抗體的陽性率為50%，提示PADI4可能作為自身抗原參與RA的發(fā)病，在原位形成免疫復(fù)合物促進(jìn)反應(yīng)。張霞等［6］結(jié)果顯示抗PADI4抗體對于RA的診斷敏感性為45%，特異性為93.5%，并發(fā)現(xiàn)抗PADI4抗體與DAS28及抗CCP抗體具有相關(guān)性，抗PADI4抗體陽性的RA患者其RF、血沉、IgG、IgM、DAS28、抗CCP抗體水平均高于抗PADI4抗體陰性的患者，X線攝片提示關(guān)節(jié)破壞程度也較抗PADI4抗體陰性患者高。而國內(nèi)另一項(xiàng)研究則顯示RA患者血清抗PA-DI4抗體水平是RA侵蝕性改變的一項(xiàng)新的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，與DAS28及抗CCP抗體無明顯相關(guān)性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)在RF、AKA、抗CCP抗體陰性的患者中抗PADI4抗體陽性率分別為50%、43%、60%，提示抗PADI4抗體水平對于RA的診斷有很高價(jià)值，尤其是在RF、AKA、抗CCP抗體陰性的患者中的診斷［24］。劉秀明等［25］研究發(fā)現(xiàn)RA高活動(dòng)組血清抗PADI4水平與低活動(dòng)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并認(rèn)為抗PADI4抗體可作為RA診斷、鑒別診斷及預(yù)后評估的有效血清學(xué)標(biāo)記。由此認(rèn)為，抗PADI4抗體可作為RA早期診斷，評估病情活動(dòng)性及關(guān)節(jié)侵蝕性改變的新的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，臨床研究意義較大。

3　小結(jié)

抗BRAF抗體與抗PADI4抗體對于RA的診斷有較高的敏感性和特異性，可能成為RA早期診斷的新思路，尤其是對于RF、AKA、抗CCP抗體陰性的患者，聯(lián)合診斷對于RA的確診意義更大，深入研究抗BRAF抗體與抗PADI4抗體將有助于我們深入探索RA的發(fā)病機(jī)制及拓展RA診斷和治療的新領(lǐng)域。但目前其在RA發(fā)病機(jī)制中的作用尚不明確，仍有待進(jìn)一步研究。

［1］Ikawa S，F(xiàn)ukui M，Ueyama Y，et al.B-raf，a new member of the raf-family，is activated by DNA rearrangement［J］，Mol Cell Bi0l，1988，8（6）：2651-2654.

［2］金銀姬，趙金霞，劉湘源，等.鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2014，18（8）：567-569.

［3］Thalhamer T，McGrath MA，Harnett MM.MAPKs and their relevancetoarthritisandinflammation［J］.Rheumatology（Oxford），2008，47（4）：409-414.

［4］López-Santalla M，Salvador-Bernáldez M，González-Alvaro I，et al.T-yr323-dependent p38 activation is associated with rheumatoid arthritis and correlates with disease activity［J］.Arthritis Rheum，2011，63（7）：1833-1842.

［5］Choe JY，Lee SJ，Park SH，et al.Tacrolimus（FK506）inhibits int-erleukin-1β-induced angiopoietin-1，Tie-2 receptor，and vascular endothelial growth factor through down-regulation of JNK and p38 pathway in human rheumatoid fibroblast-like synoviocytes［J］. Joint BoneSpine，2012，79（2）：137-143.

［6］張霞，趙金霞，孫琳，等.抗鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1抗體的檢測及其在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的意義［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，44（2）：195-198.

［7］Auger I，Balandraud N，Rak J，et al.New autoantigens in rheumatoid arthritis（RA）：screening 8268 protein arrays with sera from patients with RA［J］.Ann Rheum Dis，2009，68（4）：591-594.

［8］李揚(yáng)，竺紅.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清抗鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1抗體檢測及臨床意義探討［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2014，18（4）：240-243.

［9］Weisbart RH，Chan G，Li E，et al.BRAF splice variants in rheumatoid arthritis synovial fibroblasts activate MAPK through CRAH［J］.Mol Immunol，2013，55（3-4）：247-252.

［10］Nakashima K，Hagiwara T，Yamada M.Nuclear localization of peptidylarginine deiminase V and histone deimination in granulocytes［J］.J Biol Chem，2002，277（51）：49562-49568.

［11］Suzuki A，Yamada R，Chang X，et al.Functional haplotypes of PADI4，encoding citrullinating enzyme peptidylarginine deiminase 4，are associated with rheumatoid arthritis［J］.Nat Genet，2003，34（4）：395-402.

［12］Kang CP，Lee HS，Ju H，et al.A functional haplotype of the PADI4 geneassociated with increased rheumatoid arthritis susceptibility in Koreans［J］.Arthritis Rheum，2006，54（1）：90-96.

［13］Hoppe B，H?upl T，Gruber R，et al.Detailed analysis of the variability of peptidylarginine deiminase 4 in German patients with rheumatoid arthritis：a case-control study［J］.Arthritis Res T-her，2006，8（2）：R34.

［14］Harney SM，Meisel C，Sims AM，et al.Genetic and genomic studies of PADI4 in rheumatoid arthritis［J］.Rheumatology（Oxford），2005，44（7）：869-872.

［15］Caponi L，Petit-Teixeira E，Sebbag M，et al.A family based study shows no association between rheumatoid arthritis and the PADI4 gene in a white French population［J］.Ann Rheum Dis，2005，64（4）：587-593.

［16］Lee YH，Rho YH，Choi SJ，et al.PADI4 polymorphisms and rheumatoid arthritis susceptibility：a meta-analysis［J］.Rheumatol Int，2007，27（9）：827-833.

［17］Burr ML，Naseem H，Hinks A，et al.PADI4 genotype is not associated with rheumatoid arthritis in a large UK Caucasian population［J］.Ann Rheum Dis，2010，69（4）：666-670.

［18］Freudenberg J，Lee HS，Han BG，et al.Genome-wide association study ofrheumatoid arthritis in Korea：population-specific loci as well as overlap with European susceptibility loci［J］. Arthritis Rheum，2011，63（4）：884-893.

［19］Kapitány A，Szabó Z，Lakos G，et al.Associations between serum anti-CCP antibody，rheumatoid factor levels and HLA-DR4 expression in Hungarian patients with rheumatoid arthritis［J］. Isr Med Assoc J，2008，10（1）：32-36.

［20］Cha S，Choi CB，Han TU，et al.Association of anti-cyclic citrullinated peptide antibody levels with PADI4 haplotypes in early rheumatoid arthritis and with shared epitope alleles in very last rheumatoid arthritis［J］.Arthritis Rheum，2007，56（5）：1463-1464.

［21］劉冀，楊發(fā)滿，李蓉，等.青海地區(qū)回族類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者抗環(huán)瓜氨酸抗體與血清肽?；彼崦搧啺泵富蚨鄳B(tài)性關(guān)系的研究［J］.中國全科醫(yī)學(xué)，2012，15（11B）：3734-3736.

［22］Vossenaar ER，van Venrooij WJ.Anti-CCP antibodies，a highly specific marker for（early）rheumatoid arthritis［J］.Clin Appl Immunol Rev，2003，4：239-262.

［23］Takizawa Y，Sawada T，Suzuki A，et al.Petidylarginine deiminase4（PADI4）identified as a conformation-dependent autoantigen in rheumatoid arthritis［J］.Scand J Rheumatol，2005，34（3）：212-215.

［24］史恒星，錢龍，李向培，等.血清抗肽?；彼崦搧啺泵?抗體檢測在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的意義［J］.免疫學(xué)雜志，2010，26（4）：329-332.

［25］劉秀明，宮怡.血清抗肽酰基精氨酸亞胺酶4抗體與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性探討［J］.寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34（3）：229-233.

Correlation between Anti Vraf Murine Sarcomaviral Oncogene Homologue B1 Antibodies and Anti Peptidylarginine Deiminase 4 Antibodies with Rheumatoid Arthritis

LIU Yali，SHENG Jun，LU Jinming?
（Department of Rheumatology and Immunology，Yijishan Hospital，Wannan Medical College，Wuhu 241001，China）

R593.2

A

1008-2344（2016）05-0377-04

10.16753/j.cnki.1008-2344.2016.05.019

2016-03-23

（文敏 編輯）

陸進(jìn)明（1960—），女（漢），主任醫(yī)師，研究方向：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等風(fēng)濕性疾病的臨床診斷及治療. E-mail：lujm1231@hotmail.com