• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    多菌種協(xié)同發(fā)酵啤酒糟渣和蘋果渣生產(chǎn)蛋白飼料的研究

    2016-03-30 04:03:00王曉力王帆孫尚琛王永剛李想王春梅朱新強(qiáng)孫啟忠
    飼料工業(yè) 2016年3期
    關(guān)鍵詞:蛋白飼料掃描電鏡

    ■王曉力王 帆孫尚琛王永剛李 想王春梅朱新強(qiáng)孫啟忠

    (1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所,甘肅蘭州730050;2.蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州730050;3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所,內(nèi)蒙古呼和浩特010010)

    ?

    多菌種協(xié)同發(fā)酵啤酒糟渣和蘋果渣生產(chǎn)蛋白飼料的研究

    ■王曉力1王帆2孫尚琛2王永剛2李想2王春梅1朱新強(qiáng)1孫啟忠3

    (1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所,甘肅蘭州730050;2.蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州730050;3.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所,內(nèi)蒙古呼和浩特010010)

    摘要:以蘋果渣和啤酒糟為發(fā)酵基質(zhì),利用里氏木霉、黑曲霉、產(chǎn)朊假絲酵母為發(fā)酵菌種,采用單因素3驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)固態(tài)發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化,并對(duì)發(fā)酵飼料品質(zhì)進(jìn)行了評(píng)定,利用掃描電子顯微鏡技術(shù)探究了微生物在固態(tài)發(fā)酵中的作用。結(jié)果表明,最佳的基質(zhì)配比為1∶1,3種微生物配比為1∶1∶1,接種量為8%,含水量、發(fā)酵溫度和時(shí)間分別為60%,35℃和48 h,在此條件下,發(fā)酵后飼料中粗蛋白含量提高34.52%,酸性和中性纖維素含量分別降低22.93%和9.08%。飼料品質(zhì)良好,無結(jié)塊,伴有淡淡的酸香味和蘋果醇香味。尼龍袋瘺管羊瘤胃消化試驗(yàn)表明,72 h后粗蛋白、酸性和中性纖維素消化率分別為79.78%、51.96%和39.88%。掃描電鏡結(jié)果顯示微生物在發(fā)酵過程中破壞了飼料結(jié)晶區(qū)表面結(jié)構(gòu),纖維素分子無定形區(qū)消失,大量酵母細(xì)胞分布在飼料表面,汲取養(yǎng)分生長繁殖成為高蛋白飼料。

    關(guān)鍵詞:蘋果渣;啤酒糟;固態(tài)發(fā)酵;蛋白飼料;掃描電鏡

    糟渣類飼料主要是指農(nóng)副產(chǎn)品加工的廢棄物以及工業(yè)下腳料中可以作為飼料資源的部分,包括工業(yè)副產(chǎn)品酒糟、醋糟、果渣、薯渣等,產(chǎn)量非常大[1-3]。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),我國年產(chǎn)醋糟150~175萬噸、蘋果渣120~150萬噸、酒糟產(chǎn)量3 076.8萬噸[4]。但因這類資源含水量高,易腐敗變質(zhì),含抗?fàn)I養(yǎng)因子,粗纖維含量高而不被廣泛利用,造成了環(huán)境污染和資源的極大浪費(fèi)。隨著我國畜牧業(yè)的快速發(fā)展,飼料原料的供給成為制約我國畜牧業(yè)健康、持續(xù)發(fā)展的瓶頸。據(jù)全國飼料工業(yè)辦公室估算,到2020年,我國僅蛋白質(zhì)飼料缺口就達(dá)到4 800萬噸4]。因此如何對(duì)糟渣類資源進(jìn)行深加工和開發(fā)利用成為緩解飼料資源供應(yīng)不足、治理環(huán)境污染的研究焦點(diǎn)之一。

    針對(duì)糟渣類飼料資源含水量高,營養(yǎng)不均衡,抗?fàn)I養(yǎng)因子等特點(diǎn),涌現(xiàn)出很多飼料開發(fā)技術(shù),如青貯、微貯、氨貯和黃貯等[5-6]。其中微生物發(fā)酵技術(shù)成為提升飼料品質(zhì)的主要技術(shù)手段之一,能有效降低糟渣類物質(zhì)的纖維素含量,改善飼料動(dòng)物適口性,提高蛋白質(zhì)含量及可消化吸收性能。目前關(guān)于酒糟和蘋果渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料的報(bào)道很多[7,13],主要是采用高產(chǎn)纖維素酶和蛋白的微生物進(jìn)行協(xié)同發(fā)酵來改善飼料品質(zhì),獲得高蛋白飼料。但是關(guān)于酒糟和蘋果渣聯(lián)合作為發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵的研究甚少,本研究參考張吉鹍所報(bào)道的《飼料間的組合效應(yīng)及其在配方設(shè)計(jì)中的應(yīng)用》一文[14],基于前期對(duì)酒糟和蘋果渣基本營養(yǎng)組分測定的基礎(chǔ)上,探究了以啤酒糟和蘋果渣為發(fā)酵原料,黑曲霉、里氏木霉和產(chǎn)阮假絲酵母為發(fā)酵菌株的固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料工藝參數(shù),為蘋果渣和酒糟的飼用化提供一條切實(shí)可行的技術(shù)方法。

    1材料與方法

    1.1材料

    1.1.1試驗(yàn)原料

    啤酒糟(蘭州黃河嘉釀啤酒有限公司)、醋糟(蘭州小二黑食品有限公司)、蘋果渣(天水長城果汁集團(tuán)有限公司)。

    1.1.2供試菌株

    黑曲霉孢子粉(孢子含量≥150億/g,沂源康源生物科技有限公司)、里氏木霉(纖維素酶≥30 000 U/g)、產(chǎn)朊假絲酵母粉(酵母菌數(shù)≥30.0億/g),購自武漢東康源科技有限公司。

    1.1.3培養(yǎng)基

    ①PDA斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,去皮,切成小塊,加水煮沸至軟而不爛,用紗布過濾,加瓊脂20 g,融化過濾后加葡萄糖20 g,磷酸二氫鉀2 g,蛋白胨1 g,硫酸鎂1 g,硫酸胺1 g,補(bǔ)水至1 000 ml,pH值調(diào)至7.2~7.4,分裝在4個(gè)500 ml的錐形瓶中,121℃滅菌20 min,冷卻待用。

    ②PDA種子液培養(yǎng)基:與配制上述PDA斜面培養(yǎng)基的方法相同,但不加瓊脂。

    1.2試劑與儀器

    試劑:濃硫酸、濃鹽酸、氫氧化鈉、石油醚、丙酮、硼酸、甲基紅、溴甲酚綠等均為分析純,購自天津市富宇精細(xì)化工有限公司。

    儀器:數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(GZX-9240MBZ,上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)、數(shù)顯電熱培養(yǎng)箱(HPX-9162MBE,上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)、真空泵(SHB-IIIA,鄭州長城科工貿(mào)有限公司)、滅菌鍋(DSX-280B,寧波甬安醫(yī)療器械制造有限公司)、電子分析天平(AB104-N,梅特勒-托利多儀器有限公司)、博蘭特?zé)o菌操作臺(tái)(蘇州博蘭特實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)工程有限公司)、紫外可見分光光度計(jì)(Cary50,美國瓦里安)等。

    1.3試驗(yàn)方法

    1.3.1固態(tài)發(fā)酵工藝流程

    以啤酒糟、蘋果渣和醋糟為發(fā)酵基質(zhì),接種活化后擴(kuò)大培養(yǎng)的黑曲霉、里氏木霉和產(chǎn)朊假絲酵母3種菌懸液(活菌/孢子數(shù)≥109),用無菌玻璃棒在潔凈工作臺(tái)上攪拌均勻,用pH值6.0磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)發(fā)酵基質(zhì)水分含量,分裝100 g于500 ml三角瓶中,在不同的發(fā)酵條件下發(fā)酵。發(fā)酵結(jié)束后,將發(fā)酵產(chǎn)物在60℃下干燥,測定粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量。

    1.3.2單因素發(fā)酵試驗(yàn)

    1.3.2.1固態(tài)發(fā)酵復(fù)合菌種組合的確定

    以啤酒糟、蘋果渣和醋糟(m:m:m=1:1:1)為發(fā)酵基質(zhì),分別將活化后擴(kuò)大培養(yǎng)的黑曲霉、里氏木霉和產(chǎn)朊假絲酵母3種菌懸液(活菌/孢子數(shù)≥109)以單獨(dú)或不同組合方式,按6%的接種量(v:m)接到發(fā)酵基質(zhì)上,用無菌玻璃棒在潔凈工作臺(tái)上攪拌均勻,用pH值6.0磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)發(fā)酵基質(zhì)水分含量為60%,分裝100 g于500 ml三角瓶中,在30℃條件下發(fā)酵5 d,發(fā)酵結(jié)束后,將發(fā)酵產(chǎn)物在60℃下干燥,測定粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量,確定最佳的發(fā)酵菌種組合。

    1.3.2.2固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)配比的確定

    分別改變啤酒糟、蘋果渣和醋糟的配比,接種發(fā)酵菌株參照1.3.2.1節(jié)方法進(jìn)行發(fā)酵,測定粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量,確定最佳的發(fā)酵基質(zhì)組分配比。

    1.3.2.3初始水分含量的確定

    分別改變初始發(fā)酵基質(zhì)含水量,接種發(fā)酵菌株參照1.3.2.1節(jié)方法進(jìn)行發(fā)酵,測定粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量,確定最佳的初始含水量。

    1.3.2.4發(fā)酵時(shí)間的確定

    分別改變發(fā)酵時(shí)間,接種發(fā)酵菌株參照1.3.2.1節(jié)方法進(jìn)行發(fā)酵,測定粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量,確定最佳的發(fā)酵時(shí)間。

    1.3.2.5發(fā)酵溫度的確定

    分別改變發(fā)酵溫度,接種發(fā)酵菌株參照1.3.2.1節(jié)方法進(jìn)行發(fā)酵,測定粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量,確定最佳的發(fā)酵時(shí)間。

    1.3.2.6接種量的確定

    分別改變接種量,接種發(fā)酵菌株參照1.3.2.1節(jié)方法進(jìn)行發(fā)酵,測定粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量,確定最佳的接種量。

    1.3.3正交試驗(yàn)

    在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,以發(fā)酵時(shí)間、溫度和接種量為因素,采用L9(34)表做正交試驗(yàn),以發(fā)酵飼料中粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為評(píng)價(jià)指標(biāo),正交試驗(yàn)因素與水平見表1。

    表1因素水平

    1.3.4分析方法

    ①微生物計(jì)數(shù):采用血球計(jì)數(shù)板法對(duì)黑曲霉、里氏木霉孢子和產(chǎn)朊假絲酵母細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    ②飼料基本成分測定:粗蛋白(CP)含量采用GB/T6432-1994方法測定;粗纖維含量采用GB/T 6434-1994酸堿洗滌法測定;粗脂肪(EE)含量采用索氏提取法測定;灰分(Ash)測定采用GB/T6438-1992中的灰化法;酸性洗滌纖維(ADF)含量參照NY/T 1459-2007方法測定;中性洗滌纖維素(NDF)含量參照GB/T 20806-2006方法測定。

    1.3.5體外消化試驗(yàn)

    飼料經(jīng)65℃干燥后,粉碎過2.5 mm篩孔,選取3只體重為(35±1.5)kg的24月齡安裝有永久性瘤胃瘺管的成年肉用公羊,精粗比為4:6,按1.3倍維持水平飼養(yǎng)(肉羊NRC 2007)。試驗(yàn)動(dòng)物按該品種動(dòng)物常規(guī)程序飼養(yǎng)管理,分圈飼養(yǎng),槽飼喂,每天飼喂2次,自由飲水。測定前至少預(yù)飼15 d。以尼龍袋法(in si?tu)測定飼料在瘤胃中消化6、12、24、36、48和72 h后粗蛋白(CP)、酸性洗滌纖維(ADF)和中性洗滌纖維(NDF)的降解率,本試驗(yàn)在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所進(jìn)行。

    1.3.6掃描電鏡結(jié)構(gòu)表征

    采用離子濺射鍍膜法制備發(fā)酵原料前后電鏡測試樣品,置于掃描電鏡的樣品室中掃描分析,調(diào)節(jié)加速電壓20 kV,放大100~1 000倍,用隨機(jī)工作站進(jìn)行拍攝,觀察飼料表面的形態(tài)。

    1.3.7發(fā)酵飼料質(zhì)量評(píng)價(jià)

    感官評(píng)定:根據(jù)發(fā)酵飼料的氣味、色澤及質(zhì)地評(píng)定飼料發(fā)酵狀況的優(yōu)劣。

    營養(yǎng)成分測定:參照國家標(biāo)準(zhǔn)方法分別測定粗蛋白質(zhì)(CP)、中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)含量等。

    1.3.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    數(shù)據(jù)平行測定3次,結(jié)果由平均值±SD值表示,用Excel 2007完成;采用SPSS 17.0(SPSS Inc.,Chicago)進(jìn)行方差分析和顯著性分析(P<0.05)。

    2結(jié)果與分析

    2.1發(fā)酵原料營養(yǎng)成分分析

    參照國家標(biāo)準(zhǔn)測定方法分別對(duì)啤酒糟、醋糟和蘋果渣基本成分進(jìn)行測定,結(jié)果見表2。3種原料中主要成分是蛋白質(zhì)和纖維素,其中啤酒糟中的蛋白質(zhì)含量最高,可能是含有一定量的酵母等微生物菌體蛋白。此外,基質(zhì)中含有大量的非水溶性纖維素類,也正是大量的非水溶性膳食纖維影響了各飼料原料的適口性。因此采用微生物發(fā)酵法通過降解基質(zhì)中的纖維素類,不僅可以改善飼料原料的口感,還可以產(chǎn)生很多對(duì)動(dòng)物消化吸收有利的代謝產(chǎn)物。

    2.2單因素試驗(yàn)結(jié)果

    2.2.1發(fā)酵基質(zhì)復(fù)合比例的確定

    表2發(fā)酵原料基本營養(yǎng)成分測定結(jié)果(以干基計(jì)%)

    本試驗(yàn)選擇里氏木霉、黑曲霉和產(chǎn)阮假絲酵母為發(fā)酵菌株(1:1:1),為了保證微生物在發(fā)酵前期過程中能良好生長,本試驗(yàn)選擇以可溶性固形物含量較高的啤酒糟和蘋果渣為發(fā)酵主要原料,輔以醋糟進(jìn)行不同配比組合的固態(tài)發(fā)酵試驗(yàn),發(fā)酵產(chǎn)物粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素測定結(jié)果如圖1。從圖1可以看出,B種組合在相同條件下發(fā)酵后的蛋白含量高達(dá)27.89%,明顯高于其他原料復(fù)配組合,而且酸性洗滌纖維和中性洗滌纖維的含量也明顯低于其他組,因此選取B組合作為固態(tài)發(fā)酵的基質(zhì)組合。

    注:A代表醋糟:啤酒糟:蘋果渣=2:2:1;B代表啤酒糟:蘋果渣=4:1;C代表醋糟:啤酒糟:蘋果渣=1:3:1;D代表醋糟:蘋果渣=4:1;E代表醋糟:啤酒糟:蘋果渣=3:1:1。圖1不同基質(zhì)配比發(fā)酵后蛋白質(zhì)、酸性和中性洗滌纖維含量

    2.2.2發(fā)酵菌株的選擇

    糟渣類物質(zhì)主要的組成特點(diǎn)是纖維素含量較高,適口性差,不利于動(dòng)物消化吸收,本試驗(yàn)選擇黑曲霉、里氏木霉和產(chǎn)阮假絲酵母為發(fā)酵菌株,目的是使微生物體內(nèi)的各種酶系協(xié)同作用,從而改善飼料的適口性,降低纖維素含量,提高蛋白質(zhì)含量。以啤酒糟和蘋果渣(m:m=1:1)為發(fā)酵基質(zhì),參照1.3.2.1節(jié)方法將3種菌種以單獨(dú)或不同比例組合方式接種,發(fā)酵結(jié)束后測定飼料中粗蛋白、酸性纖維素和中性纖維素含量,結(jié)果見圖2。從圖2可以看出,不同的菌種組合利用糟渣類物質(zhì)的效率不同,與空白對(duì)照組相比,采用單菌發(fā)酵后的粗蛋白含量提高了20%~35%,而將兩種菌兩兩組合之后,粗蛋白含量提高了30%~50%左右,3種菌同時(shí)混合后進(jìn)行發(fā)酵,結(jié)果粗蛋白的含量提高了34.29%左右,所以本次試驗(yàn)中最佳的菌種組合是3種發(fā)酵菌種按照1:1:1混合,從而可以保證粗蛋白的含量達(dá)到最大。因此選擇里氏木霉、黑曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母三菌混合(1:1:1)作為發(fā)酵菌種。

    注:L代表里氏木霉;H代表黑曲霉;R代表產(chǎn)朊假絲酵母菌。圖2不同菌種組合對(duì)發(fā)酵后飼料蛋白質(zhì)、酸性和中性洗滌纖維含量的影響

    2.2.3初始水分含量的確定

    微生物在發(fā)酵過程中需要有適宜的水分。發(fā)酵底物環(huán)境中的水分直接影響微生物的生長情況,隨著含水量的增加,提高了反應(yīng)體系的水活度,這不僅有利于菌體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的輸送,也增加了菌株代謝產(chǎn)酶量的增加。參照1.3.2.1節(jié)方法分別進(jìn)行初始基質(zhì)水分含量為50%、55%、60%、65%和70%的發(fā)酵試驗(yàn),粗蛋白、纖維素測定結(jié)果如圖3。初始含水量為60%時(shí),所得到的飼料中粗蛋白的含量最高,中性洗滌纖維素含量最小,酸性洗滌纖維素含量較小。因此確定發(fā)酵初始基質(zhì)含水量為60%。

    2.2.4發(fā)酵時(shí)間的確定

    以啤酒糟和蘋果渣(m:m=1:1)為發(fā)酵基質(zhì),里氏木霉、黑曲霉和產(chǎn)阮假絲酵母為發(fā)酵菌株(1:1:1),參照1.3.2.1節(jié)方法分別進(jìn)行24、36、48、60 h和72 h發(fā)酵試驗(yàn),發(fā)酵結(jié)束后飼料中粗蛋白、酸性纖維素和中性纖維素含量測定結(jié)果見圖4,從圖中可以看出當(dāng)發(fā)酵時(shí)間為48 h時(shí),所得到的飼料中粗蛋白的含量最高,發(fā)酵時(shí)間對(duì)飼料中蛋白含量的增加影響是48 h>36 h>60 h>72 h>24 h,纖維素含量降低,說明隨著發(fā)酵時(shí)間的增加,微生物能夠利用基質(zhì)中不溶性纖維素進(jìn)行繁殖和代謝,蛋白質(zhì)含量逐漸增加。

    圖3初始含水量對(duì)發(fā)酵飼料蛋白質(zhì)、酸性和中性洗滌纖維含量的影響

    圖4發(fā)酵時(shí)間對(duì)發(fā)酵飼料蛋白質(zhì)、酸性和中性洗滌纖維含量的影響

    2.2.5發(fā)酵溫度的確定

    溫度是影響微生物生長和代謝活動(dòng)的主要因素之一,由于本次發(fā)酵菌株都屬于真菌,因此分別在25、27.5、30、32.5℃和35℃5個(gè)溫度下進(jìn)行發(fā)酵,其他發(fā)酵參數(shù)同1.3.2.1節(jié)。發(fā)酵結(jié)束后,飼料中蛋白質(zhì)、中性纖維素和酸性纖維素含量如圖5,可以看出,在30℃下飼料中蛋白質(zhì)含量最高,酸性纖維素和中性纖維素含量最低,初步確定發(fā)酵溫度為30℃,既滿足微生物生長代謝,也滿足發(fā)酵代謝中產(chǎn)生的各種酶類所需要的最適宜酶解溫度。

    圖5發(fā)酵溫度對(duì)發(fā)酵飼料蛋白質(zhì)、酸性和中性洗滌纖維含量的影響

    2.2.6接種量的確定

    接種量大小直接影響發(fā)酵過程中微生物的生長和代謝調(diào)控,接種量太小,微生物生長緩慢,發(fā)酵周期變長,接種量太大,會(huì)造成基質(zhì)溫度上升過快,局部溫度過高,發(fā)酵過程不易控制。本研究分別采用接種量(體積分?jǐn)?shù))2%、4%、6%、8%、10%和12%,6個(gè)接種量接種發(fā)酵48 h,發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白、中性纖維素和酸性纖維素含量見圖6,從圖中可以看出接種量在8%時(shí)飼料中粗蛋白含量最大,纖維素含量與其他接種量發(fā)酵條件下差異性不大。究其原因可能是在為微生物的生長是按照指數(shù)增長,后期發(fā)酵過程中微生物數(shù)量的差異性較小,因此發(fā)酵過程中利用纖維素的能力相當(dāng),各條件下纖維素變化不大。

    圖6接種量對(duì)發(fā)酵飼料蛋白質(zhì)、酸性和中性洗滌纖維含量的影響

    2.3正交試驗(yàn)

    基于上述單因素試驗(yàn)結(jié)果,本次試驗(yàn)選擇以啤酒糟和蘋果渣(m:m=1:1)為發(fā)酵基質(zhì),里氏木霉、黑曲霉和產(chǎn)阮假絲酵母為發(fā)酵菌株(1:1:1),接種量為8%為基礎(chǔ)發(fā)酵條件,分別研究發(fā)酵時(shí)間(A)、水分含量(B)和發(fā)酵溫度(C)3種因素對(duì)發(fā)酵飼料蛋白質(zhì)、酸性洗滌纖維素和中性洗滌纖維素含量的影響,按照表1進(jìn)行正交試驗(yàn),蛋白質(zhì)、酸性洗滌纖維素和中性洗滌纖維素含量結(jié)果見圖7,從圖7可以看出各發(fā)酵組與對(duì)照組相比,蛋白質(zhì)含量都有較大程度的增加,纖維素含量都降低,其中組合3蛋白質(zhì)含量最高,但是酸性洗滌纖維素含量組合6最低,中性洗滌纖維素含量組合4最低。因此,以蛋白質(zhì)含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),正交試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可知,發(fā)酵基質(zhì)初始含水率、發(fā)酵溫度和發(fā)酵時(shí)間等因素對(duì)發(fā)酵產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量的影響程度為:發(fā)酵溫度>發(fā)酵時(shí)間>發(fā)酵基質(zhì)初始含水率。而且發(fā)酵最優(yōu)條件為A1B2C3。即:發(fā)酵時(shí)間為48 h,發(fā)酵基質(zhì)初始含水率60%,發(fā)酵溫度為35℃。在此發(fā)酵條件下進(jìn)一步對(duì)該組合進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),經(jīng)測定發(fā)酵后飼料中粗蛋白含量達(dá)37.49%,因此確定本組合為最佳發(fā)酵工藝條件。

    注:1、2、3、4、5、6、7、8、9代表正交試驗(yàn)組合,10代表空白對(duì)照。圖7固態(tài)發(fā)酵正交試驗(yàn)發(fā)酵后蛋白、酸性和中性洗滌纖維含量百分?jǐn)?shù)

    2.4體外消化試驗(yàn)

    以尼龍袋法分別測定微生物發(fā)酵飼料在肉羊瘤胃中消化6、12、24、36、48 h和72 h 6個(gè)時(shí)間點(diǎn)CP、ADF和NDF的消化率,以發(fā)酵基質(zhì)啤酒糟和蘋果渣(m:m=1:1)為對(duì)照組,平行測定3次,結(jié)果見表4。從表中可以看出CP、ADF和NDF相較對(duì)照組消化率顯著增加。由此說明,微生物發(fā)酵過程中能夠利用發(fā)酵基質(zhì)中的可溶性碳源進(jìn)行生長代謝,產(chǎn)生一系列水解酶,如本試驗(yàn)中采用的黑曲霉、里氏木霉能夠分泌纖維素酶,進(jìn)而使得基質(zhì)中的部分纖維素進(jìn)行水解利用,破壞了基質(zhì)中纖維素?zé)o定形晶體結(jié)構(gòu),從而提高了在肉羊瘤胃中的消化性能。

    表3正交試驗(yàn)直觀分析

    2.5發(fā)酵前后飼料表面形態(tài)結(jié)構(gòu)表征

    為了進(jìn)一步分析微生物在發(fā)酵過程中對(duì)發(fā)酵基質(zhì)的作用機(jī)理,采用掃描電子顯微鏡對(duì)發(fā)酵前后飼料表面形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察,結(jié)果如圖8a(發(fā)酵前)和圖8b(發(fā)酵后)。由圖8a可知,發(fā)酵前原料基質(zhì)中木質(zhì)纖維結(jié)構(gòu)排列緊湊,纖維素聚集態(tài)結(jié)構(gòu)清晰,結(jié)構(gòu)致密有,纖維素結(jié)晶區(qū)和無定形區(qū)交錯(cuò)結(jié)合,沿鏈長方向纖維素聚集成微細(xì)纖維狀態(tài)。經(jīng)微生物發(fā)酵作用后,由圖8b可以看出,發(fā)酵基質(zhì)表面形貌變得粗糙,纖維素分子無定形區(qū)消失,結(jié)晶區(qū)表面結(jié)構(gòu)被破壞。由此可見,微生物發(fā)酵技術(shù)對(duì)于提高纖維質(zhì)原料的飼用化具有重要的作用。此外在纖維素降解過程中產(chǎn)生的可溶性碳源有作為微生物生長良好的培養(yǎng)基,如圖8c,大量的酵母細(xì)胞附著在發(fā)酵基質(zhì)表面,出芽繁殖現(xiàn)象明顯,進(jìn)一步說明酵母菌體蛋白是飼料總蛋白含量提高的主要原因之一。

    2.6發(fā)酵飼料營養(yǎng)價(jià)值評(píng)定

    啤酒糟和蘋果渣發(fā)酵基質(zhì)按照正交試驗(yàn)優(yōu)化條件發(fā)酵48 h后,微生物生長較好,飼料表面和內(nèi)部由微生物菌絲體粘連在一起,干燥后手感松散,無結(jié)塊,發(fā)黃,伴有淡淡的酸香味和蘋果醇香味。綜合理化指標(biāo)測定結(jié)果表明,發(fā)酵飼料pH值為5.6,粗蛋白質(zhì)含量37.49%,中性纖維素含量和酸性纖維素含量分別為65.05%和38.81%。結(jié)合瘺管羊飼料消化試驗(yàn)測定結(jié)果表明,蛋白質(zhì)消化率為79.86%,中性和酸性纖維素消化率為39.78%和46.27%。綜合發(fā)酵飼料的質(zhì)量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)感官評(píng)定、化學(xué)評(píng)定和消化性能評(píng)定結(jié)果得出,以黑曲霉、里氏木霉和產(chǎn)阮假絲酵母為混合發(fā)酵菌劑,不僅可以酶解大分子纖維素,改善啤酒糟和蘋果渣發(fā)酵基質(zhì)動(dòng)物飼用的適口性,而且通過微生物生長和代謝過程產(chǎn)生大量的菌體蛋白,將無機(jī)氮源轉(zhuǎn)化成能夠被動(dòng)物消化利用的蛋白質(zhì)類。

    表4發(fā)酵飼料CP、ADF和NDF在羊瘤胃中的消化率(%)

    圖8發(fā)酵前后飼料表面形態(tài)結(jié)構(gòu)表征

    3 結(jié)論

    本試驗(yàn)以啤酒糟和蘋果渣復(fù)合基質(zhì)為主要原料,利用黑曲霉、里氏木霉和產(chǎn)阮假絲酵母混合菌株對(duì)發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行協(xié)同處理,對(duì)其最適菌種配伍、原料配比和發(fā)酵工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化,并以瘺管羊?yàn)槟P?,采用尼龍袋法測定了發(fā)酵飼料的消化性能,對(duì)發(fā)酵飼料進(jìn)行了營養(yǎng)價(jià)值評(píng)定,結(jié)合掃描電子顯微鏡技術(shù)對(duì)發(fā)酵基質(zhì)發(fā)酵前后結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征,進(jìn)一步揭示了微生物在發(fā)酵過程中對(duì)纖維素降解作用和利用發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行生長代謝產(chǎn)生高蛋白菌體飼料的本質(zhì)。

    ①以啤酒糟和蘋果渣(m:m=1:1)為發(fā)酵基質(zhì),接種8%的里氏木霉、黑曲霉和產(chǎn)阮假絲酵母(1: 1:1)混合發(fā)酵菌劑,調(diào)整初始含水率為60%,在35℃下發(fā)酵48 h。相較發(fā)酵基質(zhì),發(fā)酵后飼料中粗蛋白含量從27.87%提高到37.49%,酸性洗滌纖維含量從50.36%降低到38.81%,中性洗滌纖維從71.55%降低到65.05%。

    ②發(fā)酵飼料的品質(zhì)評(píng)定結(jié)果表明,發(fā)酵飼料表面有白色微生物菌絲生長,干燥后手感松散,無結(jié)塊,發(fā)黃,伴有淡淡的酸香味和蘋果醇香味。結(jié)合瘺管羊尼龍袋消化試驗(yàn)結(jié)果顯示發(fā)酵后極大改善了飼料的纖維化,提升了飼料品質(zhì),動(dòng)物適口性得到了有效改善。

    ③掃描電子顯微鏡技術(shù)掃描結(jié)果表明,微生物發(fā)酵技術(shù)在改善糟渣類物質(zhì)結(jié)構(gòu),高效利用糟渣類物質(zhì)生產(chǎn)菌體蛋白飼料方面具有很大的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。

    參考文獻(xiàn)

    [1]趙蕓君,劉娜娜,王培基,等.我國利用糟渣類資源生產(chǎn)蛋白飼料的研究進(jìn)展[J].草食家畜, 2009, 04:51-54.

    [2]鐘榮珍,房義.糟渣類飼料的開發(fā)現(xiàn)狀和在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].飼料工業(yè), 2010, 01:44-48.

    [3]黃潔,徐萍,申躍宇,等.糟渣類副產(chǎn)品飼料在奶牛日糧中的應(yīng)用[J].飼料研究, 2010, 08:60-63.

    [4]崔耀明,董曉芳,佟建明.我國食品及制造業(yè)糟渣類飼料資源的應(yīng)用[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2014,26(7):1728-1737

    [5]劉策,曹清明,刁其玉,等.固態(tài)發(fā)酵技術(shù)在糟渣類副產(chǎn)品的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].糧食與飼料工業(yè), 2013, 12:42-45.

    [6]雷恒,王慧麗,郝薇,等.利用物理化學(xué)參數(shù)評(píng)價(jià)糟渣類副產(chǎn)品的飼料特性[J].飼料工業(yè), 2014, 07:20-25.

    [7]程輝,孟凡智,李發(fā)生,等.酒糟菌體蛋白飼料的生產(chǎn)工藝及其飼喂效果研究[J].飼料研究, 2001, 08:7-8.

    [8]陳學(xué)林,李浩,張余盛.酒糟菌體蛋白飼料的開發(fā)與研究[J].飼料研究, 1994, 10:7-9.

    [9]余有貴,曾傳廣,賀建華.白酒糟開發(fā)蛋白質(zhì)飼料的研究進(jìn)展[J].中國飼料, 2007, 01:12-15.

    [10]莊童琳,李虎,郭鳳霞,等.黑曲霉固態(tài)混菌發(fā)酵蘋果渣生產(chǎn)多酶生物飼料[J].食品工業(yè)科技, 2010, 12:171-175.

    [11]李義海,黃坤勇.蘋果渣的營養(yǎng)成分及在飼料中的應(yīng)用[J].飼料與畜牧, 2011, 02:35-37.

    [12]王來娣,邵丹.蘋果渣作為飼料資源的開發(fā)與利用[J].中國飼料, 2012, 03:43-45.

    [13]陳建軍,曹香林,雷夢(mèng)云,等.蘋果渣發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料及鯉魚離體消化研究[J].飼料研究, 2013, 01:70-74.

    [14]張吉鹍.飼料間的組合效應(yīng)及其在配方設(shè)計(jì)中的應(yīng)用[J].草業(yè)科學(xué), 2009, 12:113-117.

    (編輯:王芳,xfang2005@163.com)

    Study on production of protein feedstuff from apple pomace and brewer's grains by cooperation of different microbial strains

    Wang Xiaoli, Wang Fan, Sun Shangchen, Wang Yonggang, Li Xiang, Wang Chunmei, Zhu Xinqiang, Sun Qizhong

    Abstract:Optimization the solid-state fermentation process was studied by single factor experiment and orthogonal experiment using apple pomace and brewer's grains as fermentation substrate, and Trichodermareesei, Aspergillus niger and Candida utilis as for fermentation strains. As well as, evalua?tion of the fermented feedstuff quality and exploration the role of microorganisms in solid-state fermen?tation using scanning electron microscopy were investigated. The results showed that the proportion of fermentation substrate and three microorganisms were 1∶1 and 1∶1∶1 respectively, inoculum amount was 8%,the water content, fermentation temperature and time was 60%,35℃and 48 h. Un?der optimized conditions,the protein content was increased 34.52%, while the acidic and neutral cellu?lose content were decreased 22.93% and 9.08% respectively. The feedstuff with a fantastic quality and no agglomerate was accompanied by mild acid and apple aroma. The degradability of crude protein, acidic and neutral cellulose in feedstuff using the nylon-bag method in the sheep rumen were 79.78%,51.96% and 39.88% respectively that 72 h after. Scanning electron microscopy results indicated that the microbes in the fermentation process destroyed the surface structure of feed?stuff , amorphous area of cellulose molecules dis?persed, and a large number of yeast cells distrib?uted in the surface of the feedstuff to absorb nu?book=33,ebook=36trients growing to feedstuff with high protein content.

    Key words:apple pomace;brewer's grains;protein feed;digestibility;scanning electron microscopy

    基金項(xiàng)目:公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)子課題:工業(yè)副產(chǎn)品的優(yōu)化利用技術(shù)研究與示范項(xiàng)目資助[201203042]和甘肅省自然基金[1310RJYA022]

    收稿日期:2015-08-08

    通訊作者:孫啟忠,研究員。

    作者簡介:王曉力,副研究員,主要從事畜牧方面的研究工作。

    中圖分類號(hào):S816.6+1

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    文章編號(hào):1001-991X(2016)03-0032-07

    doi:10.13302/j.cnki.fi.2016.03.007

    猜你喜歡
    蛋白飼料掃描電鏡
    《春尺蠖觸角結(jié)構(gòu)與感器掃描電鏡觀察》更正
    中國棉花(2023年9期)2023-12-17 02:08:05
    枸杞葉草粉營養(yǎng)價(jià)值的研究
    掃描電鏡能譜法分析紙張的不均勻性
    掃描電鏡在雙金屬層狀復(fù)合材料生產(chǎn)和研究中的應(yīng)用
    電線電纜(2017年4期)2017-07-25 07:49:48
    利用蔬菜加工副產(chǎn)物發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料研究
    馬鈴薯渣發(fā)酵蛋白飼料研究進(jìn)展
    廣東飼料(2016年3期)2016-12-01 03:43:13
    菌渣固態(tài)發(fā)酵菌體蛋白飼料的工藝優(yōu)化
    利用掃描電鏡技術(shù)研究納米Ni-Fe顆粒對(duì)四氯化碳快速脫氯的機(jī)理
    巖礦測試(2015年3期)2015-12-21 03:57:04
    基于PSO-GRG的背散射模式掃描電鏡的數(shù)字處理及應(yīng)用
    中藥渣生產(chǎn)蛋白飼料的氮源優(yōu)化研究
    中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:03
    18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美日本中文国产一区发布| 久久狼人影院| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产精品99久久99久久久不卡| 日韩有码中文字幕| 色老头精品视频在线观看| 后天国语完整版免费观看| 亚洲人成电影免费在线| 日本 av在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 欧美日韩精品网址| 9191精品国产免费久久| 日本三级黄在线观看| 一级作爱视频免费观看| 视频在线观看一区二区三区| 欧美在线一区亚洲| 欧美乱妇无乱码| tocl精华| 国产麻豆69| av超薄肉色丝袜交足视频| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲精品一二三| 岛国视频午夜一区免费看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国产又爽黄色视频| 成人三级黄色视频| 亚洲 国产 在线| 纯流量卡能插随身wifi吗| 手机成人av网站| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 女警被强在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美亚洲日本最大视频资源| videosex国产| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 一区二区三区激情视频| 香蕉久久夜色| 国产成人精品久久二区二区免费| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲 欧美一区二区三区| 黄色怎么调成土黄色| 欧美最黄视频在线播放免费 | 一级毛片女人18水好多| 国产av一区在线观看免费| 性少妇av在线| 很黄的视频免费| av福利片在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 51午夜福利影视在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费观看人在逋| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 一级片免费观看大全| 51午夜福利影视在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美日韩视频精品一区| 久9热在线精品视频| 99国产综合亚洲精品| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 久久久久久久久久久久大奶| 超色免费av| 国产色视频综合| 日本vs欧美在线观看视频| 精品久久久久久成人av| 精品久久久久久久久久免费视频 | 97碰自拍视频| 国产欧美日韩一区二区三| 免费人成视频x8x8入口观看| 男人舔女人的私密视频| 村上凉子中文字幕在线| 丰满的人妻完整版| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 99久久国产精品久久久| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 中文字幕色久视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久久国产一区二区| 最新美女视频免费是黄的| 日韩大尺度精品在线看网址 | x7x7x7水蜜桃| 一区二区三区精品91| bbb黄色大片| 午夜精品在线福利| 免费不卡黄色视频| 亚洲avbb在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 老熟妇仑乱视频hdxx| ponron亚洲| 免费看a级黄色片| 免费看a级黄色片| 国产高清激情床上av| a级片在线免费高清观看视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产黄a三级三级三级人| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 99国产精品免费福利视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| 51午夜福利影视在线观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 一级a爱片免费观看的视频| 一a级毛片在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 国产午夜精品久久久久久| 国产午夜精品久久久久久| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 新久久久久国产一级毛片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产又爽黄色视频| 久久天堂一区二区三区四区| 久久中文看片网| 91成年电影在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲七黄色美女视频| 麻豆av在线久日| 99在线视频只有这里精品首页| 精品久久久久久电影网| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 美女 人体艺术 gogo| 日本vs欧美在线观看视频| 国产区一区二久久| 亚洲人成电影观看| 十八禁人妻一区二区| 精品日产1卡2卡| 日韩大尺度精品在线看网址 | 久久精品91无色码中文字幕| 欧美精品一区二区免费开放| 国产单亲对白刺激| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产精品一区二区三区四区久久 | 日日爽夜夜爽网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久久久久午夜电影 | 国产精品乱码一区二三区的特点 | 精品日产1卡2卡| 黄片播放在线免费| 亚洲熟女毛片儿| 高清在线国产一区| 在线观看舔阴道视频| 精品电影一区二区在线| 国产深夜福利视频在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 久久精品国产清高在天天线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧美日韩乱码在线| 1024视频免费在线观看| x7x7x7水蜜桃| 亚洲在线自拍视频| 久久香蕉精品热| 国产一区二区激情短视频| 狂野欧美激情性xxxx| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 制服诱惑二区| 亚洲一区中文字幕在线| 国产三级黄色录像| 亚洲avbb在线观看| 丝袜在线中文字幕| 满18在线观看网站| 可以在线观看毛片的网站| 97碰自拍视频| a级毛片在线看网站| 成人影院久久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品久久视频播放| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| av免费在线观看网站| 免费高清视频大片| 校园春色视频在线观看| 18禁观看日本| 麻豆av在线久日| 男男h啪啪无遮挡| 一区福利在线观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲中文字幕日韩| cao死你这个sao货| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲少妇的诱惑av| 一区二区三区精品91| 美国免费a级毛片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲免费av在线视频| 午夜两性在线视频| 69av精品久久久久久| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美av亚洲av综合av国产av| bbb黄色大片| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲九九香蕉| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲精华国产精华精| 一级毛片精品| 精品国产美女av久久久久小说| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久久国产成人精品二区 | 99精品久久久久人妻精品| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久久国产成人精品二区 | 国产精品野战在线观看 | 亚洲五月婷婷丁香| 精品日产1卡2卡| 亚洲色图综合在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久久国产欧美日韩av| 日本黄色日本黄色录像| 国产有黄有色有爽视频| 欧美激情高清一区二区三区| 99在线视频只有这里精品首页| svipshipincom国产片| 美国免费a级毛片| 悠悠久久av| 99热只有精品国产| 中文字幕人妻丝袜制服| 两人在一起打扑克的视频| 高清欧美精品videossex| 亚洲成a人片在线一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产一区二区三区视频了| 视频区欧美日本亚洲| 免费在线观看黄色视频的| 久久伊人香网站| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 丁香欧美五月| 久久精品人人爽人人爽视色| 成人手机av| svipshipincom国产片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 欧美激情 高清一区二区三区| 交换朋友夫妻互换小说| www.精华液| 曰老女人黄片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美日韩亚洲高清精品| 视频区欧美日本亚洲| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲 欧美一区二区三区| 岛国在线观看网站| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲九九香蕉| 老司机福利观看| a级毛片黄视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 丝袜美腿诱惑在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产成人精品久久二区二区91| x7x7x7水蜜桃| 麻豆成人av在线观看| 国产三级黄色录像| 人妻久久中文字幕网| 亚洲成人免费电影在线观看| 精品福利永久在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 黄色毛片三级朝国网站| 啦啦啦 在线观看视频| 搡老乐熟女国产| 成人三级黄色视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 嫩草影视91久久| 成人手机av| 欧美精品亚洲一区二区| 精品福利永久在线观看| 国产精品国产高清国产av| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 成年人免费黄色播放视频| 天堂影院成人在线观看| 欧美黑人精品巨大| 日韩有码中文字幕| 日韩免费高清中文字幕av| 美女午夜性视频免费| 一个人免费在线观看的高清视频| 日本一区二区免费在线视频| 欧美乱码精品一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| 电影成人av| 正在播放国产对白刺激| 欧美日韩黄片免| 国产一区二区在线av高清观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| svipshipincom国产片| 国产精品亚洲一级av第二区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 91成年电影在线观看| 高清av免费在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 9191精品国产免费久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 高清毛片免费观看视频网站 | av国产精品久久久久影院| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲激情在线av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产黄色免费在线视频| 校园春色视频在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 老司机亚洲免费影院| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 极品教师在线免费播放| www.999成人在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日韩视频一区二区在线观看| 中出人妻视频一区二区| 午夜两性在线视频| 岛国视频午夜一区免费看| 真人一进一出gif抽搐免费| 中文字幕高清在线视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 69av精品久久久久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲成人免费电影在线观看| av有码第一页| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 欧美黑人精品巨大| 中文欧美无线码| 高潮久久久久久久久久久不卡| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久久国产成人精品二区 | 一a级毛片在线观看| 午夜免费激情av| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 午夜免费成人在线视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 精品日产1卡2卡| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美成人午夜精品| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜精品在线福利| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产真人三级小视频在线观看| videosex国产| 久久久国产成人精品二区 | 99精品欧美一区二区三区四区| 一级作爱视频免费观看| 黑人操中国人逼视频| 国产男靠女视频免费网站| 日韩欧美免费精品| 成人影院久久| 午夜精品国产一区二区电影| 丝袜美腿诱惑在线| 高清av免费在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 成人亚洲精品一区在线观看| 在线观看日韩欧美| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99精品久久久久人妻精品| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产又爽黄色视频| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲伊人色综图| 交换朋友夫妻互换小说| 精品第一国产精品| 麻豆久久精品国产亚洲av | 人妻久久中文字幕网| 亚洲精品成人av观看孕妇| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品无人区乱码1区二区| 成人永久免费在线观看视频| 在线免费观看的www视频| 久99久视频精品免费| 亚洲专区字幕在线| 久久天堂一区二区三区四区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 老司机亚洲免费影院| 99国产精品免费福利视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 18美女黄网站色大片免费观看| 伦理电影免费视频| 国产成人欧美| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 纯流量卡能插随身wifi吗| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产成人av激情在线播放| 色在线成人网| 国产成人影院久久av| 色播在线永久视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| tocl精华| 亚洲一区二区三区不卡视频| 在线永久观看黄色视频| 久久久国产成人精品二区 | 一个人免费在线观看的高清视频| 精品久久蜜臀av无| 亚洲精品成人av观看孕妇| 女性生殖器流出的白浆| www国产在线视频色| 精品福利观看| 精品人妻在线不人妻| 国产精品久久视频播放| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美日韩乱码在线| 高清在线国产一区| 欧美日韩黄片免| 99精国产麻豆久久婷婷| 中文字幕色久视频| 老鸭窝网址在线观看| 国产高清videossex| 亚洲全国av大片| 日本a在线网址| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 黄色怎么调成土黄色| 12—13女人毛片做爰片一| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美日本中文国产一区发布| 久久性视频一级片| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 宅男免费午夜| 成人国语在线视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本三级黄在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 天堂动漫精品| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 美女高潮到喷水免费观看| 午夜久久久在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 最近最新免费中文字幕在线| 久久精品国产综合久久久| 久久精品国产清高在天天线| 老司机午夜十八禁免费视频| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久精品国产亚洲av高清一级| 可以在线观看毛片的网站| 黄色女人牲交| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线观看免费视频日本深夜| 99国产综合亚洲精品| 亚洲色图综合在线观看| 国产av一区二区精品久久| 国产乱人伦免费视频| 一本大道久久a久久精品| 啦啦啦 在线观看视频| 国产精品一区二区在线不卡| 久久亚洲精品不卡| 成人国语在线视频| 男人舔女人的私密视频| 在线观看日韩欧美| 丝袜在线中文字幕| 两性夫妻黄色片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久精品91无色码中文字幕| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产1区2区3区精品| 国产一区二区三区综合在线观看| 制服人妻中文乱码| 他把我摸到了高潮在线观看| 很黄的视频免费| 悠悠久久av| 嫁个100分男人电影在线观看| 麻豆成人av在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 村上凉子中文字幕在线| 波多野结衣一区麻豆| 一级黄色大片毛片| 一级,二级,三级黄色视频| 日韩精品中文字幕看吧| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲欧美一区二区三区久久| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 高潮久久久久久久久久久不卡| 在线永久观看黄色视频| 黑人猛操日本美女一级片| 美女大奶头视频| 欧美中文日本在线观看视频| 涩涩av久久男人的天堂| 久久午夜亚洲精品久久| 一级黄色大片毛片| 在线观看免费日韩欧美大片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲av电影在线进入| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日本精品一区二区三区蜜桃| 高清在线国产一区| 一a级毛片在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲国产精品999在线| 最新在线观看一区二区三区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 三级毛片av免费| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 国产免费男女视频| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 日韩欧美在线二视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 超色免费av| 老司机亚洲免费影院| 日韩中文字幕欧美一区二区| 免费人成视频x8x8入口观看| 老司机亚洲免费影院| 欧美激情高清一区二区三区| 看片在线看免费视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 两个人免费观看高清视频| 午夜久久久在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 成人国语在线视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲全国av大片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美日韩av久久| 最近最新中文字幕大全免费视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 成人免费观看视频高清| 看免费av毛片| 99热只有精品国产| 国产在线精品亚洲第一网站| 宅男免费午夜| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲,欧美精品.| 伦理电影免费视频| 婷婷六月久久综合丁香| 久久伊人香网站| 欧美黑人精品巨大| 高清av免费在线| 99re在线观看精品视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 色在线成人网| 性欧美人与动物交配| 午夜影院日韩av| 成年女人毛片免费观看观看9| 午夜影院日韩av| 国产成人欧美在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲免费av在线视频| 丁香欧美五月| 校园春色视频在线观看| 久热这里只有精品99| 免费av中文字幕在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日韩欧美在线二视频| 最好的美女福利视频网| 久久久久九九精品影院| av免费在线观看网站| 男女下面插进去视频免费观看| 看黄色毛片网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲av成人av| 脱女人内裤的视频| 美女高潮到喷水免费观看| 成人精品一区二区免费| 国产精品av久久久久免费| 美国免费a级毛片| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产色视频综合| 身体一侧抽搐| 一进一出抽搐动态| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 久久香蕉激情| 亚洲 国产 在线| 免费不卡黄色视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 校园春色视频在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 高清在线国产一区| 亚洲男人天堂网一区|