三陰性乳腺癌中COX-2、NF-κB及VEGF表達(dá)的臨床研究*

?

·論著·

三陰性乳腺癌中COX-2、NF-κB及VEGF表達(dá)的臨床研究*

馬玲娣，董燕芬，劉乾，范靜，蔣麗佳，陳亞紅

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州市第二人民醫(yī)院檢驗科，江蘇常州 213000)

摘要:目的研究環(huán)氧酶(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義。方法選取2010年1月至2014年12月于該院進(jìn)行乳腺癌治療的100例患者為研究對象，其中三陰性乳腺癌50例，非三陰性乳腺癌50例，采用免疫組織化學(xué)法檢測100例患者乳腺癌組織中COX-2、NF-κB及VEGF的表達(dá)，并應(yīng)用D2-40標(biāo)記檢測淋巴管浸潤和淋巴管密度，對相關(guān)的臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果COX-2在三陰性與非三陰性乳腺癌中的表達(dá)分別為76%、70%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)，VEGF在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達(dá)率分別為60%和36%，差異有統(tǒng)計意義(P<0.05)。NF-κB在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達(dá)率分別為66%和32%，差異有統(tǒng)計意義(P<0.05)。三陰性乳腺癌組織中乳腺癌中NF-κB與VEGF，COX-2與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論放化療是三陰性乳腺癌術(shù)后治療的主要手段，而抑制NF-κB、VEGF和COX-2的表達(dá)有望成為治療三陰性乳腺癌的新靶點，值得研究探索。

關(guān)鍵詞:三陰性乳腺癌；環(huán)氧酶；血管內(nèi)皮生長因子

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，成為威脅女性健康的主要病因[1]。三陰性乳腺癌是指雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體均呈現(xiàn)陰性的一種特殊類型的乳腺癌[2]，多發(fā)生于絕經(jīng)前年輕女性，約占所有乳腺癌的15%，具有較強(qiáng)的腫瘤侵襲能力，易于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，內(nèi)臟轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率較高，3年之內(nèi)為轉(zhuǎn)移高峰。預(yù)后較其他類型乳腺癌差，有較高的死亡風(fēng)險[3]。三陰性乳腺癌和基底細(xì)胞樣型乳腺癌之間存在某些基因表達(dá)譜和免疫表型上的差異，對此，本文選取2010年1月至2014年12月于本院進(jìn)行乳腺癌治療的100例患者為研究對象，采用免疫組織化學(xué)法檢測100例乳腺癌組織中環(huán)氧酶(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)，并應(yīng)用D2-40標(biāo)記檢測淋巴管浸潤和淋巴管密度，對相關(guān)的臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計分析，取得十分滿意的療效，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2010年1月至2014年12月于本院進(jìn)行乳腺癌治療的100例患者為研究對象，患者均為女性,其中三陰性乳腺癌50例，年齡為18～64歲；非三陰性乳腺癌50例，患者均為女性,年齡18～65歲，術(shù)前均未行放、化療及免疫治療，術(shù)后均經(jīng)病理組織學(xué)證實為乳腺癌。ER、PR、HER-2均為陰性的患者診斷為三陰性乳腺癌。納入標(biāo)準(zhǔn)：明確診斷為乳腺癌，符合三陰性乳腺癌證候標(biāo)準(zhǔn)，試驗前1個月未接受其他腫瘤藥物治療，預(yù)計生存期在6個月以上，患者精神、體力尚好，年齡18～65歲。

1.2試驗方法檢測NF-κBp65來表示NF-κB，因為NF-κBp65是NF-κB的主要組成因子,兔抗人NF-κBp65抗體、SABC試劑盒均購自武漢博士德公司。鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人COX-2單克隆抗體均購自Santa Cruz公司，采用SABC法，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。主要包括山羊血清封閉,分別依次滴加抗NF-κBp65、COX-2、VEGF抗體過夜(工作濃度1∶2 000),生物素化二抗及ABC復(fù)合物,DAB顯色,蘇木精復(fù)染后封片。用PBS代替一抗作陰性對照,用已知乳腺癌陽性片做陽性對照。全部新鮮標(biāo)本24 h內(nèi)經(jīng)4%甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋，厚4 μm連續(xù)切片，均作HE和免疫組織化學(xué)染色。

1.3療效評價每張切片分別隨機(jī)取共5個區(qū)域的細(xì)胞計數(shù)，每個區(qū)計數(shù)200個腫瘤細(xì)胞，共計數(shù)1 000個細(xì)胞，計算染色細(xì)胞所占比例，NF-κB陽性染色呈淺棕色或深棕色，定位于細(xì)胞核。陽性染色細(xì)胞數(shù)小于10%為表達(dá)陰性(-);≥10%為表達(dá)陽性(+)。COX-2和VEGF陽性染色陽性細(xì)胞呈棕黃或棕褐色顆粒，主要定位于細(xì)胞漿。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS15.0，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌COX-2、NF-κB和VEGF表達(dá)率比較COX-2和VEGF陽性染色陽性細(xì)胞呈棕黃或棕褐色顆粒，主要定位于細(xì)胞漿。COX-2在三陰性乳腺癌的陽性表達(dá)率為76%，高于非三陰性乳腺癌的70%，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。然而，VEGF在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達(dá)率分別為60%和36%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。NF-κB在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達(dá)率分別為66%和32%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1(見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2.2三陰性乳腺癌組織中NF-κB與VEGF表達(dá)的關(guān)系在33例NF-κB陽性標(biāo)本中,有28例同時存在VEGF陽性表達(dá)；而在20例VEGF陰性標(biāo)本中,有15例伴NF-κB表達(dá)缺失,相關(guān)分析證實,三陰性乳腺癌組織中NF-κB與VEGF表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，結(jié)果見表2。

表2　　三陰性乳腺癌組織中NF-κB與VEGF

表3　　三陰性乳腺癌組織中COX-2與VEGF

2.3三陰性乳腺癌組織中COX-2與VEGF表達(dá)的關(guān)系在38例COX-2陽性標(biāo)本中,有29例同時存在VEGF陽性表達(dá)；而在20例VEGF陰性標(biāo)本中,有11例伴COX-2表達(dá)缺失,相關(guān)分析證實,三陰性乳腺癌組織中COX-2與VEGF表達(dá)顯著正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)果見表3。

3討論

NF-κB是一類重要的核轉(zhuǎn)錄因子，一般情況下，NF-κB以非活性形式存在于胞質(zhì)，當(dāng)NF-κB被激活后，NF-κB從胞質(zhì)轉(zhuǎn)位于胞核，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞激酶、趨化因子、生長因子、細(xì)胞黏附因子及早期反應(yīng)的蛋白質(zhì)分子基因的轉(zhuǎn)錄[4]。然而其異常激活將導(dǎo)致細(xì)胞不能正常轉(zhuǎn)導(dǎo)信號，促進(jìn)細(xì)胞癌變。參與細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng)[5-6]，近年來研究表明NF-κB異?；罨c許多人類疾病，例如乳腺腫瘤、卵巢腫瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等多種實體腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7-9]。在本研究中，三陰性乳腺癌病變中 NF-κB 陽性表達(dá)率為66%,非三陰性乳腺癌病變中 NF-κB 陽性表達(dá)率為32%，顯示在三陰性乳腺癌組織中 NF-κB表達(dá)顯著高于非三陰性乳腺癌組織。

COX-2 是一種膜結(jié)合蛋白酶，參與新生血管生成、腫瘤細(xì)胞增殖，并且抑制凋亡，從而有利于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。在通常情況下，在乳腺癌患者中具有較高的表達(dá)，且與預(yù)后密切相關(guān)[10]。因此，COX-2在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用[11]。然而，大多數(shù)乳房惡性腫瘤的高病死率與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[12]。本研究表明COX-2 在三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌中分別為76% 和 70%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，其主要原因可能在于COX-2 是大多數(shù)腫瘤比較普遍的基因表達(dá)產(chǎn)物，并且參與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的多個方面。

VEGF 是一種能夠特異性促使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，參與內(nèi)皮細(xì)胞活化、遷移、入侵和生存的蛋白，在多種實體惡性腫瘤中具有較高的表達(dá)[13]。研究表明，乳腺腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴血管的生成，即從現(xiàn)有的血管形成新的血管網(wǎng)絡(luò)。然而，這一過程的主要調(diào)節(jié)者是VEGF[14]。在本研究中，三陰性乳腺癌病變中 VEGF陽性表達(dá)率為60%,非三陰性乳腺癌病變中VEGF陽性表達(dá)率為36%，可見在三陰性乳腺癌組織中 VEGF表達(dá)顯著高于非三陰性乳腺癌組織。綜上所述，三陰性乳腺癌病變中，COX-2、NF-κB及VEGF均呈現(xiàn)高表達(dá),與非三陰性乳腺癌病變組織相比，NF-κB及VEGF表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

除此之外，本研究發(fā)現(xiàn)NF-κB與VEGF，COX-2與VEGF表達(dá)存在明顯正相關(guān)。放化療是三陰性乳腺癌術(shù)后治療的主要手段，近年來，分子靶向治療成為了研究的焦點，但目前尚無標(biāo)準(zhǔn)的治療方法[15]。COX-2、NF-κB和VEGF 在三陰性乳腺癌中高表達(dá)，且NF-κB與VEGF，COX-2與VEGF表達(dá)存在明顯正相關(guān)。因此，抑制NF-κB、VEGF和COX-2的表達(dá)有望成為治療三陰性乳腺癌的新靶點。

參考文獻(xiàn)

[1]Desantis C,Siegel R,Bandi P,et al.Breast Cancer statistics,2011[J].CA Cancer J Clin,2011,61(6):409-418.

[2]O′shaughnessy J,Osborne C,Pippen JE,et al.Iniparib plus chemotherapy in metastatic triple-negative breast Cancer[J].N Engl J Med,2011,364(3):205-214.

[3]ThummuriD,JeengarMK,ShrivastavaS,etal.

Boswellia ovalifoliolata abrogates ROS mediated NF-κB activation,causes apoptosis and chemosensitization in triple negative breast cancer cells[J].Environ Toxicol Pharmacol,2014,38(1):58-70.

[4]Jimenez X,Lu D,Brennan L,et al.A recombinant,fully human,bispecific antibody neutralizes the biological activities mediated by both vascular endothelial growth factor receptors 2 and 3[J].Mol Cancer Ther,2005,4(3):427-434.

[5]Ahn KS,Sethi G,Aggarwal BB.Nuclear factor-kappa B:from clone to clinic[J].Curr Mol Med,2007,7(7):619-637.

[6]Kalaitzidis D,Gilmore TD.Transcription factor cross-talk:the estrogen receptor and NF-kappaB[J].Trends Endocrinol Metab,2005,16(2):46-52.

[7]Karin M,Greten FR.NF-kappaB:linking inflammation and immunity to Cancer development and progression[J].Nat Rev Immunol,2005,5(10):749-759.

[8]Biswas DK,Shi Q,Baily S,et al.NF-kappa B activation in human breast Cancer specimens and its role in cell proliferation and apoptosis[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2004,101(27):10137-10142.

[9]Pacifico F,Mauro C,Barone C,et al.Oncogenic and anti-apoptotic activity of NF-kappa B in human thyroid carcinomas[J].J Biol Chem,2004,279(52):54610-54619.

[10]Sun L,Yu DH,Sun SY,et al.Expressions of ER,PR,HER-2,COX-2,and VEGF in primary and relapsed/metastatic breast cancers[J].Cell Biochem Biophys,2014,68(3):511-516.

[11]Ho MY,Liang SM,Hung SW,et al.MIG-7 controls COX-2/PGE2-mediated lung Cancer metastasis[J].Cancer Res,2013,73(1):439-449.

[12]Okuda H,Xing F,Pandey PR,et al.miR-7 suppresses brain metastasis of breast Cancer stem-like cells by modulating KLF4[J].Cancer Res,2013,73(4):1434-1444.

[13]Valdehita A,Carmena MJ,Bajo AM,et al.RNA interference-directed silencing of VPAC1 receptor inhibits VIP effects on both EGFR and HER2 transactivation and VEGF secretion in human breast Cancer cells[J].Mol Cell Endocrinol,2012,348(1):241-246.

[14]Vidaurreta M,Sánchez-Munoz R,Veganzones S,et al.Vascular endothelial growth factor gene polymorphisms in patients with colorectal cancer[J].Rev Esp Enferm Dig,2010,102(1):20-31.

[15]Foulkes WD,Smith IE,Reis-Filho JS.Triple-negative breast cancer[J].N Engl J Med,2010,363(20):1938-1948.

Clinical research on COX-2,NF-κB and VEGF expression in triple negative breast cancer*

MaLingdi,DongYanfen,LiuQian,FanJing,JiangLijia,ChenYahong

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChangzhouSecondPeople′sHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Changzhou,Jiangsu213000,China)

Abstract:ObjectiveTo study the cyclooxygenase (COX-2),nuclear factor-κB (NF-κB) and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression and clinical significance in triple negative breast cancer.MethodsFrom January 2010 to December 2014,breast cancer treatment in our hospital 100 patients for the study,50 patients with triple negative breast cancer,50 cases of non-triple negative breast cancer was detected by immunohistochemistry，100 cases of breast cancer were detected by immunohistochemistry in organizations COX-2,NF-κB and VEGF expression of lymphatic vessel invasion and lymph vessel density and D2-40 mark detection,statistical analysis of relevant clinical and pathological information.ResultsCOX-2 in triple negative and non-triple negative breast cancer were 76%,70%,the difference was not statistically significant (P>0.05),VEGF triple negative breast cancer and non-triple negative breast lesions in cancerous lesions positive expression rates of 60% and 36%,respectively,which had significant difference (P<0.05).NF-κB in triple negative breast cancer lesions and non-triple negative breast lesions positive expression rate was 66% and 32%,respectively,which had significant difference (P<0.05).Triple negative breast cancer NF-κB and VEGF,COX-2 and VEGF expression was significantly positively related to breast cancer.ConclusionRadiation and chemotherapy is a major means of triple negative breast cancer postoperative treatment,while inhibiting the NF-κB,the expression of VEGF and COX-2 is expected to become the new target for treatment of triple negative breast cancer,is worth exploring.

Key words:triple negative breast cancer; cyclooxygenase;vascular endothelial growth factor

(收稿日期：2015-11-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.002

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0436-03

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目(81101647)。

作者簡介：馬玲娣，女，副主任技師，主要從事腫瘤免疫及中藥抗腫瘤研究。