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    五子衍宗丸中脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜分析

    2016-03-30 01:14:43黃旭暉付婷婷丘偉中閔存云王昌俊
    現(xiàn)代醫(yī)院 2016年8期
    關(guān)鍵詞:烷酸烯酸甲酯

    譚 為 黃旭暉 付婷婷 丘偉中 閔存云 王昌俊

    五子衍宗丸中脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜分析

    譚 為 黃旭暉 付婷婷 丘偉中 閔存云 王昌俊

    目的明確五子衍宗丸中脂肪酸的組成和含量。方法采用索氏提取法對五子衍宗丸中的脂肪油進(jìn)行提取,甲酯化后,利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對其脂肪酸的組成和含量進(jìn)行分析測定。結(jié)果五子衍宗丸中共測出19種脂肪酸,其中飽和脂肪酸9種,不飽和脂肪酸10種。其絕對含量分別為十四烷酸的含量為0.050%,十五烷酸甲酯的含量為0.004%,十六烷酸的含量為0.379%,十六烯酸的含量為0.005%,十七烷酸的含量為0.034%,十七碳烯酸甲酯的含量為0.002%,十八烷酸的含量為0.066%,十八烯酸的含量為0.447%,十八碳二烯酸的含量為1.080%,γ-十八碳三烯酸的含量為0.920%,α-十八碳三烯酸的含量為0.213%,二十烷酸的含量為0.005%,二十碳烯酸的含量為0.002%,HOMO-γ-二十碳三烯酸的含量為0.001%,二十二烷酸的含量為0.008%,二十二碳烯酸的含量為0.001%,二十三烷酸的含量為0.001%,二十四烷酸的含量為0.006%,二十四碳烯酸的含量為0.001%。結(jié)論五子衍宗丸含有的多種脂肪酸成分可能是其部分藥理作用的基礎(chǔ)。

    五子衍宗丸;脂肪酸;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

    【Author's address】 Guangdong General Hospital&Guangdong Academy of Medical Sciences,Guangdong Geriatric Institute,Guangzhou,510080,China

    五子衍宗丸由菟絲子、枸杞子、覆盆子、五味子及車前子組方,是著名的補(bǔ)腎良方。方中菟絲子性溫,入腎經(jīng),以壯腎陽;枸杞子性甘平,入腎經(jīng),補(bǔ)陰益精;覆盆子性微溫,歸腎經(jīng),溫腎固精;五味子性溫,味酸甘,酸甘化陰,能補(bǔ)肝腎之陰;車前子利濕固氣,具有很好的補(bǔ)腎填精作用。全方陰陽雙補(bǔ),陰中求陽,且邪有出路,兼顧填補(bǔ)腎氣,為方中之上品。據(jù)考證該方起源于唐代道教的《懸解錄》中,書中有張果獻(xiàn)給唐玄宗的五子守仙丸方,即是五子衍宗方的原貌[1]。1977年版藥典收載并更名為五子補(bǔ)腎丸,1985年至2010年版藥典收載為五子衍宗丸,具有補(bǔ)腎益精、種嗣衍宗之功,主要用于腎虛精虧所致的陽痿不育、遺精早泄、腰痛、尿后余瀝。被譽為古今“種子第一方”,還被譽為“補(bǔ)陽方藥之祖”,有“五子壯陽、六味滋陰”之說(五子即五子衍宗丸,六味即六味地黃丸)?,F(xiàn)代藥理研究表明[2-3],五子衍宗丸作用廣泛。其在生殖系統(tǒng)方面能夠提高睪丸細(xì)胞存活率,同時可增強(qiáng)精子活力,達(dá)到促進(jìn)生殖功能作用[4]。在神經(jīng)系統(tǒng)方面能降低神經(jīng)功能損害來防治阿爾茲海默癥。此外,因其能調(diào)節(jié)免疫、抑制氧化反應(yīng)等作用,在抗腫瘤領(lǐng)域也有一定的成效[5]。研究表明,眾多單味中藥及中藥復(fù)方有抗疲勞作用[6-7]。我們前期研究表明[8-9],五子衍宗丸對乳腺癌小鼠的化療相關(guān)性疲勞有明顯的緩解作用,發(fā)現(xiàn)給予五子衍宗丸干預(yù)的乳腺癌小鼠血漿中的神經(jīng)酸水平明顯提高。因此,我們推測神經(jīng)酸可能是緩解乳腺癌小鼠化療相關(guān)性疲勞的主要物質(zhì)之一。為進(jìn)一步明確五子衍宗丸中是否含有神經(jīng)酸我們進(jìn)行了本研究,現(xiàn)報告如下:

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    菟絲子(批號:141204701)、枸杞子(批號:150307901)、覆盆子(批號:150302691)、五味子(批號:150306591)及車前子(批號:150304711),均購自康美藥業(yè)股份有限公司。雙蒸水、甲醇、乙醇、鹽酸、乙醚、氫氧化鈉、三氟化硼、異辛烷、氯化鈉、無水硫酸鈉等均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    Thermo Trace1300/ISQ型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(賽默飛世爾科);RE-52C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(亞榮生化儀器廠);BS110S型電子天平(賽多利斯天平公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 脂肪油的提取

    五子衍宗丸(按藥典中處方比例,枸杞子∶菟絲子∶覆盆子∶五味子∶車前子=8∶8∶4∶1∶2)采用索氏提取法提取油脂,方法參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T14772-2008《食品中粗脂肪的測定》。

    1.3.2 脂肪油的甲酯化

    將提取的油脂加入8mL2%的氫氧化鈉-甲醇溶液,80℃回流至油珠完全消失,冷卻后加入7mL15%三氟化硼-甲醇溶液,80℃回流5min后迅速冷卻,加異辛烷10mL,振搖5min,加入飽和氯化鈉溶液使有機(jī)層至瓶口,移取5mL有機(jī)層至離心管中,加入3 g無水硫酸鈉,輕輕振搖,過0.25μm有機(jī)濾膜,供GC-MS分析用。

    1.3.3 脂肪酸的分析鑒定

    色譜條件:色譜柱為 DB-WAX(30 m×0.25mm ×0.25μm);進(jìn)樣口溫度250℃;程序升溫:初始溫度70℃,以5℃/min升至250℃,保持5min檢測結(jié)束。載氣為氦氣,進(jìn)樣量為0.2μL,氣化溫度280℃;載氣流量1mL/min,分流比為100∶1。

    質(zhì)譜條件:離子源為電子轟擊源;離子源溫度為230℃;電離電壓為70 eV;電子倍增器電壓為1988 V;發(fā)射電流為34.6μA;接口溫度為230℃;掃描范圍為50~550 m/z。

    定性分析:取經(jīng)2.3.2項處理過的樣品0.4μL,用GC-MS進(jìn)行分析鑒定。通過Thermo Xcalibur3.0.63化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),檢索NIST MS Seach2.2質(zhì)譜圖庫,確定樣品中各個化學(xué)成分。

    定量分析:通過Thermo Xcalibur3.0.63化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),分別求得各化學(xué)成分的絕對含量。

    2 結(jié)果

    經(jīng)GC-MS分析,五子衍宗丸脂肪酸甲酯總離子流譜圖如圖1所示。GC-MS分析結(jié)果見表1。由表1可知,五子衍宗丸中共測出19種脂肪酸,其中十四烷酸、十五烷酸甲酯、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、二十烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸等9種脂肪酸為飽和脂肪酸;十六烯酸、十七碳烯酸甲酯、十八烯酸、十八碳二烯酸、γ-十八碳三烯酸、α-十八碳三烯酸、二十碳烯酸、HOMO-γ-二十碳三烯酸、二十二碳烯酸、二十四碳烯酸等10種脂肪酸為不飽和脂肪酸。各種脂肪酸的絕對含量分別為十四烷酸(肉豆蔻酸)的含量為0.050%,十五烷酸甲酯的含量為0.004%,十六烷酸(軟脂酸)的含量為0.379%,十六烯酸的含量為0.005%,十七烷酸的含量為0.034%,十七碳烯酸甲酯的含量為0.002%,十八烷酸的含量為0.066%,十八烯酸的含量為0.447%,十八碳二烯酸的含量為1.080%,γ-十八碳三烯酸(亞油酸)的含量為0.920%,α-十八碳三烯酸(亞油酸)的含量為0.213%,二十烷酸的含量為0.005%,二十碳烯酸的含量為0.002%,HOMO-γ-二十碳三烯酸(亞麻酸)的含量為0.001%,二十二烷酸的含量為0.008%,二十二碳烯酸的含量為0.001%,二十三烷酸的含量為0.001%,二十四烷酸的含量為0.006%,二十四碳烯酸的含量為0.001%。

    3 討論

    本研究運用GC-MS方法,分析了五子衍宗丸中的脂肪酸的含量及成分,結(jié)果表明,五子衍宗丸中含有9種飽和脂肪酸、10種不飽和脂肪酸。脂肪是機(jī)體結(jié)構(gòu)的一部分。植物油脂是飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸的重要來源。目前對不飽和脂肪酸的研究較多,主要有降血糖、調(diào)節(jié)血脂、降膽固醇和抗血栓形成、防治心血管病、促進(jìn)生長發(fā)育等[10]。飽和脂肪酸一向被認(rèn)為是“壞”脂肪酸,但有研究證明并非如此[11]。飽和脂肪酸能通過調(diào)節(jié)脂代謝,減少氧化應(yīng)激,減少炎癥及纖維化等多方面對酒精性肝病進(jìn)行防治[12]。此外,飽和脂肪酸還能提高精液質(zhì)量,進(jìn)食2周飽和脂肪酸的公豬的精子細(xì)胞外膜的組成發(fā)生獨特變化,有利于保持其精子活性[13]。這些不飽和脂肪酸及飽和脂肪酸可能是五子衍宗丸發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。我們前期研究發(fā)現(xiàn)[8],給予五子衍宗丸干預(yù)的乳腺癌小鼠血漿中的神經(jīng)酸水平明顯提高。神經(jīng)酸屬于二十四碳烯酸類的脂肪酸,又名鯊魚酸,學(xué)名順-15-二十四碳烯酸,是一種ω-9型低不飽和度、長碳鏈脂肪烯酸,為人體非必需脂肪酸。神經(jīng)酸是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子,能完整通透過血腦屏障,也是神經(jīng)細(xì)胞膜的重要組成部分,對離子通道和受體起著重要的調(diào)節(jié)作用,有恢復(fù)神經(jīng)末梢

    圖1 五子衍宗丸脂肪酸甲酯總離子流色譜圖

    表1 五子衍宗丸脂肪油中脂肪酸的組成及相對含量

    活性,促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞生長和發(fā)育的功能[14]。以往神經(jīng)酸都是從深海鯊魚油或鯊魚腦中提取?,F(xiàn)代研究表明很多植物含有神經(jīng)酸,但神經(jīng)酸的含量相對較低。大多在含油脂量高的植物中(尤其是含油脂的果實),其中包括很多中藥[15]。五子衍宗丸復(fù)方中的五味中藥為植物的種子或果實,里面含有比較豐富的脂肪酸。本研究的結(jié)果表明五子衍宗丸復(fù)方中含有神經(jīng)酸。結(jié)合前期研究結(jié)果,我們可以推測,通過額外補(bǔ)充體內(nèi)神經(jīng)酸的水平而發(fā)揮緩解乳腺癌小鼠化療相關(guān)性疲勞的作用可能是其作用機(jī)制之一。五子衍宗丸廣泛的藥理作用可能與其獨特的脂肪酸組成有關(guān)。

    [1]孔令青,李鳴鏑.中醫(yī)方劑“五子衍宗丸”組方的歷史源流[J].中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2009,15(1):67-68.

    [2]曾慶琪,孫 磊,聶 超,等.五子衍宗丸的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2014,32(8):1935-1937.

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    [4]殷金龍,徐 淵,吳 斌.五子衍宗復(fù)方對睪丸支持細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷和細(xì)胞凋亡的影響[J].中華男科學(xué)雜志,2013,19(3):257-261.

    [5]王洪武,李守超,王光勇,等.五子衍宗方對H22荷瘤小鼠環(huán)磷酰胺化療的減毒作用[J].中成藥,2012,34(11):2211-2214.

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    [8]譚 為.五子衍宗丸對腫瘤相關(guān)性疲勞小鼠的影響及作用機(jī)制研究[D].廣州:南方醫(yī)科大學(xué),2012.

    [9]歐陽明子,譚 為,劉艷艷,等.五子衍宗丸對小鼠乳腺癌化療敏感性及化療相關(guān)性疲勞的干預(yù)作用[J].2013,29(11):1744-1747.

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    Gas Chromatography-Mass Spectrometry Analysis of Fatty Acids in Compound Wuziyanzong Pill

    TAN Wei,HUANG Xuhui,F(xiàn)U Tingting,et al

    ObjectiveThe fatty acids were extracted from compound Wuziyanzong Pill and analyzed by gas chromatography-mass spectrometry(GC/MS).MethodsThe fatty acids of compound Wuziyanzong Pill were extracted by Soxhlet extraction,and their fatty acid compositions and content were analyzed by GC-MS.ResultsThe results of GC-MS analysis showed that19 acids are found in compound Wuziyanzong Pill and10 of them were unsaturated fatty acids,and the rest were saturated fatty acids.The absolute content of tetradecanoic acid was0.050%,pentadecanoate acid was0.004%,hexadecanoic acid was0.379%,hexadecenoic acid was0.005%,margatic acid was0.034%,heptadecenoic was0.002%,octadecanoic acid was0.066%,oleic acid was0.447%,octadecadienoic acid was1.080%,6,9,12-octadecatrienic acid was0.920%,9,12,15-octadecatrienic acid was0.213%,eicosanoic acid was0.005%,eicosenoic acid was0.002%,8,11,14-eicosatrienoic acid was0.001%,docosanoic acid was0.008%,docosenoic acid was0.001%,tricosanoic acid was0.001%lignoceric acid was0.006%,nervonic acid was0.001%,respectively.ConclusionThe compound Wuziyanzong Pill contains kinds of fatty acids.These fatty acids maybe partial material bases of pharmacology of compound Wu-Zi-Yan-Zong.

    Wuziyanzong Pill;Fatty Acid;Gas Chromatography-Mass Spectrometry

    R284.2

    :Adoi:10.3969/j.issn.1671-332X.2016.08.033

    國家自然科學(xué)基金(編號:81302958,81373582);廣東省中醫(yī)藥局建設(shè)中醫(yī)藥強(qiáng)省課題資助(編號:20131102,20151019,20151018)

    譚 為 黃旭暉 付婷婷 丘偉中 閔存云 王昌俊:廣東省人民醫(yī)院//廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院//廣東省老年醫(yī)學(xué)研究所 廣東廣州510080

    王昌俊

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