固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定食品中的誘惑紅

□ 李小杏 廣西玉林產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所

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固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定食品中的誘惑紅

□ 李小杏 廣西玉林產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)所

本實(shí)驗(yàn)建立了固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定食品中的誘惑紅的方法，優(yōu)化和改進(jìn)了誘惑紅測(cè)定樣品前處理方法。結(jié)果表明，固相萃取法的前處理方法能更有效地將分析物與干擾組分進(jìn)行分離，減少樣品預(yù)處理過程，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、省力，同時(shí)，取得了良好的線性，回收率和精密度，適用于食品中誘惑紅的測(cè)定。

人工合成色素與人們的生活息息相關(guān)，廣泛應(yīng)用于食品的生產(chǎn)、加工。人工合成色素一般色澤鮮艷、著色能力強(qiáng)、穩(wěn)定性好，而且成本低廉，可以改善糖類、飲料等食品的色澤。但是一般合成色素有毒性，已成為影響食品安全的一個(gè)重要因素。誘惑紅是偶氮類化合物，過多使用不僅影響兒童的生理和心理健康，使他們情緒失控，出現(xiàn)大哭大叫、失眠等狀態(tài)，還會(huì)對(duì)某些過敏體質(zhì)的成年人產(chǎn)生影響，使他們出現(xiàn)易怒等情緒不穩(wěn)定的狀況。因此，準(zhǔn)確測(cè)定食品中的誘惑紅對(duì)于食品安全有著重要意義。

目前，測(cè)定誘惑紅的方法有紙層色譜光度法、示波極譜法、高效液相色譜法等，液相色譜法應(yīng)用較為廣泛。采用液相色譜處理法要對(duì)樣品進(jìn)行前處理，目前樣品前處理方法有液液分配法、聚酰胺吸附法、固相萃取法等。本文將以聚酰胺吸附法和固相萃取法進(jìn)行比較優(yōu)化，以期找到高效測(cè)定誘惑紅的檢測(cè)方法。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器設(shè)備

高效液相色譜儀：賽默飛U3000高效液相色譜（配紫外檢測(cè)器）。

色譜柱：waters-C18（250 mmx4.6 mm，5 μm）。

試劑

誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

甲醇為色譜純，經(jīng)0.45μm濾膜過濾；

乙酸銨：取1.54 g乙酸銨，加水溶解并稀釋至1 000 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾。

固相萃取柱小柱（美國(guó)Phenomenex）。

色譜條件

柱溫30℃；

檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；

梯度洗脫條件：甲醇15%～35%，5%/ min，35%～98%，9%/min，15%保持4.5 min。

實(shí)驗(yàn)方法

聚酰胺吸附法

稱取液體飲料5 g，加水至50 mL，用檸檬酸溶液（200 g/L）調(diào)至PH=4后，加入（100～200目）聚酰胺粉，攪拌片刻，置于60℃水浴中加熱，使色素完全吸附。用G3漏斗過濾，用PH=4的60℃熱水洗滌3～5次，再用甲醇-甲酸混合液（60∶40）洗滌3～5次，蒸餾水洗至中性，最后用乙醇-氨水-水（70∶20∶10）洗脫。洗脫液蒸發(fā)濃縮后定容至5 mL，過0.45 μm濾膜后上機(jī)測(cè)定。

固相萃取法

稱取液體飲料5 g，加水至20 mL，超聲提取20 min，最后定容到25 mL，過濾提取液。

固相萃取小柱依次用5 mL甲醇活化，5 mL水平衡。將5 mL提取液至小柱上，流速低于1 mL/min。依次用5 mL水、5 mL甲醇沖洗小柱，沖洗后完全抽干小柱，棄去流出液。用2 mL 5%氨水甲醇溶液分兩次洗脫小柱，全過程流速保持1 mL/min，收集洗脫液，用氮?dú)獯蹈?，加?.02 mol/L乙酸銨定容至2 mL，過0.45 μm濾膜后上機(jī)測(cè)定。

結(jié)果與討論

提取方法的選擇

聚酰胺吸附法操作比較煩瑣，費(fèi)時(shí)，而且該方法對(duì)于糖量高、粘度大、含脂肪蛋白高的食品以及液態(tài)乳制品等的抽濾較為困難，檢測(cè)也不夠理想。

固相萃取法是一種應(yīng)用比較廣泛的前處理方法，能更有效地將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過程，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、省力。

對(duì)比兩種方法處理結(jié)果得出，固相萃取法去除了大部分干擾色素測(cè)定的雜質(zhì)峰，使檢測(cè)更可靠。與聚酰胺吸附法比較，大大簡(jiǎn)化了操作，縮短了時(shí)間。

方法線性

在選定的色譜條件下，按配制好的標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（5～50μg/mL）線性范圍內(nèi)，以峰面積y為縱坐標(biāo)，濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)＞0.999 0。

加標(biāo)回收與精密度

取已知誘惑紅空白的樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。稱取樣品5 g（精確到0.000 1 g），在樣品中添加誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液即樣品加標(biāo)量為10 μg/mL。按上述前處理方法，進(jìn)行三水平測(cè)定。

分析物加標(biāo)回收率在97.8%，具有較高的回收率，相對(duì)偏差為1.04，精密度較好。

結(jié)語(yǔ)

本文對(duì)誘惑紅測(cè)定樣品前處理方法進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn)，采用固相萃取處理樣品，能更有效地將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過程，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、省力，同時(shí)，取得了良好的線性、回收率和精密度。由此可見，在測(cè)定食品中誘惑紅的含量時(shí)，固相萃取法滿足食品中誘惑紅的測(cè)定，并優(yōu)于聚酰胺吸附法，具有較大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。