溫州地區(qū)767例腹瀉患兒A群輪狀病毒感染分析

陳　韓　　李小龍　　王薇薇　　鄭文靜　　王金果　　余方友▲.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江溫州　35000；.浙江省溫州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江溫州　35000

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溫州地區(qū)767例腹瀉患兒A群輪狀病毒感染分析

陳韓1李小龍1王薇薇1鄭文靜2王金果1余方友1▲
1.溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江溫州325000；2.浙江省溫州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江溫州325000

[摘要]目的分析浙江溫州地區(qū)腹瀉患兒A群輪狀病毒感染情況。方法收集2013年9月～2014年9月門診及住院767例腹瀉患兒糞便標(biāo)本，采用膠體金免疫層析法檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果767例腹瀉患兒中，有156例檢出輪狀病毒陽性，陽性率為20.3％。其中，0～6個(gè)月、6個(gè)月～1歲、1～2歲、2～3歲、＞3歲患兒RV陽性率分別為11.1％、22.3％、35.4％、42.9％、5.6％，而1～2歲、2～3歲這兩個(gè)年齡段的腹瀉患兒RV感染陽性率明顯高于其他年齡段的患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；男性患兒與女性患兒間的陽性率分別為18.6％和22.8％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.056，P＞0.05）；秋冬季10月、11月、12月以及次年的1月是RV感染高峰，其陽性率分別為39.2％、43.3％、43.1％、32.1％，不同月份之間陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=107.439，P＜0.01）。結(jié)論1～3歲兒童是A群輪狀病毒感染高發(fā)年齡段群體，每年秋冬季節(jié)高發(fā)。

[關(guān)鍵詞]A群輪狀病毒（RV）；膠體金免疫層析法；腹瀉；感染；糞便標(biāo)本

輪狀病毒（rotavirus，RV）是一種雙鏈核糖核酸病毒，屬于呼腸孤病毒科，輪狀病毒屬，根據(jù)VP6抗原性的不同，將RV劃分為A～G 7個(gè)群，但只有A、B、C 這3個(gè)群能感染人類，B群和成人腹瀉有關(guān)，C群較少見，其中A群最為常見，在RV感染中高達(dá)90％以上，常導(dǎo)致嬰幼兒重癥腹瀉，因此人們關(guān)注的重點(diǎn)仍是A群輪狀病毒[1]?？v觀全球2008年間，在5歲以下的患兒中，由于感染輪狀病毒引起腹瀉而導(dǎo)致死亡的共計(jì)453 000例，其中，有些國家如埃塞俄比亞、印度和尼日利亞等國死亡人數(shù)中超過半數(shù)是由于感染輪狀病毒[2]。我國也是輪狀病毒危害嚴(yán)重的國家，資料顯示每年輪狀病毒感染的患兒約1700萬，死亡近4萬例，占5歲以下腹瀉住院嬰幼兒的31. 6％～52.9％[3]。為了解浙江溫州地區(qū)腹瀉患兒RV感染的流行情況，對(duì)本院2013年9月～2014年9月收集的767例腹瀉患兒的糞便標(biāo)本進(jìn)行RV檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料

收集2013年9月～2014年9月從溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院收治的767例腹瀉患兒糞便標(biāo)本，其中男442例,女325例，男女性別比1.36∶1，所有患兒中0～6個(gè)月271例（35.3％），6個(gè)月～1歲309例（40.3％），1～2歲130例（16.9％），2～3歲21例（2.7％），＞3歲36例（4.7％）。收集腹瀉患兒新鮮糞便標(biāo)本于干凈容器中，1 h內(nèi)完成檢測(cè)并記錄結(jié)果。

1.2試劑與儀器

本法采用免疫層析雙抗體夾心法，膠體金免疫層析法檢測(cè)采用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供的膠體金A組輪狀病毒檢測(cè)試劑盒。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作及結(jié)果判定。

1.3檢測(cè)方法

取一勺新鮮糞便標(biāo)本（約100 g），放入裝有相應(yīng)稀釋液的滴管中，振蕩混勻并靜置1～2 min。如果標(biāo)本中含較大顆粒，5 min/3000r離心，取上清液備用。在加樣孔垂直滴加2～3滴標(biāo)本，室溫平置，5～10 min內(nèi)判定結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩組計(jì)數(shù)資料以率（％）表示，率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1腹瀉患兒年齡構(gòu)成

以0～6個(gè)月、6個(gè)月～1歲和1～2歲為主，分別占總數(shù)35.3％（271/767）、40.3％（309/767）和16.9％（130/ 767）。結(jié)果表明，不同年齡段之間的腹瀉率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=44.717，P＜0.01），經(jīng)χ2檢驗(yàn)，1～2歲、2～3歲這兩個(gè)年齡段的腹瀉患兒輪狀病毒感染陽性率明顯高于其他年齡段的患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），不同年齡組中，2～3歲RV陽性率最高，為42.9％，而＞3歲最低，為5.6％，見表1。

表1　不同年齡組患兒輪狀病毒檢測(cè)結(jié)果

2.2不同性別腹瀉患兒病毒檢出率

結(jié)果顯示，男性患兒與女性患兒間的陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.056，P＞0.05），見表2。

表2　不同性別患兒輪狀病毒檢測(cè)結(jié)果

2.3不同月份腹瀉患兒A群輪狀病毒感染情況

A群輪狀病毒陽性檢出率高峰集中在每年秋冬季10月、11月、12月以及次年的1月，分別為39.2％、43.3％、43.1％、32.1％，其中每年11月份最高，其次為2月、3月及4月，陽性率較低的月份為5～9月，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，不同月份RV感染陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 107.439，P＜0.01），見圖1。

圖1　2013～2014年溫州地區(qū)A群輪狀病毒季節(jié)分布

3　討論

腹瀉?。╠iarrhea disease）是一類多病因臨床綜合征，可導(dǎo)致嬰幼兒營養(yǎng)不良、發(fā)育遲緩，嚴(yán)重者可致死。有研究表明，腹瀉病主要與病毒、細(xì)菌感染有關(guān)，其中，輪狀病毒是引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體之一，且各個(gè)地區(qū)發(fā)病年齡和感染狀況均不同。

1973年，輪狀病毒是由澳大利亞學(xué)者Ruth Bishop等首先發(fā)現(xiàn)的，形似車輪狀而得名[4]，其致病機(jī)制主要是由于RV進(jìn)入人體后，可在小腸上部2/3的絨毛細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行RNA的復(fù)制及結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白的合成，并產(chǎn)生腸毒素，使絨毛細(xì)胞發(fā)生空泡變性和壞死，并可伴隨壞死脫落的細(xì)胞隨糞便排出體外，絨毛細(xì)胞被大量破壞后，導(dǎo)致水分吸收障礙，會(huì)引起滲透性急性腹瀉，集體流失水分及電解質(zhì)，嚴(yán)重者可出現(xiàn)酸中毒、脫水和休克等臨床癥狀[5]，近年也有研究提示，輪狀病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NSP4可能影響小腸絨毛細(xì)胞骨架蛋白的分布狀況以及肌動(dòng)蛋白和微管素細(xì)胞骨架等方面的改變，絨毛缺血和細(xì)胞旁通透性的改變同樣在腹瀉的發(fā)病進(jìn)程中發(fā)揮作用。此外，腸神經(jīng)系統(tǒng)（ENS）受到刺激也起到明顯作用[6]。如果治療不當(dāng)或治療不及時(shí)，后果嚴(yán)重者將導(dǎo)致患兒死亡。此外，輪狀病毒感染除了造成腸道的損傷外，還引起全身多個(gè)其他系統(tǒng)如神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的損傷。近年來，研究者們發(fā)現(xiàn)輪狀病毒還有引起心肌損傷的趨勢(shì)[7]。而且研究表明，患兒還存在一定程度的體液免疫功能紊亂[8]，導(dǎo)致患兒免疫功能方面缺陷。因此，RV已慢慢成為全世界醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)，及時(shí)準(zhǔn)確的RV快速檢測(cè)和對(duì)癥治療，對(duì)臨床具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，腹瀉患兒主要以0～2歲嬰幼兒為主，而1～2歲、2～3歲這兩個(gè)年齡段的腹瀉患兒RV感染陽性率則明顯高于其他年齡段的患兒，這可能與患兒腸道免疫功能發(fā)育尚不完善、缺乏相應(yīng)抗體、過早斷乳以及患兒腸黏膜屏障功能低、抵御病毒入侵能力不足有關(guān)[9]。3歲以后RV感染陽性率大幅度下降，其可能原因：一是幼兒免疫系統(tǒng)隨著年齡增長而逐漸完善；二是抵抗力慢慢增強(qiáng)；三是自然感染后血清和腸道分泌的特異性免疫球蛋白起到預(yù)防作用[10]；四是衛(wèi)生意識(shí)增強(qiáng)，因此陽性率相對(duì)較低。而0～6個(gè)月齡患兒常為母乳喂養(yǎng)，母乳中的脂肪小球膜表面親脂性糖蛋白乳凝集素（lactadherin），是母乳中與RV交聯(lián)最強(qiáng)和抗病毒特異性最高的成分，其與分泌性IgA起到競(jìng)爭(zhēng)性抑制RV結(jié)合到宿主小腸黏膜上的作用，避免細(xì)胞損傷，有效預(yù)防和緩解病情[11]。因此，6個(gè)月齡內(nèi)患兒對(duì)RV感染有一定免疫力，一般不易感染，即使感染，癥狀也較輕微[12]。

767例腹瀉患兒中，A群輪狀病毒檢測(cè)陽性率為20.3％，低于潘以韻等[13]報(bào)道的2007年上海市部分地區(qū)兒童輪狀病毒感染率（42.5％），與陳平等[14]報(bào)道的浙江省急性腹瀉患兒中RV陽性率（25.52％）接近，原因可能在于隨著社會(huì)進(jìn)步，人們對(duì)輪狀病毒的認(rèn)知逐漸加深、在生活中提前預(yù)防以及疫苗的使用等。本研究中男女患兒陽性率分別為18.6％和22.8％，兩者陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與國內(nèi)報(bào)道一致[10-15]，說明RV感染在性別上并無顯著性差異。

在溫帶地區(qū)，輪狀病毒感染癥主要發(fā)生于冬季，但是在熱帶地區(qū)全年都會(huì)發(fā)生，但有明顯的季節(jié)性，20℃左右氣溫較適宜。雖然各個(gè)國家和地區(qū)流行季節(jié)稍有不同，但總體上以每年秋冬季10月、11月、12月以及次年的1月高發(fā)[16]，說明RV和溫度及濕度有明顯關(guān)系[17]。夏季發(fā)病最少，夏秋交接和秋冬交接時(shí)期尤其要注意，早晚氣溫變化較大，而嬰幼兒抵抗力較弱，容易被病毒入侵。本研究結(jié)果顯示，溫州地區(qū)腹瀉患兒輪狀病毒感染高峰期為秋冬季，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[18]。

綜上所述，A群輪狀病毒主要通過糞-口途徑傳播[19]，具有明顯的流行季節(jié)性，目前臨床上對(duì)RV感染并無特效藥，治療以對(duì)癥為主，關(guān)鍵在于預(yù)防，首先，最好實(shí)行母乳喂養(yǎng)；其次，應(yīng)注意個(gè)人衛(wèi)生、食品衛(wèi)生和飲水衛(wèi)生，培養(yǎng)健康的生活習(xí)慣；再次，隔離住院患兒，加強(qiáng)醫(yī)療器械等物品的消毒；最后，免疫接種是有效的預(yù)防手段，減毒活疫苗可有效地減少或減輕腹瀉等癥狀，降低發(fā)病率[20，21]，但是疫苗也有增加腸套疊的風(fēng)險(xiǎn)[22]，因此，我們應(yīng)該積極研究出能夠防治輪狀病毒感染的新方法。

綜上所述，本文回顧性研究溫州地區(qū)輪狀病毒感染的致病情況及流行病學(xué)特點(diǎn)，為臨床診斷提供初步依據(jù)。因此，秋冬季節(jié)，對(duì)有腹瀉癥狀、糞便呈蛋花湯樣或稀水樣便，尤其是1～3歲的嬰幼兒，應(yīng)開展A群輪狀病毒常規(guī)檢查，以便早期發(fā)現(xiàn)，正確治療，避免盲目使用抗生素，從而有效降低患兒死亡率。

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Analysis of group A rotavirus infection among 767 children with diarrhea in Wenzhou

CHEN Han1LI Xiaolong1WANG Weiwei1ZHENG Wenjing2WANG Jin'guo1YU Fangyou1
1.Department of Laboratory Medicine, the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou 325000, China; 2.Department of Laboratory Medicine, Wenzhou People’s Hospital in Zhejiang Province, Wenzhou 325000, China

[Abstract]Objective To investigate the prevalence of group A rotavirus infection among children with diarrhea of Wenzhou Area in Zhejiang Province. Methods A total of 767 stool samples from outpatient and hospitalized children with diarrhea were collected from September 2013 to September 2014. Group A rotavirus was detected by GICA test. The software of SPSS 19.0 was used for statistical analysis. Results 156 cases（20.3％）were positive for group A rotavirus in all the 767 cases. The positive rates of group A rotavirus among 0 to 6 months, 6 months to 1 year, 1 to 2 years, 2 to 3 years and above 3 years old were 11.1％, 22.3％, 35.4％, 42.9％and 5.6％, respectively, the positive rates among the children of 1 to 2 and 2 to 3 years old were significantly higher than the other children（P＜0.01）. There was no significant difference in the positive rates of group A rotavirus between male（18.6％）and female（22.8％）（χ2=2.056, P＞0.05）. The positive rates of group A rotavirus among children during January, October, November and December were 32.1％, 39.2％, 43.3％and 43.1％, respectively, which were significantly difference among them（χ2=107.439, P＜0.01）. Conclusion 1 to 3 years old of children are much easier infected by group A rotavirus and especially during autumn and winter.

[Key words]Group A rotavirus（RV）; GICA test; Diarrhea; Infections; Stool samples

收稿日期：（2015-11-11）

[基金項(xiàng)目]國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81271906）▲通訊作者

[中圖分類號(hào)]R725.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1673-9701（2016）02-0115-04