NOD2在狼瘡性腎炎患者腎臟組織中的表達(dá)

侯成成　潘宇航　黃祥奇　李秋霞　張曦　黃紅月　金歐

510630 廣州，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院風(fēng)濕免疫科(侯成成,潘宇航，李秋霞，張曦，黃紅月，金歐)，病理科(黃祥奇)

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NOD2在狼瘡性腎炎患者腎臟組織中的表達(dá)

侯成成潘宇航黃祥奇李秋霞張曦黃紅月金歐

510630 廣州，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院風(fēng)濕免疫科(侯成成,潘宇航，李秋霞，張曦，黃紅月，金歐)，病理科(黃祥奇)

【摘要】目的研究核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域2(NOD2)即CARD15在狼瘡性腎炎(LN)患者腎臟組織中的表達(dá)和分布情況，探討NOD2在LN中的作用。方法收集25例行病理活組織檢查(活檢)LN患者的腎臟組織，另取因腎實(shí)質(zhì)性腫瘤行手術(shù)切除遠(yuǎn)離腫瘤2 cm以外的4例正常腎臟組織作為對(duì)照，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)2組腎臟組織中NOD2的表達(dá)分布情況，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)上述腎臟組織中NOD2 mRNA表達(dá)水平，分析LN患者NOD2 mRNA與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果LN患者腎臟組織中NOD2表達(dá)較正常腎臟組織增高(P<0.01)。Ⅱ型LN僅腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)有少量NOD2表達(dá)，Ⅲ型和Ⅳ型LN腎小球上皮細(xì)胞(壁層上皮細(xì)胞、足細(xì)胞)、腎小管上皮細(xì)胞中均有NOD2表達(dá)，Ⅴ型LN腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)NOD2表達(dá)明顯增強(qiáng)。Ⅱ~Ⅴ型腎臟組織中NOD2表達(dá)水平均比正常對(duì)照組升高(P均<0.01)，并且各型腎臟組織中NOD2表達(dá)水平由低至高排列為Ⅱ型、Ⅴ型、Ⅲ型、Ⅳ型(P均<0.05)。qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LN患者腎臟組織中NOD2 mRNA水平較正常組升高(P<0.01)。LN患者腎臟組織NOD2 mRNA表達(dá)水平與臨床指標(biāo)無(wú)關(guān)(P均>0.05)。結(jié)論NOD2可能參與了LN的發(fā)病過(guò)程，可能是LN疾病進(jìn)程中的一個(gè)重要炎癥介質(zhì)。

【關(guān)鍵詞】系統(tǒng)性紅斑狼瘡；狼瘡性腎炎；核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域2；

免疫組織化學(xué)染色；聚合酶鏈反應(yīng)

Nucleotide-binding oligomerization domain containing 2; Immunohistochemistry;

Polymerase chain reaction

SLE是一種可以導(dǎo)致全身多器官及系統(tǒng)受累的慢性自身免疫紊亂性疾病，在我國(guó)發(fā)病率約為70/100 000、患病率約1/1 000，我國(guó)SLE患者數(shù)量為全球最多[1]。狼瘡性腎炎(LN)是SLE患者最常見(jiàn)和最嚴(yán)重的并發(fā)癥[2]。研究LN的發(fā)病機(jī)制對(duì)SLE的治療及預(yù)后具有重要意義。有研究發(fā)現(xiàn)，模式識(shí)別受體(PRR)紊亂和各種免疫性疾病如SLE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等有關(guān)[3]。PRR可以通過(guò)識(shí)別保守的分子模式去鑒別病原相關(guān)分子模式(PAMP)和損害相關(guān)分子模式(DAMP)。但是，額外的信號(hào)可能會(huì)誘發(fā)對(duì)機(jī)體有害的免疫反應(yīng)[4-6]。胞漿核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域(NOD)樣受體(NLR)是PRR的一個(gè)新家族，可以識(shí)別胞外的PAMP，近年來(lái)越來(lái)越多的關(guān)注點(diǎn)開(kāi)始集中于有關(guān)NLR的研究。NOD2(即CARD15)是NLR家族的一個(gè)典型成員，包含CARD結(jié)構(gòu)域，識(shí)別肽聚糖中的胞壁酰二肽(MDP)。近年來(lái)，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)NOD2可能參與各種自體炎癥及自身免疫性疾病[7-12]。有關(guān)NOD2與SLE、LN之間關(guān)系的研究較少。為此，本研究收集了LN患者腎臟活組織病理檢查(活檢)組織、正常腎臟組織及其臨床生化及病理資料，觀察腎臟組織中NOD2的表達(dá)分布情況，探討NOD2在LN腎臟組織中表達(dá)的意義。

材料與方法

一、標(biāo)本來(lái)源

收集2015年在我院風(fēng)濕免疫科住院并行活檢的25例LN患者腎臟組織(LN組)。25例LN患者中，男5例、女20例，年齡(26.5±4.1)歲，從發(fā)病至行腎穿刺明確診斷的病程(10.1±7.8)個(gè)月，SLE病情活動(dòng)性評(píng)分(SLEDAI)為(11.5±1.1)分；補(bǔ)體C3、C4水平分別為(0.48±0.05)、(0.08±0.02)g/L。ESR(45.6±13.2)mm/h， CRP(4.13±0.22)mg/L；血尿素氮(6.78±2.01)μmol/L，血清肌酐(79.5±0.7)μmol/L，尿蛋白(0.89±0.14)g/d；LN病理分型為Ⅱ型5例、Ⅲ型6例、Ⅳ型8例、Ⅴ型6例。25例LN患者均經(jīng)B超引導(dǎo)下行腎臟穿刺活檢術(shù)證實(shí)為L(zhǎng)N性腎炎病理改變，住院期間7例Ⅳ型LN患者接受500 mg的甲潑尼龍沖擊治療，其余患者根據(jù)病情的嚴(yán)重程度分別給予8~120 mg的甲潑尼龍治療。另取同期在我院因腎實(shí)質(zhì)性腫瘤行手術(shù)切除遠(yuǎn)離腫瘤2 cm以外的4例正常腎臟組織作為對(duì)照(正常對(duì)照組)，經(jīng)病理證實(shí)基本為正常腎臟組織，且患者無(wú)原發(fā)性腎小球腎炎、腎小管及腎間質(zhì)疾病、高血壓病、糖尿病等繼發(fā)性腎臟疾病。上述患者均簽署了本院標(biāo)本收集的知情同意書(shū)，腎穿刺活檢均是在確?；颊甙踩那疤嵯逻M(jìn)行的，且在行腎穿刺診斷明確之前均未給予腎上腺皮質(zhì)激素(激素)和免疫抑制劑治療。

二、主要試劑

包括：小鼠抗CARD15單克隆抗體(ab31488，Abcam公司，美國(guó))；小鼠抗CD68單克隆抗體(ab955，Abcam公司，美國(guó))；兔抗腎母細(xì)胞瘤WT-1單克隆抗體(ab89901，Abcam公司，美國(guó))；辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記羊抗鼠/兔IgG(谷歌生物公司)；二氨聯(lián)苯胺(DAB)顯色液(谷歌生物公司)；濃縮型山羊血清(谷歌生物公司)；一抗稀釋液(谷歌生物公司)；Trizol總RNA抽提試劑(Invitrogen，美國(guó))；PCR引物(Life公司，美國(guó))；可去除DNA污染的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TAKARA，日本)；實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒(TAKARA，日本)。

三、方　法

1. 標(biāo)本采集

將上述29例腎臟組織經(jīng)4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片。另外收集上述25例LN患者中的6例患者的額外少許腎臟組織(Ⅲ型2例、Ⅳ型2例、Ⅴ型2例)及上述4例正常腎臟組織少許，先加入液氮研磨，然后加Trizol提取mRNA，再行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)。

2. 腎臟切片的病理評(píng)價(jià)

所有LN患者的腎臟組織都是在B超定位下采用自動(dòng)活檢針完成的。病理診斷由本院病理科醫(yī)師完成。病理分型根據(jù)2003年國(guó)際腎臟病學(xué)會(huì)和腎臟病理學(xué)會(huì)有關(guān)LN的最新分型方案，分為：Ⅰ型系膜輕微病變性LN、Ⅱ型系膜增殖性LN、Ⅲ型局灶性LN、Ⅳ型彌漫性LN、Ⅴ型膜性LN、Ⅵ型終末硬化性LN[13]。

3. 腎臟組織中NOD2、CD68、WT-1表達(dá)水平的檢測(cè)

CD68是單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的特異性標(biāo)記分子，由于NOD2已被發(fā)現(xiàn)可以表達(dá)在該類炎癥細(xì)胞中，而LN患者腎臟組織中多有單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，為觀察NOD2在LN腎臟組織中的表達(dá)分布情況，本研究對(duì)腎臟組織進(jìn)行連續(xù)切片，并依次對(duì)NOD2、CD68采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)(SP)染色(CD68陽(yáng)性地方提示為單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)。以3.0 μm厚作連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、水化，3%過(guò)氧化氫封閉內(nèi)源性抗原后，采用高壓修復(fù)方式暴露抗原，5%的山羊血清室溫封閉30 min后，棄除組織表面的山羊血清，每例組織連續(xù)作3張切片，標(biāo)本依次滴加50 μl抗人CARD15的小鼠單克隆抗體(1∶100稀釋)、50 μl抗CD68的小鼠單克隆抗體(1∶200稀釋)、50 μl磷酸鹽緩沖液(陰性對(duì)照)，37℃組化濕盒孵育1 h。將切片用磷酸鹽緩沖液沖洗后，每張切片組織滴加50 μl HRP二抗(Dako Envision復(fù)合物)，37℃組化濕盒孵育30 min，DAB顯色，光鏡觀察中止反應(yīng)，蘇木素染核，自來(lái)水返藍(lán)終止顯色，乙醇脫水后放入60℃恒溫箱烘烤1 h后，放入二甲苯浸泡，取出切片，中性樹(shù)膠封片，室溫晾干。為證實(shí)NOD2在Ⅳ型LN腎小球內(nèi)的具體表達(dá)細(xì)胞，本研究對(duì)8例Ⅳ型LN患者的連續(xù)切片行NOD2、WT-1染色(WT-1是足細(xì)胞的特異性標(biāo)記分子)，分別加一抗NOD2(1∶100稀釋)、WT-1(1∶200稀釋)，其余步驟同前述。

4. 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

NOD2(即CARD15)陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)。CD68陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)。WT-1陽(yáng)性信號(hào)為褐色，定位于細(xì)胞核。于顯微鏡下定位拍片，采用Bresalier半定量評(píng)分評(píng)價(jià)染色結(jié)果：雙盲法在每張切片中隨機(jī)選取10個(gè)視野，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度分為4級(jí)，陰性染色計(jì)0分、淺黃色顯色計(jì)1分、棕黃色顯色計(jì)2分、棕褐色顯色計(jì)3分，計(jì)算每一強(qiáng)度染色在該視野中所占的百分比，分別計(jì)算每個(gè)視野中各染色強(qiáng)度分值與其視野所占百分比的乘積之和，10個(gè)視野的平均值就是整張切片免疫組化染色定量結(jié)果。具體公式如下：染色強(qiáng)度得分(IS)=Σ(0×F0+1×F1+2×F2+3×F3)。

5. 腎臟組織中NOD2 mRNA表達(dá)水平檢測(cè)

使用qPCR檢測(cè)。采用Trizol提取腎臟細(xì)胞中的總RNA，紫外線分光光度計(jì)測(cè)濃度。當(dāng)測(cè)量標(biāo)本的光密度260/280比值位于1.8左右時(shí)，方可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)測(cè)量結(jié)果將RNA濃度稀釋至約200 μg/μl，再次測(cè)量得到準(zhǔn)確濃度后進(jìn)行RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。取等量RNA(500 ng)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，將逆轉(zhuǎn)錄得到的模板DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，總體系20 μl。引物序列：NOD2上游5’-ACCTTTGATGGCTTTGACG-3’，下游5’-CACCTT GCGGGCATTCTT-3’；GAPDH上游5’-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3’，下游5’-GAAGAT GGTGATGGGATTTC-3’。反應(yīng)條件： 95℃ 30 s預(yù)變性，95℃ 5 s、60℃ 34 s共40個(gè)循環(huán)，95℃ 15 s、60℃ 60 s、95℃ 15 s延伸。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，GAPDH作為對(duì)照基因，計(jì)算目的基因NOD2的2-△△Ct值，比較LN組與正常對(duì)照組的NOD2 mRNA的表達(dá)水平。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié)果

一、腎臟組織的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

NOD2(即CARD15)、CD68的連續(xù)腎臟組織切片染色發(fā)現(xiàn)，NOD2可表達(dá)在炎癥細(xì)胞以外的腎臟固有細(xì)胞中。NOD2在正常腎臟組織的腎小球和腎小管內(nèi)有少量表達(dá)，而在LN腎臟組織表達(dá)明顯增多(t=9.104，P<0.001)。不同病理類型LN腎臟組織NOD2表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=69.333，P<0.001)。Ⅱ型LN僅腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)有少量NOD2表達(dá)，Ⅲ型和Ⅳ型LN腎小球上皮細(xì)胞(壁層上皮細(xì)胞、足細(xì)胞)、腎小管上皮細(xì)胞中均有NOD2表達(dá)，Ⅴ型LN腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)NOD2表達(dá)明顯增強(qiáng)，正常對(duì)照組均未見(jiàn)著色，見(jiàn)圖1。Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型腎臟組織中NOD2表達(dá)水平均比正常對(duì)照組升高(t分別為9.733、15.075、15.303、16.330，P均<0.001)，Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型的腎臟組織中NOD2表達(dá)水平均高于Ⅱ型(t分別為9.179、14.912、13.212，P均<0.001)，Ⅳ型的腎臟組織中NOD2表達(dá)水平高于Ⅲ型(t為2.777，P<0.05)，Ⅲ型、Ⅳ型的LN腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)NOD2表達(dá)水平均高于Ⅴ型(t分別為2.917、7.258，P均<0.05)，見(jiàn)表1。8例Ⅳ型LN患者的連續(xù)切片行NOD2、WT-1染色，可見(jiàn)Ⅳ型LN患者的足細(xì)胞內(nèi)有NOD2的表達(dá)，見(jiàn)圖2。

圖1　不同病理類型LN組織與正常腎臟組織的NOD2表達(dá)(通用型二步法染色，×200倍)

A~C：正常對(duì)照腎臟組織的陰性對(duì)照染色、NOD2染色、CD68染色結(jié)果；D~F：Ⅱ型LN腎臟組織的陰性對(duì)照染色、NOD2染色、CD68染色結(jié)果；G~I：Ⅲ型LN腎臟組織的陰性對(duì)照染色、NOD2染色、CD68染色結(jié)果；J~L：Ⅳ型LN腎臟組織的陰性對(duì)照染色、NOD2染色、CD68染色結(jié)果；M~O：Ⅴ型LN腎臟組織的陰性對(duì)照染色、NOD2染色、CD68染色結(jié)果

表1　LN與正常腎臟組織的NOD2

注：與正常對(duì)照組比較，aP<0.01，bP<0.05；與Ⅱ型LN組比較，cP<0.01；與Ⅲ型LN組比較，dP<0.05；與Ⅳ型LN組比較，eP<0.01

二、腎臟組織的NOD2 mRNA表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果

LN組腎臟組織NOD2mRNA表達(dá)水平是正常對(duì)照組的4.4倍，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(7.77±1.69vs. 1.77±0.88，t=-5.579、P=0.001)，見(jiàn)圖3。

三、LN患者NOD2 mRNA與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

對(duì)6例同時(shí)行免疫組織化學(xué)染色及熒光定量PCR的LN患者腎臟組織NOD2 mRNA水平和LN的臨床指標(biāo)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)LN患者的腎臟組織NOD2 mRNA水平與SLEDAI、補(bǔ)體(C3、C4)、ESR、CRP、血清白蛋白、血清肌酐、血尿素氮、尿蛋白定量等臨床指標(biāo)均無(wú)關(guān)(P均>0.05)，見(jiàn)表2。

討論

SLE是一種復(fù)雜的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，以多系統(tǒng)受累出現(xiàn)多種臨床表現(xiàn)為特征，腎臟是最為為常見(jiàn)的受累器官，故LN的治療對(duì)SLE的病情控制及預(yù)后極為重要[15]。隨著社會(huì)的發(fā)展和醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，SLE的治療措施日趨完善，其生存率較以前大大提高。但是，目前LN的治療主要應(yīng)用激素和免疫抑制劑，起到緩解病情的作用，且不良反應(yīng)較大。因此，探討和闡明LN的發(fā)病機(jī)制，尋求有效的治療措施，尤其是靶向治療，對(duì)于改善患者病情和提高患者生存質(zhì)量具有重要作用。

圖2?、粜蚅N的連續(xù)切片中NOD2與WT-1的表達(dá)(通用型二步法染色，×200倍)

A：陰性染色；B：NOD2染色；C：WT-1染色

表2　LN患者NOD2 mRNA與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

圖3　LN組與正常對(duì)照組的腎臟組織NOD2 mRNA表達(dá)比較

與正常對(duì)照組比較，*P<0.01

LN是由大量免疫復(fù)合物沉積而介導(dǎo)的一種自身免疫性腎小球腎炎。既往多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，大量細(xì)胞炎癥因子參與了LN的免疫炎癥反應(yīng)，促炎因子和抗炎因子之間的失衡程度決定了炎癥的嚴(yán)重性和腎臟的損傷程度。NLR是機(jī)體激活固有免疫和誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫對(duì)抗病原微生物的重要分子[16]。其中最有代表性的是NOD1和NOD2，作用于共同的下游分子受體關(guān)聯(lián)蛋白2(RIP2)即RICK，其含有絲氨酸、蘇氨酸激酶，并具有CARD結(jié)構(gòu)。NOD1和NOD2識(shí)別細(xì)胞內(nèi)PAMP或內(nèi)源性危險(xiǎn)信號(hào)后誘導(dǎo)自身寡聚化，募集下游RIP2，并與RIP2發(fā)生嗜同種CARD-CARD相互作用，隨后RIP2與IKK復(fù)合物(IKKC)相互作用，使NOD1或NOD2與IKKC連接，活化IKK，從而激活NF-κB，促進(jìn)TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18等促炎細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄。近年來(lái),NOD2已經(jīng)成為NLR家族廣為研究的成員之一，被發(fā)現(xiàn)可能參與各種炎癥及自身免疫性疾病[7-9]。既往研究發(fā)現(xiàn)，NOD2廣泛表達(dá)于樹(shù)突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、潘氏細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、肺上皮細(xì)胞及口腔上皮細(xì)胞中，其基因的變異已被證實(shí)與克羅恩病、Blau 綜合征及哮喘相關(guān)。NOD2可以被胞壁酰二肽類(MDP)激活，通過(guò)關(guān)聯(lián)識(shí)別，NOD2經(jīng)歷了一個(gè)構(gòu)象改變、NOD區(qū)域的寡聚體化從而引發(fā)RIP2的募集。隨后NOD2的CARD與RIP2的CARD區(qū)域通過(guò)相互關(guān)聯(lián)而結(jié)合，導(dǎo)致包括NF-κB、MAPK等多條信號(hào)通路的激活和促炎因子的產(chǎn)生。2010年首次發(fā)現(xiàn)NOD2在人和小鼠的腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)[17]。NOD2敲除后可以明顯改善腎缺血再灌注引起的損傷[18]。后來(lái)，Du等[19]發(fā)現(xiàn)NOD2也表達(dá)于糖尿病患者的腎小球系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和足細(xì)胞中，且發(fā)現(xiàn)NOD2是胰島素抵抗導(dǎo)致糖尿病腎病腎損傷信號(hào)傳導(dǎo)通路的重要成員之一，敲除NOD2的糖尿病小鼠尿蛋白及腎損傷的情況明顯改善。對(duì)于NOD2是否參與了LN的疾病進(jìn)程，目前相關(guān)研究較少。有研究探討了NOD2基因多態(tài)性在歐洲人群和亞洲人群中SLE易感性中的相關(guān)性，僅一項(xiàng)數(shù)據(jù)指出NOD2的rs2066845等位基因似乎與SLE的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)(OR=2.01，95%CI：1.01~4.03)[20]。

本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)染色和PCR等方法初步檢測(cè)了LN患者腎臟組織NOD2的表達(dá)水平及分布情況。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示，正常對(duì)照組和Ⅱ型LN腎臟組織中NOD2表達(dá)較少，而Ⅲ、Ⅳ型LN腎臟組織中NOD2表達(dá)明顯增強(qiáng)，且多表達(dá)在腎小球上皮細(xì)胞(壁層上皮細(xì)胞和足細(xì)胞)及腎小管上皮細(xì)胞中，而在Ⅴ型LN腎臟組織中，NOD2主要在腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)。這可能與Ⅲ型和Ⅳ型LN的病情活動(dòng)性較強(qiáng)，腎小球病變及炎癥程度較重有關(guān)。熒光定量PCR結(jié)果也提示LN患者腎臟組織中NOD2 mRNA的表達(dá)水平較正常對(duì)照組明顯升高，說(shuō)明NOD2可能參與了LN病程中的炎癥發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。針對(duì)LN患者NOD2 mRNA水平和臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，腎臟組織中NOD2 mRNA水平與其臨床指標(biāo)均無(wú)關(guān)，這與之前在糖尿病腎病中的研究結(jié)果一致[19]。但由于行熒光定量的新鮮SLE腎臟組織收集困難，導(dǎo)致樣本量不大，可能無(wú)法真正反映其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，日后還需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，LN患者腎臟組織中NOD2表達(dá)增加，提示NOD2可能參與了LN的疾病進(jìn)展，但是尚需要擴(kuò)大樣本量及進(jìn)一步行體外細(xì)胞模擬實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)深入研究，為阻止LN的進(jìn)展提供理論基礎(chǔ)。

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(本文編輯：林燕薇)

Expression of NOD2 in renal tissue of patients with lupus nephritis

HouChengcheng,PanYuhang,HuangXiangqi,LiQiuxia,ZhangXi,HuangHongyue,JinOu.

DepartmentofRheumatologyandImmunology，theThirdAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity，Guangzhou510630,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and distribution of nucleotide-binding oligomerization domain containing 2 (NOD2) in the renal tissues of patients diagnosed with lupus nephritis (LN), and explore the potential role of NOD2 in LN. MethodsThe renal tissues were obtained from 25 LN patients undergoing pathological biopsy. The kidney sample > 2 cm from the tumors was collected from 4 healthy controls who received surgical resection of renal tumors. The expression and distribution of NOD2 in the renal tissues of LN patients and normal controls were detected by immunohistochemistry. The messenger RNA (mRNA) level of NOD2 in the renal tissues was detected by fluorescence quantitative-polymerase chain reaction (qPCR) between two groups. The correlation between NOD2 mRNA level and clinical parameters was analyzed. ResultsImmunohistochemistry results demonstrated that the expression of NOD2 in LN patients was significantly higher than that of normal controls (P<0.01). NOD2 was slightly expressed in the glomerular epithelial cells of patients with type Ⅱ LN, detected in the glomerular epithelial cells (parietal epithelial cells and podocytes) and renal tubular epithelial cells of type Ⅲ LN cases, and significantly up-regulated in the renal tubular epithelial cells of type Ⅴ LN patients. The expression levels of NOD2 in renal tissues listed from low to high was type Ⅱ, Ⅴ, Ⅲ and Ⅳ (all P<0.05). qPCR analysis revealed that the mRNA level of NOD2 in the renal tissues of LN patients was significantly up-regulated than that in normal controls (P<0.01). In LN patients, the mRNA level of NOD2 was not correlated with clinical parameters (P>0.05). ConclusionNOD2 may participate in the pathogenesis of LN, and probably serves as a pivotal inflammatory mediator during the progression of LN.

【Key words】Systemic lupus erythematosus; Lupus nephritis;

(收稿日期：2015-12-07)

Corresponding author, Jin Ou

通訊作者，金歐

基金項(xiàng)目：中華醫(yī)學(xué)會(huì)臨床醫(yī)學(xué)專項(xiàng)-風(fēng)濕病學(xué)發(fā)展與研究資金項(xiàng)目(12040700370)

DOI：10.3969/j.issn.0253-9802.2016.02.009

·基礎(chǔ)研究論著·