臍療對(duì)腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究*

王陸軍，于巖瀑，高樹(shù)中，馬玉俠△

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250014;2.解放軍94370部隊(duì)醫(yī)院，濟(jì)南 250021)

臍療對(duì)腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究*

王陸軍1，2，于巖瀑1，高樹(shù)中1，馬玉俠1△

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250014;2.解放軍94370部隊(duì)醫(yī)院，濟(jì)南 250021)

目的:探討隔藥灸臍法對(duì)腹瀉型腸易激綜合征模型大鼠的影響效應(yīng)。方法:將大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，除空白對(duì)照組外，其余4組均建立IBS-D模型?？瞻讓?duì)照組與模型組不做任何治療，其余組分別采用隔藥灸臍法、藥物敷貼法、艾條灸臍法進(jìn)行治療。對(duì)各組大鼠癥狀、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)及腸道敏感性進(jìn)行評(píng)估并比較各組差異。結(jié)果:在改善IBS-D模型大鼠癥狀、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)及腸道敏感性方面，隔藥灸臍組、藥物敷貼組、艾條灸臍組均優(yōu)于模型組，隔藥灸臍組優(yōu)于藥物敷貼組和艾條灸臍組。結(jié)論:隔藥灸臍法、藥物敷貼法、艾條灸臍法能夠改善IBS-D模型大鼠癥狀、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)及腸道敏感性，且隔藥灸臍法療效最佳。

腹瀉型腸易激綜合征;臍療;結(jié)腸運(yùn)動(dòng);腸道敏感性

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是一種常見(jiàn)的腸道功能紊亂性疾病。IBS在全球的發(fā)病率為10% ～20%［1］，其中腹瀉型腸易激綜合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome，IBSD)最為常見(jiàn)［2］，其發(fā)病率約占IBS的1/3［3-5］。西醫(yī)治療IBS-D的公認(rèn)藥物包括解痙藥、止瀉藥及5-羥色胺受體拮抗劑等，往往對(duì)癥治療，不能緩解IBS-D患者的整體癥狀。臍療為中醫(yī)外治方法之一，治療IBS-D具有簡(jiǎn)便廉驗(yàn)捷等優(yōu)點(diǎn)。前期大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，臍療治療IBS-D的療效明顯優(yōu)于治療IBS-D的一線藥物得舒特(匹維溴銨)。為系統(tǒng)評(píng)估臍療治療IBS-D療效，驗(yàn)證隔藥灸臍法的優(yōu)效性，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)臍療前后IBS-D模型大鼠的癥狀、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)及腸道敏感性等直觀指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

選用清潔級(jí)健康SD雄性大鼠50只，體質(zhì)量(400±20)g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。所有大鼠自由取食和飲水，明暗周期為12 h/12 h，環(huán)境溫度18～24℃，濕度(60±10)%，保持籠內(nèi)墊料清潔，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑

冰乙酸500 ml，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.3 主要藥物

白術(shù)、茯苓、丁香、白芍、五倍子等，將藥物按比例超微粉碎混合，密封備用。

1.4 分組與造模

將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、模型組、隔藥灸臍組、藥物敷貼組、艾條灸臍組5組各10只。除正常組外，其余各組建立IBS-D模型。造模前24 h大鼠禁食不禁水，乙醚麻醉后經(jīng)肛門(mén)插入連接注射器的硅膠管(距肛門(mén)8 cm)，結(jié)腸內(nèi)灌入40 ml/L的乙酸1 ml，緩慢拔出硅膠管，用手壓迫肛門(mén)并將大鼠尾巴抬高30 s，后用0.01 mmol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)1 ml沖洗結(jié)腸［6］，放回籠中自由活動(dòng)進(jìn)食水，于第7天行束縛應(yīng)激，每天用寬透明膠帶束縛前肩、前上肢及胸部，限制其搔抓頭面部［7］，束縛時(shí)間2 h，連續(xù)束縛7 d。以最能反映大鼠結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的糞便含水量［8］及大鼠腸道敏感性的腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex，AWR)評(píng)分［9］均高于正常組(P＜0.05)為造模成功的標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 處理方法

各組分別治療10 d后進(jìn)行評(píng)估與檢測(cè):空白對(duì)照組與模型組不做任何治療，僅做與各臍療組同步的抓取和固定;隔藥灸臍組將大鼠仰臥固定，用75%的乙醇常規(guī)消毒神闕穴(根據(jù)類比原理，大鼠的神闕穴定位在胸腹正中線，胸骨柄上緣至外生殖器連線的上3/4與下1/4交界處［10-11］)，以溫開(kāi)水調(diào)面粉成圓圈狀(內(nèi)徑約0.5 cm)置于大鼠神闕穴上，將備好的藥末(約3 g)均勻地填至神闕穴，將艾炷(直徑約0.5 cm，高約0.5 cm)置于藥末上施灸。連續(xù)施灸3壯約20 min。灸后保留藥末，用醫(yī)用無(wú)紡布敷貼固封神闕穴處，解除束縛24 h后揭下，隔日治療1次;藥物敷貼組無(wú)需艾灸，將備好的藥末(約3 g)均勻地敷于神闕穴，用醫(yī)用無(wú)紡布敷貼固封于神闕穴處，大鼠固定20 min后解除束縛。術(shù)前準(zhǔn)備與術(shù)后操作同隔藥灸臍組;艾條灸臍組無(wú)需放置藥物，用純艾條施灸，將大鼠固定施灸20 min后解除束縛。術(shù)前準(zhǔn)備與術(shù)后操作同隔藥灸臍組。

1.6 評(píng)估指標(biāo)

觀察大鼠實(shí)驗(yàn)前后精神狀態(tài)和皮毛色澤的變化;體質(zhì)量增長(zhǎng)率［12］;排便情況:單只大鼠關(guān)入籠內(nèi)，籠內(nèi)墊濾紙，觀察4 h內(nèi)大鼠排便的糞點(diǎn)數(shù);糞便含水量［13］:先稱量糞便濕質(zhì)量，然后將糞便放入烘干箱烘干至質(zhì)量不再變化，此時(shí)即為干質(zhì)量，濕質(zhì)量與干質(zhì)量之差除以濕質(zhì)量即為糞便含水量;AWR測(cè)定(每只大鼠用溫水給予球囊擴(kuò)張3次，容量分別為1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml，每次擴(kuò)張持續(xù)20 s，間隔30 s)［14］。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［15］:0分:大鼠對(duì)結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)無(wú)行為反應(yīng);1分:結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)身體靜止不動(dòng)，頭部運(yùn)動(dòng)減少;2分:結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)腹肌收縮但未抬離桌面;3分:結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)腹肌收縮并抬離桌面;4分:結(jié)腸擴(kuò)張時(shí)骨盆抬起，身體呈弓狀。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢測(cè)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，2組間采用t檢驗(yàn)，多組間差異顯著性采用單因素方差分析，用Student-Newman-Keuls或 Duncan’s new multiple range method進(jìn)行組間兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況

實(shí)驗(yàn)后空白對(duì)照組大鼠體型健碩，精神狀態(tài)良好，皮毛光澤柔順，無(wú)脫落;模型組大鼠體型相對(duì)消瘦，在非束縛狀態(tài)下精神萎靡、束縛狀態(tài)下狂躁、皮毛晦暗無(wú)光澤、鼠毛豎立易脫落、稀便甚至沾染尾根部，仍呈現(xiàn)IBS-D癥狀特點(diǎn);各治療組大鼠情緒較平和、皮毛較光澤柔順、脫落減少。其中隔藥灸臍組癥狀改善最顯著，且在治療過(guò)程中該組大鼠始終表現(xiàn)安靜，無(wú)煩躁與抬頭現(xiàn)象。

2.2 各組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率、排便情況、糞便含水量

表1 實(shí)驗(yàn)后各組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率、排便情況、糞便含水量比較(±s)

表1 實(shí)驗(yàn)后各組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率、排便情況、糞便含水量比較(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:*P＜0.05;與模型組比較:△P＜0.05;與隔藥灸臍組比較:#P＜0.05

組 別鼠數(shù)體質(zhì)量增長(zhǎng)率(%) 4 h內(nèi)排便點(diǎn)數(shù)(點(diǎn))糞便含水量(%)空白對(duì)照組10 43.85±0.62 0.60±0.52 28.46±2.72模 型 組 10 18.43±0.64* 5.70±0.48* 71.78±3.65*隔藥灸臍組 10 42.05±1.12△ 0.80±0.42△ 29.80±2.03△藥物敷貼組 10 21.54±0.88＊△# 4.30±0.48＊△# 40.27±1.69＊△#艾條灸臍組 10 22.34±0.58＊△# 4.20±0.42＊△# 39.03±1.67＊△#

表1顯示，在改善IBS-D模型大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率、4 h內(nèi)排便點(diǎn)數(shù)、糞便含水量方面，隔藥灸臍法、藥物敷貼法、艾條灸臍法均有療效(P＜0.05);隔藥灸臍組療效最明顯，治療后與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);藥物敷貼組與艾條灸臍組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 各組大鼠腹壁撤退反射(AWR)

表2 實(shí)驗(yàn)后各組大鼠AWR評(píng)分(分，±s)

表2 實(shí)驗(yàn)后各組大鼠AWR評(píng)分(分，±s)

注:與空白對(duì)照組比較:*P＜0.05;與模型組比較:△P＜0.05;與隔藥灸臍組比較:#P＜0.05

組容量(ml) 1.0 1.5 2.0空白對(duì)照組(分)別1.00±0.67 1.70±0.48 2.70±0.48模型 組 (分 ) 2.40±0.70* 3.20±0.42* 3.90±0.32*隔藥灸臍組(分) 1.10±0.57△ 1.80±0.42△ 2.80±0.42△藥物敷貼組(分) 1.70±0.48＊△# 2.90±0.32＊△# 3.30±0.48＊△#艾條灸臍組(分) 1.70±0.48＊△# 2.80±0.42＊△# 3.20±0.42＊△#

表2顯示，在改善IBS-D模型大鼠腸道敏感性方面，隔藥灸臍法、藥物敷貼法、艾條灸臍法均有療效(P＜0.05);隔藥灸臍組療效最明顯，治療后與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);藥物敷貼組與艾條灸臍組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

腹瀉型腸易激綜合征(IBS-D)屬于中醫(yī)學(xué)“泄瀉”范疇，其發(fā)病機(jī)制尚不十分明確。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，泄瀉的發(fā)生與感受外邪、脾胃虛弱、飲食不節(jié)、情志失調(diào)、年老體弱有關(guān)，其病位在腸，與脾、胃、肝、腎等臟腑關(guān)系密切。臍療是中醫(yī)外治法的一種，是以臍(神闕穴)為用藥或刺激部位，以激發(fā)經(jīng)氣、疏通經(jīng)絡(luò)、促進(jìn)氣血運(yùn)行、調(diào)節(jié)人體陰陽(yáng)與臟腑功能，從而防治疾病的一種方法。前期研究發(fā)現(xiàn)，臍療能夠明顯降低IBS患者的5-HT、組胺、血管活性腸肽及P物質(zhì)的水平而治療疾病［16］。在本研究中，IBS-D模型大鼠呈現(xiàn)出精神異常、胃腸動(dòng)力異常及腸道高敏感性等狀態(tài)。臍療治療后大鼠各效應(yīng)指標(biāo)均有改善，且隔藥灸臍法效果最明顯。本實(shí)驗(yàn)中，隔藥灸臍法具有穴位艾灸和藥物作用以及三者的綜合作用，藥物敷貼法具備藥物作用和穴位作用，艾條灸臍法包括穴位作用和艾灸作用。

從解剖結(jié)構(gòu)看，神闕穴表皮角質(zhì)層最薄，滲透力強(qiáng)，藥物分子較易通過(guò)皮膚的角質(zhì)層迅速?gòu)浬⑷胙ㄟ_(dá)全身。臍部靠近腹腔和盆腔，此處有植物神經(jīng)的主要神經(jīng)叢及神經(jīng)節(jié)存在，支配腹腔和盆腔內(nèi)所有的臟腑器官。因此各種刺激作用于神闕穴時(shí)，能夠激活神經(jīng)免疫機(jī)制，從而發(fā)揮抗炎、增強(qiáng)免疫力的功能［17］。此外，神闕穴與整體聯(lián)系廣泛。神闕穴通過(guò)經(jīng)絡(luò)系統(tǒng)與小腸、大腸、脾、胃、肝、腎相通，刺激神闕穴，使脾主運(yùn)化、肝主疏泄、腎陽(yáng)溫煦、小腸泌別清濁、大腸傳導(dǎo)功能恢復(fù)，使泄瀉自止。

艾葉主治心腹冷痛、泄瀉久痢。臍療所用的艾絨雖為灸材，但“外治之藥即內(nèi)治之藥”，它在治療過(guò)程中發(fā)揮重要的藥理作用。艾灸是以燃燒艾絨而治病，燃燒時(shí)產(chǎn)生的熱效應(yīng)是一種良性治療因素，作用于穴位，不僅刺激穴位表層，而且能深入溫煦臟腑，調(diào)節(jié)小腸、大腸、脾、胃、肝、腎而達(dá)治療泄瀉之效。

清·吳師機(jī)《理瀹駢文》曰:“外治之理即內(nèi)治之理，外治之藥即內(nèi)治之藥，所異者法耳?！卑仔g(shù)味苦、辛、性溫，能健脾益氣、燥濕利水;茯苓味甘、淡、性平，有利水滲濕、健脾和胃之效;丁香味辛、性溫，有溫中、暖腎之功;白芍味苦、酸、性微寒，具有緩急止痛之效;五倍子味酸、澀、性寒，有澀腸之功。所選之藥皆有健脾利濕、柔肝暖腎、澀腸止瀉之品，諸藥合用，標(biāo)本兼顧，力專效宏，達(dá)止瀉之效。

本研究中隔藥灸臍法療效最明顯，體現(xiàn)了穴位、艾灸、藥物三者綜合應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)。艾灸、藥物對(duì)穴位的刺激可激發(fā)穴位的治療作用，加之艾灸、藥物本身對(duì)疾病的調(diào)節(jié)，穴位、艾灸、藥物三者相輔相成，在觸發(fā)、調(diào)動(dòng)和增強(qiáng)機(jī)體自組織能力的前提下共奏健脾利濕、柔肝暖腎、澀腸止瀉之功，其實(shí)質(zhì)是一種綜合調(diào)節(jié)作用。

綜上，隔藥灸臍法、藥物敷貼法、艾條灸臍法均能改善IBS-D模型大鼠的癥狀、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)及腸道敏感性，而隔藥灸臍法療效最佳。

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Experimental Study on the Effect of Umbilical Therapy on Diarrhea Type in the Irritable Bowel Syndrome Model Rats

WANG Lu-jun1，2，YU Yan-pu1，GAO Shu-zhong1，Ma Yu-xia1△
(1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Shandong Jinan 250014，China; 2.PLA 94370 Hospital Shandong Jian 250021，China)

Objective:To investigate the effect of herb-partition moxibustion on the navel of treating diarrheapredominant irritable bowel syndrome(IBS-D).Methods:The rats were randomly divided into 5 groups.In addition to the normal group，the other 4 groups were set up the model of IBS-D.The normal group and the model group were haven’t any treatment;the other groups were respectively treated by herb-partition moxibustion on the navel，drug covering navel therapy and navel therapy with moxa stick moxibustion.We observed the symptoms，colon movement，intestinal sensitivity and then compared the differences among these groups.Results:In terms of the above effect indicators，the group of herbpartition moxibustion on the navel，the group of drug covering navel therapy and the group of navel therapy with moxa stick moxibustion are all superior to the model group，and the group of herb-partition moxibustion on the navel is superior to the group of drug covering navel therapy and the group of navel therapy with moxa stick moxibustion.Conclusion:Herbpartition moxibustion on the navel，drug covering navel therapy and navel therapy with moxa stick moxibustion can improve the symptoms，colon movement and intestinal sensitivity of the rats with IBS-D.The advantages of herb-partition moxibustion on the navel are more obvious.

Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome;Navel therapy;Colon movement;Intestinal sensitivity

R285.5

B

1006-3250(2016)06-0774-03

2015-11-03

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)項(xiàng)目(2007CB512703)-基于中醫(yī)特色療法的理論基礎(chǔ)研究-臍療防治疾病的臨床療效評(píng)價(jià)和機(jī)理研究;國(guó)家中醫(yī)藥管理局針灸重點(diǎn)學(xué)科(山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院)重點(diǎn)項(xiàng)目-基于肥大細(xì)胞介導(dǎo)臍療治療IBSD的效應(yīng)機(jī)制研究

王陸軍(1987-)，男，山東青島人，醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事經(jīng)穴藥物外治法的臨床與研究。

△通訊作者:馬玉俠(1975-)，女，山東臨朐人，副教授，醫(yī)學(xué)博士，碩士研究生導(dǎo)師，Tel:0531-89628088，E-mail: myxia1976@163.com。