清涼巴布劑貼敷對小鼠腹腔毛細血管通透性增高及大鼠足腫脹的改善作用

夏勤，崔莉，杜秋

(1南京市中醫(yī)院，南京 210001；2江蘇省中醫(yī)藥研究院)

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清涼巴布劑貼敷對小鼠腹腔毛細血管通透性增高及大鼠足腫脹的改善作用

夏勤1，崔莉2，杜秋1

(1南京市中醫(yī)院，南京 210001；2江蘇省中醫(yī)藥研究院)

摘要：目的觀察清涼巴布劑對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高及角叉菜致大鼠足腫脹的影響，并探討其可能機制。方法 60只小鼠隨機分為6組各10只，a、b、c組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑，d、f組涂抹等量空白基質，e組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2。給藥后a、b、c、d、e組制備腹腔毛細血管通透性增高模型，f組不制備，測定腹腔清洗液OD值。60只SD大鼠隨機分為6組各10只，A、B、C組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑，D、F組涂抹等量空白基質，E組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2。給藥后A、B、C、D、E組制備足腫脹模型，F(xiàn)組不制備，計算足腫脹度及胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)。結果與d組比較，a、b、c、e組腹腔清洗液OD值降低；與F組比較，D組胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)增加，IL-6水平升高，IL-10水平降低；與D組比較，A、B、E組足腫脹度、胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)減小，IL-6水平降低，IL-10水平升高；與D組比較，C組足腫脹度、脾臟質量指數(shù)減小，IL-10水平升高；P均<0.05。結論 清涼巴布劑能抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高及角叉菜膠致大鼠足腫脹，可能與足組織IL-6水平降低、IL-10水平升高有關。

關鍵詞：清涼巴布劑；毛細血管通透性；足腫脹；白細胞介素6；白細胞介素10

痔病是一種常見的多發(fā)病，雖手術可以幫助治療，但創(chuàng)口劇痛、愈合緩慢、易被感染等弊端限制了手術的應用[1]。清涼膏由血竭、乳香、沒藥、青黛、冰片等組成，具有清熱消腫、活血定痛作用，對炎性及血栓外痔、術后肛門水腫、腫痛型痔病有顯著療效，但其存在油性大、載藥量小、使用不方便等缺點。我院將清涼膏與巴布劑結合，研制出清涼膏巴布劑，其具有保濕性及透氣性好、載藥量大、易于吸收及清洗等優(yōu)點[2]。本研究觀察了清涼巴布劑對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高及角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響，并探討其可能機制。

1材料與方法

1.1實驗動物清潔級昆明種小鼠60只，雌雄各半，體質量(20±2)g；SD大鼠60只，雌雄各半，體質量(200±20)g；均由上海斯萊克實驗動物中心提供。

1.2藥品、試劑及儀器雙氯芬酸二乙胺乳膠劑(扶他林，北京諾華制藥有限公司)；清涼巴布劑(南京中醫(yī)藥大學藥劑教研室提供)；角叉菜膠(上海貝基生物科技有限公司)；二甲苯(國藥集團化學試劑公司)；IL-6、IL-8試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)?？烧{高速勻漿器(FSH-2，金壇市恒豐儀器廠)；全自動酶標儀(MK3，上海富眾生物科技發(fā)展有限公司)。

1.3小鼠腹腔毛細血管通透性增高模型制備及清涼巴布劑貼敷參照文獻[3,4]方法。取清潔級小鼠60只，隨機分為a、b、c、d、e、f組各10只。實驗前小鼠禁食12 h，腹部脫毛后用藥。a、b、c組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑(含生藥量)，d組與f組小鼠涂抹等量空白基質，e組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2，各組均連續(xù)給藥7 d。最后1次給藥1 h后，經尾靜注1%伊文思藍生理鹽水溶液0.02 mL/g，然后經腹腔注射0.7%醋酸生理鹽水溶液0.2 mL/只(f組除外)，0.5 h后脫頸椎處死小鼠，打開腹腔并用生理鹽水清洗。

1.4小鼠腹腔清洗液OD值測定取小鼠腹腔清洗液10 mL，離心后取上清液，于波長590 nm處測定OD值。

1.5大鼠足腫脹模型制備及清涼巴布劑貼敷參照文獻[5]方法。取SD大鼠60只，隨機分為A、B、C、D、E、F組各10只。實驗前大鼠禁食12 h。A、B、C組分別貼敷2.727、1.364、0.682 mg/cm2清涼巴布劑(含生藥量)，D、F組大鼠涂抹等量空白基質，E組涂抹扶他林乳劑0.3 mg/cm2。給藥1 h后，每鼠右足踝關節(jié)以下皮內注射新鮮配制的1%角叉菜膠0.1 mL致炎(F組除外)。

1.6大鼠足腫脹度、胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)測算及足組織IL-6、IL-10檢測致炎后2 h測量大鼠右后足容積值，并計算足腫脹度，足腫脹度=致炎后足容積-致炎前足容積。后處死大鼠，取足標本，制作足組織勻漿，采用ELISA法檢測組織勻漿IL-6、IL-10。另取大鼠胸腺和脾臟稱取質量，分別計算胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)，胸腺質量指數(shù)=胸腺質量/大鼠體質量，脾臟質量指數(shù)=脾臟質量/大鼠體質量。

2結果

2.1小鼠腹腔清洗液OD值比較a、b、c、d、e、f組腹腔清洗液OD值分別為0.423±0.028、0.469±0.036、0.501±0.043、0.635±0.031、0.414±0.037、0.392±0.025，a、b、c、e組分別與d組比較，P均<0.05。

2.2大鼠足腫脹度、胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)及足組織IL-6、IL-10比較足腫脹度、胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)及足組織IL-6、IL-10表達比較見表1。

表1　各組足腫脹度、胸腺質量指數(shù)、脾臟質量指數(shù)及足組織IL-6、IL-10表達比較±s)

注：與F組比較，*P<0.05，△P<0.01；與D組比較，#P<0.05，▲P<0.01。 3討論

清涼巴布劑處方來源于國家級名老中醫(yī)丁澤民教授，由血竭、乳香、沒藥、青黛、冰片等中藥組成。血竭的化學成分包括血竭素、血竭紅素、黃色血竭樹脂烴、去甲基血竭紅素、去甲基血竭素等，具有斂瘡生肌、行淤止痛的功效[6,7]。乳香的主要成分為揮發(fā)油、樹脂及樹膠，具有活血定痛、消腫生肌的功效[8]?，F(xiàn)代藥理研究表明，乳香具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、抗胃潰瘍、抗氧化等作用[9～11]。沒藥為沒藥屬植物樹皮滲出的膠狀樹脂，功效類似于乳香，目前已鑒定其有300多個化學成分，主要包括萜類、黃酮、甾體等[12]。文獻[13]報道，青黛具有清熱解毒、涼血定驚的功效。冰片不僅具有抗病原微生物、抗炎鎮(zhèn)痛等藥理作用，而且可促進藥物經生理性屏障到達作用部位[14~16]。本研究顯示，a、b、c組腹腔清洗液OD值較d組減小，A、B、C組足腫脹度較D組減輕，提示清涼巴布劑可抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高及角叉菜膠致大鼠足腫脹。吳文君等[17]認為，復方兒茶止瀉霜可下調胸腺、脾臟指數(shù)，證明其具有良好的抗炎活性。本研究顯示，A、B組胸腺指數(shù)及A、B、C組脾臟指數(shù)均較D組降低，提示清涼巴布劑具有抗炎作用。

IL-6是一種多功能炎性細胞因子，炎性細胞因子在炎癥反應過程中發(fā)揮重要的作用[18,19]。IL-10是一種免疫調節(jié)因子，可以抑制單核細胞功能及T淋巴細胞、巨噬細胞的活化和效應作用。IL-10最重要的功能是限制和終止炎癥反應[20,21]，其調節(jié)炎癥反應的機制是與淋巴細胞、抗原遞呈細胞作用，從而調節(jié)Th1、Th2細胞因子之間的平衡[22]。IL-10能夠有效抑制IL-1、IL-6、IL-12、TNF-α等主要的促炎癥細胞因子的產生，在調節(jié)胃腸道的細胞動態(tài)平衡上扮演著重要角色，從而發(fā)揮抗炎作用[23,24]。本研究顯示，A、B組IL-6水平較D組降低，A、B、C組IL-10水平較D組升高。說明清涼巴布劑可通過調節(jié)大鼠足組織中抗炎癥細胞因子水平發(fā)揮抗炎作用。

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(收稿日期:2015-09-03)

中圖分類號：R9

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)03-0034-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.03.012

基金項目：江蘇省中醫(yī)藥管理局基金資助項目(LZ11112)。