利用陸地棉營養(yǎng)芽合成人工種子

胡根海， 董　娜， 張志勇

(河南科技學(xué)院 現(xiàn)代生物育種河南省協(xié)同創(chuàng)新中心， 河南 新鄉(xiāng) 453003)

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利用陸地棉營養(yǎng)芽合成人工種子

胡根海， 董娜， 張志勇

(河南科技學(xué)院 現(xiàn)代生物育種河南省協(xié)同創(chuàng)新中心， 河南 新鄉(xiāng) 453003)

摘要：【目的】研究利用陸地棉Gossypium hirsutum L.營養(yǎng)芽制作人工種子的方法，為陸地棉人工種子技術(shù)開發(fā)應(yīng)用提供一條新途徑。【方法】以陸地棉營養(yǎng)芽為外植體，利用海藻酸鈉+MSB包埋外植體，CaCl2溶液凝固制作人工胚乳珠，再利用較高濃度海藻酸鈉附加不同濃度的甲基纖維素包埋人工胚乳珠，用CaCl2溶液固化獲得人工種皮，研究陸地棉營養(yǎng)芽人工種皮內(nèi)添加抑菌劑后在有菌基質(zhì)上的萌發(fā)效果?！窘Y(jié)果】制作人工種子的最佳外植體長度為5 mm; 最佳胚乳珠包埋方案為w為3%的海藻酸鈉+MSB+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA，在100 mmol·L-1CaCl2中固化20 min;人工種皮最佳配方為w為4%海藻酸鈉+w為1%甲基纖維素+w為1.0%苯甲酸鈉+0.02~0.04 mg·L-1青霉素+0.5 mg·L-1多效唑，在200 mmol·L-1CaCl2固化20 min。該人工種子的無菌萌發(fā)率為95.0%，生根率為35.8%，可以在有菌人工基質(zhì)中萌發(fā)成苗?！窘Y(jié)論】獲得一條利用陸地棉營養(yǎng)芽制作人工種子的新途徑，該技術(shù)制作的人工種子在有菌環(huán)境下有較高的萌發(fā)率并能成苗。

關(guān)鍵詞：陸地棉; 人工胚乳; 海藻酸鈉; 多效唑; 營養(yǎng)芽

自20世紀70年代Murashige提出研制人工種子的設(shè)想以來，人工種子的研究迅速發(fā)展，1985年Kitto等[1]報道了胡蘿卜人工種子制作并種植成活，隨后多種植物的人工種子研制取得成功，如主要農(nóng)作物小麥[2]、水稻[3]、玉米[4]、大麥[5]、甘薯[6]、馬鈴薯[7]等，藥用植物石斛[8]、龍牙槐木[9]、半夏[10]等，蔬菜作物芫荽[11]、蕹菜[12]、芹菜[13]等。棉花是我國主要的經(jīng)濟作物之一，目前生產(chǎn)上陸地棉GossypiumhirsutumL.常規(guī)種因其授粉特性極易造成生物學(xué)混雜；雜交種雖具有產(chǎn)量優(yōu)勢，但在種子生產(chǎn)過程中需要人工去雄和授粉，成本昂貴，這極大限制了陸地棉種子的生產(chǎn)與利用[14]。棉花是無性繁殖較難的作物之一，人工種子在快速繁殖無性系、固定雜種優(yōu)勢及與基因工程相結(jié)合等方面有著廣闊的應(yīng)用前景，因此如能找到一種可行的棉花無性繁殖方法，將為棉花優(yōu)異種質(zhì)保純和雜交種利用開辟一條經(jīng)濟、有效的途徑。1995年張保紅等[15]報道了棉花人工種子制作，但其制作中使用的是生產(chǎn)上過時不用的老品種珂字312，包埋材料是體細胞胚胎。目前棉花體細胞胚胎發(fā)生不僅受基因型限制，而且體細胞胚胎發(fā)生還具有較高的畸變率[16]，因此利用體細胞胚胎制作生產(chǎn)上可推廣的陸地棉人工種子面臨巨大挑戰(zhàn)。陸地棉是原產(chǎn)熱帶的木本植物，其生長過程中會產(chǎn)生大量營養(yǎng)芽，而且營養(yǎng)芽具有與母株相同的生物學(xué)特性。本研究以陸地棉營養(yǎng)芽為材料，對營養(yǎng)芽人工種子的制作、萌發(fā)進行了探討，以期為陸地棉人工種子的推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

陸地棉新品種中棉所47， 2014年4月25日種植于河南科技學(xué)院喬謝試驗基地。待營養(yǎng)芽長至1～2 cm時(圖1a)，取材備用。

1.2方法

1.2.1營養(yǎng)芽處理選取健壯、生長一致的陸地棉營養(yǎng)芽, 去掉包在外部的幼葉， 用φ為75%的乙醇溶液漂洗0.5 min, 在1 g·L-1氯化汞溶液中消毒3 min, 無菌水沖洗4次以上。切去少許營養(yǎng)芽基部露出新組織作為包埋的外植體(圖1b)。

a: 植株上的營養(yǎng)芽; b:處理后的營養(yǎng)芽。

Fig.1The axillary buds of Gossypium hirsutum before and after processing

1.2.2人工種子的制作在超凈臺上進行操作, 將營養(yǎng)芽放進包埋劑[MSB+6-BA+NAA+麥芽糖+海藻酸鈉]中, 用CaCl2溶液作為凝固劑,滴珠法每次用吸管吸入1個營養(yǎng)芽, 放入CaCl2溶液中進行離子交換反應(yīng)20 min, 將包埋好的人工種子放在MSB(Murashige and Skoog 基本培養(yǎng)基+B5培養(yǎng)基有機成分)+7 g·L-1瓊脂+3%(質(zhì)量分數(shù))葡萄糖的培養(yǎng)基上培養(yǎng), 培養(yǎng)條件為(25±2) ℃,光照時間為每天12 h, 光照度20~30 μmol·m-2·s-1，15 d 后觀察人工種子的萌發(fā)率。

包埋介質(zhì)與凝固劑濃度：配制不同質(zhì)量分數(shù)(1%、2%、3%、4% 和 5%)海藻酸鈉+MSB，分別在不同濃度(25、50、75、100 和 200 mmol·L-1)的CaCl2溶液中進行凝固包埋，將包埋好的人工種子種植在MSB+7 g·L-1瓊脂+3%(質(zhì)量分數(shù))葡萄糖的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，15 d 后觀察人工種子的萌發(fā)率。

人工胚乳中激素成分：在人工胚乳中添加不同質(zhì)量濃度植物激素(0~0.5 mg·L-1NAA, 0~0.5 mg·L-1IBA)，將包埋好的人工種子種植在MSB+7 g·L-1瓊脂+3%(質(zhì)量分數(shù))葡萄糖的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，15 d 后觀察人工種子的萌發(fā)率，30 d后觀察生根率。

人工種子種皮制備：方案1)人工種子海藻酸鈉胚乳珠分別浸泡在質(zhì)量分數(shù)為0、2%、4%、6%、8%和10%的丙烯酸樹脂中30 min后，取出室溫放置在超凈工作臺24 h，觀察失水率； 方案2)人工種子海藻酸鈉胚乳珠，分別浸泡在質(zhì)量分數(shù)為4%、5%海藻酸鈉(含質(zhì)量分數(shù)為0.1%、0.5%、1.0%、2.0%甲基纖維素)中20 min, 在200 mmol·L-1CaCl2溶液中浸泡20 min形成人工種子種皮,室溫放置24 h，觀察失水率。

失水率= (脫水前質(zhì)量-脫水后質(zhì)量)/脫水前質(zhì)量 ×100%。

1.2.3自然環(huán)境萌發(fā)試驗穴盤中放入4 cm厚的濕萌發(fā)基質(zhì)[m(營養(yǎng)土)︰m(蛭石)=1∶1]，營養(yǎng)土購自花卉市場，富含均衡的營養(yǎng)元素、多種礦物質(zhì)和有機質(zhì)，基質(zhì)用多菌靈滅菌1次，將制備好的人工種子播入基質(zhì)中，每穴1粒，深度為1 cm，置于無菌溫室內(nèi)，(25±2) ℃培養(yǎng)。自播種之日起15 d后統(tǒng)計萌發(fā)率，30 d統(tǒng)計成苗率。

1.2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計每組50 粒人工種子, 重復(fù)3 次，數(shù)據(jù)采用SPSS10.0 軟件處理分析。萌發(fā)率統(tǒng)計：以人工種子突破種皮記為萌發(fā), 播種15 d 天后, 統(tǒng)計人工種子的萌發(fā)率；成苗率統(tǒng)計：以萌發(fā)后形成具有根莖葉完整的幼苗, 并能在培養(yǎng)基上成活記為成苗, 統(tǒng)計棉花人工種子成苗率。

萌發(fā)率=萌發(fā)的人工種子/播種總數(shù)×100%，

成苗率=幼苗成活數(shù)/萌發(fā)的人工種子數(shù)×100%。

2結(jié)果與分析

2.1海藻酸鈉和CaCl2濃度對人工種子萌發(fā)的影響

在海藻酸鈉質(zhì)量分數(shù)為1%、2%或CaCl2濃度為25 mmol·L-1時, 離子交換包埋后難于形成顆粒狀小球，看似形成，但撈出時即破裂，因而表1中未列出。質(zhì)量分數(shù)為3%的海藻酸鈉可以成型，但在不同濃度CaCl2中固化時表現(xiàn)不同，3%海藻酸鈉+100 mmol·L-1CaCl2獲得人工種子質(zhì)量好，硬度適中，有彈性，具有最少萌發(fā)天數(shù)和最高的萌發(fā)率(表1，圖2a)。當(dāng)海藻酸鈉的質(zhì)量分數(shù)≥4%時，濃度越高種子越硬，透明度越差，人工種子萌發(fā)天數(shù)越多，萌發(fā)率越低。最終選擇質(zhì)量分數(shù)為3%海藻酸鈉+100 mmol·L-1CaCl2為適宜的制作人工胚乳珠的組合。

表1海藻酸鈉和CaCl2濃度對人工種子成型及萌發(fā)影響1)

Tab.1Effects of different concentrations of sodium alginate and CaCl2on germination of encapsulated axillary buds

w(海藻酸鈉)/%c(CaCl2)/(mmol·L-1)t/d萌發(fā)率/%35011b74b37512b78b31009a100a320013b68c45014b66c47515b65c410016b54d420015b45e55011b71b57513b68c510016b52d520020c32f

1)培養(yǎng)時間30 d，t為萌發(fā)所需時間; 同列數(shù)據(jù)后凡是有一個相同小寫字母者，表示差異不顯著(Duncan‘s法，P>0.05,n=3)。

a: 制備好的人工種子;b: 人工種子在MS培養(yǎng)基上萌發(fā);c: 人工種子3周開始生根;d: 4周后形成人工種子萌發(fā)小苗。

圖2陸地棉營養(yǎng)芽人工種子發(fā)育成苗

Fig.2Plantlet regeneration from encapsulated axillary buds of Gossypium hirsutum

2.2人工胚乳中激素配比對人工種子萌發(fā)和生根的影響

選用營養(yǎng)芽作為外植體，其人工種子萌發(fā)的主要表現(xiàn)是營養(yǎng)芽的生長與生根，這也是決定人工種子能否成活的關(guān)鍵。在人工胚乳中添加IBA和NAA， 2種激素對人工種子的萌發(fā)及生根的影響見表2和 圖2b、 2c。由表2可知，添加激素對人工種子萌發(fā)及生根有很大影響，說明在陸地棉營養(yǎng)芽萌發(fā)及生根過程中激素起著重要作用。在單獨添加NAA或IBA時，人工種子生根率均增加，但不同濃度間差異不顯著，兩者組合使用可使生根率明顯增加。說明影響人工種子萌發(fā)的主要因素是激素的種類和濃度。人工胚乳最佳激素組合為MSB+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA，其萌發(fā)率為95.0%、生根率達到35.8%，且成苗長勢良好(圖2d)。

表2人工胚乳中激素對種子萌發(fā)生根的影響1)

Tab.2Effects of different growth regulators on synthetic seed germination and root formation

ρ(激素)/(mg·L-1)NAAIBA萌發(fā)率/%生根率/%根長/cm008.0f0d0.1±0.3c0.1023.0e12.3c1.4±0.3b0.3024.2e10.1c1.3±0.3b0.5062.3c28.6b1.7±0.5b0.7055.1d25.3b1.6±0.4b00.126.1e18.1c1.4±0.3b00.329.4e22.1b1.4±0.3b00.568.1c27.0b1.8±0.5b00.757.6d26.1b1.6±0.4b0.50.186.2b28.1b1.7±0.3b0.50.391.5a30.4a2.1±0.4a0.50.595.0a35.8a2.2±0.5a0.50.792.0a33.2a2.0±0.3a0.10.585.3b27.4b1.6±0.3b0.30.591.3a31.6a2.0±0.4a0.70.591.1a30.1a1.8±0.4b

1)培養(yǎng)時間30 d，每次試驗最少50個人工種子；同列數(shù)據(jù)后凡是有一個相同小寫字母者，表示差異不顯著(Duncan’s法，P>0.05，n=3)。

2.3外植體大小對陸地棉人工種子萌發(fā)和生根的影響

為了獲得適宜大小的外植體，對不同大小外植體進行包埋后萌發(fā)比較, 結(jié)果見表3。由表3可知，處理2 外植體比處理1 長2 mm, 人工種子萌發(fā)率高8.1%，且4 mm營養(yǎng)芽的生根率比2 mm的高5.7%。營養(yǎng)芽人工種子的萌發(fā)率、生根率均與外植體的大小呈正相關(guān)，隨著外植體長度增加，人工種子萌發(fā)率、生根率均增加，但超過5mm以后沒有顯著性差異；故較長的外植體有利于人工種子萌發(fā)，但考慮包埋的便利，本試驗較佳的外植體長度為5 mm。

表3營養(yǎng)芽長度對人工種子萌發(fā)成活的影響1)

Tab.3Effect of nutrition bud length on the survival of artificial seed germination

處理l外植體/mm種子數(shù)/個萌發(fā)率/%生根率/%125017.2c14.4c245025.3b20.1b355095.1a35.6a465096.2a35.4a585096.1a35.6a

1)同列數(shù)據(jù)后凡是有一個相同小寫字母者，表示差異不顯著(Duncan’s法，P>0.05，n=3)。

2.4人工種皮的失水率比較

人工胚乳珠分別浸泡在質(zhì)量分數(shù)為0、2%、4%、6%、8%、10%、12%和14%的丙烯酸樹脂中，浸泡30 min后取出，存放24 h的失水率分別為90.1%、90.2%、90.4%、85.4%、84.5%、83.2%、83.1%和80.2%?？梢姡┧針渲m然具有成膜性，能在人工種子外面形成一層白色膜，但保水性很低；隨著丙烯酸樹脂濃度增加，人工種皮保水性增加，但在w為14%丙烯酸樹脂處理下，人工種子失水率仍高達80.2%，因此，丙烯酸樹脂不是制作人工種皮的理想材料。

利用高濃度海藻酸鈉附加甲基纖維素試制的人工種皮失水率的結(jié)果(表4)顯示，w為4%和5%海藻酸鈉附加甲基纖維素制作的種皮均具有一定彈性和硬度，不同濃度甲基纖維素保水率沒有顯著性差異，但w為2%甲基纖維素和w為5%海藻酸鈉配制時，溶液特別黏稠使制作種子增大變形，w為1%以下甲基纖維素和w為4%海藻酸鈉組合即可獲得理想人工種皮，24 h保水性能良好。

表4海藻酸鈉與甲基纖維素混合種皮對種子失水率的影響1)

Tab.4Effects of different concentrations of sodium alginate and methyl cellulose on water loss rates

w/%失水率/%w/%失水率/%海藻酸鈉甲基纖維素海藻酸鈉甲基纖維素40.15.1a50.13.5c40.54.2b50.53.2c41.04.4b51.03.2c42.04.4b52.03.2c

1)數(shù)據(jù)后凡是有一個相同小寫字母者，表示差異不顯著(Duncan’s法，P>0.05，n=3)。

2.5人工種皮中添加抑菌劑的種子萌發(fā)成苗率

為了增加人工種子在自然條件下的成苗率，在人工種皮中添加了3種抑菌劑，結(jié)果(表5)顯示，人工種子不加抑菌劑在自然條件下全部污染，并迅速死亡；在3種抑菌劑濃度較低時雖有少數(shù)成活，但污染率較高。在處理2~4中苯甲酸鈉和多效唑濃度相同時，隨著青霉素濃度升高，污染率下降，污染率在9.8%~12.1%；當(dāng)苯甲酸鈉質(zhì)量分數(shù)≥1.0%、ρ(多效唑)≥0.5 mg·L-1、ρ(青霉素)≥0.02 mg·L-1時，人工種子萌發(fā)呈現(xiàn)較低污染，污染率均≤2.0%。由處理5~10可知，過高濃度抑菌劑對生根有抑制作用，抑菌劑最佳組合為w為1.0%苯甲酸鈉+0.02~0.04 mg·L-1青霉素+0.5 mg·L-1多效唑。處理 5~10的污染率較低，說明多效唑、苯甲酸鈉與青霉素三者適宜濃度同時使用抗菌效果好，尤其是青霉素和多效唑在抑制雜菌污染方面起了關(guān)鍵性的作用。

表5人工種子種皮添加抑菌劑對種子污染和生根的影響1)

Tab.5Effects of bacteriostatic agents added into artificial seed coat on pollution and root of seed

處理w(苯甲酸鈉)/%ρ/(mg·L-1)青霉素多效唑污染率/%生根率/%1000100a0e20.50.010.112.1b12.1c30.50.020.111.1b11.1c40.50.040.19.8c9.8d51.00.010.52.0d21.1b61.00.020.51.1e35.5a71.00.040.51.2e35.4a81.50.011.01.0e32.4a91.50.021.01.0e31.2a101.50.041.00.9f31.2a

1)同列數(shù)據(jù)后凡是有一個相同小寫字母者，表示差異不顯著(Duncan’s法，P>0.05，n=3)。

3討論與結(jié)論

用營養(yǎng)芽制作人工種子有許多優(yōu)點：可以避免體細胞胚胎發(fā)生中產(chǎn)生的高頻變異；營養(yǎng)芽數(shù)量多，取材容易，成本低；海藻酸鈉凝膠包埋系統(tǒng)無毒且價格低、工藝簡單。本試驗利用海藻酸鈉作為包埋介質(zhì)，對陸地棉營養(yǎng)芽進行了包埋處理并利用較高濃度海藻酸鈉與甲基纖維素制作了復(fù)合人工種皮。試驗得出人工胚乳的最佳制作條件為3% 海藻酸鈉在100 mmol·L-1CaCl2中反應(yīng)20 min, 這與曾穎蘋等[19]的結(jié)果一致，但與已報道的安祖花、白術(shù)的人工種子制作中海藻酸鈉的濃度有差別[17-18]。研究發(fā)現(xiàn)外植體越長人工種子萌發(fā)率越高，但考慮到制作人工種子工藝(目前一般使用吸管)，因此，外植體長度控制在5 mm為宜。

前人制作的人工種子一般只是對外植體進行1次包埋，本試驗為了增加人工種子的保水性，做了2次包埋，包括人工胚乳和人工種皮包埋。1次包埋為人工胚乳，主要含有營養(yǎng)成分麥芽糖和促進生根的激素IBA和NAA，試驗發(fā)現(xiàn)如果人工胚乳中不添加激素，萌發(fā)只有8%，且未觀察到生根現(xiàn)象；補加IBA或NAA均對人工種子萌發(fā)和生根有作用，但組合使用效果更好。張寶紅等[15]在利用棉花體細胞胚胎制作人工種子時，僅使用w為2%海藻酸鈉且沒有添加任何激素，可獲得40%的成苗率。本試驗結(jié)果顯示，海藻酸鈉的最佳質(zhì)量分數(shù)為3%，而且胚乳中需要補加植物激素，營養(yǎng)芽制作人工胚乳時添加激素才能萌發(fā)和生根，產(chǎn)生這種差異的原因可能是外植體不同造成的。

人工胚乳制作完成后，存放過程中失水問題是制約人工種子利用的難點。黃紹興等[20]研究認為人工種子若失水率低于80%，人工種子吸水恢復(fù)后萌發(fā)率還可以保持70%以上，若失水率高于80%，其人工種子萌發(fā)率將成倍下降。本試驗對人工種皮進行2次包埋主要是為了創(chuàng)制一個保水、通氣的種皮，美國植物研究所發(fā)現(xiàn)Elvax4260是最好的外種皮，它具有防水、無黏性、抑制干縮和使海藻酸鈣硬化等優(yōu)點，但其詳細成分及其配制并無數(shù)據(jù)可查，我國水稻人工種子研究中發(fā)現(xiàn)丙烯酸樹脂可以作為人工種子的種皮使用[21-22]，但在本試驗中發(fā)現(xiàn)丙烯酸樹脂成膜時間長，且保水性能也不佳。采用海藻酸鈉，同時添加甲基纖維素、包埋液CaCl2，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，w為4%海藻酸鈉+w為1%甲基纖維素包埋后，在200 mmol·L-1CaCl2凝固20 min，可以獲得不粘連、有一定硬度且對萌發(fā)無影響的種皮。

在人工種皮中添加抑菌物質(zhì)苯甲酸鈉、青霉素和多效唑，自然條件下的萌發(fā)結(jié)果表明，最佳抑菌組合為w為1.0%苯甲酸鈉+0.02~0.04 mg·L-1青霉素+0.5 mg·L-1多效唑，這與李修慶等[2]和陳德富等[23]的結(jié)論相近，說明在人工種皮中添加抑菌、抗菌藥物可以使人工種子在有菌環(huán)境下萌發(fā)，添加抑菌劑后可獲得較低污染率(1.1%)和較高的生根率(35.5%)，本試驗在無菌條件下獲得的人工種子生根率為35%左右，說明人工種皮添加抑菌劑并未對人工種子的萌發(fā)與成苗產(chǎn)生影響，棉花人工種子生根率低的原因有待進一步研究。

本研究獲得一種利用陸地棉營養(yǎng)芽制作人工種子的新途徑，即外植體最佳長度5 mm, 胚乳珠包埋為3%海藻酸鈉+MSB+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA和100 mmol·L-1CaCl2固化20 min;人工種皮配方為w為4%海藻酸鈉+w為1%甲基纖維素+w為1.0%苯甲酸鈉+0.02~0.04 mg·L-1青霉素+0.5 mg·L-1多效唑，該人工種子無菌萌發(fā)率95.0%，生根率35.8%，可以在有菌人工基質(zhì)中萌發(fā)成苗。

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【責(zé)任編輯周志紅】

Encapsulation of upland cotton，Gossypium hirsutum L.,axillary buds as artificial seeds

HU Genhai, DONG Na, ZHANG Zhiyong

(Collaborative Innovation Center of Modern Biological Breeding, Henan Province/Henan Institute of

Science and Technology, Xinxiang 453003, China)

Abstract：【Objective】 To provide a new manufacturing method for the artificial seeds of upland cotton, Gossypium hirsutum L., using axillary buds. 【Method】The axillary buds of upland cotton were used as explants. The explants were embedded by embedding solutions which were composed of different concentrations of sodium alginate and MSB after sterilization, and then immersed in different concentrations of CaCl2solutions to solidify and obtain artificial endosperm beads. The artificial seed coat was obtained on the outer synthetic endosperm beads which were immersed in the solution composed of high concentration of sodium alginate and methyl cellulose, and then immersed in CaCl2liquid. After added the bacteriostatic agent to the artificial seed coat, the seed germination experiment was done in nonsterile substrate. 【Result】The axillary buds could be made into artificial seeds after disinfection treatment, and the optimal length of explant was 5 mm. The optimal embedding program was found to be the combination of 3 % sodium alginate+MSB+0.5 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA，and solidified in 100 mmol·L-1CaCl2for 20 min. The optimal combination of artificial seed coat was the solution of 4 % sodium alginate+1% methyl cellulose+1.0% sodium benzoate+0.02-0.04 mg·L-1penicillin+0.5 mg·L-1paclobutrazol, and solidified in 200 mmol·L-1CaCl2for 20 min. The germination rate of synthetic seed was 95.0 %,the rooting rate was 35.8 %.The artificial seed could germinate and grow into seedling in nonsterile substrate. 【Conclusion】A new asexual reproduction technology making artificial seed is obtained using upland cotton axillary bud, and the artificial seed can be converted into seedling in nonsterile substrate.

Key words：Gossypium hirsutum; artificial endosperm; sodium alginate; paclobutrazol; axillary bud

中圖分類號：Q942.5

文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1001- 411X(2016)02- 0036- 06

基金項目：國家自然科學(xué)基金(31271648)；河南省科技攻關(guān)計劃(142102110126)

作者簡介：胡根海(1966—),男，副教授，博士，E-mail：hgh1013@126.com

收稿日期：2015- 06- 16優(yōu)先出版時間：2016- 01- 18

優(yōu)先出版網(wǎng)址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1110.s.20160118.1513.008.html

胡根海， 董娜， 張志勇.利用陸地棉營養(yǎng)芽合成人工種子[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2016,37(2):36- 41.