甲苯胺紅不加熱血清試驗陽性與自身免疫性疾病的相關性研究

吳曉怡 董海展 李建海

【摘要】目的：探究甲苯胺紅不加熱血清試驗（tolulized red unheated serum test，TRUST）陽性與自身免疫性疾病的關系，為臨床研究提供參考依據(jù)。方法：選擇2010年5月至2014年6月期間來我院診治的100例紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病患者為病例組，分別采用TRUST和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，比較兩種方法的陽性檢測率。同期選擇100例健康人群為對照組，比較病例組和對照組人群的抗心磷脂抗體（ACA）濃度的高低。結(jié)果：采用ELISA檢測病例組和對照組ACA濃度，病例組患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1的水平均顯著高于對照組人群，具有明顯差異性（P<005）；經(jīng)過TRUST檢測，實驗組患者凝集反應強度為3+～4+ 者35例，2+者45例，1+者15例，-者為5例，陽性率950%，顯著高于對照組患者，具有明顯差異性（P<005）。結(jié)論：患有自身免疫性疾病的患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1等ACA水平顯著高于正常人群，是一項值得重視的檢測指標。TRUST對于篩選自身免疫性疾病陽性患者，具有一定的特異性，具有較高的檢查率，可以在臨床上使用。

【關鍵詞】甲苯胺紅不加熱血清試驗；自身免疫性疾?。幻嘎?lián)免疫吸附法；抗心磷脂抗體

【中圖分類號】R4466【文獻標志碼】A

迄今為止國內(nèi)外報道的自身免疫性疾病大約有30多種，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類風濕關節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎、皮肌炎等，嚴重影響了患者的身心健康，給患者及其家庭帶來了困擾。抗心磷脂抗體（anticardiolipin，ACA）是一種以血小板和內(nèi)皮細胞膜上帶負電荷的心磷脂作為靶抗原的自身抗體，常見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其他自身免疫性疾病，是一種非特異性的標志抗體[3]。根據(jù)非特異性抗體-抗心磷脂抗體的檢測原理，甲苯胺紅不加熱血清試驗（tolulized red unheated serum test， TRUST）可用于評價自身免疫性疾病。本文的研究目的是選擇ACA為檢測目標，選擇TRUST檢測自身免疫性疾病的患者，探究分析該臨床檢查方法的可行性。

1臨床資料與方法

11臨床資料

選擇2010年5月至2014年6月期間來我院診治的100例紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病患者為病例組，同期選擇100例健康人群為對照組。分別采用TRUST和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，比較兩種方法的陽性檢測率。兩組研究對象在年齡、性別等臨床資料無顯著性差異（P>005）。見表1。

12儀器、試劑與檢測方法

121儀器、試劑（1）TRUST：儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀、直徑為18mm圓圈的反應卡片、抗原滴管、針頭；試劑：TRUST試劑盒。（2）ELISA：儀器：微量移液器、超低溫冰箱、LXJ-04離心沉淀機、Coda全自動酶聯(lián)免疫分析儀；試劑：抗心磷脂抗體（IgG）檢測試劑盒、抗心磷脂抗體（IgM）檢測試劑盒、抗β2膽糖蛋白1抗體檢測試劑盒。

122檢測方法所有研究對象均禁食10h以上，于次日清晨空腹抽取肘靜脈血3mL，以2000r/min迅速離心分離10min，取上層血清統(tǒng)一編號，置于-80℃的超低溫冰箱中集中待檢。（1）TRUST [4]：吸取50μL血清放在卡片圓圈中，并均勻地涂布在整個圈內(nèi)將TRUST抗原輕輕搖勻，然后用9號針頭（60±1）d/mL加一滴抗原。最后將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀旋轉(zhuǎn)8min（100±2）r/min。立即在亮光下觀察結(jié)果。（2）ELISA：ACA抗體水平采用ELISA試劑盒，由德國歐蒙公司提供。按照試劑盒說明操作。

123結(jié)果判定TRUST：出現(xiàn)1+～4+強度的凝集反應為陽性結(jié)果；不產(chǎn)生凝集反應為陰性結(jié)果。凝集反應強度分級[5]：3+～4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的紅色絮狀物，液體清亮；2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到中的紅色絮狀物，液體較清亮；1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的黑色絮狀物，液體渾濁；–：圓圈內(nèi)僅見甲苯胺紅顆粒集于中央一點或均勻分散。

13統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)處理軟件包為SPSS160，計量的比較采用t檢驗，計數(shù)的比較采用χ2檢驗，P<005表示有顯著性差異。

2結(jié)果

21病例組和對照組人群ACA水平分析

采用ELISA檢測病例組和對照組ACA濃度，病例組患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1的水平均顯著高于對照組人群（P<005）。見表2。

3討論

自身免疫是指機體免疫系統(tǒng)對自身成分發(fā)生免疫應答，產(chǎn)生針對自身成分的抗體和/或致敏的自身反應性淋巴細胞免疫效應。當自身免疫是病理性的，引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病是指機體對自身抗原發(fā)生免疫反應而導致自身組織損害所引起的疾病[6，7]。國內(nèi)外大量文獻報道的自身免疫性疾病大約有30多種，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕關節(jié)炎、系統(tǒng)性血管炎等[8，9]。自身免疫性疾病的發(fā)生機制主要在于“自身耐受”的破壞，機體產(chǎn)生自身抗體和/或致敏淋巴細胞，損傷表達相應自身抗原的靶器官組織，導致疾病發(fā)生[10，11]。該類疾病基本特征表現(xiàn)在：（1）病損部位有變性的免疫球蛋白沉積呈現(xiàn)以大量淋巴細胞和漿細胞浸潤為主的慢性炎癥；（2）有遺傳傾向；（3）患者以女性多見，發(fā)病率隨年齡而增高；（4）多數(shù)自身免疫病是自發(fā)或特發(fā)性的，感染、藥物等外因可能有一定的影響；（5）常與其它自身免疫疾病同時存在。因此，自身免疫性疾病嚴重影響了患者的身心健康，治療概率疾病刻不容緩[12]。

ACA水平的檢測對臨床上判斷SLE以及其他自身免疫性疾病的活動性及是否并發(fā)血管病變和狼瘡性腎炎有重要作用，并可作為自身免疫性疾病療效觀察的指標之一，可以作為某些自身免疫性疾病非特異性的標志抗體[13]。ACA是一組異質(zhì)抗體，包括IgG、lgA、IgM三類、可結(jié)合心磷脂、磷脂酞絲氨酸和磷脂酞肌醇，是一種以血小板和內(nèi)皮細胞膜上帶負電荷的心磷脂作為抗原的自身抗體[14]。該抗體與血栓形成、血管栓塞以及血小板減少等密切相關。TRUST是一種非梅毒螺旋體抗原血清試驗，主要用于梅毒的篩選和療效觀察[15]。其檢測原理為使用正常牛心肌的心類脂作為抗原，來測定病人血清中的反應素（非特異性抗體-抗心磷脂抗體），用來初步篩查梅毒螺旋體感染。由于非特異性抗體-抗心磷脂抗體在紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病患者血清內(nèi)存在，理論上可以使用TRUST檢測方法檢測患者是否患有紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎等自身免疫性疾病。本文研究表明，病例組患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1的水平均顯著高于正常人群，提示ACA與部分自身免疫性疾病的發(fā)病機制有密切關系。本文作者研究還發(fā)現(xiàn)，100例病例組患者經(jīng)過TRUST檢測，實驗組患者凝集反應強度為3+～4+者35例，2+者45例，1+者15例，-者為5例，陽性率950%，同對照組3%的陽性率比較具有顯著差異，提示TRUST對于篩選自身免疫性疾病或具有一定的診斷作用。

綜上所述，患有自身免疫性疾病的患者的IgG-ACA、IgM-ACA與β2-GP1等抗心磷脂抗體（ACA）水平顯著高于正常人群，是一項值得重視的檢測指標。

參考文獻

[1]傅更鋒，還錫萍，丁萍，等. 江蘇省2004～2008年梅毒流行病學分析及防治策略研究. 南京醫(yī)科大學學報：自然科學版，2009，29（10）：1399-1402.

[2]李軍，鄭和義. 梅毒檢測研究進展.中國醫(yī)學科學院學報， 2012，34（1）：95-98.

[3]李博，葉志中，胡秋俠，等.抗心磷脂抗體在狼瘡腎炎患者中的臨床意義. 中國組織工程研究與臨床康復，2008（11）：2193-2196.

[4]侯捷，楊健，劉丹蓉. 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）與RPR試驗檢測梅毒的對照研究. 廣州醫(yī)學院學報，1996（5）：36-37.

[5]周亮，李杰，周松偉，等. ELISA聯(lián)合甲苯胺紅不加熱血清試驗檢測梅毒螺旋體感染的效果分析. 江蘇大學學報：醫(yī)學版，2009，19（5）：455-456.

[6]卓瑪，李長山. 自身免疫和自身免疫性疾病的研究進展. 中國醫(yī)藥指南，2012，10（23）：92-94.

[7]張姬慧，趙陰環(huán). 抗心磷脂抗體在神經(jīng)精神性狼瘡中的臨床研究. 齊齊哈爾醫(yī)學院學報，2008，29（22）：2703-2705.

[8]邢倩，張七一，蘇厚恒，等. 抗心磷脂抗體與系統(tǒng)性紅斑狼瘡高血壓的相關性. 中華高血壓雜志，2008，16（3）：267-268.

[9]殷紅蓮，湯國寧，韋啟飛. 甲苯胺紅不加熱血清試驗與密螺旋體顆粒凝集試驗檢測梅毒螺旋體抗體的結(jié)果分析. 實用醫(yī)技雜志，2011，18（10）：1062-1063.

[10]王嫻，黃瀟葦，曾著黎，等. 酶聯(lián)免疫吸附法、甲苯胺紅不加熱血清試驗、明膠顆粒凝集法檢測梅毒血清抗體比較. 成都醫(yī)學院學報，2011，6（4）：324-326.

[11]Doumas S， Kolokotronis A， Zormpa M， et al. Essential mixed cryoglobulinemia manifesting as recurrent perioral edema： report of a case.Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol， 2014，117（1）：e57-60.

[12]Haastert B， Mellanby RJ， Anderton SM， et al. T cells at the site of autoimmune inflammation show increased potential for trogocytosis. PLoS One， 2013，8（12）：e81404.

[13]Liszewski MK， Kolev M， Le Friec G， et al. Intracellular complement activation sustains T cell homeostasis and mediates effector differentiation.Immunity， 2013 ，39（6）：1143-1157.

[14]Kidder D， Richards HE， Lyons PA， et al. Sialoadhesin deficiency does not influence the severity of lupus nephritis in New Zealand black x New Zealand white F1 mice.Arthritis Res Ther， 2013，15（6）：R175.

[15]宋玉平，張俊強，柴銀柱.18例孕婦梅毒血清學分析.中國性科學，2010，19（11）：20-21，26.

（收稿日期：2015-03-26）