Axl在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床病理意義

靳高遠(yuǎn)，汪建光，張麗柯，陳彥斌，袁鵬飛，劉德純

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Axl在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床病理意義

靳高遠(yuǎn)，汪建光，張麗柯，陳彥斌，袁鵬飛，劉德純

摘要：目的研究受體酪氨酸激酶Axl(Anexelekto)在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)，探討其與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系。方法采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)2013年1月至2013年12月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院50例胃癌及相應(yīng)癌旁組織中的Axl表達(dá)，分析其表達(dá)情況與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果Axl在胃癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織(P<0.05)；胃癌組織中Axl的表達(dá)與患者分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)(P<0.05)，與患者的年齡、性別、腫瘤直徑大小及浸潤(rùn)深度無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論Axl在胃癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織，胃癌組織中Axl表達(dá)與胃癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)，預(yù)示Axl可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。

關(guān)鍵詞：胃癌；受體酪氨酸激酶Axl；臨床病理特征；免疫組織化學(xué)

作者單位：河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南洛陽(yáng) 471003

胃癌是目前最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居第4位，致死率居第2位[1]。盡管在過去10 a胃癌發(fā)病率有所下降，但仍然是全球癌癥死亡的一個(gè)主要因素[2]。多數(shù)胃癌患者在確診時(shí)已處于進(jìn)展期，錯(cuò)失了最佳手術(shù)時(shí)間，而導(dǎo)致胃癌致死率高。因此，發(fā)現(xiàn)一個(gè)與胃癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的生物靶點(diǎn)，將有助于胃癌的診斷和治療[3]。研究發(fā)現(xiàn)，受體酪氨酸激酶Axl(Anexelekto)異常表達(dá)與結(jié)腸癌[4]、甲狀腺癌[5]、肺癌[6]、肝癌[7]、胰腺癌[8]及膀胱癌[9]的發(fā)生發(fā)展及臨床預(yù)后密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry，IHC)，檢測(cè)胃癌組織及癌旁組織中Axl的表達(dá)情況，探討Axl與胃癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1―般資料收集河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年1月至2013年12月行胃癌根治術(shù)，并且有完整臨床病理資料的50例患者的胃癌組織石蠟標(biāo)本及對(duì)應(yīng)的癌旁組織石蠟標(biāo)本。本組男性35例，女性15例，年齡(59.00±1.25)歲。依據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)第7版胃癌TNM分期系統(tǒng)[10]對(duì)胃癌患者行TNM分期。所有組織均由病理科醫(yī)師確診，術(shù)前均未接受放、化療及生物治療。

1.2主要儀器及試劑本實(shí)驗(yàn)所用兔抗人Axl多克隆抗體(ab37861)購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，山羊抗兔IgG二抗(SA00001-2)購(gòu)自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司(Proteintech Group, Inc)，PBS磷酸鹽緩沖液干粉(AR0030)購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司(BOSTER)；DAB顯色試劑盒(DAB-0031/1031)購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3免疫組織化學(xué)方法本實(shí)驗(yàn)中所有石蠟組織標(biāo)本經(jīng)切片機(jī)連續(xù)行4 μm厚切片。實(shí)驗(yàn)前，將石蠟切片在60 ℃恒溫烤箱中烤片2 h，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化。加3%過氧化氫甲醇溶阻斷過氧化物酶，高壓鍋加熱修復(fù)抗原20 min，加6%正常山羊血清封閉30 min，滴加一抗(濃度為1∶200)，4 ℃過夜孵育；次日復(fù)溫后，PBS沖洗3次×5 min，加HRP標(biāo)記的二抗(濃度為1∶500)，室溫孵育60 min；PBS沖洗，加新鮮配制DAB溶液80 μL顯色，顯微鏡下觀察3～10 min，觀察切片顯色情況并及時(shí)置于清水中阻斷。經(jīng)過復(fù)染、脫水、透明后進(jìn)行封片。每次實(shí)驗(yàn)各組均進(jìn)行陰性對(duì)照，陰性對(duì)照片以PBS代替一抗。

1.4結(jié)果判斷Axl陽(yáng)性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：沒有染色記作0分，染色較淺(比背景染色稍高)記作1分，中等程度染色(比背景染色明顯高)記作2分，較強(qiáng)染色記作3分，極強(qiáng)染色記作4分；計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比積分：分別計(jì)數(shù)300個(gè)細(xì)胞(光鏡下進(jìn)行)，并計(jì)算陽(yáng)性個(gè)數(shù)占同類細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)：≤10%為0分，11%～25%為1分，26%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。然后取兩項(xiàng)積分之和，具體結(jié)果如下：0～1分,陰性(-)；2～3分,弱陽(yáng)性(+)；4～6分，陽(yáng)性(++)；7～8分，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。本實(shí)驗(yàn)中將(-)、(+)歸為陰性表達(dá)，(++)、(+++)為陽(yáng)性表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 21.0軟件統(tǒng)計(jì)并分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)(必要時(shí)采用Fisher精確概率法)，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1Axl在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)Axl表達(dá)主要定位在細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色彌漫或散在分布，見圖1。本組50例胃癌組織標(biāo)本中Axl陽(yáng)性28例，陰性22例，陽(yáng)性表達(dá)率為56.0%(28/50)。癌旁組織中Axl陽(yáng)性18例，陰性32例，陽(yáng)性表達(dá)率36.0%(18/50)。Axl在胃癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織(χ2=4.026，P=0.045)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1　Axl在胃癌組織的表達(dá)(SP，×100)

2.2Axl表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系A(chǔ)xl在胃癌組織中的表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度無關(guān)；而與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，(分別為P=0.035，P=0.013，P=0.027)，見表1。

表1Axl 表達(dá)與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系

臨床病理特征Axl陰性陽(yáng)性χ2P值年齡≤60歲1217>60歲10110.1920.661性別男1421女870.7580.384腫瘤大小<4cm78≥4cm15200.0620.804分化程度低分化1612中/高分化6164.4610.035①浸潤(rùn)深度T1/T288T3/T414200.3440.558淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無93有13256.1580.013①TNM分期Ⅰ/Ⅱ149Ⅲ/Ⅳ8194.9190.027①

注：①P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3討論

Axl是TAM家族(Tyro3，Axl和Mer)成員之一，TAM家族調(diào)控細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)、細(xì)胞因子釋放與凋亡等一系列病理及生理過程[11-13]。生長(zhǎng)停滯特異性基因6(growth arrest specific gene 6，Gas6)蛋白是Axl的配體， Gas6與Axl的結(jié)合能夠?qū)е率荏w二聚化以及自身的磷酸化，并活化細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶的活性，引發(fā)一系列的信號(hào)傳導(dǎo)過程和生物學(xué)效應(yīng)，介導(dǎo)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。1991年在慢性粒細(xì)胞性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)患者中首次分離得到Axl[14]。隨后，Dufies等[15]發(fā)現(xiàn)Axl高表達(dá)是對(duì)酪氨酸激酶抑制劑耐藥CML細(xì)胞的特點(diǎn)，且敲除Axl可使耐藥細(xì)胞對(duì)伊馬替尼敏感，證明Axl參與耐藥分子機(jī)制，并且Axl是CML中酪氨酸激酶抑制劑耐藥的一個(gè)新型標(biāo)記。近年來，Axl與腫瘤關(guān)系的報(bào)道逐漸增多，研究發(fā)現(xiàn)Axl通過激活特定的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移以及腫瘤細(xì)胞凋亡的抑制，是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中重要的調(diào)節(jié)因素[16]。

本研究通過免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)胃癌及相應(yīng)癌旁組織中Axl的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Axl在胃癌組織中表達(dá)高于癌旁組織，與Sawabu等[17]的研究結(jié)果相似，提示Axl可能在胃癌發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用，并有可能成為胃癌診斷及治療策略的靶點(diǎn)。Axl在結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)過程中起著重要的作用，并且預(yù)示著結(jié)直腸癌患者的不良預(yù)后[4]。本研究中胃癌組織Axl表達(dá)與胃癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)，提示Axl可能與胃癌細(xì)胞的惡性程度有關(guān)，介導(dǎo)了胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，可作為胃癌潛在的預(yù)后標(biāo)記，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究通過免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)胃癌及癌旁組織中Axl的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Axl在胃癌組織中表達(dá)高于癌旁組織，提示Axl在胃癌的發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用。同時(shí)，Axl的表達(dá)情況與胃癌細(xì)胞的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)及TNM分期相關(guān)，提示Axl可能參與胃癌進(jìn)展過程，可能是胃癌診斷、治療及預(yù)后評(píng)估的潛在生物學(xué)標(biāo)記。

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Expression of Axl in Gastric Cancer and its Clinicopathological Significance

JIN Gao-yuan, WANG Jian-guang, ZHANG Li-ke, CHEN Yan-bing, YUAN Peng-fei, LIU De-chun

(First Affiliated Hospital, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the expression of Anexelekto(Axl) in gastric cancer and adjacent paracancerous tissues, and evaluate the association between Axl expression and the clinicopathological characteristic of patients with gastric cancer. MethodsThe expression of Axl in 50 gastric cancer and adjacent paracancerous tissues collected from January to December in 2013 were detected by immunohistochemical (IHC) staining. Besides, the relationship bewteen the expression of Axl and the clinicopathological characteristic of patients with gastric cancer were analyzed.ResultsAxl expression in gastric cancer was higher than adjacent paracancerous tissues (P<0.05). The positive expression of Axl was related to tumor differentia-tion, lymph node metastasis status and the TNM stage (P<0.05), but not related to age, gender, tumor size, and tumor depth. ConclusionThe expression of Axl in gastric cancer tissues was higher than adjacent paracancerous tissues, which positive expression of Axl was correlated with tumor differentiation, lymph node metastasis and TNM stage. It indicates that Axl may participate in the tumorgenesis and development of gastric cancer.

Key words:gastric cancer；receptor tyrosine kinase Axl；clinicopathological characteris-tics; immunohistochemistry

通信作者：劉德純，男，博士，教授，E-mail：liudechun2008@126.com

作者簡(jiǎn)介：靳高遠(yuǎn)(1987-)，男，河南鄭州人，醫(yī)師，從事腫瘤的基礎(chǔ)研究與臨床治療工作。

收稿日期：2016-01-08

中圖分類號(hào)：R735.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.01.002

文章編號(hào)：1672-688X(2016)01-0005-03