火龍果潰瘍病菌病的室內(nèi)藥劑篩選

李界秋，李楊秀，吳凡

（廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 南寧市 530005）

火龍果潰瘍病菌病的室內(nèi)藥劑篩選

李界秋，李楊秀，吳凡

（廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 南寧市 530005）

采用菌絲生長速率法測定8種殺菌劑對火龍果潰瘍病菌?。∟eoscytalidium dimidiatum）的抑制作用，結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、苯甲·丙環(huán)唑、克菌·戊唑醇、吡唑醚菌酯和甲基硫菌靈對火龍果潰瘍病菌菌絲生長的抑制效果好，EC50值分別為0.1557 mg/L、0.3020 mg/L、0.5205 mg/L、0.8660 mg/L、2.1786 mg/L和2.7372 mg/L。離體接種試驗測定結(jié)果顯示，甲基硫菌靈2.50μg/mL、吡唑醚菌酯1.00μg/mL、咪鮮胺0.25μg/mL、苯醚甲環(huán)唑0.25μg/mL、苯甲·丙環(huán)唑0.25μg/mL和克菌·戊唑醇0.25μg/mL的離體接種防治效果好，分別達到96.84%、95.06%、93.47%、91.00%、86.56%和83.10%。本研究結(jié)果為火龍果潰瘍病田間藥效防治提供了科學(xué)依據(jù)。

火龍果潰瘍??；新暗色柱節(jié)孢菌；殺菌劑；毒力測定；防治效果

火龍果潰瘍病是發(fā)生最普遍、為害最嚴重的火龍果病害之一，由新暗色柱節(jié)孢菌引起，主要為害火龍果的肉質(zhì)莖和果實，嚴重時造成肉質(zhì)莖和果實腐爛[1-3]。隨著火龍果種植面積的不斷擴大，火龍果潰瘍病日漸猖獗，廣西防城港市高發(fā)病區(qū)潰瘍病率達50%左右[3]，對火龍果生產(chǎn)造成了嚴重的影響。目前火龍果潰瘍防治仍以化學(xué)防治為主，因此，篩選高效低毒的殺菌劑，對火龍果生產(chǎn)具有重要意義。陸志翔等曾對廣西火龍果潰瘍病病原菌進行過鑒定[3]；魏雅麗和王會會等對海南省火龍果潰瘍病菌進行了分離鑒定和室內(nèi)殺菌劑初步篩選[4-5]；易潤華等研究表明菌絲生長、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)受溫度、pH影響大[1]，但有關(guān)該菌室內(nèi)毒力測定的試驗還很少，且尚未有通過離體接種法篩選藥劑的報道和室內(nèi)藥劑篩選的報道。苯甲·丙環(huán)唑（difenoconazole·propiconazole）和苯醚甲環(huán)唑（difenoconazole）是廣譜、高效、內(nèi)吸輸導(dǎo)性強的三唑類殺菌劑，已應(yīng)用于防治各種真菌性病害[6]。嘧菌酯（azoxystrobin）和吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是一類高效、殺菌譜廣的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，可用于防治一些果樹病害[7]。咪鮮胺（prochloraz）為高效、廣譜、低毒的咪唑類殺菌劑，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)、預(yù)防保護治療等多重作用，主要用于防治由子囊菌和半知菌引起的多種農(nóng)作物病害[8-9]。 克菌·戊唑醇（captan. tebuconazole）由克菌丹和戊唑醇復(fù)配組合的低毒環(huán)保殺菌劑，具有保護、治療的雙重功效，對桃褐腐病菌具有較強毒力[10]。甲基硫菌靈（hiophanatemethyl）是一種老牌的廣譜性內(nèi)吸低毒殺菌劑，具有預(yù)防和治療作用，對多種作物真菌性病害效果好[10-11]。溴·腈（bromothalonil·myclobutani）是針對炭疽菌產(chǎn)生抗藥性而研制的新型復(fù)配殺菌劑，主要成分是溴菌清和腈菌唑，具有內(nèi)吸、預(yù)防和治療作用。本研究選擇這些良好的殺菌劑開展對火龍果潰瘍病病菌的毒力測定和室內(nèi)離體接種試驗，以期篩選出具有較好作用的藥劑，為田間開展火龍果潰瘍病化學(xué)防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

新暗色柱節(jié)孢菌［Neoscytalidium dimidiatum（Penz.）Crous＆Slippers］，病原菌采自南寧市青秀區(qū)南陽鎮(zhèn)花雨湖火龍果種植基地，經(jīng)分離、純化、鑒定及致病性測定后供試。

1.2 供試藥劑及濃度設(shè)置

450 g/L咪鮮胺EW（江門市大光明農(nóng)化有限公司生產(chǎn)）；400 g/L克菌·戊唑醇SC（江蘇省農(nóng)墾生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)）；50%苯甲·丙環(huán)唑EC（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)）；10%苯醚甲環(huán)唑WG［百農(nóng)思達（北京）農(nóng)用化學(xué)品有限公司生產(chǎn)］；250 g/L吡唑醚菌酯EC（河北天勝化工集團有限公司生產(chǎn)）；28%溴·腈WC（德克森作物有限公司生產(chǎn)）；25%嘧菌酯SC（河北石家莊深泰化工有限公司生產(chǎn)）；50%甲基硫菌靈SC（成都科利隆生化有限公司生產(chǎn)）。

1.2.1 藥劑毒力測定的濃度

在預(yù)備試驗的基礎(chǔ)上，確定各種藥劑的濃度。咪鮮胺、克菌·戊唑醇、苯甲·丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑的有效使用濃度梯度均為1.00 μg/mL、0.50 μg/mL、0.25 μg/mL、0.10 μg/mL和0.05 μg/mL，吡唑醚菌酯為4.00 μg/mL、2.00 μg/mL、1.00 μg/mL、0.50 μg/mL和0.25 μg/mL，溴·腈為280.00 μg/mL、140.00 μg/mL、70.00 μg/mL、35.00 μg/mL和17.50 μg/mL，嘧菌酯為200.00 μg/mL、100.00 μg/ mL、50.00 μg/mL、25.00 μg/mL和10.00 μg/mL，甲基硫菌靈為10.00 μg/mL、5.00 μg/mL、2.50 μg/ mL、1.00 μg/mL和0.50 μg/mL。

1.2.2 藥劑離體接種試驗的濃度

咪鮮胺、克菌·戊唑醇、苯甲·丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑的有效使用濃度均為0.25 μg/mL，吡唑醚菌酯為1.00 μg/mL，溴·腈為70.00 μg/mL，嘧菌酯為50.00 μg/mL，甲基硫菌靈為2.50 μg/mL。

1.3 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。

1.4 毒力測定試驗方法

參照菌絲生長抑制測定法[12]，火龍果潰瘍病病菌菌絲在直徑9 cm培養(yǎng)皿中長至約7 cm時，打取菌落邊緣新鮮菌碟（直徑5 cm），分別移接種到含有各藥劑不同濃度的PDA平板上，以不含藥劑的作對照，在28℃下培養(yǎng)， 當空白對照菌絲長至7 cm以上時采用交叉“+”法測量菌落直徑，每處理重復(fù)3次，試驗重復(fù)2次。采用DPS統(tǒng)計軟件中機率值分析法計算藥劑對火龍果潰瘍病病菌菌絲生長的有效抑制濃度（EC50）、毒力回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

1.5 離體接種試驗方法

1.5.1 菌種準備

火龍果潰瘍病病菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 d，用無菌水洗脫節(jié)孢子成孢子懸浮液，節(jié)孢子濃度調(diào)至105個/mL[3]。

1.5.2 離體接種試驗

剪取老熟程度一致的火龍果新梢枝條約25cm，先用75%酒精進行表面消毒，再用相應(yīng)藥劑離體接種試驗濃度的藥液噴霧2次（間隔1 d），第2次噴霧1 d后接種。2016年7月13日用滅菌的解剖針在火龍果枝條上刺傷表皮組織，然后用移液器接種5 μL菌液在傷口處，每個處理接種3根枝條，每枝條接種3個點，接種點之間相距約5 cm。接種后將枝條置于常溫（28～32℃）的保濕盒中觀察記錄，以噴清水后接種菌液作對照1（CK1），噴清水后接無菌水作對照2（CK2），每種處理設(shè)3個重復(fù)。2016年8月29日采用交叉“+”法測量病斑直徑。參照農(nóng)藥生物活性測試標準計算防治效果[13]。

防治效果（%）= ［（對照病斑擴展面積總和-處理病斑擴展面積總和）/對照病斑擴展面積總和］×100

2 結(jié)果與分析

2.1 供試藥劑對火龍果潰瘍病菌EC50值比較

從表1可以看出，供試藥劑中苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、苯甲·丙環(huán)唑克菌·戊唑醇、吡唑醚菌酯和甲基硫菌靈對火龍果潰瘍病病菌菌絲生長有好的抑制效果，對火龍果潰瘍病病菌的EC50值分別為0.155 7、0.302 0、0.520 5、2.178 6和2.737 2 mg/L。嘧菌酯和溴·腈對火龍果潰瘍病病菌菌絲生長抑制作用弱，EC50值分別為33.807 8和224.166 1 mg/L。測定8種農(nóng)藥毒力回歸方程的相關(guān)系數(shù)均大于0.9，而r 0.05值等于0.878，說明相關(guān)系數(shù)差異顯著。

表2 藥劑對火龍果潰瘍病病菌的離體接種試驗效果

2.2 火龍果潰瘍病離體接種試驗效果

從表2和圖1可以看出火龍果潰瘍病病菌離體接種試驗結(jié)果。甲基硫菌靈2.50 μ g/mL、吡唑醚菌酯1.00 μ g/mL、咪鮮胺0.25 μ g/mL、苯醚甲環(huán)唑0.25 μ g/mL、苯甲·丙環(huán)唑0.25 μg/mL、克菌·戊唑醇0.25 μg/ mL、溴·腈70.00 μg/mL、嘧菌酯50.00 μg/mL和對照1（CK1）處理后產(chǎn)生病斑平均直徑依次為1.0 mm、1.6 mm、2.0 mm、2.3 mm、2.7 mm、3.3 mm、3.7 mm、5.6 mm、7.3 mm和9.0 mm，對照2（CK2）組織被刺傷后產(chǎn)生的傷口愈合斑；甲基硫菌靈2.50 μg/ mL、吡唑醚菌酯1.00 μg/mL、咪鮮胺0.25 μg/mL、苯醚甲環(huán)唑0.25 μg/mL、苯甲·丙環(huán)唑0.25 μg/mL和克菌·戊唑醇0.25 μg/mL的防治效果好，分別達到96.84%、95.06%、93.47%、91.00%、86.56%和83.10%，嘧菌酯50.00 μg/mL防治效果最差，只有34.21%。

圖1 1：CK1(噴清水接菌液) 2：嘧菌酯 3：溴·腈4：克菌·戊唑醇 5：苯甲·丙環(huán)唑 6：苯醚甲環(huán)唑7：咪鮮胺 8：吡唑醚菌酯 9：甲基硫菌靈 10：CK2（噴清水接無菌水）

3 討論與結(jié)論

本研究中，三唑類殺菌劑中苯醚甲環(huán)唑?qū)瘕埞麧儾〔【z生長抑制作用的 EC50值為0.155 7 mg/L，與武玉國等研究對黃瓜枯萎病菌菌絲生長抑制EC50值0.154 mg/L基本一致，抑制作用強[14]，離體接種的防效達91.00%。甲氧基丙烯酸酯類中吡唑醚菌酯對火龍果潰瘍病病菌菌絲生長有較好的抑制效果較好，EC50值為2.178 6 mg/L，比王會會等的研究結(jié)果EC50值1.029 1 mg/L[5]，以及段俊飛等研究吡唑醚菌酯對蘋果斑點落葉病菌和輪紋病病菌菌絲生長的EC50值0.176 3和0.033 3 mg/L略高[7]，離體接種的防效達95.06%。甲基硫菌靈對火龍果潰瘍病菌菌絲生長抑制作用的 EC50值為2.737 2 mg/L，但其離體接種的防效達96.84%。

綜上所述，甲基硫菌靈、吡唑醚菌酯、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、苯甲·丙環(huán)唑和克菌·戊唑醇對火龍果潰瘍病病菌菌絲生長有明顯的抑制作用，并且離體接種防治效果好，可進一步進行田間藥效防治試驗。

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S436.67+9

B

1003-8779（2016）04-0016-03

2016-11-9

南寧市青秀區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃項目（2015N05）

李界秋（1967—），男，廣西玉林市人，高級實驗師。