小兒清咽顆粒中青黛的薄層色譜鑒別研究

張曉南　毛云宏　游燕　周林

【摘 要】 目的：對(duì)小兒清咽顆粒中青黛薄層色譜檢驗(yàn)存在的困難進(jìn)行研究，以期為提升小兒清咽顆粒的法定標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：按2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》附錄中薄層色譜法和衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第六冊(cè)中小兒清咽沖劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)小兒清咽顆粒中青黛進(jìn)行薄層色譜研究。結(jié)果：采用回流或溫浴超聲的方法提取能明顯改善青黛提取效果，樣品在與靛藍(lán)、靛玉紅對(duì)照品的位置可見清晰的斑點(diǎn)，陰性實(shí)驗(yàn)無(wú)干擾。結(jié)論：改進(jìn)后的方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠，增強(qiáng)了小兒清咽顆粒中青黛薄層色譜鑒別的重復(fù)性和可鑒別性。

【關(guān)鍵詞】 小兒清咽顆粒；青黛；薄層色譜

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）22-0021-02

小兒清咽顆粒是由玄參、蒲公英、牛蒡子（炒）、薄荷、蟬蛻、板藍(lán)根、連翹、牡丹皮、青黛九味藥材經(jīng)煎煮、濃縮、加入蔗糖、糊精等輔料制成的復(fù)方顆粒。具有清熱解表、解毒利咽的功效，用于小兒外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱頭痛、咳嗽音啞、咽喉腫痛。其標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第六冊(cè)（標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為：WS3-B-1092-92）[1]。小兒清咽顆粒的療效好、見效快、毒副作用低且口感較好，容易被兒童接受。小兒清咽顆粒的法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定要進(jìn)行青黛的薄層色譜檢驗(yàn)，但按照現(xiàn)有法定標(biāo)準(zhǔn)的方法操作[1-2]，不論是按標(biāo)準(zhǔn)工藝將青黛包煎，提取浸膏制粒，還是在提取好的浸膏中直接散入青黛再制粒，薄層色譜檢驗(yàn)的結(jié)果都是陰性。在市場(chǎng)上購(gòu)買了多家廠商，多個(gè)批次的小兒清咽顆粒進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)也都呈現(xiàn)同樣的陰性結(jié)果。有文獻(xiàn)指出，按法定方法難以檢出靛藍(lán)，并從藥材相互助溶的角度加以探討[3]。由此可見，法定標(biāo)準(zhǔn)中的青黛鑒別方法存在一定的缺陷，需要改進(jìn)。

在檢測(cè)小兒清咽顆粒的另一味藥材牛蒡子時(shí)，其樣品液的提取工藝是回流提取，發(fā)現(xiàn)提取液可見微弱的藍(lán)色，分析原因可能來(lái)自于青黛的靛藍(lán)，以此推測(cè)青黛的提取效果受溫度的影響比較大。研究通過(guò)提高提取溫度，有可能解決青黛檢測(cè)困難的問題，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 AG285型電子天平；XMTD-4000型水浴鍋；SK3200LH型超聲波清洗器；OBS-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2 材料 靛藍(lán)（批號(hào)：110716-201111，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；靛玉紅（批號(hào)：110717-200204，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；自制小兒清咽顆粒1批；陰性樣品顆粒（自制）；市售小兒清咽顆粒3批（編號(hào)1：批號(hào)2014018，重慶太極集團(tuán)四川南充制藥有限公司；編號(hào)2：批號(hào)20140803，建省泉州羅裳山制藥廠；編號(hào)3：批號(hào)141008，四川同人泰藥業(yè)有限公司）。水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液制備

2.1.1 方法1 取本品4g，加含2%水合氯醛的三氯甲烷20ml，室溫26℃，40kKHz超聲波提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)雍?%水合氯醛三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液（標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法）。

2.1.2 方法2 取取本品4g，加三氯甲烷20ml，40℃溫水浴，并40kKHz超聲波提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.3 方法3 取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃溫水浴，并40kKHz超聲波提取30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.4 方法4 取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃溫水浴回流30 min，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取靛藍(lán)、靛玉紅對(duì)照品，分別加三氯甲烷配制為每毫升含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 取陰性樣品顆粒4g，其余制法同供試品溶液制備方法3。

2.4 展開劑及展開方式 選擇法定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的展開劑：甲苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1），上行展開。

2.5 檢視方法的選擇 選擇法定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的檢視方法：取出，晾干，置日光下檢視，斑點(diǎn)顏色清晰。

2.6 薄層板的選擇 硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；硅膠G薄層板（青島美高集團(tuán)有限公司）；硅膠G薄層板（上海默克化工），都可以取得較好的展開效果。實(shí)驗(yàn)選擇斑點(diǎn)顯色最為清晰的上海默克化工技術(shù)有限公司生產(chǎn)的硅膠G薄層板。

2.7 點(diǎn)樣方式與點(diǎn)樣量 點(diǎn)樣方式為接觸點(diǎn)樣；點(diǎn)樣量為3、5、10、15μl。對(duì)照品溶液點(diǎn)樣量10μl及供試品溶液點(diǎn)樣量為10μl時(shí)能明顯檢出。

2.8 溫度及相對(duì)濕度的影響 按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察在20℃、25℃、35℃，相對(duì)濕度為35%～70%時(shí)展開對(duì)薄層色譜結(jié)果的影響。結(jié)果在上述溫度、相對(duì)濕度范圍內(nèi)對(duì)該薄層色譜結(jié)果無(wú)明顯影響。

2.9 預(yù)平衡的影響 按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察未飽和、飽和15min、飽和30min對(duì)薄層色譜斑點(diǎn)的影響。結(jié)果在上述條件下，薄層色譜斑點(diǎn)均清晰明顯，分離度好。為了簡(jiǎn)化操作程序，采用未經(jīng)飽和展開。

2.10 結(jié)果 在上述條件下，標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液的點(diǎn)樣量都為10μl，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮（5∶4∶1）為展開劑，上行展開，取出，晾干，置日光下檢視，自制的小兒清咽顆粒和市售的3批小兒清咽顆粒樣品，采用方法2、3、4制備的供試品溶液，所得薄層色譜都可呈現(xiàn)與靛藍(lán)及靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品相對(duì)應(yīng)的清晰斑點(diǎn)，而方法1（標(biāo)準(zhǔn)方法制備）的供試品溶液色譜圖中未見明顯斑點(diǎn)。由此可知，提取溫度為40℃或60℃時(shí)，超聲提取和60℃回流提取樣品中的靛藍(lán)及靛玉紅都可以得到滿意的提取效果。由薄層色譜中靛藍(lán)及靛玉紅斑點(diǎn)的清晰程度來(lái)看，三種提取方法的提取效果沒有明顯差別，都較為理想。

4 討論

由結(jié)果可知，將提取溫度由室溫提高到40℃或60℃后，無(wú)論是超聲還是回流提取都能得到較為理想的結(jié)果，建議在將來(lái)法定標(biāo)準(zhǔn)提高時(shí)能將青黛鑒別檢驗(yàn)的樣品溶液處理方法變更為回流或溫浴超聲。另外，靛玉紅在供試品色譜中也呈現(xiàn)出了明顯的斑點(diǎn)，在將來(lái)的法定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高中，可考慮將靛玉紅也納入鑒別，以便青黛能得到更為全面的質(zhì)量控制。此外，筆者考察過(guò)水合氯醛對(duì)提取效果的影響，結(jié)果表明影響并不明顯，為操作簡(jiǎn)便，可以選擇不加入。

法定方法建立時(shí)，必定也經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)，研究通過(guò)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，當(dāng)室溫達(dá)到32℃時(shí)，超聲提取不需要溫浴所得提取液就可以在薄層色譜中顯現(xiàn)較為明顯的斑點(diǎn)。另外，小兒清咽顆粒的處方中還含有板藍(lán)根，板藍(lán)根中也含有靛藍(lán)和靛玉紅，但陰性樣品的薄層色譜中并未清晰顯現(xiàn)靛藍(lán)和靛玉紅的斑點(diǎn)，由此可知小兒清咽顆粒中的靛藍(lán)和靛玉紅主要來(lái)自于青黛，而來(lái)源于板藍(lán)根的靛藍(lán)和靛玉紅由于藥材中的含量就較低[4-5]，轉(zhuǎn)移到制劑中的量過(guò)少，故而不能被薄層色譜法檢出。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第六冊(cè)）[M].1991：23.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]楊云芝，胥蘇勛.小兒清咽顆粒組方中對(duì)青黛成份影響的研究[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009，25（2）：225-227.

[4]馬莉，孫琴，李友，等.HPLC法測(cè)定板藍(lán)根藥材及制劑中靛藍(lán)和靛玉紅含量[J]. 藥物分析雜志，2010，30（9）：1642-1645.

[5]王永霞.不同采收期板藍(lán)根的質(zhì)量分析與考察研究[J].中國(guó)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)，2014，15（2）：23-24.

（收稿日期：2015.08.24）