蒙醫(yī)五味甘露浴對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠5—HT、DA、NE的影響

張麗霞　水玲　陳英松

【摘 要】 目的：觀(guān)察蒙醫(yī)五味甘露浴對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠下丘腦中五-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲腎上腺素（NE）含量的影響。方法：將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、來(lái)氟米特組和五味甘露浴組，每組10只。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠進(jìn)行造模，在無(wú)菌條件下將大鼠右后足趾部注射0.1ml的CFA（完全弗氏佐劑）致炎，正常對(duì)照組注射同劑量的生理鹽水。造模后第3d，對(duì)藥浴組進(jìn)行1次/d，30min/次的治療，連續(xù)藥浴治療15d[溫度為（40±2）℃]。同樣的方法，對(duì)正常對(duì)照組和模型組做溫水浴治療作為對(duì)照。來(lái)氟米特組以0.17g/kg劑量灌胃進(jìn)行治療15d。采用ELISA法檢測(cè)大鼠5-HT、DA、NE的含量。結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，模型組5-HT、DA、NE的含量明顯升高（P<0.05），五味甘露浴組、來(lái)氟米特組與模型組比5-HT、DA、NE的含量明顯降低（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，蒙醫(yī)五味甘露浴組與來(lái)氟米特組比，5-HT、DA、NE的含量明顯降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：蒙醫(yī)五味甘露浴可能通過(guò)調(diào)節(jié)AA大鼠5-HT、DA、NE的含量，對(duì)AA起到抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

【關(guān)鍵詞】 蒙醫(yī)五味甘露??；AA大鼠；神經(jīng)遞質(zhì)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R291.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）22-0009-02

蒙醫(yī)五味甘露藥浴由小白蒿，水柏枝、麻黃各，杜鵑葉、刺柏五種藥物組成，是蒙醫(yī)臨床外治法中的重要療法之一，目前廣泛運(yùn)用于臨床。其不僅具有悠久的歷史和獨(dú)特的理論，同時(shí)具有毒副作用小、療效明顯、簡(jiǎn)便易行、臨床應(yīng)用廣范等特點(diǎn)。蒙醫(yī)五味甘露浴在臨床上治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）方面具有非常顯著的療效，未發(fā)現(xiàn)毒副作用。本研究采用CFA誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎（adjuvant arthritis，AA）模型大鼠，檢測(cè)治療前后5-HT、DA、NE含量的變化，探討蒙醫(yī)五味甘露浴的抗炎及鎮(zhèn)痛機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥物與試劑 取4～6周齡清潔級(jí)雄性SD大鼠[SCXK（軍）2012-0004] 40只，體重180～200g，由北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，進(jìn)行3d適應(yīng)性飼養(yǎng)，自由飲水和攝食。

完全弗氏佐劑（CFA， Sigma公司產(chǎn)品），五-羥色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲腎上腺素（NE），ELISA檢測(cè)試劑盒，北京新亞太生物科技有限公司提供，批號(hào)分別為：DZE30326、DZE30237、DZE30587；蒙醫(yī)五味甘露浴劑，國(guó)家蒙藥制劑中心內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院中心制劑室提供（批號(hào)：720121110）。來(lái)氟米特，由蘇州長(zhǎng)征-欣凱制藥有限公司提供（國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)：H20000550）。

1.2 儀器 80-2式離心機(jī)由金壇市化城敏科實(shí)驗(yàn)儀器廠(chǎng)提供；特制浴療器等。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組與造模 將正常雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、來(lái)氟米特組和五味甘露浴組，每組10只。對(duì)模型組、來(lái)氟米特組、五味甘露浴組大鼠進(jìn)行造模。在無(wú)菌條件下給予大鼠右后足趾注射0.1ml的CFA（內(nèi)含0.1℅滅活結(jié)核桿菌）致炎[1]，正常對(duì)照組注射同劑量的0.9%的生理鹽水，之后針眼處涂抹紫藥水。

2.2 治療方法 正常對(duì)照組：造模后第3天，對(duì)該組進(jìn)行1次/d，30min/次的治療，連續(xù)溫水浴治療15d[溫度為（40±2）℃]。治療方法：在長(zhǎng)50cm、寬30cm、高20cm的半透明塑料容器中加入溫度為（40±2）℃的清潔飲用水1000ml，將大鼠的四肢和尾部浸泡在溫水中，治療結(jié)束后用清潔毛巾擦拭干凈后放入鼠籠中。

模型組：治療方法與正常對(duì)照組相同。

來(lái)氟米特組：造模后第3天開(kāi)始來(lái)氟米特灌胃，0.17g/kg的給藥量1次/d，連續(xù)灌胃15d。

藥浴組：治療方法為在長(zhǎng)50cm、寬30cm、高20cm的半透明塑料容器中加入濃度為33.4%的蒙醫(yī)五味甘露浴1000ml，浸泡方法與正常對(duì)照組相同。

2.3 取材、檢測(cè)方法 末次治療后24h，用烏拉坦腹部皮下麻醉大鼠，將大鼠斷頭處死，在冰上剝離大腦，迅速完整取下丘腦，并稱(chēng)重后置于速凍管，用液氮快速冷凍，放入-80 ℃冰箱保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)大鼠5-HT、NE、DA的含量，按試劑盒說(shuō)明操作。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)量數(shù)據(jù)均以（x±s）表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量結(jié)果用單因素方差分析作為統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

與正常對(duì)照組相比，模型組5-HT、DA、NE的含量明顯升高（P<0.05），五味甘露浴組、來(lái)氟米特組與模型組比5-HT、DA、NE的含量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），蒙醫(yī)五味甘露浴組與來(lái)氟米特組比，5-HT、DA、NE的含量明顯降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

4 討論

類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種病因未明的慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性、自身免疫性疾病。臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)紅腫熱痛和活動(dòng)障礙，并伴有不同程度的僵硬畸形、骨和骨骼肌的萎縮，是目前造成人類(lèi)喪失勞動(dòng)力和致殘的主要原因之一。RA是一種主要累及關(guān)節(jié)滑膜的慢性、炎癥性自身免疫性疾病[2]，是世界醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的難治性疾病，其發(fā)病機(jī)制仍不清楚。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)患病率為0.3%～0.4%[3-5]。大鼠佐劑性關(guān)節(jié)模型與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎在病理機(jī)制、臨床表現(xiàn)、病理學(xué)和免疫學(xué)改變等方面有許多相似特征，佐劑能較好地模擬免疫紊亂和炎癥反應(yīng)，故佐劑性關(guān)節(jié)炎是建立免疫性炎癥動(dòng)物模型的最常用的方法。國(guó)內(nèi)外學(xué)者[6]認(rèn)為用CFA誘發(fā)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型的疼痛特點(diǎn)具有持續(xù)性，可以成為良好的臨床痛證研究的動(dòng)物模型。佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠致痛的機(jī)制為炎癥局部血小板被激活，釋放出5-HT，超過(guò)了MAO的代謝能力而產(chǎn)生疼痛。因游離的5-HT是一種致痛物質(zhì)，其減少途徑可能是使血小板對(duì)5-HT吸收增加及再釋放減少[7]，并使較多的5-HT貯存于胃壁的APUD細(xì)胞內(nèi)，使5-HT釋放入血的量減少[8]。雖然DA、NE不是直接的致痛物質(zhì)，但疼痛時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)一系列的自主神經(jīng)反應(yīng)，特別是在交感神經(jīng)系統(tǒng)；NE作為交感神經(jīng)遞質(zhì)，當(dāng)疼痛發(fā)生時(shí)，NE的含量會(huì)升高。在這次實(shí)驗(yàn)中，蒙醫(yī)五味甘露浴能抑制交感神經(jīng)的過(guò)度興奮，使DA、NE含量下降；同時(shí)，DA、NE含量的降低又有助于改善炎癥局部血液循環(huán)，促使致痛物質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)運(yùn)和清除，從而使疼痛減輕。

關(guān)節(jié)炎屬蒙醫(yī)“托來(lái)”病范疇，其治病因素是“黃水”，黃水增盛，并與血交搏注關(guān)節(jié)，導(dǎo)致局部氣血運(yùn)行受阻所致。誘發(fā)本病之常見(jiàn)因素有關(guān)節(jié)拐傷，強(qiáng)勞內(nèi)傷，酗酒，飲食過(guò)多，汗出冒風(fēng)寒，中潮濕之毒等。據(jù)蒙醫(yī)文獻(xiàn)及臨床實(shí)踐，蒙醫(yī)五味甘露藥浴之藥有各自的功能主治等蒙藥特征外，傳統(tǒng)理論認(rèn)為五味配合具有改善全身氣血運(yùn)行、潤(rùn)僵舒筋、疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)理體素、增強(qiáng)臟腑器官的功能、根除深伏之病毒余邪的作用等功效[9]。臨床中主要治療四肢僵直或抅攣、關(guān)節(jié)腫痛、肌肉萎縮等“黃水”疾患，治宜以燥黃水，舒筋為原則[10]。

蒙醫(yī)五味甘露浴是利用水和藥物的協(xié)同作用使人體的外部浸漬，以達(dá)到防治疾病目的的一種療法，是蒙醫(yī)臨床外治法重要組成部分。藥物的有效成分通過(guò)皮膚黏膜吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、擴(kuò)散，通過(guò)對(duì)皮膚的刺激，擴(kuò)張血管、促進(jìn)血液循環(huán)、改善周?chē)M織，發(fā)揮抑制和殺死病菌、調(diào)節(jié)免疫的作用。五味甘露藥浴能抑制各種炎癥模型所致的炎癥，并能起到鎮(zhèn)痛作用，是蒙醫(yī)臨床外治法中重要的療法之一[9]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蒙醫(yī)五味甘露浴具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，能夠明顯降低CFA誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠下丘腦5-HT、DA、NE的含量。提示蒙醫(yī)五味甘露浴通過(guò)調(diào)節(jié)AA大鼠下丘腦5-HT、DA、NE的含量，抑制炎癥模型所致炎癥，起到鎮(zhèn)痛作用。

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（收稿日期：2015.09.16）