濾泡輔助性T細(xì)胞參與自身免疫性疾病發(fā)病的研究進展

方忠俊，王 悅，陽 帆，稽曉赟，劉 軍 綜述，李云春 審校

(1.復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，上海 200433；2.上海市光華中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科，上海 200052)

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·綜 述·

濾泡輔助性T細(xì)胞參與自身免疫性疾病發(fā)病的研究進展

方忠俊1，2，王 悅2，陽 帆2，稽曉赟2，劉 軍2綜述，李云春2審校

(1.復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，上海 200433；2.上海市光華中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗科，上海 200052)

自身免疫疾??； 綜述； 濾泡輔助性T細(xì)胞； 發(fā)病機制

濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)是一群具有輔助B淋巴細(xì)胞功能、表型為CXCR5+CD40L+誘導(dǎo)性協(xié)同刺激分子(ICOS)+的T淋巴細(xì)胞亞群。2000年Schaerli等[1]和Breitfeld等[2]同時報道了Tfh定位于淋巴濾泡，他們發(fā)現(xiàn)CXCR5、ICOS分子是該細(xì)胞主要的表面標(biāo)記物。自身免疫性疾病常與T、B淋巴細(xì)胞的高度活化，自身抗體類免疫蛋白增多等機體異常免疫應(yīng)答反應(yīng)有關(guān)。初始T淋巴細(xì)胞經(jīng)外來抗原刺激分化為輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)，其分泌的γ干擾素(IFN-γ)、白介素(IL)-4等細(xì)胞因子對B淋巴細(xì)胞分泌抗體具有輔助作用。在自身免疫性疾病等病理情況下有研究發(fā)現(xiàn)，Tfh膜表面標(biāo)志物及分泌的細(xì)胞因子表達(dá)異常，Tfh可遷移到非淋巴組織并形成生發(fā)中心(GC)，對其自身的遷移、定位、分化、發(fā)育也具有重要作用[3]。因此，在淋巴濾泡中和淋巴濾泡外，Tfh對B淋巴細(xì)胞增殖和漿細(xì)胞分化均具有調(diào)控作用，Tfh異常與自身免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展具有一定的關(guān)系，現(xiàn)將近年來有關(guān)Tfh在自身免疫性疾病中的研究進展綜述如下。

1 Tfh功能及膜表面標(biāo)志物

1.1 Tfh功能 在B淋巴細(xì)胞分化過程中一部分Tfh持續(xù)高表達(dá)CXCR5與其配體CXCLl3結(jié)合刺激作用下遷移到B淋巴細(xì)胞濾泡中進行分化成熟，形成GC，主要輔助B淋巴細(xì)胞分化并發(fā)生Tfh-B相互作用[4]，高親和力B淋巴細(xì)胞在受Tfh刺激后可分化為記憶性B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞，促進免疫球蛋白類別的轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致某類高滴度自身抗體的產(chǎn)生，機體體液免疫應(yīng)答發(fā)生紊亂，所以，Tfh功能正常與否是決定機體抗體免疫應(yīng)答發(fā)生的主要因素[5-6]。

1.2 Tfh膜表面標(biāo)志物

1.2.1 CXCR5 在效應(yīng)T淋巴細(xì)胞中能夠穩(wěn)定持續(xù)地表達(dá)CXCR5者只有Tfh，所以是最早鑒別Tfh的重要表面標(biāo)志物[7-8]。趨化因子CXC家族中高表達(dá)CXCR5，作為CXC亞族趨化因子受體可通過識別其配體CXCLl3結(jié)合并相互作用，引導(dǎo)B淋巴細(xì)胞和Tfh定位于濾泡形成GC，在淋巴組織中經(jīng)抗原刺激后CXCR5+CD4+T型效應(yīng)T淋巴細(xì)胞明顯增多，能有效輔助B淋巴細(xì)胞并使其分化為漿細(xì)胞，促進免疫球蛋白類別的轉(zhuǎn)換。

1.2.2 ICOS ICOS可與B淋巴細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、單核細(xì)胞等產(chǎn)生的ICOS配體(ICOSL)結(jié)合，促進Tfh分泌炎性細(xì)胞因子IL-21，T淋巴細(xì)胞活化后誘導(dǎo)Tfh高水平表達(dá)ICOS分子，若使ICOS分子產(chǎn)生減少就可阻斷ICOS-ICOSL相互作用，減少IL-21的表達(dá)，導(dǎo)致GC形成障礙及Tfh缺失[9]。在小鼠B淋巴細(xì)胞上遺傳性敲除ICOSL的實驗結(jié)果提示，Tfh的形成需要來自B淋巴細(xì)胞上ICOSL信號刺激誘導(dǎo)，Yoo等[10]研究證實，ICOS-ICOSL相互作用對Tfh的形成及功能特性和B淋巴細(xì)胞的發(fā)育及分化均具有重要作用。Xu等[11]研究也表明，ICOS還可通過磷脂酰肌醇3-激酶信號途徑誘導(dǎo)細(xì)胞偽足的發(fā)生，促進其在體內(nèi)持續(xù)性運動，有效遷移到濾泡區(qū)。

1.2.3 IL-21 IL-21是具有執(zhí)行Tfh效應(yīng)功能、主要由Tfh、Th17、NKT細(xì)胞等產(chǎn)生的細(xì)胞因子[12]。所有的B淋巴細(xì)胞均表達(dá)IL-21受體，也是IL-21的主要靶細(xì)胞。有研究證明，IL-21與IL-21R缺陷小鼠體內(nèi)Tfh減少，IL-21信號缺失對細(xì)胞與蛋白抗原的免疫應(yīng)答影響較大，所以，IL-21在促進B淋巴細(xì)胞增殖、免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換及產(chǎn)生等方面具有重要作用[13]。IL-21可促使初始T淋巴細(xì)胞向Tfh分化，發(fā)揮Tfh輔助B淋巴細(xì)胞的功能，促進Tfh向淋巴濾泡和GC遷移，維持T淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞的動態(tài)平衡[14]。Karnell等[15]研究表明，IL-21與細(xì)胞活化因子一起可加強CD40與其配體CD40L的結(jié)合而誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖。此外最近有研究發(fā)現(xiàn)，Tfh還可產(chǎn)生IL-4，因IL-4拮抗IL-21誘導(dǎo)Blimp-1表達(dá)，導(dǎo)致Tfh發(fā)育異常。

1.2.4 細(xì)胞淋巴瘤-6(Bcl-6) Bcl-6是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，包含鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白，具有調(diào)控初始T淋巴細(xì)胞發(fā)育為Tfh的功能。Bcl-6因子高表達(dá)可促進Tfh分化，其缺乏導(dǎo)致Tfh無法形成GC及分化，因此，Bcl-6是初始T淋巴細(xì)胞發(fā)育為Tfh的必要條件[16]。在其他非Tfh的CD4+細(xì)胞上高表達(dá)Blimp-1作為Bcl-6相互拮抗的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其共同調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)平衡。有研究也證明，Blimp-1可抑制Bcl-6表達(dá)及Tfh的分化，但對非Tfh的CD4+細(xì)胞的增殖和分化具有促進作用。Kitano等[17]發(fā)現(xiàn)，Bcl-6過度表達(dá)可提高Tfh的產(chǎn)生并抑制其他Tfh的分化。所以，Bcl-6與Blimp-1表達(dá)平衡是維持Tfh正常發(fā)育與功能的關(guān)鍵因素。

2 Tfh與自身免疫性疾病

自身免疫性疾病是機體在不同病原誘導(dǎo)下產(chǎn)生高滴度自身抗體將自身組織和細(xì)胞作為靶向引起強烈異常免疫應(yīng)答反應(yīng)，致使結(jié)締組織和膠原組織嚴(yán)重和持久的結(jié)構(gòu)及功能破壞并出現(xiàn)臨床癥狀的疾病?；赥fh膜表面標(biāo)志物，其功能缺陷或亢進均將導(dǎo)致機體免疫狀態(tài)紊亂，Tfh在GC的形成中具有重要作用，且異位GC在許多自身免疫性疾病的非淋巴組織中均會形成。黃曉梅等[18]關(guān)于Tfh在免疫性血小板減少性紫癜患者的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，Tfh參與了調(diào)節(jié)免疫性血小板減少性紫癜疾病的發(fā)生，且患者外周血Tfh占CD4+T淋巴細(xì)胞的比例顯著增高，證實Tfh能為免疫性血小板減少性紫癜患者的免疫調(diào)節(jié)和干預(yù)提出新的治療方向。

2.1 Tfh與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA) RA病因至今尚未真正明確，多種因素均影響疾病的發(fā)生、發(fā)展，其病理特征是一種以關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜細(xì)胞增生、襯里層增厚、多種炎癥細(xì)胞浸潤、血管翳形成及侵犯軟骨并引起骨質(zhì)破壞為主要表現(xiàn)的全身性自身免疫性疾病。研究小鼠膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)模型發(fā)現(xiàn)，過多Tfh產(chǎn)生將促進細(xì)胞激活、分化成漿細(xì)胞，進而分泌大量高親和力抗體。Ma等[19]在RA患者外周血中發(fā)現(xiàn)，Tfh表達(dá)數(shù)量、IL-21水平、Bcl-6 表達(dá)水平均較健康對照組明顯升高，且其升高幅度與血漿中抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體水平有關(guān)，Tfh可促進IL-21分泌，但受Bcl-6 mRNA的調(diào)控，所以，Tfh密切參與了RA的發(fā)病。此外Chakera等[20]研究表明，RA患者血循環(huán)中Tfh表達(dá)的免疫球蛋白超家族受體CD200增加顯著，提示信號旁路(CD200/CD200)可作為RA潛在的預(yù)防及治療靶點。周萌等[21]研究發(fā)現(xiàn)，RA患者關(guān)節(jié)滑膜組織中存在CD4+CXCR5+ICOS+Tfh，而骨關(guān)節(jié)炎及正?；ぶ形礄z測到Tfh，提示在初發(fā)RA患者血漿中可溶性程序性死亡受體-1(PD-1)水平與RA疾病活動度有關(guān)，且PD-1水平升高與類風(fēng)濕因子、抗CCP抗體、IL-21等呈正相關(guān)；Greisen 等[22]在研究中也證明了Tfh與RA疾病的重要關(guān)系。

2.2 Tfh與系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) SLE發(fā)病機制與多因素有關(guān)，其重要發(fā)病機制之一是B淋巴細(xì)胞持續(xù)過度活化產(chǎn)生自身抗體。Linterman等[23]在狼瘡小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，Tfh在濾泡處大量集聚并分泌高滴度自身抗體。Simpson等[24]證實了疾病的嚴(yán)重程度與GC的形成相關(guān)，同時發(fā)現(xiàn)，SLE 患者高滴度抗雙鏈DNA(ds-DNA)抗體、CXCR5、ICOS 及CD40L等表達(dá)均高于健康對照組。Wu等[25]在觀察40 例SLE 患者使用抗-CD3 單克隆抗體治療前后的臨床指標(biāo)差異中發(fā)現(xiàn)，SLE發(fā)病機制可能與Tfh過度表達(dá)、IL-21過量分泌、高滴度自身抗體等有關(guān)。此外國內(nèi)外還有研究表明，轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6 與SLE 發(fā)病有關(guān)[23-26]，在狼瘡小鼠模型中阻斷CD40-CD40L/ICOS-ICOSL相互作用可抑制GC的形成。

2.3 Tfh與1型糖尿病(T1DM) T1DM是由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的胰島B細(xì)胞選擇性破壞所致的自身免疫性疾病，Tfh分泌的細(xì)胞因子IL-21是T1DM的關(guān)鍵易感性因子。Corthay[27]研究證實，IL-21R缺陷K/BxN小鼠可阻止IL-21在非肥胖性糖尿病(NOD)中的致病作用。李麗等[28]發(fā)現(xiàn)，初發(fā)T1DM患者外周血Tfh比例顯著增加并伴隨B淋巴細(xì)胞及谷氨酸脫羧酶抗體滴度的上升，表明Tfh可能參與了T1DM的發(fā)病。

2.4 Tfh與自身免疫性肝炎 IL-21細(xì)胞因子可促進CD8+T淋巴細(xì)胞活化，自身免疫性肝炎是受CD8+T淋巴細(xì)胞活化而誘發(fā)的，所以，調(diào)控肝臟內(nèi)Tfh數(shù)量而調(diào)控IL-21細(xì)胞因子表達(dá)量，可抑制自身免疫性肝炎的發(fā)生。Aoki等[29]通過切除PD-1缺陷小鼠胸腺，建立NTx-PD-1(-/-)小鼠模型后發(fā)現(xiàn)，小鼠脾內(nèi)B細(xì)胞區(qū)內(nèi)存在大量Tfh并遷移至肝臟內(nèi)，誘發(fā)致死性自身免疫性肝炎。

2.5 Tfh與重癥肌無力(MG) Saito等[30]研究發(fā)現(xiàn)，外周血CD4+CXCR5+T淋巴細(xì)胞比例在MG患者治療前明顯高于健康者，且與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，治療后與健康者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。胡波等[31]研究發(fā)現(xiàn)，在MG患者血清IL-21水平明顯高于健康對照組，B淋巴細(xì)胞上的IL-21R與IL-21相互作用，促進B淋巴細(xì)胞增殖、免疫球蛋白類別的轉(zhuǎn)換，誘導(dǎo)MG患者血清中抗Ab向IgGl和IgG3亞型轉(zhuǎn)換，引起MG發(fā)病。MG屬于自身免疫性疾病，主要受乙酰膽堿受體抗體(Ab)介導(dǎo)、細(xì)胞免疫依賴、補體參與，所以，通過觀察機體Tfh效應(yīng)分子CXCR5、IL-21在不同階段的變化，可為MG的預(yù)防及治療提供新途徑。

國內(nèi)外亦有研究表明，Tfh參與了多種其他自身免疫性疾病包括多發(fā)性硬化癥、干燥綜合征、自身免疫性甲狀腺炎、免疫缺陷性疾病、腫瘤等，Tfh表達(dá)數(shù)量或功能失調(diào)貫穿了自身免疫性疾病發(fā)生、發(fā)展，但具體機制尚需進一步研究[32]。

綜上所述，Tfh作為一個新的T淋巴細(xì)胞亞群，輔助于體液免疫B淋巴細(xì)胞，是抗體產(chǎn)生及調(diào)節(jié)機制中的重要因素，且Tfh異常增多或相關(guān)效應(yīng)分子異常表達(dá)與自身免疫性疾病相關(guān)如通過有效抑制Tfh相關(guān)因子信號通路、中和多余免疫紊亂產(chǎn)生的炎癥因子、減少GC和高濃度自身抗體形成等，即如何有效抑制相關(guān)因子的表達(dá)數(shù)量及功能，從而達(dá)到治療自身免疫性疾病的目的尚有待于進一步研究。隨著研究的不斷進展，其終將成為治療某些自身免疫性疾病的新靶點。

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方忠俊，男，主管技師，主要從事免疫學(xué)檢驗的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.02.036

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