MitoKATP與枳實(shí)薤白桂枝湯保護(hù)家兔心肌缺血再灌注損傷機(jī)制相關(guān)性研究※

茍玉東 徐 雙 姜曉旭 孫世曉

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)2015級(jí)碩士研究生，黑龍江 哈爾濱 150040)

實(shí) 驗(yàn) 研 究

MitoKATP與枳實(shí)薤白桂枝湯保護(hù)家兔心肌缺血再灌注損傷機(jī)制相關(guān)性研究※

茍玉東 徐 雙1姜曉旭1孫世曉△

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)2015級(jí)碩士研究生，黑龍江 哈爾濱 150040)

目的 目的通過實(shí)驗(yàn)研究觀察線粒體ATP敏感性鉀離子通道(MitoKATP)是否參與枳實(shí)薤白桂枝湯(ZSXBGZD)對(duì)家兔心肌缺血再灌注損傷(MIRI)保護(hù)性機(jī)制。方法 將40只大耳家兔隨機(jī)分為5組，每組8只，即非缺血再灌注組(Sham組)、缺血再灌注組(MIRI組)、缺血再灌注+枳實(shí)薤白桂枝湯組(ZSXBGZD組)、缺血再灌注+枳實(shí)薤白桂枝湯+5-羥基癸酸鹽組(5-HD組)、缺血再灌注+枳實(shí)薤白桂枝湯+格列本脲組(Gli組)，每組各8只。利用Langendorff體外法備MIRI模型，Sham組家兔完成全部操作，不進(jìn)行停灌，持續(xù)灌流200 min；其余4組家兔離體心臟平衡灌流30 min后，進(jìn)行停灌80 min；ZSXBGZD組于缺血前10 min給予含有枳實(shí)薤白桂枝湯提取液的locke液灌流10 min，然后缺血80 min，再灌注時(shí)仍給予含有枳實(shí)薤白桂枝湯提取液的locke液灌流120 min；5-HD組、Gli組過程同ZSXGZD組，在給予ZSXBGZD藥物的基礎(chǔ)上分別再加入5-HD、Gli。灌流結(jié)束后測(cè)定心肌組織乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量，分別記錄停灌前10 min及再灌注后20、40、60、80、100、120 min各組家兔的冠脈流量，利用2，3，5-氯化三苯基四氮唑法(TTC法)測(cè)定心肌梗死面積。結(jié)果 MIRI組中家兔MDA、LDH、心肌梗死面積均明顯高于Sham組，SOD、冠脈流量明顯低于Sham組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與MIRI組相比，ZSXBGZD組SOD、冠脈流量均明顯增加，心肌梗死面積縮小，MDA、LDH降低，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與MIRI組比較，5-HD組及Gli組SOD、MDA、LDH含量，冠脈流量及心肌梗死面積均無明顯變化(P>0.05)，但與ZSXBGZD組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 ZSXBGZD能減輕家兔MIRI損傷，具有保護(hù)心肌作用，且此作用能被5-HD大部分抵消，能被Gli完全阻斷，提示枳實(shí)薤白桂枝湯對(duì)家兔MIRI保護(hù)作用與MitoKATP顯著性相關(guān)。

枳實(shí)薤白桂枝湯；KATP通道；再灌注損傷；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；兔

心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI)歷來是心血管疾病研究的焦點(diǎn)[1]。目前各種治療手段如溶栓法、心臟介入、心臟移植等使缺血性心臟病的治療取得了顯著成效，但仍尚無有效措施根除心臟再灌注治療過程中帶來的負(fù)面影響，甚者會(huì)導(dǎo)致心肌組織損傷和細(xì)胞功能障礙進(jìn)一步加重[2]。研究表明，枳實(shí)薤白桂枝湯(Zhishi Xiebai Guizhi Decoction，ZSXBGZD)能降低MIRI，減少心肌梗死面積，臨床上治療冠心病、心絞痛等效果顯著[3-4]。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)證實(shí)ATP敏感性鉀離子通道(KATP)在保護(hù)心肌，抵抗MIRI過程中扮演重要角色[5]。早期，人們認(rèn)為僅有一種存在于心肌細(xì)胞膜的通道，即細(xì)胞膜ATP敏感性鉀離子通道(sarcKATP)，隨后研究發(fā)現(xiàn)，在線粒體上也存在著另外一種通道，稱之為線粒體ATP敏感性鉀離子通道(MitoKATP)，且后者在抑制MIRI中起到比前者更為突出的作用[6]。因此，我們推測(cè)ZSXBGZD對(duì)家兔MIRI的作用機(jī)制可能與MitoKATP有很大關(guān)聯(lián)。本實(shí)驗(yàn)通過GL-2離體心臟灌流系統(tǒng)，觀察ZSXBGZD在家兔MIRI中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脫氫酶(LDH)、冠脈流量及心肌梗死面積的改變，旨在探討MitoKATP通道是否參與了家兔MIRI保護(hù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)成年大耳家兔40只，體質(zhì)量約2.5 kg，雌雄不限，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK黑2008-004

1.1.2 藥物與試劑

1.1.2.1 ZSXBGZD 采用水提醇沉制備枳實(shí)薤白桂枝湯提取液。參照《金匱要略》枳實(shí)薤白桂枝湯記載，藥物組成：枳實(shí)12 g，厚樸12 g，薤白9 g，桂枝6 g，瓜蔞12 g。按以上比例稱取藥物，分開浸泡30 min，煎煮冷卻，紗布過濾提取藥液，加入無水乙醇，使含醇量達(dá)到75%，封閉冷藏放置24 h；然后用紗布過濾藥液，用SHZ-Ⅱ水循環(huán)真空泵抽濾藥液2次，再置于恒溫水浴，揮發(fā)并濃縮藥液成膏劑；然后加雙蒸餾水200 mL配成藥液，離心機(jī)3 500 r/min離心30 min，取上清液；再次置于恒溫水浴，為了實(shí)驗(yàn)方便，濃縮藥液至含生藥51 g/100 mL，然后將藥液置4 ℃冰箱貯存?zhèn)溆肹7]。

1.1.2.2 locke液 根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[8]配制locke液。1 000 mL蒸餾水中先加入試劑氯化鈉(NaCl)9.0 g、氯化鉀(KCl)0.42 g、碳酸氫鈉(NaHCO3)0.2 g ，最后加入葡萄糖 1.0 g、氯化鈣(CaCl2)0.24 g。在此過程中，需注意一種試劑完全溶解后才可加入其他試劑。配制完全后真空抽濾2次，pH調(diào)至7.35～7.45(充以5%CO2和95%O2混合氣體)。本實(shí)驗(yàn)使用的locke液全部為新鮮配制，每次配制2 500 mL。

1.1.2.3 其他試劑 SOD、MDA、LDH試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。5-羥基癸酸鹽(5-HD)、格列本脲(Gli)為SIGMA-ALDRICH公司產(chǎn)，0.4%2，3，5-氯化三苯基四氮唑溶液(TTC)染色液為Beijing Solarbio Science Technology Co, Ltd.公司產(chǎn)，蒸餾水由本實(shí)驗(yàn)室自行提取，其余均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、GL-2離體心臟灌流系統(tǒng)，均為成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)；LDZ-1.2臺(tái)式離心機(jī)為北京醫(yī)用離心機(jī)公司生產(chǎn)；PHS-3C型實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)為上海今邁儀器儀表有限公司產(chǎn)；SHZ-Ⅱ水循環(huán)真空泵長(zhǎng)春科貿(mào)公司生產(chǎn)；722型光柵分光光度計(jì)為山東高密彩虹分析儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 篩選心電圖正常的家兔40只，隨機(jī)分為5組，即非缺血再灌注組(Sham組)、缺血再灌注組(MIRI組)、缺血再灌注+枳實(shí)薤白桂枝湯組(ZSXBGZD組)、缺血再灌注+枳實(shí)薤白桂枝湯+5-HD組(5-HD組)、缺血再灌注+枳實(shí)薤白桂枝湯+GLi組(Gli組)，每組各8只。

1.2.2 給藥劑量 ZSXBGZD：經(jīng)計(jì)算每劑約煎取300 mL藥液，內(nèi)含51 g生藥，人體每次服藥約100 mL，內(nèi)含生藥約17 g。按體質(zhì)量70 kg計(jì)算，人體正常每次服藥劑量約為0.24 g/kg。參照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥劑量計(jì)算方法，家兔1次給藥劑量為：17×0.07/1.5=0.79 g/kg，故家兔離體心臟灌注給藥劑量為0.79 g/kg。5-HD 溶液：將其溶于雙蒸餾水中，配成10 mmol/L母液，4 ℃保存，實(shí)驗(yàn)前用locke灌流液稀釋至所需濃度100 μmol/L。Gli溶液：將Gli試劑溶于二甲基亞砜(DMSO，sigma)中，配成3 mmol/L母液，4 ℃保存，實(shí)驗(yàn)前用locke灌流液稀釋至3 μmol/L。

1.2.3 模型制備及方法 ①所有家兔術(shù)前禁食12 h，20%氨基甲酸乙酯(5 mL/kg)耳緣靜脈麻醉，另一耳緣靜脈注射肝素鈉(2 mL/kg)。麻醉生效后，仰臥位固定于專用解剖臺(tái)，胸部備皮，開胸，迅速取出心臟，置于4 ℃locke液中，修剪周圍殘余組織，暴露主動(dòng)脈，將主動(dòng)脈套管插入其中，并無菌細(xì)線結(jié)扎，隨后將之與GL-2離體心臟灌流系統(tǒng)連接。以氧飽和的locke液行常規(guī)恒壓恒溫逆向灌流，調(diào)節(jié)基礎(chǔ)流量為20 mL/min，locke液溫度37 ℃，灌流壓力約為12 kPa。繼之用眼科剪在左心耳開一小口，將自制球囊經(jīng)左心房插入至左心室，并接BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，保持球囊內(nèi)壓力在0.4～1.3 kPa范圍內(nèi)。左心室內(nèi)壓力通過壓力換能器輸入BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)完成信號(hào)自動(dòng)采集。關(guān)閉灌流裝置主動(dòng)脈套管上方的開關(guān)，造成缺血；打開開關(guān)，形成再灌注。②Sham組家兔完成全部操作，不進(jìn)行停灌，持續(xù)灌流200 min；其余4組家兔離體心臟平衡灌流30 min后，進(jìn)行停灌80 min，以此造成家兔心臟全心缺血。此過程中同時(shí)通過GL-2離體心臟灌流系統(tǒng)對(duì)浸泡于37 ℃locke液中的心臟保持恒溫。

1.2.4 給藥方法 Sham組：持續(xù)灌流200 min，不進(jìn)行任何藥物干預(yù)。MIRI組：缺血80 min，再灌注時(shí)仍以氧飽和的locke液行常規(guī)恒壓恒溫逆向灌流120 min。ZSXBGZD組：于缺血前10 min給予含ZSXBGZD提取液的locke液灌流10 min，然后缺血80 min，再灌注時(shí)仍給予含有ZSXBGZD提取液的locke液灌流120 min；5-HD組、Gli組：過程同ZSXGZD組，在給予ZSXBGZD的基礎(chǔ)上分別加入濃度為100 μmol/L的5-HD及3 μmol/L的Gli溶液。

1.2.5 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.2.5.1 SOD、LDH和MDA含量測(cè)定 灌流結(jié)束后，剪下各組家兔心臟缺血心肌組織約0.2 g，于4 ℃0.9%氯化鈉注射液中除去血液，濾紙吸干后，放于小離心管經(jīng)液氮速凍后保存在-80 ℃冰箱中。測(cè)定前取出組織，并按照0.9%氯化鈉注射液的體積質(zhì)量與組織塊質(zhì)量9∶1比例制備組織勻漿，離心機(jī)離心取適量上清液。利用硫代巴比妥酸法(TBA法)測(cè)定MDA含量，鹽酸羥胺法測(cè)定SOD活性，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測(cè)定LDH含量。

1.2.5.2 冠脈流量測(cè)定 分別記錄在停灌前10 min及再灌注后20、40、60、80、100、120 min各組家兔的冠脈流量。

1.2.5.3 心肌梗死面積測(cè)定 采用TTC法：再灌注結(jié)束后立刻將各組家兔心臟在液氮中進(jìn)行物理固定，10 s后取出，置于小手術(shù)臺(tái)，以垂直心臟縱軸方向切片，每片厚約2 mm，經(jīng)0.9%氯化鈉注射液沖洗，濾紙吸干后，放于4%TTC緩沖液中，37 ℃恒溫水浴孵育15 min后，再用0.9%氯化鈉注射液終止反應(yīng)。壞死區(qū)被染成灰白色，非壞死區(qū)被染成紅色，梗死面積為壞死區(qū)域面積與缺血區(qū)域面積之比。

2 結(jié) 果

2.1 5組家兔心肌組織SOD、MDA、LDH含量比較 見表1。

表1 5組家兔心肌組織SOD、MDA、LDH含量比較

組 別nSOD(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)LDH(U/gprot)Sham組88.64±1.47166.05±16.11280.73±17.86MIRI組86.06±1.24*295.12±20.14*408.81±20.13*ZSXBGZD組88.85±1.54△175.34±15.67△303.52±13.12△5-HD組85.92±1.43#243.15±17.86#383.19±12.31#Gli組85.36±1.12#257.17±12.13#526.21±18.74#

與Sham組比較，*P<0.05；與MIRI組比較，△P<0.05；與ZXBGZD組比較，#P<0.05

由表1可見，與Sham組相比，MIRI組心肌組織SOD含量降低，MDA、LDH含量升高，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與MIRI組相比，ZSXBGZD組SOD含量升高，MDA、LDH含量下降(P<0.05)。5-HD組、Gli組與MIRI組相比，SOD、MDA、LDH均無明顯變化(P>0.05)；與ZSXBGZD組相比，SOD含量低，MDA、LDH含量高(P<0.05)。

2.2 5組家兔心肌梗死面積比較 見表2，圖1。

表2 5組家兔心肌梗死面積比較 ±s

與Sham組比較，*P<0.05；與MIRI組比較，△P<0.05；與ZSXBGZD組比較，#P<0.05

由表2、圖1可見，與Sham組相比，MIRI組心肌梗死面積增大(P<0.05)；與MIRI組相比，ZSXBGZD組心肌面積顯著減小(P<0.05)，5-HD組、Gli組無明顯變化(P>0.05)；與ZSXBGZD組相比，5-HD組、Gli組心肌梗死面積增大(P<0.05)。

Sham組

MIRI組

ZSXBGZD組

5-HD組

Gli組

2.3 5組家兔MIRI過程中冠脈流量比較 見表3。

組 別n停灌前10min再灌注20min再灌注40min再灌注60min再灌注80min再灌注100min再灌注120minSham組815.12±0.1315.25±0.2416.42±0.3515.69±0.2115.58±0.3615.74±0.6316.04±0.22MIRI組814.25±0.5811.42±0.56*10.26±0.37*9.18±0.63*8.22±0.69*8.11±0.48*7.24±0.4*ZSXBGZD組815.49±0.4414.20±0.36△15.56±0.48△16.32±0.65△16.78±0.46△16.85±0.72△16.94±0.38△5-HD組814.61±0.7813.8±0.23#12.60±0.38#12.01±0.35#11.80±0.11#10.42±0.18#9.85±0.36#Gli組811.4±0.4610.8±0.13#9.21±0.46#8.8±0.64#8.6±0.21#8.12±0.27#7.9±0.14#

與Sham組比較,*P<0.05；與MIRI組比較，△P<0.05；與ZXBGZD組比較，#P<0.05

由表3可見，與Sham組比較，MIRI組缺血再灌注后20、40、60、80、100、120 min冠脈流量均顯著減少(P<0.05)。與MIRI組相比，ZSXBGZD組缺血再灌注后20、40、60、80、100、120 min冠脈流量均增加(P<0.05)，而Gli組、5-HD組無明顯變化(P>0.05)。與ZSXBGZD組比較，5-HD組、Cli組缺血灌注后20、40、60、80、100、120 min冠脈流量均減少(P<0.05)。

3 討 論

目前實(shí)驗(yàn)研究中對(duì)于MIRI模型建立常采用Langendorff體外法、冠脈左前降支結(jié)扎法、ISO誘導(dǎo)法及垂體后葉誘導(dǎo)法[9]。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)家兔離體心肌梗死面積、病理生理性指標(biāo)及冠脈流量的監(jiān)測(cè)來探討ZSXBGZD對(duì)心肌的保護(hù)性作用，故采用Langendorff體外法建立家兔離體心臟缺血再灌注模型。它是一種逆向灌流裝置，即在主動(dòng)脈瓣關(guān)閉時(shí)，灌注液通過主動(dòng)脈根部的冠狀動(dòng)脈開口進(jìn)行動(dòng)脈的循環(huán)灌注，最后從冠狀靜脈竇進(jìn)入右心房，與生理?xiàng)l件下灌流方向相反[10]，其穩(wěn)定性高，重復(fù)性強(qiáng)，操作方便。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，除了對(duì)晶體灌注液制備、實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度、灌流模式選擇、給藥途徑等多方面嚴(yán)格要求外，還需對(duì)心臟分離和插管這一過程重點(diǎn)掌握、熟練操作。整個(gè)過程需控制在操作30 s以內(nèi)，避免長(zhǎng)時(shí)間操作造成心肌缺血預(yù)適應(yīng)[11]，這是在實(shí)驗(yàn)研究開展以來筆者認(rèn)為最為重要的環(huán)節(jié)。同時(shí)，對(duì)于以MIRI模型為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)研究多采用左前降支結(jié)扎法為主，通過Langendorff法研究ZSXBGZD對(duì)家兔MIRI保護(hù)作用與MitoKATP通道相關(guān)性機(jī)制尚不多見。

MIRI發(fā)病機(jī)制多與再灌注導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載、氧自由基(OFR)大量迸發(fā)、微血管損傷及炎癥反應(yīng)等有關(guān)[12]。其中，OFR產(chǎn)生與MIRI關(guān)系緊密[13]，在心肌缺血發(fā)生時(shí)，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)應(yīng)激性增強(qiáng)，機(jī)體常以白細(xì)胞呼吸爆發(fā)等方式大量產(chǎn)生OFR，通過攻擊細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸，造成脂膜局部破壞，脂質(zhì)流動(dòng)性降低，逐步分解成一系列脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，如MDA等，從而使細(xì)胞膜的功能和結(jié)構(gòu)改變，再灌注損傷加重[14]。MDA作為脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，能間接反應(yīng)心肌損傷的程度。SOD作為一種新型酶抑制劑和機(jī)體首要清除劑，能清除OFR，阻斷脂質(zhì)過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其活性高低直接反映機(jī)體清除OFR的能力[15]。相關(guān)文獻(xiàn)表明，SOD、MDA作為一對(duì)氧化反應(yīng)指標(biāo)，存在此消彼長(zhǎng)關(guān)系，若SOD升高，則MDA降低[16]。LDH作為心肌損傷標(biāo)志酶，通過對(duì)其在再灌注過程冠脈漏出液中活性測(cè)量，能直接反映心肌組織損傷情況[17]。本實(shí)驗(yàn)中，MIRI組中家兔MDA、LDH、心肌梗死面積均明顯高于Sham組(P<0.05)，SOD、冠脈流量明顯低于Sham組(P<0.05)，表明缺血再灌注加重細(xì)胞凋亡、心肌缺血及梗死程度。與MIRI相比，ZSXBGZD組SOD、冠脈流量均明顯增加(P<0.05)，心肌梗死面積減少(P<0.05)，MDA、LDH值降低(P<0.05)，驗(yàn)證了ZSXBGZD具有保護(hù)心肌、防止MIRI的作用。

MitoKATP開放劑和阻滯劑的出現(xiàn)使對(duì)MIRI的研究更加具有了指向性與科學(xué)性，為抗心肌缺血藥物研究提供了新靶點(diǎn)[18]。實(shí)驗(yàn)表明，MitoKATP除了通過減少鈣離子超載、降低細(xì)胞凋亡等方式抵抗MIRI外，還與減輕OFR釋放導(dǎo)致的損傷，保護(hù)線粒體呼吸鏈有關(guān)[14]。MIRI發(fā)生時(shí)產(chǎn)生的OFR會(huì)引起瀑布式的自由基連鎖反應(yīng)，使膜脂質(zhì)流動(dòng)性降低，通透性增高，從而導(dǎo)致線粒體腫脹，細(xì)胞代謝障礙和損傷加重[19]。姚慧等[20]通過分離細(xì)胞或線粒體模型，說明葛根素預(yù)處理具有抗缺氧及復(fù)氧損傷作用，并且該作用能被5-HD部分阻斷。自1991年在大鼠肝細(xì)胞線粒體內(nèi)膜發(fā)現(xiàn)KATP后,便將其分為質(zhì)膜KATP(sarcKATP)和線粒體KATP(mitoKATP)，選擇性MitoKATP阻滯劑5-HD能抵消特異性MitoKATP開放劑的保護(hù)作用，KATP阻滯劑Gli則會(huì)抵消以鉀通道為基礎(chǔ)的作用[21]。本實(shí)驗(yàn)中，與MIRI組比較，5-HD組及Gli組心肌組織SOD、MDA、LDH含量，冠脈流量及心肌梗死面積均無明顯變化(P>0.05)，與ZSXBGZD組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說明ZSXBGZD對(duì)家兔MIRI作用被大部分5-HD減縮，且被Gli完全阻斷，表明ZSXBGZD對(duì)家兔MIRI保護(hù)作用與MitoKATP顯著相關(guān)。國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)已表明，二氮嗪(diazoxide)、尼可地爾等作為MitoKATP通道特異性開放劑，對(duì)心臟的保護(hù)作用是顯著的，且該保護(hù)作用均能被MitoKATP選擇性抑制劑削弱[20]。因此，ZSXBGZD對(duì)離體家兔MIRI的保護(hù)作用可能是模擬了其開放劑藥物對(duì)心臟保護(hù)機(jī)制，可能與維持適量線粒體體積、抑制再灌注過程中線粒體鈣離子超載及改變細(xì)胞活性氧(ROS)生成有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究在論證了ZSXBGZD對(duì)家兔MIRI具有保護(hù)作用基礎(chǔ)上，僅對(duì)該作用與MitoKATP通道是否具有聯(lián)系進(jìn)行了初步探討，但具體保護(hù)機(jī)制仍需更深層次的實(shí)驗(yàn)研究去探索及驗(yàn)證。

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(本文編輯：曹志娟)

The correlation study between Mito-KATPTO and Zhishi-xiebai-guizhi decoction in protecting rabbits with MIRI,

XUYudong*,XUShuang,JiangXiaoxu,etal.

*2015-GradeMasterofHeilongjiangUniversityofTraditionalChineseMedicine,Heilongjiang,Harbin150040

Objective To investigate the correlation between MitoKATP and the mechanism of Zhishi-xiebai-guizhi decoction (ZSXBGZD) in protection of myocardial ischemia reperfusion injury (MIRI) rabbits. Methods 40 rabbits were randomly divided into 5 groups, including the non-ischemic reperfusion group (Sham group), ischemia-reperfusion group (MIRI group), ischemia and reperfusion with ZSXBGZD group (MIRI+ZSXBGZD group), ischemia and reperfusion with ZSXBGZD +5-HD group (5-HD group), ischemia and reperfusion ZSXBGZD+Gli group (Gli group), 8 rabbits in each group. MIRI model was established by Langendorff isolated heart perfusion system. Rabbits in Sham group received overall operation, continuous perfusion 200 min without ischemia. Rabbits other four groups, after 30 min stabilization the injury was induced by 80 min ischemia. ZSXBGZD group received 10 min perfusion of locke's liquid with ZSXBGZD extracting solution 10 min before ischemia, ischemia for 80 min and 120 min reperfusion of locke's liquid with ZSXBGZD extracting solution. The 5-HD and Gli was added in 5-HD and Gli group on the basis of ZSXGAD group operation. After perfusion, the lactic dehydrogenase (LDH), malonaldehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in cardiac muscle tissue were measure. The coronary flow rate was recorded at 10 min before ischemia, and 20 min, 40 min, 60 min, 80 min, 100 min, 120 min after reperfusion. The myocardial infarction area was measured by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC) method. Results The MDA, LDH and myocardial infarction area in MIRI group were obvious higher than Sham group, the SOD and coronary flow rate were obvious lower, with statistical differences (P<0.05). As compared with MIRI, the SOD and coronary flow rate in ZSXBGZD group were markedly increased, and the myocardial infarction area was decreased, the MAD and LDH were decreased, with statistical differences (P<0.05). As compared with MIRI group, there were no statistical differences on the SOD, MDA, LDH, coronary flow rate and myocardial infarction area in 5-HD and Gli group (P>0.05), but there were statistical differences with ZSXBGZD group (P<0.05). Conclusion ZSXBGZD can reduce injury of MIRI in rabbits, has protect effect of myocardium, which can be largely offset by 5-HD and can be completely blocked by Gli, showed that the protective effects of Zhishi-xiebai-guizhi decoction on MIRI rabbits were significantly associated with MitoKATP.

Zhishi-xiebai-guizhi decoction; KATP channels; Reperfusion injury; Animal experiment; Rabbits

10.3969/j.issn.1002-2619.2016.12.020

※ 項(xiàng)目來源：2015年黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)研究生創(chuàng)新科研項(xiàng)目(編號(hào)：2015-017)

茍玉東(1991—)，男,碩士研究生在讀。研究方向：針灸與臟腑關(guān)系的生理學(xué)研究；針?biāo)幏乐涡哪X血管疾病的實(shí)驗(yàn)研究。

R542.2;R285.5

A

1002-2619(2016)12-1836-06

2016-08-03)

△ 通訊作者：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，黑龍江 哈爾濱 150040

1 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)2014級(jí)碩士研究生，黑龍江 哈爾濱 150040