對蝦白斑綜合征病毒免疫防治研究進展

何培民，郭媛媛，賈曉會，施定基，2，莊旻敏，何 玲，賈 睿

（1.上海海洋大學水產(chǎn)與生命學院，上海 201306；2.中國科學院植物研究所，北京 100093）

對蝦白斑綜合征病毒免疫防治研究進展

何培民1，郭媛媛1，賈曉會1，施定基1，2，莊旻敏1，何 玲1，賈 睿1

（1.上海海洋大學水產(chǎn)與生命學院，上海 201306；2.中國科學院植物研究所，北京 100093）

對蝦白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus，WSSV）是一種引起養(yǎng)殖對蝦爆發(fā)性死亡的病毒，由于它宿主范圍廣、蔓延速度快以及致死率高，已經(jīng)成為對蝦養(yǎng)殖中的第一殺手，因此有效防治WSSV爆發(fā)在水產(chǎn)養(yǎng)殖中具有重要意義并極具挑戰(zhàn)性。本文主要介紹WSSV基因組以及結(jié)構(gòu)蛋白、對蝦WSSV免疫機制、對蝦WSSV疫苗研究進展，以及我國對蝦養(yǎng)殖中WSSV防治措施，認為對蝦WSSV疫苗將是今后對蝦大規(guī)模養(yǎng)殖中病害防治的一種重要手段。

白斑綜合征病毒（WSSV）；對蝦；疫苗；防治進展

對蝦白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus，WSSU）是迄今對蝦養(yǎng)殖業(yè)危害最大的一種病毒［1］。該病毒分布范圍廣泛，自1992年WSSV首次在中國臺北對蝦養(yǎng)殖場中發(fā)現(xiàn)后，隨后，很快分別在中國大陸、韓國、日本、泰國、印度等幾乎整個亞洲地區(qū)的國家均發(fā)現(xiàn)了此病毒［2－4］，如今已傳播到中東、歐洲、美國、中美洲和南美洲［5］。WSSV傳染能力極強，致死率高，不僅感染對蝦，還可能感染克氏原鰲蝦（Procambarus clarkii）、中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）等淡水和海水甲殼類動物［6－8］。對蝦感染W(wǎng)SSV后，7～10 d死亡率可達100%。國際獸醫(yī)局（OIE）、聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）以及亞太地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展網(wǎng)絡中心（NACA）在20世紀90年代已將白斑綜合征列為需要報告的嚴重水生動物病毒性疫病之一。20多年來，國內(nèi)外學者對WSSV的傳播途徑進行了大量研究，發(fā)現(xiàn)白斑綜合征病毒主要有3種傳播途徑：水平傳播［9］（相同個體之間通過直接接觸傳播）、垂直傳播［10］（通過感染的親代傳給子代）和種間傳播［11］。有研究表明口和消化道是宿主感染W(wǎng)SSV的主要途徑［8］。目前，對蝦生產(chǎn)上均采用養(yǎng)殖抗病力強的種類及切斷WSSV傳播途徑等方法防止WSSV病害傳播。同時，多年來國內(nèi)外許多學者試圖應用免疫技術(shù)對對蝦白斑綜合征病毒進行防治。本文就WSSV免疫防治研究新進展進行綜述，以期為今后有效防控WSSV提供參考。

1 對蝦白斑綜合征病毒基因組

WSSV是新設立的線極病毒科（Nimaviridae）白斑病毒屬（Whispovirus）的唯一種，為具有囊膜的環(huán)狀dsDNA病毒，大約300 kb［12］。目前Genbank中已經(jīng)公布了3株WSSV分離株的基因組序列，分別是中國大陸株（WSSV-CN，AF-332093［13］）、中國臺灣株（WSSV-TW，AF440570［14］和泰國株（WSSV-TH，AF-369029［15］）。其中，中國大陸株基因組為305107 bp［13］，含531個ORF，已確定181個ORF可編碼功能蛋白，其基因組3%與其它物種ORF同源，97%為WSSV特征ORF（圖1）；中國臺灣株基因組最大，全長307 287 bp［14］；泰國株基因組為292 967 bp［15］，具有184個ORF，其中6%與其它物種ORF同源，94%為WSSV特征ORF。泰國株與中國大陸株99%序列同源，僅泰國株［15］缺失了1個12 kb片段；中國臺灣株比泰國株全序列［15］多出14 kb，與中國大陸株基因組序列一樣，比泰國株多出的序列均位于同一位置（即31 135 bp處），其余序列基本一致。國際分類委員會（ICTV）已把中國大陸株列為該屬代表株系［11］。

2 對蝦白斑綜合征病毒結(jié)構(gòu)蛋白

隨著3株WSSV分離株的全基因組序列測定完成以及蛋白組學迅猛發(fā)展，WSSV結(jié)構(gòu)蛋白研究逐漸深入。WSSV結(jié)構(gòu)蛋白在病毒吸附、入侵宿主、包裝、釋放等過程中發(fā)揮著重要作用［16］。病毒的結(jié)構(gòu)蛋白主要包括囊膜蛋白和核衣殼［17］，已經(jīng)確定的WSSV結(jié)構(gòu)蛋白至少有62種［18］，包括VP26、VP28、VP24、VP19、VP15、VP51、VP60、VP136和VP37等［19］，其中VP28和VP19為囊膜蛋白，VP15、VP24、VP136和VP60等為核衣殼蛋白，VP26蛋白則定位于被膜結(jié)構(gòu)中［20］，且VP28和VP26占據(jù)整個囊膜的60%［21］。

VP28由wsv421編碼，為對蝦白斑綜合征病毒囊膜上含量最高的一種結(jié)構(gòu)蛋白。研究表明VP28在WSSV感染對蝦的開始階段起著關(guān)鍵作用［12］。VP28作為病毒結(jié)合蛋白與對蝦細胞結(jié)合，幫助病毒進入對蝦細胞內(nèi)［22］。有研究認為VP28可能具有識別對蝦表面受體一些蛋白糖基化位點的作用［23］。

圖1 WSSV中國大陸株基因組［13］Fig.1 Isolated genome of WSSV［13］by China

VP26由wsv311編碼，是含量很高的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一。2001年，VAN HULTEN等［24］最早用western-blot實驗表明VP26為核衣殼蛋白，但2年后，ZHANG等［25］通過免疫膠體金電鏡觀察發(fā)現(xiàn)VP26定位在WSSV囊膜蛋白上，與VAN HULTEN等結(jié)論完全相反。TSAI等［26］通過免疫電鏡觀察膠體金顆粒，得出VP26不同于囊膜蛋白和核衣殼蛋白，是位于一個介于病毒囊膜蛋白和核衣殼之間的核膜結(jié)構(gòu)層，且XIE等［27］發(fā)現(xiàn)VP26分別能與宿主actin和VP28發(fā)生相互作用，因此認為該蛋白為囊膜與核衣殼之間的連接蛋白。

VP24由wsv002編碼，為主要結(jié)構(gòu)蛋白且含量很高［28］，在病毒包膜復合物形成過程中起著重要的作用［29］。VP26、VP24與VP28屬同一基因家族，且為同源蛋白，它們可能是基因復制后根據(jù)不同的功能分化為不同的蛋白［25］。

3 對蝦白斑綜合征病毒免疫應答爭議

對蝦作為無脊椎動物，其抵抗外界病原體的免疫機制存在爭議。長期以來，學者們認為無脊椎動物不存在后天適應形成的專一性免疫能力，它們的免疫機制主要是依靠非特異性免疫。1985年，RATCLIFFE等［30］報道以細胞為基礎而建立起來的無脊椎動物天然免疫系統(tǒng)非常完善。2002年，HOFFMANN等［31］也指出無脊椎動物缺乏真正的適應性免疫性，僅依靠先天的免疫。一般認為，包括對蝦在內(nèi)的甲殼類動物在應對病原體入侵的先天免疫系統(tǒng)包括體液免疫和細胞免疫［32－33］。細胞免疫包括吞噬作用、結(jié)節(jié)形成以及整合素介導的信號轉(zhuǎn)導［29］，而體液免疫包括proPo級聯(lián)反應、凝血反應、抗菌肽（AMPs）、凝集素、唐氏綜合癥細胞粘附分子（Dscam）、Toll和IMD通路［28］，這些分子直接或間接觸發(fā)一系列防御反應。

目前國內(nèi)外學者已研制出對蝦各種疫苗（抗WSSV核酸藥物等［34］）和植物提取物有效成份等［35］，對于抵抗病毒具有一定療效。這些研究表明特異性免疫在對蝦防御機制中具有重要作用。VENEGAS等［36］研究表明日本囊對蝦（Marsupenaeus japonicus）在自然或?qū)嶒灨腥網(wǎng)SSV后存在類免疫反應。2013年LIN等［37］認為蝦可能有特定的記憶性，讓蝦初次暴露在高溫殺死的溶藻弧菌或福爾馬林耐受的溶藻弧菌后，再讓蝦暴露在活的溶藻弧菌中，結(jié)果顯示免疫參數(shù)均有較大提高。此外，POPE等［38］將耐受福爾馬林的哈氏弧菌注射進對蝦血腔，第7天收集對蝦血細胞，并與哈氏弧菌、革蘭氏陽性菌枯草芽孢桿菌共同培養(yǎng)，結(jié)果顯示血細胞吞噬哈氏弧菌活性明顯增強，表明對蝦體內(nèi)存在特定的免疫記憶能力，可以抵抗外界病原體入侵。本實驗室研究也表明，將轉(zhuǎn)入VP28基因并獲得表達的藍藻喂養(yǎng)對蝦幼苗，可以明顯提高幼苗存活率［39］。

同時，抗體作為特異性免疫的重要成分雖未在對蝦體內(nèi)鑒定到，但抗體研究已取得一定進展。SHIH等［40］獲得了能夠識別WSSV的VP28和VP19的兩種單克隆抗體（MAbs）6E1和3E8，MAb 6E1和病毒濾液的混合物接種于從凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）的淋巴器官（Oka器官）中得到的主要外植體單層培養(yǎng)物上。細胞病的阻斷顯示MAb很可能中和了病毒對單層細胞的感染。將中和病毒液注射進凡納濱對蝦蝦苗，攻毒后陽性對照組在第34天100%死亡，陰性對照組沒有死亡，而死亡率6E1是6.7%、3E8是13.3%。綜合這些體內(nèi)和體外實驗表明，MAbs能識別WSSV包膜蛋白，它們對這種病毒具有中和作用。

4 對蝦白斑綜合征病毒免疫學防治

4.1 利用免疫因子增強對蝦先天免疫能力

蝦的先天免疫系統(tǒng)通過模式識別受體（PRRs）識別病原相關(guān)分子模式（PAMPs）而激活，此識別過程可直接或間接地觸發(fā)一系列的防御反應以減少病原體的入侵［41－42］，包括免疫識別、信號轉(zhuǎn)導和效應物的產(chǎn)生［43］。相建海等［33］報道的TLRs（Toll-like receptors）是一類在先天免疫系統(tǒng)中起重要作用的蛋白，Toll信號途徑通過調(diào)節(jié)很多套基因在應對革蘭氏陽性菌和真菌中起關(guān)鍵作用。果蠅中的Toll通路典型成分包括Sp?tzle、Toll、Pelle、Tube、MyD88、Cactus、Dorsal、Dorsal-related immunity factor（DIF）［44］。對蝦中也已發(fā)現(xiàn)了Dorsal同系物，包括FcDorsal和LvDorsal，且已克隆到中國明對蝦（Penaeus chinensis）的Cactus和MyD88的cDNA序列［45］，可見對蝦中存在Toll通路。

衣啟麟等［46］以海洋無脊椎動物為研究對象，分離鑒定參與免疫識別、免疫信號轉(zhuǎn)導和病原清除的關(guān)鍵分子，篩選能激活免疫系統(tǒng)、增強機體免疫防御能力的活性物質(zhì)，最終明確了水生無脊椎動物免疫系統(tǒng)的基本分子組成，獲得了25個具有顯著抗菌活性的重組免疫因子，發(fā)現(xiàn)了CpGODN可激活蝦蟹類的免疫系統(tǒng)，顯著提高抵御白斑綜合征病毒感染的能力。張立新等［47］對山東青島及其附近海域常見的21種海洋無脊椎動物的粗提物進行了免疫調(diào)節(jié)活性測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)海洋無脊椎動物對T、B淋巴細胞具有ConA或LPS協(xié)同刺激作用或者抑制作用，這表明海洋無脊椎動物粗提物具有一定的免疫調(diào)節(jié)功能。隨著深入研究，未來更多的無脊椎動物免疫因子將逐步被發(fā)現(xiàn)。

4.2 利用植物、菌類等有效成分提高對蝦免疫能力

BINDHU等［48］利用開花薔薇（Agathi grandifora）乙酸乙酯和甲醇提取物投喂已注射過WSSV的印度明對蝦（Penaeus indicus），其死亡率是對照組的10%～20%，推斷可能是開花薔薇提取物阻斷了WSSV的轉(zhuǎn)錄和翻譯，進而抑制WSSV增殖，減少了對蝦WSSV負載量。GRASIAN等［49］通過RT-PCR驗證了隨著投喂的馬尾藻（Sargassum wightii）密度增加，凡納濱對蝦體內(nèi)WSSV拷貝數(shù)不斷減少，0.3%馬尾藻投喂組WSSV拷貝數(shù)是11，Ct值36.26，而陽性對照組WSSV拷貝數(shù)高達1.42×106個，可見馬尾藻對WSSV具有較強的抗性。付永鋒等［50］從一種中溫性食用菌—姬松茸（Agaricus blazei）中獲得5種酒精沉淀物（含有大量姬松茸多糖、糖蛋白復合物、甾醇類等物質(zhì)），通過日本囊對蝦淋巴細胞的細胞毒性測試，發(fā)現(xiàn)姬松茸水溶液經(jīng)17%、29%和38%酒精沉淀得到的樣品可以完全抑制WSSV感染。劉恒等［51］報道從海藻獲得的免疫多糖作為餌料添加劑投喂凡納濱對蝦幼蝦，10 d后可提高對蝦的酚氧化酶活力、超氧化酶活力及溶菌和抗菌活力。江曉路等［52］用海藻多糖（PV911）和北蟲草多糖（cP）作為餌料添加劑飼喂中國明對蝦20 d后，可以顯著提高中國明對蝦血細胞的吞噬能力、血清SOD的活力和酚氧化酶的活力，溶菌酶的活性也有一定的提高，增強了對蝦的免疫能力?？梢姡Ｔ宥嗵蔷哂泻芎玫膽们熬?。

4.3 利用疫苗來提高對蝦的特異性免疫活性

VP28作為疫苗已多次證明可產(chǎn)生對WSSV的免疫力，但至今尚未鑒定到它的抗體，所以VP28疫苗曾被稱為“免疫促進劑”［53］或“疫苗的候選者”［54］。更多的研究發(fā)現(xiàn)，通過DNA疫苗、蛋白質(zhì)亞單位疫苗和dsRNA疫苗均可以誘發(fā)蝦體產(chǎn)生免疫應答的保護效應，提高對蝦抵抗WSSV的能力進而提高對蝦成活率。

4.3.1 DNA疫苗

DNA疫苗是防治WSSV過程中很有效的一種疫苗，它也就是裸露的DNA分子，稱為質(zhì)粒，在宿主體內(nèi)作為抗原被翻譯成免疫蛋白并表達于細胞表面，當病原體與宿主細胞表面分子相互作用時，將引發(fā)有效的免疫保護反應。

ROUT等［55］利用編碼WSSV結(jié)構(gòu)蛋白VP15、VP28、VP35和VP281的基因構(gòu)建重組DNA質(zhì)粒，然后分別用這些重組質(zhì)粒去免疫凡納濱對蝦，再用WSSV攻毒，實驗結(jié)果表明VP28或VP281的DNA重組質(zhì)粒在第35天時仍有很強的保護效果，保護率分別是50%和46.7%，而表達WSSV核酸蛋白VP15和VP35的DNA不會引起保護性反應。RAJESH KUMAR等［56］用DNA疫苗免疫斑節(jié)對蝦（Penaeusmonodon），試驗組對蝦存活率是56.6%～90.0%，同時對蝦體內(nèi)的酚氧化酶原和SOD水平增加，這表明這些免疫因子可能參與抵抗WSSV并提高對蝦免疫力。NING等［57］首次用減毒的鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）為活的載體口服投喂克氏原螯蝦DNA疫苗，從而誘導克氏原螯蝦對WSSV的免疫保護效應，攻毒組免疫保護率有56.7%～83.3%?？梢奃NA疫苗具有很好的抵抗WSSV免疫保護效果。

4.3.2 蛋白亞單位疫苗

應用原核表達系統(tǒng)將WSSV結(jié)構(gòu)蛋白制備蛋白亞單位疫苗已多次報道，且獲得很好的保護效果。施定基等［39］和JIA等［1］將VP28基因連接質(zhì)粒構(gòu)建穿梭表達載體，通過三親接合轉(zhuǎn)移法分別轉(zhuǎn)化念珠藻（Nostoc）、聚球藻7002（Synechococcussp.PCC 7002）和魚腥藻7120（Anabaenasp.PCC7120），然后用轉(zhuǎn)基因藻投喂蝦苗再攻毒，念珠藻、聚球藻7002和魚腥藻7120試驗組成活率分別高達61.5%、76.9%和68%，而陽性對照組100%死亡。除此以外，國際上還有多種VP28表達系統(tǒng)。2004年，WITTEVELDT等［58］首次利用原核表達載體在大腸桿菌中分別對VP28、VP19蛋白進行重組表達，分別投喂包裹了過度表達的WSSV囊膜蛋白VP19和VP28失活細菌的餌料，在免疫后的第3天、第7天分別進行攻毒實驗，試驗組與對照組相比，VP28蛋白投喂組有較高的保護效果，相對存活率分別是64%和77%，而VP19未見保護效果，可見通過這種方式得到的VP28蛋白高效，但蛋白需要純化且大腸桿菌會分泌內(nèi)毒素。2014年，VALDEZ等［59］將表達有VP26融合蛋白的枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）包裹在餌料中，然后投喂凡納濱對蝦，能100%保護對蝦免受WSSV感染，且該疫苗無致病性并能分泌蛋白，是大腸桿菌表達系統(tǒng)的一種新改進。

應用3種真核表達系統(tǒng)也獲得了很好效果。魏克強等［60］將含有WSSV囊膜蛋白VP28基因的重組桿狀病毒HyNPV-VP28感染家蠶（Bombyx mori）蛹，制成藥餌持續(xù)口服免疫克氏原鰲蝦35 d后，克氏厚鰲蝦血細胞的酚氧化酶活性、超氧化物歧化酶活性以及抗菌和溶菌活性等均顯著提高。免疫35 d后攻毒，試驗組累積存活率高達66.67%，對照組僅6.67%，說明口服免疫家蠶蛹具有增強抵抗WSSV感染作用。雷杰等［61］應用畢赤酵母（Pichia pastoris）表達VP28、VP19蛋白投喂克氏原鰲蝦25 d，接著第3天進行攻毒實驗，VP28蛋白組累積死亡率為26.4%，VP19蛋白組為81.9%，陽性對照組為86.6%，陰性對照組無死亡。JHA等［62］將含有重組蛋白VP28和VP19顆粒餌料投喂對蝦25 d，分別在停餌后第3天和第21天進行攻毒，陽性對照組累積死亡率為90%，試驗組分別為39.6%和39.83%，陰性對照組無死亡。FENG等［63］用含VP28基因的鹽生杜氏藻（Dunaliella salina）制備一種新型口服亞單位疫苗，對蝦在接種轉(zhuǎn)基因鹽生杜氏藻后具有較高的存活率（59%死亡率），陽性對照組100%死亡。桿狀病毒也用于表達VP28基因，SYED MUSTHAQ等［64］將VP28插入桿狀病毒載體，ie1啟動子調(diào)控其在桿狀病毒表面表達VP28蛋白，再將得到的Bac-VP28免疫凡納濱對蝦，攻毒后投喂組和浸泡組累積存活率分別是81.7%和76.7%，而陰性對照組100%死亡。

4.3.3 dsRNA疫苗

2004年，ROBALINO等［65］首次報道了給凡納濱對蝦肌內(nèi)注射從脊椎動物體內(nèi)得到的不同dsRNA，均表現(xiàn)出對白斑綜合征病毒抗性。這種抗病毒狀態(tài)的誘發(fā)是獨立于dsRNA序列的，有別于序列特異的dsRNA介導基因干擾現(xiàn)象。該研究表明無脊椎動物的免疫系統(tǒng)就像脊椎動物一樣，可以將dsRNA當作病毒相關(guān)分子模式，引起一個先天的抗病毒反應的激活。

2007年，KIM等［4］在中國明對蝦幼體中注射與WSSV蛋白激酶基因、VP28和VP281基因相關(guān)的長鏈dsRNAs，注射VP28試驗組100%存活，VP281試驗組死亡率為20%，陰性對照組死亡率為46.7%，說明在肌內(nèi)注射長鏈dsRNAs能夠防治WSSV。2008年，SARATHI等［66］在斑節(jié)對蝦肌內(nèi)注射VP28-dsRNA，然后攻毒，30 d時間內(nèi)沒有出現(xiàn)蝦死亡的現(xiàn)象，陽性對照組10 d內(nèi)全部死亡。2011年，MEJIA-RUIZ等［67］用VP28或VP26的dsRNA通過注射方式免疫凡納濱對蝦10 d，單次攻毒試驗組累積死亡率為13%。再次攻毒后累積死亡率為33%，可見單次攻毒、連續(xù)攻毒均有較好的抗病毒保護效應。2015年，JARIYAPONG等［68］以MrNv-VLPs（Macrobrachium rosenbergiinodavirus-like particles）為載體構(gòu)建了VP28 dsRNA，免疫蝦后，陽性對照組100%死亡，試驗組在攻毒后相對存活率為44.5%，表明MrNv-VLPs載體系統(tǒng)能保證VP28-dsRNA介導的免疫保護可以控制WSSV感染。

5 養(yǎng)殖過程中預防措施

白斑綜合征病毒嚴重危害了對蝦養(yǎng)殖業(yè)健康快速發(fā)展，在積極研制各種抗WSSV藥物的同時，養(yǎng)殖過程中仍需采取一些預防措施，這些措施在生產(chǎn)上發(fā)揮了很大作用，對我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有很大貢獻。

5.1 引進抗病力強的蝦種-凡納濱對蝦

中國明對蝦，俗稱東方對蝦，因其對白斑綜合征病毒抗性差，因而1993～1994年使我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)遭受巨大損失。凡納濱對蝦，俗稱南美白對蝦，對WSSV具有一定抗性，原產(chǎn)自西太平洋沿岸，是美洲重要對蝦養(yǎng)殖品種，也是世界養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的三大蝦種之一。1988年凡納濱對蝦由中科院海洋研究所張偉權(quán)研究員從夏威夷海洋研究所初次引進我國，1991年經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準引進了第二批凡納濱對蝦（P7－10）蝦苗4 000 ind，運輸成活率達85%［72］。1994年通過人工育苗獲得小批量蝦苗，到2000年已實現(xiàn)工廠化育苗生產(chǎn)，養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴大［73］。據(jù)聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織（FAO）統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，世界凡納濱對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)量由1998年的19×104t迅速增加到2004年的133×104t，再發(fā)展到2013年產(chǎn)量超過330×104t［74］。目前凡納濱對蝦已成為我國養(yǎng)殖對蝦的主要品種［75］。

表1 防治WSSV疫苗Tab.1 Different vaccines againstWSSV

5.2 放養(yǎng)無病毒優(yōu)質(zhì)種苗

對蝦養(yǎng)殖最關(guān)鍵是蝦苗的選擇，加快對蝦無毒良種幼苗的培育開發(fā)尤為重要。1999年我國已引進美國SPF凡納濱對蝦種蝦和繁育技術(shù)，培育出了SPF凡納濱對蝦蝦苗［75］，SPF親蝦具有生長快、大小均勻、產(chǎn)卵量大等優(yōu)良特性，但其抗病力和適應性無明顯優(yōu)勢，因此親蝦病原檢出率也不低［76］。因此，我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)還應加強對蝦育苗場的監(jiān)督和管理。同時在選取蝦苗過程中，要求對蝦個體健康體壯、大小相對均勻、肌肉飽滿、活動能力強、刺激反應靈敏、體節(jié)細長、體色透明、體表干凈［73］，并確保優(yōu)質(zhì)蝦苗在0.8～1.0 cm之間［77］，養(yǎng)殖戶應在放苗之前確認試水安全，即可放苗。

5.3 改善對蝦養(yǎng)殖環(huán)境

對蝦生長與養(yǎng)殖環(huán)境密切相關(guān)。在放苗前需要使用免疫制劑［77－78］對養(yǎng)殖塘和養(yǎng)殖用水作消毒處理，養(yǎng)殖過程中需要大量增氧，合理且適量投喂具有生產(chǎn)許可證的餌料，適當增加日常換水次數(shù)［79］，合理協(xié)調(diào)養(yǎng)殖面積、養(yǎng)殖密度，確保對蝦養(yǎng)殖水質(zhì)優(yōu)良，可以達到較高經(jīng)濟效益［61］。

6 展望

6.1 對蝦免疫機制研究

對蝦等海洋甲殼動物免疫學是一門重要學科，是最終戰(zhàn)勝對蝦病害的重要基礎［80］。在過去的十年中，對蝦先天免疫的研究突飛猛進［46］，同時越來越多研究表明無脊椎動物存在適應性免疫現(xiàn)象。盡管如此，目前蝦類免疫學的研究還不完善，需要更深入的研究。已多次證明VP28作為疫苗可產(chǎn)生WSSV免疫力，雖至今尚未鑒定到它的抗體，但已有一定的研究進展，為以后深入研究對蝦免疫機制奠定了基礎。

另外，HE等［81］報道了病毒微小 RNA（miRNA）能夠避免宿主免疫系統(tǒng)的攻擊和保持病毒處于潛伏期狀態(tài)。病毒在侵染宿主過程中會編碼病毒自身的miRNA，而WSSV編碼miRNA（WSSV-miR-66和WSSV-miR-68）的靶向性病毒基因能抑制病毒感染。HUANG等［82］指出一些特定的DNA病毒產(chǎn)生微小RNAs能夠調(diào)控宿主和病毒基因的表達，病毒的miRNA（WSSV-miRN24）能夠靶向蝦的半胱天冬酶8基因，同時WSSV-miR-N24和半胱天冬酶8基因相互作用可進一步抑制蝦體內(nèi)的血細胞的凋亡。

6.2 疫苗的應用與推廣

免疫防治是水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治的最好途徑。目前疫苗使用有注射法、浸泡法和口服法等。注射法是導入疫苗簡便有效的方法，但生產(chǎn)上不可能對每只對蝦進行肌肉注射［53］。浸泡法效果較好，但所需要的疫苗含量高，成本較高導致應用受限［80］?？诜ㄐЧ^好，但多為轉(zhuǎn)基因細菌制備，需純化后才能使用，所以成本較高［71］。JIA等［1］獲得的VP28轉(zhuǎn)基因藍藻，可作為蝦苗的餌料投喂，藥食同源，具有較高的免疫保護效果，且不需要純化成本低，這種疫苗有望能應用到規(guī)?；a(chǎn)上。

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Research advance of immunology prevention of shrimp white spot syndrome virus

HE Pei-ming1，GUO Yuan-yuan1，JIA Xiao-hui1，SHIDing-ji1，2，ZHUANG Min-min1，HE Ling1，JIA Rui1
（1.College of Fisheries and Life Science，ShanghaiOcean University，Shanghai201306，China；（2.Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Beijing10093，China）

White spot syndrome virus（WSSV）has emerged as one of the most virulent，widespread and lethal virus known tomost shrimp farming areas in the world.WSSV is highly lethal tomost of commercially cultivated penaeid shrimp species.WSD caused byWSSV emerged in the east Asia in 1992－1993 and itwas quickly dispersed across the Asian continent to the Southeast Asia，Thailand，southeastern Europe，India，the Middle East and USA where it caused a major pandemic，and continued to cause large economic losses to shrimp aquaculture industry.An acute outbreak of WSD（white spot disease）can cause a cumulative mortality up to 100%within 3-10 days in cultured shrimp.WSSV has a broad host range among decapod crustaceans and is reported to infect aquatic animals that include marine and brackish water crustaceans，crabs，penaeids，freshwater prawns and crayfish.Thus effective prevention of the outbreak ofWSSV has the vital significance in aquaculture and it’s full of challenge.So far，domestic and foreign researchers have gradually deepened understanding of the WSSV，focused on the development of some drugs and made some breakthrough.Several achievements have been attained in preventing and controlling the WSSV.In the paper，we illuminated the genome and structural protein of WSSV in the first place.And we introduced the immunemechanism of shrimp.There is a commonly accepted opinion that shrimp only has innate immune response，but the dispute between specific immunity and innate immune response exists.The paper also discussed the relevantmethods of prevention and control of the shrimp WSSV.Finally，we suggested that vaccination trials should attract more attention than others in the shrimp industry after we analyzed the characteristics of several vaccines.In addition，oral vaccination of shrimp againstWSSV has great application potential for field use in large-scale production.

WSSV；shrimp；vaccine；progress in prevention and controlling

S 941

A

1004－2490（2016）04－0437－12

2015－09－10

國家海洋863計劃項目（2014AA093506）；上海市科委項目（12391901700）；上海海洋大學海洋學科高原項目

何培民，男，教授，博士生導師。Tel：15692165272，E-mail：pmhe＠shou.edu.cn

賈 睿，副教授。E-mail：rjia＠shou.edu.cn