改良穿刺活檢技術(shù)用于降低VX2肌肉腫瘤穿刺并發(fā)癥的研究

曹海營(yíng)，金 宇，趙景新，王 瑜，魏 然，李春輝

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·論著·

改良穿刺活檢技術(shù)用于降低VX2肌肉腫瘤穿刺并發(fā)癥的研究

曹海營(yíng)，金 宇，趙景新，王 瑜，魏 然，李春輝

【摘要】目的探討改良穿刺活檢技術(shù)改善兔VX2肌肉腫瘤穿刺孔出血及其周圍腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。方法將VX2腫瘤組織包埋種植于22只家兔雙側(cè)股外側(cè)肌內(nèi)制作成VX2肌肉腫瘤模型。其中20只左腿腫瘤設(shè)為左側(cè)組，采用改良穿刺活檢技術(shù)，穿刺后通過(guò)套管植入密封栓封堵穿刺孔；右腿腫瘤設(shè)為右側(cè)組，采用傳統(tǒng)穿刺活檢技術(shù)，對(duì)穿刺孔不封堵。穿刺1 h后對(duì)左側(cè)組及右側(cè)組穿刺孔及周圍行彩色超聲檢查，評(píng)定兩組家兔穿刺孔出血情況；穿刺7 d后，處死20只家兔，取其腫瘤外穿刺針道軟組織行病理學(xué)檢查。結(jié)果穿刺1 h后，左側(cè)組腫瘤穿刺孔出血率(40%，8/20)低于右側(cè)組(85%，17/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.64，P<0.005)。左側(cè)組穿刺孔血腫體積為0(32)mm3,小于右側(cè)組的300(162)mm3,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=161，P<0.05)。穿刺7 d后，左側(cè)組穿刺針道腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移率(20%，4/20)低于右側(cè)組(70%，14/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.10，P<0.05)。結(jié)論改良穿刺活檢技術(shù)可降低家兔穿刺孔出血發(fā)生率，使穿刺孔周圍血腫體積縮小，降低周圍軟組織腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

目前，腫瘤特別是肢體惡性軟組織腫瘤發(fā)病率逐年升高，影像學(xué)技術(shù)為腫瘤的診斷提供大部分信息，但組織活檢仍是腫瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)?；顧z方式多樣，穿刺活檢應(yīng)用較為廣泛，其具有創(chuàng)傷小、出血少等優(yōu)點(diǎn)。雖然穿刺活檢方式及器械不斷進(jìn)步，但仍存在發(fā)生穿刺孔出血、腫瘤細(xì)胞經(jīng)針道轉(zhuǎn)移等并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，目前對(duì)改善軟組織腫瘤穿刺孔出血及針道腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的研究較少。本研究采用自行設(shè)計(jì)的改良穿刺活檢器械對(duì)20只家兔VX2肌肉腫瘤進(jìn)行穿刺，應(yīng)用封閉栓對(duì)穿刺孔進(jìn)行封堵，評(píng)定穿刺孔出血及針道腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移情況，為改良穿刺活檢技術(shù)的推廣應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.2器材及儀器超聲診斷掃描儀(GE Medical Systems-LOGIQ9)，光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS-BX53)，自行設(shè)計(jì)制作的改良穿刺活檢器械及密封栓(專利號(hào)：201310050606.1)(見圖1，本文彩圖詳見本刊官網(wǎng)www.chinagp.net)。VX2肌肉腫瘤株由廣州吉妮歐生物試劑公司提供。

注：a為改良穿刺器械示意圖，b為密封栓

圖1改良穿刺器械及密封栓

Figure 1Improved puncture instrument and bolt closure

1.3動(dòng)物準(zhǔn)備

1.3.1家兔VX2肌肉腫瘤模型制備將凍存的VX2腫瘤組織在-4 ℃條件下復(fù)蘇，無(wú)菌條件下剪成1 mm3大小的碎組織塊，并置入0.9%氯化鈉溶液中。耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉(1 ml/kg)麻醉，后肢去毛，俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)上。常規(guī)手術(shù)區(qū)消毒、放置無(wú)菌洞巾后，分別于兔雙側(cè)大腿股外側(cè)肌處做一1 cm長(zhǎng)切口，依次切開皮下組織、筋膜，暴露股外側(cè)肌，用眼科鑷在肌肉層穿一小洞，采用切口腫塊包埋種植法，將一腫塊植于其中。依次縫合肌肉、筋膜、皮下組織和皮膚，該家兔VX2肌肉腫瘤模型即制作完畢。

1.3.2實(shí)驗(yàn)對(duì)象選取每7 d對(duì)家兔雙側(cè)后肢行彩色超聲檢查明確腫瘤生長(zhǎng)情況。3周后家兔雙側(cè)大腿切口愈合良好，局部均可見包塊，質(zhì)韌，超聲檢查示腫物大小30 mm×30 mm×40 mm，邊界較清(見圖2)。于植入3、4周后各處死1只家兔，取雙側(cè)腫瘤周圍軟組織行病理HE染色檢查，均未見瘤細(xì)胞。

注：a為植入3周后，VX2肌肉腫瘤大體像，切面觀呈淡紅色魚肉狀，質(zhì)脆；b示超聲下腫瘤影像，邊界較清，周圍血運(yùn)較豐富

圖2植入3周后VX2肌肉腫瘤大體像及超聲所見

Figure 2Gross anatomy and ultrasonography of VX2 tumor 3 weeks after implantation

1.4穿刺方法植入3周后，經(jīng)耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉(1 ml/kg)麻醉，分別將后肢腫物表面毛發(fā)剃除，俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)上。常規(guī)碘伏消毒，鋪無(wú)菌孔單。將20只家兔左下肢VX2肌肉腫瘤作為左側(cè)組，采用改良穿刺活檢技術(shù)進(jìn)行穿刺，當(dāng)穿刺針到達(dá)腫瘤內(nèi)時(shí)，拔出針芯，套管針保持位置不動(dòng)，插入取病理針，旋轉(zhuǎn)采取少量腫瘤組織，并將密封栓從針尾放進(jìn)套管，用針芯順套管將密封栓頂置肌肉腫瘤淺層穿刺孔內(nèi)進(jìn)行封堵，縫合(見圖3～4)。右下肢作為右側(cè)組，采用傳統(tǒng)穿刺活檢技術(shù)，對(duì)穿刺孔不封堵。

注:由內(nèi)到外依次為腫瘤組織、腫瘤包膜、腫瘤反應(yīng)區(qū)、正常軟組織；a示帶針芯的套管通過(guò)VX2肌肉腫瘤內(nèi)，b示拔出針芯，使VX2肌肉腫瘤組織與體外相通，c示通過(guò)套管插入取病理套管，取出腫瘤組織，d示通過(guò)套管放入封閉栓，e示拔出通道套管，封閉栓留在穿刺孔發(fā)揮封閉作用

圖3改良穿刺活檢技術(shù)穿刺VX2肌肉腫瘤過(guò)程

Figure 3Operational process of the improved biopsy technique on VX2 tumor

1.5術(shù)后評(píng)價(jià)穿刺1 h后，對(duì)家兔穿刺部位行彩色超聲檢查，觀察穿刺孔周圍出血情況。對(duì)穿刺孔周圍出血的家兔，由醫(yī)師超聲下測(cè)量穿刺孔血腫長(zhǎng)徑、厚徑，依據(jù)Carlsson公式V=0.5×a×b2(a、b分別為超聲下測(cè)得血腫長(zhǎng)徑、厚徑，V為血腫體積)計(jì)算血腫體積[1]。穿刺7 d后，處死家兔，取腫瘤外穿刺針道軟組織。浸泡于4%甲醛溶液中固定，石蠟包埋，切片并進(jìn)行HE染色，觀察鏡下病理結(jié)果。

有學(xué)者提出在二語(yǔ)習(xí)得中，影響語(yǔ)言遷移的社會(huì)因素有很多，主要包括學(xué)習(xí)者的文化傳統(tǒng)、思維模式以及非語(yǔ)言交際等。本文從探討影響語(yǔ)言遷移的社會(huì)因素出發(fā)，發(fā)現(xiàn)這些因素都會(huì)影響母語(yǔ)遷移的發(fā)生，這些因素可能對(duì)母語(yǔ)遷移產(chǎn)生正遷移，也可能對(duì)母語(yǔ)遷移產(chǎn)生負(fù)遷移。

圖4　一次性密封栓封堵VX2肌肉腫瘤穿刺孔

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以M(QR)表示，組間比較采用配對(duì)樣本W(wǎng)ilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料的分析采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1穿刺后出血情況穿刺1 h后，左側(cè)組家兔封閉栓均未見脫落，其中8只家兔穿刺孔出血；右側(cè)組17只家兔穿刺孔出血(見圖5)。左側(cè)組腫瘤穿刺孔出血率(40%，8/20)低于右側(cè)組(85%，17/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.64，P<0.005)。左側(cè)組穿刺孔血腫體積為0(32)mm3,小于右側(cè)組的300(162)mm3,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=161，P<0.05)。

注：a示左側(cè)組穿刺孔周圍無(wú)明顯出血；b示右側(cè)組穿刺孔周圍可見血腫形成

圖5穿刺1 h后穿刺部位超聲圖像

Figure 5Ultrasonoscopy of puncture area 1 hour after puncture

2.2周圍軟組織腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移情況穿刺7 d后，左側(cè)組可見密封栓依舊封堵于穿刺孔內(nèi)，4只家兔針道軟組織中發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞，而右側(cè)組14只家兔發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞(見圖6)。左側(cè)組穿刺孔針道腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移率(20%，4/20)低于右側(cè)組(70%，14/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.10，P<0.05)。植入3、4周時(shí)處死的未行腫瘤穿刺的家兔病理檢查示腫瘤周圍正常軟組織均未發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞侵犯(見圖7)。

注：a示左側(cè)組穿刺孔周圍軟組織未見瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移(×10)；b示右側(cè)組穿刺孔周圍軟組織見瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，可見周圍腫瘤外針道肌肉組織中含核大深染的瘤細(xì)胞(×10)；c示高倍鏡下瘤細(xì)胞核大深染，部分胞質(zhì)量少，核仁明顯，有較多核分裂象，細(xì)胞異型性大(×40)

圖6穿刺7 d后穿刺孔周圍軟組織病理圖片(HE染色)

Figure 6Pathological pictures of soft issues around the puncture 7 days after puncture

圖7　未行腫瘤穿刺的家兔病理檢查結(jié)果(HE染色，×10)

Figure 7Pathologic examination results of rabbits without tumor puncture

3討論

肢體軟組織腫瘤病變較為復(fù)雜，其組織學(xué)分型仍需組織學(xué)檢查確定，活體組織檢查作為決定病理類型及腫瘤診斷準(zhǔn)確性最高的方法，是診斷肌肉和骨骼病變的金標(biāo)準(zhǔn)[2]，也是制定手術(shù)方案的重要依據(jù)[3]。目前肢體軟組織腫瘤活檢方式分為閉合活檢、切開活檢及切除活檢，各種活檢方式各有利弊。切開活檢獲取組織較多，具有較高的整體診斷準(zhǔn)確率[4-5],但缺點(diǎn)是出血多、腫瘤細(xì)胞特別是惡性腫瘤細(xì)胞容易局部擴(kuò)散，且相關(guān)手術(shù)切口可能影響下次手術(shù)治療方案。閉合活檢多為針吸活檢和穿刺活檢，骨科常用穿刺活檢，其優(yōu)點(diǎn)是創(chuàng)傷小、出血少、操作方便以及穿刺孔對(duì)下次手術(shù)治療方案影響較小，但缺點(diǎn)是取材較少、準(zhǔn)確率較切開活檢低。穿刺活檢病理提取完畢后，拔出組織取樣套管，醫(yī)生通過(guò)按壓的方式使組織止血，由于穿刺對(duì)患者形成的創(chuàng)傷孔徑較小，人體組織會(huì)自然愈合。但由于人體腫瘤內(nèi)壓力與外界不同，腫瘤內(nèi)組織會(huì)滲透到腫瘤外形成血腫，若患者骨內(nèi)組織包含惡性腫瘤細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞會(huì)隨骨內(nèi)組織液體的外滲，造成惡性腫瘤轉(zhuǎn)移。據(jù)報(bào)道，穿刺活檢后可能發(fā)生穿刺孔出血、周圍血腫形成、腫瘤細(xì)胞經(jīng)針道轉(zhuǎn)移等并發(fā)癥[6-7]。本研究通過(guò)自行設(shè)計(jì)并已經(jīng)申報(bào)國(guó)家專利的穿刺活檢器械及密封栓，對(duì)質(zhì)地較韌的兔VX2肌肉腫瘤進(jìn)行穿刺活檢，該器械的套管進(jìn)入穿刺孔同時(shí)，對(duì)穿刺孔進(jìn)行了物理隔離[8]，病理組織提取完畢后，用密封栓對(duì)穿刺孔進(jìn)行封堵，整個(gè)操作過(guò)程保證了穿刺孔內(nèi)組織液不會(huì)外滲，從而降低穿刺孔出血及腫瘤細(xì)胞經(jīng)針道轉(zhuǎn)移的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

VX2肌肉腫瘤是一類質(zhì)韌的軟組織惡性乳頭狀瘤，可接種在兔肺臟、肝臟、肌肉、骨骼等處，具有較高的生物學(xué)特性[9-10]，而將VX2瘤株接種于肌肉內(nèi)建立腫瘤模型的研究很少，通常用作傳種瘤株[11]。蘇靜等[12]對(duì)兔VX2肌肉腫瘤模型制造發(fā)現(xiàn)，21～28 d時(shí)腫瘤體積迅速增大，質(zhì)地較韌，B超顯示為圓形或類圓形，邊界較清楚，彩色多普勒血流成像顯示腫瘤病灶周邊均可見大量的短條狀或分支狀血流信號(hào)包饒瘤灶；接種21 d取材，切面觀呈灰紅色魚肉狀，光鏡下可見腫瘤區(qū)與小片狀壞死區(qū)交錯(cuò)分布，界限清楚，腫瘤周圍軟組織無(wú)瘤細(xì)胞浸潤(rùn)，且腫瘤尚未出現(xiàn)臟器轉(zhuǎn)移。席占國(guó)等[13]認(rèn)為應(yīng)用組織塊包埋法建立的模型操作簡(jiǎn)單、成瘤率高、腫瘤生長(zhǎng)局限、形態(tài)較規(guī)則、轉(zhuǎn)移發(fā)生相對(duì)較晚。本研究采用腫瘤組織塊包埋法在兔大腿股外側(cè)肌內(nèi)移植建立VX2肌肉腫瘤模型均獲得成功，腫瘤生長(zhǎng)較局限、質(zhì)韌、形狀較規(guī)則，轉(zhuǎn)移發(fā)生較晚，接種21 d后VX2肌肉腫瘤模型可作為理想的穿刺研究對(duì)象。

本研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用改良穿刺法后，家兔穿刺孔出血發(fā)生率降低，穿刺孔周圍血腫體積縮小，周圍軟組織腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移發(fā)生率降低。該改良穿刺法及器械的優(yōu)點(diǎn)在于套管進(jìn)入穿刺孔時(shí)，不僅對(duì)穿刺孔進(jìn)行了物理隔離，且對(duì)穿刺孔進(jìn)行了封堵。密封栓由醫(yī)用高分子聚合物材料制成，可植入體內(nèi)，環(huán)狀翹片的直徑及成對(duì)凸起和成對(duì)倒鉤的間距均大于套管通孔內(nèi)徑，可有效固定并封堵穿刺孔，避免穿刺孔出血，同時(shí)也避免了穿刺孔的滲漏所造成惡性腫瘤轉(zhuǎn)移。前期研究證明，此改良穿刺方法明顯改善骨髓穿刺孔出血情況[8]。軟組織腫瘤多為質(zhì)軟或質(zhì)韌的腫物，密封栓穩(wěn)定性較差，不易卡在穿刺孔內(nèi)而存在脫落風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致封堵失敗。VX2肌肉腫瘤質(zhì)地較韌，而密封栓成對(duì)凸起和成對(duì)倒鉤的間距均大于套管通孔的內(nèi)徑，可有效固定并封堵穿刺孔，本研究穿刺7 d后，均未發(fā)現(xiàn)密封栓脫落。隨著對(duì)本改良穿刺活檢技術(shù)及器械的不斷改進(jìn)，在骨及軟組織腫瘤穿刺動(dòng)物模型中進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，為本項(xiàng)技術(shù)早日應(yīng)用臨床奠定良好的基礎(chǔ)。

作者貢獻(xiàn)：曹海營(yíng)進(jìn)行數(shù)據(jù)收集、文章撰寫并對(duì)文章負(fù)責(zé)；金宇負(fù)責(zé)文章修改、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)審查及實(shí)驗(yàn)全面統(tǒng)籌工作；趙景新負(fù)責(zé)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型制作；王瑜負(fù)責(zé)動(dòng)物病理組織取材；魏然進(jìn)行動(dòng)物腫瘤影像學(xué)評(píng)估；李春輝進(jìn)行動(dòng)物腫瘤病理組織的病理學(xué)評(píng)估。

本文無(wú)利益沖突。

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(本文編輯：吳立波)

【關(guān)鍵詞】穿刺術(shù)；肌肉瘤；手術(shù)后出血；腫瘤轉(zhuǎn)移

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Application of Improved Biopsy Technique in Reducing Complications Induced by VX2 Tumour PunctureCAOHai-ying,JINYu,ZHAOJing-xin，etal.ChengdeMedicalCollege,Chengde067000,China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of improved biopsy technique in reducing the risk of puncture hole hemorrhage and surrounding tumor cell metastasis induced by VX2 tumour puncture.MethodsThe VX2 tumor was implanted in thigh vastus lateralis of 22 rabbits to build VX2 tumor models.Twenty cases of adult rabbits with tumor on left leg were assigned into left group,and the puncture holes were implanted with bolt closure through casing after needle biopsy.The rabbits with tumor on right leg were assigned into right group,and were managed with traditional biopsy technique without closure of puncture holes.Ultrasonography was used to assess the bleeding of the puncture hole and adjacent area 1 hour after puncture;7 days after puncture,20 rabbits were killed,and the soft tissues outside tumor where the puncture needle was placed were obtained to conduct pathological examination.ResultsOne hour later，the left group was lower than the right group in bleeding incidence〔(40%，8/20)vs.(85%，17/20);χ2=8.64，P<0.005〕.The hematoma volume of the left group was lower than that of right group〔0(32)mm3vs.300(162)mm3;Z=161，P<0.05〕.Seven days after puncture,the left group was lower than the right group in tumor cell metastasis rate at puncture needle passage〔(20%，4/20)vs.(70%，14/20);χ2=10.10，P<0.05〕.ConclusionImproved needle biopsy technology could lessen the incidence of bleeding at puncture hole,reduce the hematoma volume around puncture hole and reduce the risk for tumor cell metastasis in the adjacent soft tissues.

【Key words】Punctures；Myosarcoma；Postoperative hemorrhage；Neoplasm metastasis

(收稿日期：2015-06-23；修回日期：2015-11-20)

【中圖分類號(hào)】R 446.8

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.05.015

通信作者:金宇，067000河北省承德市，承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院；E-mail：792027135@qq.com

基金項(xiàng)目：2014年河北省科技廳指令性項(xiàng)目(14277790D)
作者單位：067000河北省承德市，承德醫(yī)學(xué)院(曹海營(yíng)，魏然)；承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(金宇，趙景新，王瑜，李春輝)