LC/MS檢定前列舒樂膠囊中的淫羊藿苷的含量

汪秀月，卜其濤，張成中

(阜陽市食品藥品檢驗檢測中心，安徽 阜陽　236015)

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LC/MS檢定前列舒樂膠囊中的淫羊藿苷的含量

汪秀月，卜其濤，張成中

(阜陽市食品藥品檢驗檢測中心，安徽 阜陽236015)

摘要：目的建立前列舒膠囊中淫羊藿苷含量LC/MS測定方法。方法采用LC/MS測定前列舒樂膠囊中淫羊藿苷的含量，并比較其與HPLC法的優(yōu)劣。結(jié)果LC/MS測定淫羊藿苷0.05～0.50 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，與標(biāo)準(zhǔn)方法比較相對偏差小于2%，符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。結(jié)論LC/MS檢測前列舒樂膠囊中的淫羊藿苷方法簡便，快速，靈敏度高，可以進(jìn)行定量分析。

關(guān)鍵詞：淫羊藿苷；液質(zhì)聯(lián)用；含量測定

前列舒樂膠囊方由淫羊藿、黃芪、蒲黃、車前草、川牛膝等五味中藥組成，具有補腎益氣，化瘀通淋之功效，可用于腎脾雙虛，氣滯血瘀，前列腺增生，慢性前列腺炎等的治療。方以淫羊藿為君藥，淫羊藿中主要成分為淫羊藿苷，國家局藥品標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法測定淫羊藿苷的含量[1]，曾有文獻(xiàn)報道也以HPLC法檢測為主[2]，本文采用LC-MS測定其含量，并與HPLC檢測結(jié)果比較，本法靈敏度高、重現(xiàn)性好、簡便快速易行。

1儀器和材料

Agilent1290高效液相色譜儀串聯(lián)6460三重四級桿質(zhì)譜儀(美國Agilent公司)；色譜柱：ZORBAX SB-C18(600 Bar 2.1 mm×55 mm，1.8 μm)；島津LC-20AT型高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測器(日本島津株式會社)；Elma E100H型數(shù)控超聲波清洗器(德國Elma公司)； XP205電子分析天平(METTLER TOLEDO公司)。

淫羊藿苷(110737-200415)對照品，供含量測定用，購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈、甲酸為色譜純(國藥集團(tuán))；蒸餾水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)；其他試劑均為分析純。

2實驗方法

2.1LC/MS條件流動相：甲醇-0.1%甲酸溶液(50∶50)；流速：0.4 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量1 μL，分析時長4 min；電噴霧離子源(ESI)，正離子模式；霧化器壓力45 psi，干燥器溫度300℃，干燥器流速：8.0 L·min-1，鞘氣溫度350℃，鞘氣流速11 L·min-1；多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)：母離子677.2；子離子531.1、313.0(見表1、圖1)。

表1　質(zhì)譜條件

金絲桃苷，屬于黃酮醇苷類化合物，具有解痙、消炎、利尿、降壓、止咳、降低膽固醇，蛋白同化、局部和中樞鎮(zhèn)疼以及對心、腦血管的保護(hù)作用等多種生理活性，是一種重要的天然產(chǎn)物[8]。本實驗建立了HPLC法測定男寶膠囊中金絲桃苷含量，該方法穩(wěn)定、簡單、重復(fù)性好，且雜質(zhì)干擾小，是一種較為理想的含量測定方法，可作為男寶膠囊的質(zhì)量控制方法。但鑒于男寶膠囊成分復(fù)雜，是由31味藥組成，金絲桃苷是其君藥菟絲子中的有效成分之一。如何建立適合于男寶膠囊質(zhì)量控制的完善方法，尚需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

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圖1　淫羊藿苷MRM圖譜及總離子流圖

2.2對照品配制精密稱取淫羊藿苷對照品 10.24 mg加甲醇溶解稀釋成2.026 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

2.3樣品處理準(zhǔn)確稱取重量差異項下前列舒膠囊內(nèi)容物約0.3 g，精密加入70%乙醇25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的量，過濾，濾液備用，必要時稀釋至檢測限度范圍內(nèi)。

2.4高效液相色譜測定條件以乙腈-水(25∶75)為流動相，柱溫：35℃，進(jìn)樣量：10 μL,檢測波長：270 nm。

3結(jié)果

3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線將淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成為0.05、0.10、0.20、0.40、0.50 mg·L-1標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別將不同濃度的淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=100.076 302X-1 146.043 300(R2=0.999 7), 0.05～0.50 mg·L-1內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2精密度試驗精密吸取“3.1”項下濃度為0.1 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，峰面積的RSD為2.5%，表明精密度良好。

3.3加樣回收率試驗精密稱取同一批前列舒樂膠囊0.32 g,共6份，分別精密加入0.05 mg·L-1的對照品溶液各2 mL，按“2.3”項下方法制備樣品溶液，進(jìn)樣測定，每個樣品重復(fù)進(jìn)樣3次，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量，計算得平均回收率95.2%，RSD為1.7%。

3.4樣品含量取不同廠家的3批前列舒樂膠囊，按“2.3”項下方法制備樣品溶液，分別進(jìn)樣，多重反應(yīng)監(jiān)測測定，母離子677.2；子離子531.1定性、313.0定量，每批測定2個平行樣品，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算含量，與HPLC法測定結(jié)果比較，HPLC法采用國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)YBZ05102006所用標(biāo)準(zhǔn)(表2)。

表2　前列舒樂膠囊含量測定結(jié)果(n=3批×2)

4討論

前列舒樂膠囊能明顯抑制前列腺的增生,改善其病理形態(tài)[3]，具有較強的抗炎作用及一定的免疫調(diào)節(jié)作用[4]。淫羊藿是前列舒樂膠囊中的君藥，具有補腎壯陽、祛風(fēng)除濕、通淋之功效，其主要成分為淫羊藿苷，是本中成藥質(zhì)量控制的主要指標(biāo)成分之一。淫羊藿苷質(zhì)譜裂解母離子m/z 677.2[M+H]+，二級質(zhì)譜可以得到碎片離子531.1[M+H-rha]+、369.2[M+H-rha-glc]+，313.0[M+H-rha-glc-C4H8]+等，本文以531.1作為含量測定的定性離子，313.0作為定量離子，采用LC/MS測定淫羊藿苷的含量。

采用LC/MS法測定淫羊藿苷的含量可以得到與HPLC一致的結(jié)果，定性定量更精確，檢驗時間較短，實驗操作更快捷方便，所用試劑較少，因此，LC/MS法可以用于前列舒樂膠囊的含量測定。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局.YBZ05102006[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006：633.

[2]張培芳,史亞軍.HPLC法測定前列舒樂膠囊中淫羊藿苷的含量[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2008,31(4):21-22,40.

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收稿日期：(2015-06-23，修回日期：2015-10-17) (2015-09-11，修稿日期：2015-10-23)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.01.017