RP-HPLC法測定男寶膠囊中金絲桃苷的含量

劉文蘋，張振凌，吳小菲

(1.亳州市食品藥品檢驗所中藥室，安徽 亳州　236800；

2.河南中醫(yī)藥大學藥學院，河南 鄭州　450008；

3.亳州中藥科技學校藥學部 安徽 亳州　236800)

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RP-HPLC法測定男寶膠囊中金絲桃苷的含量

劉文蘋1，張振凌2，吳小菲3

(1.亳州市食品藥品檢驗所中藥室，安徽 亳州236800；

2.河南中醫(yī)藥大學藥學院，河南 鄭州450008；

3.亳州中藥科技學校藥學部 安徽 亳州236800)

摘要：目的建立用高效液相色譜法測定男寶膠囊中金絲桃苷含量的方法。方法采用C18反相色譜柱，流動相為乙腈-0.085%磷酸(17∶83)，檢測波長為360 nm，流速為1.0 mL·min-1，進樣量為10 μL。結(jié)果金絲桃苷在2.15～21.5 mg·L-1范圍內(nèi)線性良好，回歸方程Y=9 203X-2 501.5,r=0.999 2(n=6)。平均回收率為97.9%，RSD為1.0 %(n=7)。結(jié)論該法簡捷，準確，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性高，可用于男寶膠囊中測定金絲桃苷的含量測定。

關(guān)鍵詞：男寶膠囊；菟絲子；金絲桃苷；高效液相色譜法；含量測定

中藥男寶膠囊是由鹿茸、肉桂、淫羊藿、海馬、枸杞子、菟絲子、牡丹皮、狗腎、驢腎、人參、當歸等31味藥組成的中藥成方制劑，功效補腎壯陽，用于腎陽不足引起的陽痿滑泄、性欲淡漠、腎囊濕冷、腰腿酸痛、食欲不振、精神萎靡等癥。治療效果顯著，且副作用小，使用方便，深得消費者的認可，需求量較大。市場有62 家醫(yī)藥企業(yè)生產(chǎn)男寶膠囊。中藥男寶膠囊標準收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》第十九冊[1]中，標準中除性狀及膠囊劑的常規(guī)檢查外，僅有當歸的薄層色譜鑒別,沒有對君藥及貴重藥材做出定性和定量的鑒別和檢查，不能較好的控制質(zhì)量。 本研究參考相關(guān)文獻資料考察了不同處理方法及不同流動相，建立了高效液相色譜測定金絲桃苷含量的方法[2-4]。實驗結(jié)果表明本方法簡便可行，重現(xiàn)性好，可用于男寶膠囊的質(zhì)量控制。

1儀器、試劑與試藥

1.1儀器美國Waters 高效液相色譜儀,Waters e2695自動進樣器，Waters e2695柱溫箱，Waters 2489檢測器；大連依利特ODS色譜柱2.5 μm(4.6 mm×250 mm)；上海吉理超聲儀器有限公司生產(chǎn)超聲清洗器(型號：JL360DT)；沈陽龍騰電子稱量責任有限公司生產(chǎn)萬分之一分析天平(型號：ES-180J)；瑞士梅特勒-托利多生產(chǎn)十萬分之一分析天平(AB135-S)。

1.2試劑與試藥金絲桃苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111521-201004)；甲醇(國藥集團化學試劑有限公司，色譜純，批號：20130906)；乙腈(國藥集團化學試劑有限公司，色譜純，批號：20130808)；醋酸(國藥集團化學試劑有限公司，分析純、批號：T20130916)；磷酸(天津市富宇精細化工有限公司，分析純，批號：130761)；重蒸水(哇哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司，批號：1118BL)； 男寶膠囊:由亳州市食品藥品檢驗所提供，吉林濟邦藥業(yè)有限公司生產(chǎn)， 批號：20130402、20130309和20140106。

2實驗方法

2.1檢測波長的選擇精密量取對照品溶液10 mL，置100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾后，用紫外可見分光光度計，在200～700 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示，金絲桃苷在360 nm波長處有最大吸收峰，故將360 nm作為測定波長[5]。

2.2色譜條件Hypersil ODS 2.5 μm(4.6 mm×250 mm)C18柱；乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)為流動相；檢測器波長為360 nm；柱溫25℃；流速1.0 mL·min-1。本實驗理論板數(shù)約為10 000，因為金絲桃苷與附近色譜峰分離度大于1.5，且參考藥典中菟絲子的含量測定，故將理論板數(shù)定為5 000。

2.3對照品溶液的制備精密稱取金絲桃苷對照品10.75 mg,置250 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4供試品溶液的制備取本品10粒，除去囊殼，研細，取約1 g,精密稱定，分別置具塞錐形瓶和圓底燒瓶中，分別精密加入甲醇溶液50 mL，稱定質(zhì)量，密塞，超聲處理提取和水浴回流提取各1 h[6-7],放冷，再稱定質(zhì)量，補重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。比較峰面積積分值，確定超聲處理1 h的提取方法。

2.5陰性對照溶液的制備制成缺菟絲子的陰性對照樣品，按照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

按上述色譜條件測定，精密量取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，分別進入高效液相色譜儀中。供試品色譜中，在與對照品主峰相應(yīng)的保留時間范圍內(nèi)，有一相同的色譜峰，定為金絲桃苷峰，且與其他組分峰可達到基線分離，分離度大于1.5，而在此保留時間陰性對照溶液無干擾。見圖1。

A對照品溶液B供試品溶液C陰性對照溶液

圖1金絲桃苷HPLC色譜譜

2.6線性關(guān)系考察依次精密量取對照品溶液0.5、1、2、3、4、5 mL,分別置于10 mL量瓶中，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件，分別精密吸取10 μL進樣，以對照品進樣量為X(mg·L-1)，峰面積為Y，做線性回歸。得線性回歸方程為：Y=19 203X-2 501.5,r=0.999 2(n=6)。結(jié)果表明，金絲桃苷對照品進樣量在2.15～21.5 mg·L-1范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

2.7精密度實驗精密吸取“2.3”項下的對照品溶液，按以上色譜條件，重復(fù)進樣5次，測定峰面積，結(jié)果RSD=0.6 %(n=5)。

2.8重現(xiàn)性實驗稱取同一批號(批號：20130402)樣品6份，按“2.4”項下的方法制備，測定峰面積并計算金絲桃苷，結(jié)果金絲桃苷的平均含量為263.2 μg·g-1，RSD=1.2 %(n=6)。

2.9穩(wěn)定性實驗取同一樣品溶液，按以上色譜條件，在0、2、4、6、8、10 、12 h分別進樣，測定峰面積，共測7次，結(jié)果峰面積RSD值為0.5%，顯示供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10回收率實驗精密稱取已知含量的樣品7份，每份0.5 g，分別精密加入適量對照品,同“2.4”項下的制備方法制備，按照上述色譜條件進行測定，測得峰面積并計算含量，結(jié)果顯示平均回收率為97.9%，RSD=1.0%(n=7)。見表1。

表1　回收率試驗結(jié)果

2.11樣品測定按正文方法測定3批樣品，按2.4項下的方法制備，測定峰面積并計算含量，結(jié)果穩(wěn)定。見表2。

表2　樣品含量測定結(jié)果(μg/粒)

3討論

金絲桃苷可溶于乙醇、丙酮、甲醇等溶劑，丙酮毒性較強暫且舍去，采用甲醇與乙醇超聲1 h進行比較，結(jié)果表明甲醇超聲提取效果較好；再考察回流提取與超聲提取的效果，結(jié)果表明，樣品用甲醇超聲提取1 h效果較好，金絲桃苷比較能提取完全，且方法簡便，以乙腈-0.1 %磷酸(17∶83)、乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)、乙腈-0.2 %冰醋酸(15∶85)、乙腈-1 %冰醋酸(14∶86)進行流動相色譜考察；其中以乙腈-0.2 %冰醋酸(15∶85)、乙腈-1 %冰醋酸(14∶86)為流動相檢測出的色譜峰分離度較差；以乙腈-0.1 %磷酸(17∶83)為流動相檢測出色譜峰峰面積較低，不利于計算；乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)為流動相，配合25℃柱溫，金絲桃苷色譜峰與其他組分達到了較好的基線分離，故選定乙腈-0.085 %磷酸(17∶83)為最佳的流動相。

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.01.016

通信作者：張振凌，女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥飲片及新藥研究，E-mail:627428305@qq.com