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    Rab27B mRNA在胃癌和胃癌前病變組織中的表達(dá)及臨床意義

    2016-02-27 12:02李琪兒葉國良郭俊明
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2015年26期
    關(guān)鍵詞:腫瘤標(biāo)志物胃癌

    李琪兒+葉國良+郭俊明

    [摘要] 目的 了解Rab27B mRNA在胃癌組織和胃癌前病變組織中的表達(dá)情況及及其臨床意義。 方法 應(yīng)用實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)技術(shù)檢測胃癌組織及配對的癌旁組織中Rab27B mRNA的表達(dá)量;應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測胃癌前病變組織及配對的正常胃黏膜組織中Rab27B mRNA的表達(dá)量。 結(jié)果 Rab27B mRNA不僅在胃癌組織中表達(dá)降低(P=0.009),而且在胃癌前病變組織中表達(dá)也降低(P=0.013)。Rab27B mRNA在胃癌組織中的表達(dá)量較癌旁組織平均降低1.8倍。Rab27B mRNA的表達(dá)量與胃癌的分化程度有關(guān)(P=0.009)。 結(jié)論 Rab27B mRNA可能參與了胃癌的發(fā)生,具有成為胃癌腫瘤標(biāo)志物的潛在價值。

    [關(guān)鍵詞] Rab27B;胃癌;胃癌前病變;腫瘤標(biāo)志物

    [中圖分類號] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701(2015)26-0004-04

    Expression and its clinical significance of Rab27B mRNA in gastric cancer and gastric premalignant lesions

    LI Qier1 YE Guoliang1 GUO Junming2

    1.Department of Gastroenterology, the Affiliated Hospital of Ningbo University School of Medicine, Ningbo 315020, China;2.Ningbo University School of Medicine, Ningbo 315211, China

    [Abstract] Objective To understand the expression of Rab27B mRNA in gastric cancer and gastric premalignant lesions and its clinical significance. Methods Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(qRT-PCR) was used to detect Rab27B mRNA expression in gastric cancer tissues and adjacent non-tumorous tissues. Then, Rab27B mRNA expression in gastric premalignant lesions and matched normal tissues were explored. Results Rab27B mRNA was not only significantly down-regulated in gastric cancer tissues(P=0.009), but also decreased in gastric Premalignant lesions(P=0.013). Compared to paired adjacent normal tissues, Rab27B mRNA was down-regulated with an average level 1.8-fold in cancer tissues. The expression level of Rab27B mRNA was closely correlated with poor differentiation(P=0.009). Conclusion Rab27B mRNA may play important role in gastric cancer initiation and it has potential capacity to be tumor marker for gastric cancer.

    [Key words] Rab27B; Gastric cancer; Premalignant lesion; Tumor marker

    我國是胃癌高發(fā)地區(qū),其發(fā)病率居惡性腫瘤第2位,死亡率居惡性腫瘤死因第3位[1]。早期診斷對胃癌的預(yù)后起著至關(guān)重要的作用。早期胃癌的5年生存率可達(dá)90%以上,而進(jìn)展期胃癌則不足50%[2-3]。由于傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)等診斷胃癌的靈敏度和特異度均不高,因此有必要尋求新型的生物學(xué)標(biāo)志物。Rab27B是致癌基因RAS家族成員之一,目前已發(fā)現(xiàn)其與肝癌、乳腺癌、結(jié)腸癌相關(guān)[4-6]。我們應(yīng)用實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction, qRT-PCR)技術(shù)檢測了Rab27B mRNA在胃癌組織和胃癌前病變組織中的表達(dá)量,并分析其與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系,為Rab27B mRNA成為胃癌篩查和早期診斷的標(biāo)志物提供了重要的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣本采集

    從2012年12月~2014年4月于寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院和鄞州人民醫(yī)院共收集胃癌組織101例、胃癌前病變組織30例。101例胃癌患者中男73例,女28例,年齡39~81歲,平均(64.2±9.5)歲。30例胃癌前病變患者中男18例,女12例,年齡38~81歲,平均(60.8±10.4)歲。所有胃癌患者均經(jīng)過外科手術(shù),術(shù)后病理確診胃癌,且術(shù)前均未接受任何放化療;所有胃癌前病變患者均經(jīng)過內(nèi)鏡黏膜下剝離(endoscopic submueosaI dissection,ESD)術(shù),術(shù)后病理確診胃黏膜中重度異型增生。用于本實(shí)驗(yàn)研究的人體標(biāo)本均事先由患者或其委托人簽署知情同意書并得到了寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。采集所有病變組織標(biāo)本的同時采集相應(yīng)的距離病灶大于5 cm處正常組織1份,采集的新鮮組織標(biāo)本立即浸泡于無氮樣品保存液中,-80℃下保存?zhèn)溆谩?

    1.2 試劑

    無氮樣品保存液購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司;Trizol試劑購自德國Invitrogen公司;GoScriPt逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和GoTaqR qPCR Master Mix試劑盒均購自美國Promega公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    應(yīng)用Trizol法抽提組織總RNA,提取的總RNA用紫外分光光度計測定濃度并檢測質(zhì)量。A260/A280在1.8~2.0范圍內(nèi)可認(rèn)為總RNA純度可靠。取2 μg總RNA用于逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)采用GoScriPt逆轉(zhuǎn)錄試劑盒。所獲得的cDNA稀釋5倍后作為模板,采用GoTaqR qPCR Master Mix試劑盒,在Mx3005P熒光定量PCR儀(Srratagene公司)上檢測Rab27B mRNA的表達(dá)量。Rab27B mRNA的引物序列:上游:5'-AGGCTATTCTCTGGGATGAGTG-3',下游:5'-TCTGCTGTATTTAAGGGCACAA-3';外參甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)的引物序列:上游:5'-ACCCACTCCTCCACCTTTGAC-3',下游:5'- TGTTGC TGTAGCCAAATTCGTT-3'。擴(kuò)增條件設(shè)定:95℃ 5 min(預(yù)變性),94℃ 15 s(變性),54℃ 30 s(退火),70℃ 30 s(延伸)。循環(huán)40次。

    1.4 結(jié)果判定

    采用ΔCt法計算Rab27B mRNA相對表達(dá)量。計算公式:ΔCt=Ct(Rab27B)-Ct(GAPDH),ΔΔCt=Ct(實(shí)驗(yàn)組)-Ct(對照組)。ΔCt值越小則表達(dá)量越高。實(shí)驗(yàn)組是指胃癌組織及癌前病變組織,對照組是指相對應(yīng)的癌旁組織和正常組織,實(shí)驗(yàn)組目的基因的表達(dá)量相對于對照組變化的倍數(shù)用2ΔΔCt來表示。

    1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

    采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,分別采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(unpaired students t-test)、配對樣本t檢驗(yàn)(paired students t-test)和方差分析(ANOVA),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 Rab27B mRNA在胃癌組織中的表達(dá)情況

    應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測101對胃癌組織和配對癌旁組織中Rab27B mRNA的表達(dá)量,結(jié)果顯示,Rab27B mRNA在胃癌組織中的表達(dá)量顯著低于癌旁組織(P=0.009,封三圖3),平均降低1.8倍。61%(62/101)胃癌組織中Rab27B mRNA的表達(dá)量低于癌旁組織。

    2.2 Rab27B mRNA在胃癌前病變組織中的表達(dá)情況

    應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)檢測30對胃癌前病變組織和配對正常組織中Rab27B mRNA的表達(dá)量,結(jié)果顯示,Rab27B mRNA在胃癌前病變組織中的表達(dá)量也顯著降低(P=0.013,封三圖4)。

    2.3 Rab27B mRNA的表達(dá)量與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系

    進(jìn)一步比較Rab27B mRNA水平與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系,包括年齡、性別、TNM分期[7]、浸潤深度、腫瘤大小、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果顯示,Rab27B mRNA水平與胃癌的分化程度相關(guān)(P= 0.009,表1),其表達(dá)水平越低,則分化程度也越低。

    表1 Rab27B mRNA的表達(dá)水平(ΔCt)與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系(x±s)

    3 討論

    目前我國的早期胃癌診斷率不足10%[8]。胃癌的診斷主要依靠內(nèi)窺鏡檢查,由于內(nèi)窺鏡檢查的有創(chuàng)性注定其不適于廣泛篩查。有文獻(xiàn)報道,大范圍篩查有助于提高早期胃癌的檢出率[9]。理想的篩查手段不僅要具備無創(chuàng)、快捷、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn),還應(yīng)該具備高靈敏度和特異度,但傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物如CEA,它的靈敏度和特異度分別僅為30%[10]和23.2%[11]。為此,我們希望能夠發(fā)現(xiàn)更為理想的候選腫瘤標(biāo)志物。

    Rab蛋白屬于Ras家族的小GTP酶,參與和調(diào)節(jié)囊泡的運(yùn)輸[12]。Rab27由Rab27A和Rab27B組成。相對于Rab27A,Rab27B的表達(dá)更為局限,主要表達(dá)于腦垂體、膀胱、結(jié)腸、胃和胰腺[13-16]。

    研究最早的是Rab27B與乳腺癌的關(guān)系。Hendrix等[4]發(fā)現(xiàn)Rab27B調(diào)節(jié)雌激素受體(estrogen receptor,ER)陽性的乳腺癌細(xì)胞侵襲性生長和轉(zhuǎn)移,Rab27B的高表達(dá)與乳腺癌的不良預(yù)后密切相關(guān)。此后又有研究顯示Rab27B的高表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期晚、病理分型惡性程度高有關(guān),Rab27B表達(dá)量高的患者生存期較短[17]。新近研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌組織中Rab27B的表達(dá)量均明顯高于癌旁組織,且Rab27B蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)[5]。但Rab27B卻被證實(shí)在原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)量較癌旁組織降低[6]。我們的研究發(fā)現(xiàn)Rab27B mRNA在胃癌組織中的表達(dá)也降低。由此可見,Rab27B既可作為致癌基因又可作為抑癌基因,其在胃癌和肝癌中的作用機(jī)制可能不同于乳腺癌和結(jié)腸癌。我們進(jìn)一步分析了Rab27B mRNA的表達(dá)量與胃癌患者臨床病理因素的關(guān)系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)Rab27B mRNA的低表達(dá)與分化程度低有關(guān)。

    胃黏膜異型增生是胃黏膜發(fā)生癌變的關(guān)鍵階段,被認(rèn)為是胃癌前病變[8],目前已有研究發(fā)現(xiàn)很多癌癥相關(guān)基因在癌前病變組織中已出現(xiàn)了異常表達(dá)。Gibb等[18]進(jìn)行了一項(xiàng)人類口腔黏膜癌及癌前病變的lncRNA表達(dá)圖譜,發(fā)現(xiàn)在癌組織中異常表達(dá)的lncRNA中有60%在癌前病變組織中也存在異常表達(dá)。Shao等[19]證實(shí)HMlincRNA717在胃癌組織和胃黏膜異型增生組織中的表達(dá)量均較正常黏膜降低。屈王蕾等[20]通過免疫組織化學(xué)法檢測ToPoⅡα蛋白在正常宮頸組織、宮頸癌癌前病變組織-宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宮頸鱗癌組織中的表達(dá),結(jié)果發(fā)現(xiàn)TopoⅡα蛋白表達(dá)在CINⅡ、CINⅢ和宮頸鱗癌組織中上調(diào)。本研究發(fā)現(xiàn)Rab27B mRNA不僅僅在胃癌組織中低表達(dá),而且在胃癌前病變組織中也表達(dá)降低,說明Rab27B可能在胃癌的發(fā)生過程中起重要作用。

    綜上所述,Rab27B mRNA在胃癌組織及胃癌前病變組織中均呈現(xiàn)低表達(dá),有可能成為胃癌篩查和早期診斷的新型標(biāo)志物。

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    (收稿日期:2015-05-18)

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