侵襲性真菌病的免疫治療

熊小青綜述，于　潔審校（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血液腫瘤科，重慶400014）

侵襲性真菌病的免疫治療

熊小青綜述，于潔△審校（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血液腫瘤科，重慶400014）

真菌??；血液??；免疫療法；抗真菌藥；綜述

侵襲性真菌?。↖FD）系指真菌侵入人體，在組織、器官或血液中生長(zhǎng)、繁殖，并導(dǎo)致炎性反應(yīng)及組織損傷的疾病。真菌侵入人體后是否致病很大程度上取決于機(jī)體的免疫防御能力，所以免疫功能不全及處于免疫抑制狀態(tài)的患者易發(fā)生IFD。近年來(lái)，盡管新的抗真菌藥物越來(lái)越多，但因?yàn)榭拐婢幬锏挠邢蘅咕V、毒副作用和真菌的耐藥性等問(wèn)題，抗真菌藥物的療效仍然是有限的［1］。隨著對(duì)免疫治療和真菌感染致病機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)及技術(shù)水平的發(fā)展，免疫治療受到越來(lái)越多的重視，并為防治IFD提供了新的治療方法。

1　真菌免疫治療

機(jī)體抗真菌免疫包括天然（非特異性）免疫和獲得性（特異性）免疫。非特異性免疫是指在感染初期免疫活性細(xì)胞（如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞）、炎性介質(zhì)、天然抗體對(duì)真菌的殺傷作用。特異性免疫是指真菌刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)后，T、B淋巴細(xì)胞（主要是T淋巴細(xì)胞）及其介質(zhì)參與的免疫效應(yīng)。真菌免疫治療的對(duì)象包括宿主免疫和真菌病原體兩方面。宿主免疫方面的治療機(jī)制包括：（1）使用真菌疫苗提高宿主的免疫力；（2）有針對(duì)性的激活吞噬細(xì)胞、T細(xì)胞及抗體等介導(dǎo)的非特異性和真菌特異性免疫反應(yīng)；（3）誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞因子、趨化因子、抗菌肽（AMPs）等免疫應(yīng)答產(chǎn)物。真菌病原體方面的免疫治療有單克隆抗體、合成的抗菌肽、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑、生物制劑，其治療機(jī)制為調(diào)節(jié)和（或）參與補(bǔ)體系統(tǒng)、阻止真菌病原體黏附到宿主細(xì)胞上、抑制真菌的繁殖或直接殺死真菌病原體，這些治療機(jī)制不依賴于宿主免疫，為免疫功能不全患者的真菌治療帶來(lái)了福音。

2　細(xì)胞治療

一項(xiàng)體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明，被IL-2激活的CD4+或CD8+T細(xì)胞、T系NK細(xì)胞、CD16+/56+非T系NK細(xì)胞和LAK細(xì)胞能對(duì)抗含有莢膜的隱球菌［2］。Sun等［3］給被煙曲霉感染的免疫功能不全小鼠輸入曲霉菌抗原f16（Aspf16）特異性的CD8+T淋巴細(xì)胞，延長(zhǎng)了這些小鼠的存活時(shí)間。這些體內(nèi)外研究證實(shí)了，細(xì)胞免疫在抗真菌免疫中扮演著至關(guān)重要的角色，比如粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、NK細(xì)胞、LAK細(xì)胞、CD4+或CD8+T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫。

樹突狀細(xì)胞（DCs）在細(xì)胞免疫應(yīng)答中起導(dǎo)火線的作用，因此增強(qiáng)DCs的效能為真菌免疫治療提供了新的發(fā)展前景。含有十五肽（PPCs）的DCs和其他抗原遞呈細(xì)胞（APCs）能解讀Aspf16的編碼序列，引起APC池的擴(kuò)張及促進(jìn)能分泌干擾素（IFN）的具有細(xì)胞毒性的T細(xì)胞的增殖［4-5］。體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，已攝取抗原Aspf16 的DCs能激活被MHC-I限制的CD8+T細(xì)胞，這些具有細(xì)胞毒性的T細(xì)胞能殺死攝取了抗原的DCs和淋巴細(xì)胞；此外，在此培養(yǎng)基中分離出的T細(xì)胞也能殺死曲霉分生孢子［4］。Shi等［6］報(bào)道骨髓中處于非成熟狀態(tài)的DCs在受到念珠菌刺激后，通過(guò)上調(diào)CD80、CD40、CD86和MHC-Ⅱ的表達(dá)分化成成熟的DCs，成熟的DCs能引起細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致CD4+Th1細(xì)胞的生成。

真菌抗原特異性的Th1應(yīng)答表型與真菌感染的嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)［7］?？骨固禺愋訲h1細(xì)胞能改善合并侵襲性曲霉菌病的造血干細(xì)胞移植患者的預(yù)后；然而，環(huán)孢素A和麥考酚酸等多種化學(xué)治療藥物及激素會(huì)抑制抗曲霉特異性Th1細(xì)胞的增殖，降低CD154的表達(dá)和IFN-γ的分泌，因此這種免疫治療方法在器官移植患者中的應(yīng)用受到了限制［8］。曲霉菌、念珠菌、球孢子菌和毛霉菌的細(xì)胞壁成分存在T淋巴細(xì)胞免疫交叉反應(yīng)，這一原理使多種抗原特異性的T淋巴細(xì)胞免疫治療成為可能［9］。有文獻(xiàn)報(bào)道，在侵襲性曲霉菌患者中，煙曲霉蛋白質(zhì)Crf1、Gel1和Pmp20能誘導(dǎo)機(jī)體生成相應(yīng)的特異性T細(xì)胞；在這些T細(xì)胞中，表達(dá)CD137或CD154 的T細(xì)胞具有多種抗原特異性，這種多種抗原特異性的T細(xì)胞能同時(shí)識(shí)別曲霉菌和毛霉菌［10］。通過(guò)細(xì)胞因子捕獲系統(tǒng)（γ-干擾素）和免疫磁珠分選（CDl54），大規(guī)模制備多功能的T淋巴細(xì)胞，已在體外實(shí)驗(yàn)中取得成功［11］。

Grigull等［12-13］闡述了抗真菌藥物聯(lián)合粒細(xì)胞輸注的治療方法在粒細(xì)胞缺乏的癌癥患者中的有效性。一項(xiàng)評(píng)估粒細(xì)胞輸注治療的療效和耐受性的臨床試驗(yàn)表明，在合并感染的粒細(xì)胞缺乏的兒童和青少年患者中，粒細(xì)胞輸注治療是有效的［14］。一項(xiàng)Ⅱ期臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果顯示，粒細(xì)胞輸注劑量為8×108/kg時(shí)，中性粒細(xì)胞缺乏患兒有很好的耐受性，且能有效地清除感染（有效率大于92%）［15］。粒細(xì)胞輸注聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子（GCSF）治療合并嚴(yán)重感染的再生障礙性貧血患者，提高了他們的生存率（180 d生存率為84%）和重建了造血功能［16］。Spellberg等［17］給合并念珠菌血癥的中性粒細(xì)胞缺乏小鼠輸注HL-60細(xì)胞后，提高了它們的生存率。

3　細(xì)胞因子治療

近年來(lái)，利用細(xì)胞因子來(lái)調(diào)節(jié)抗真菌免疫反應(yīng)的免疫治療受到了人們的重視。一系列臨床試驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)了這種免疫治療的有效性，例如巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）-沙格司亭可以作為氟康唑難治性念珠菌口腔炎的輔助治療［18］。目前研究的細(xì)胞因子主要有IL-12、IL-17、IFN-γ、G-CSF和GM-CSF等。

缺乏IL-12和CD4+細(xì)胞的小鼠常常會(huì)延遲清除感染，給予重組IL-12后加快了小鼠清除卡氏肺孢子蟲的速度［19］。Zhou等［20］使用抗-CD40和IL-12聯(lián)合治療感染了隱球菌的IFN-γ敲除的小鼠，延長(zhǎng)了小鼠的壽命，增強(qiáng)了小鼠的免疫力，防治了全身性隱球菌病和隱球菌腦炎的發(fā)生。促炎性細(xì)胞因子IL-17能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞合成GM-CSF、CXCL8/IL-8和β-防御素蛋白［21］。Unsinger等［22］使用IL-7治療白色念珠菌感染小鼠，減輕了小鼠感染的嚴(yán)重程度，增強(qiáng)了其淋巴細(xì)胞的功能（包括活化作用、增值能力、黏附分子的表達(dá)和IFN-γ的生成），改善了小鼠的預(yù)后。一項(xiàng)臨床試驗(yàn)表明，用重組IFN-γ治療侵襲性念珠菌病或曲霉菌病患者，可以上調(diào)HLA-DR的表達(dá)和增加促炎性細(xì)胞因子的分泌［23］。重組G-CSF和GM-CSF能縮短中性粒細(xì)胞減少癥的持續(xù)時(shí)間和增強(qiáng)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的吞噬功能和殺傷力［24］。1例59歲的慢性皮膚黏膜念珠菌病患者，經(jīng)過(guò)短期皮下注射G-CSF和長(zhǎng)期靜脈注射GM-CSF的治療獲得了痊愈，并改善了其單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的功能［25］。

細(xì)胞因子或趨化因子能增強(qiáng)抗真菌藥物的抗菌作用，而各種抗真菌藥物又能誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子的合成。在中性粒細(xì)胞減少的小鼠模型中，G-CSF能增強(qiáng)5-氟胞嘧啶的抗真菌作用［26］。G-CSF和GM-CSF聯(lián)合伏立康唑或氟康唑的治療方案能增強(qiáng)中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞的抗真菌活性［27］。有研究報(bào)道，IFN-γ和兩性霉素B聯(lián)合治療隱球菌腦膜炎能提高病原體的清除率，且未增加不良反應(yīng)［28］。

細(xì)胞因子或趨化因子抑制劑會(huì)干擾炎癥反應(yīng)，增加宿主發(fā)生微生物感染的風(fēng)險(xiǎn)，使細(xì)胞因子治療復(fù)雜化。例如，α-腫瘤壞死因子（TNF-α）抑制劑（英夫利昔單抗、阿達(dá)木單抗、依那西普）能增加宿主真菌感染的風(fēng)險(xiǎn)［29］。預(yù)防性使用TNF抑制劑的患者發(fā)生卡氏肺囊蟲肺炎和其他真菌感染的概率明顯增高［30-31］。一項(xiàng)體外試驗(yàn)結(jié)果顯示，甲強(qiáng)龍、環(huán)孢霉素、麥考酚酸和雷帕霉素（西羅莫司）會(huì)抑制Th1細(xì)胞的增殖、減少IFN-γ的分泌及CD154的表達(dá)［8］。

4　單克隆抗體

機(jī)體感染真菌后會(huì)產(chǎn)生一些重要的抗體，這些抗體能結(jié)合真菌表面及細(xì)胞內(nèi)的抗原，包括多糖類、蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物、糖蛋白或糖脂類等抗原［32］。雜交瘤技術(shù)能捕獲天然抗體的具體特點(diǎn)，這使制備具有天然抗體功能效應(yīng)的單克隆抗體成為可能，這一技術(shù)的應(yīng)用促進(jìn)了單克隆抗體的發(fā)展。

機(jī)體分泌的殺傷因子（KTs）能殺死許多對(duì)它敏感的微生物（真菌、細(xì)菌、病毒），它通過(guò)結(jié)合細(xì)胞壁和細(xì)胞膜表面的KT受體（KTRs）來(lái)發(fā)揮殺傷作用；而對(duì)KT敏感的真菌屬能產(chǎn)生抗-KT和抗-KTR抗體，它們能中和KT的殺傷作用；抗獨(dú)特型單克隆抗體能抵消抗-KT和抗-KTR抗體的作用，從而恢復(fù)KTs的殺傷作用［33］。K20是一種抗KT4抗體的單克隆抗體，體外試驗(yàn)表明K20也具有殺傷真菌的作用［34］。一些體內(nèi)外試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，KT樣單克隆抗體（KAbs）有抗念珠菌和煙霉菌的作用［35-36］。

依芬古單抗 （Mycograb）是一種抗-熱休克蛋白90 （HSP90）的單克隆抗體，它能抑制熱帶假絲酵母菌生長(zhǎng)；研究表明，Mycograb和卡泊芬凈合用能提高念珠菌對(duì)藥物的敏感性；Mycograb聯(lián)合兩性霉素B能有效抑制白色念珠菌、克柔氏念珠菌和光滑念珠菌［37-39］。Mycograb作為兩性霉素B、卡泊芬凈或氟康唑的輔助治療，與單用抗真菌藥物（特別是兩性霉素B）相比，可顯著提高治療有效率［39］；治療真菌血癥時(shí)，Mycograb和兩性霉素B脂質(zhì)體或卡泊芬凈合用能提高療效，且有良好的耐受性［40］。一項(xiàng)Ⅲ期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示，Mycograb能降低念珠菌血癥患者的歸因病死率和提高真菌清除率［41］。但由于生產(chǎn)困難和安全性尚不明確等問(wèn)題，Mycograb尚未被用于臨床治療。

葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖結(jié)合鼠單克隆抗體-18B7是一種新型隱球菌莢膜多糖的單克隆抗體，Ⅰ期臨床試驗(yàn)在HIV感染合并隱球菌腦膜炎患者中進(jìn)行，結(jié)果顯示大劑量單克隆抗體-18B7能有效清除患者血清中的多聚糖（GXM），但其劑量安全窗較窄，單次有效劑量注射作用持續(xù)時(shí)間僅3個(gè)月［42］。放射性免疫治療是一種基于單克隆抗體的免疫治療方式，被放射性核素標(biāo)記的抗體能通過(guò)釋放輻射能殺傷靶細(xì)胞。Bryan等［43］報(bào)道與兩性霉素B相比，核素標(biāo)記的213Bi-18B7和188Re-18B7對(duì)小鼠肺組織和腦組織中的隱球菌清除效果更好。核素標(biāo)記的曲霉特異性單克隆抗體-JF5的臨床試驗(yàn)在合并侵襲性肺曲霉菌病的免疫缺陷患者中取得了成功［44］。

5　真菌疫苗

真菌病原體能引起宿主的天然抗體反應(yīng)，而純化的真菌抗原能引起機(jī)體的特異性抗體應(yīng)答，這些抗體具有保護(hù)性功能，真菌共同抗原的存在及抗體的交叉反應(yīng)使廣效的抗體反應(yīng)成為可能；這些研究結(jié)果促進(jìn)了真菌疫苗的發(fā)展。但由于臨床上對(duì)真菌感染不重視及真菌疫苗研發(fā)成本巨大，真菌疫苗的研發(fā)遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他病原體疫苗。

真菌疫苗主要包括菌體疫苗、亞單位疫苗和DNA疫苗等。傳統(tǒng)的菌體疫苗由于安全性和標(biāo)準(zhǔn)化等問(wèn)題，未達(dá)到真菌疫苗的理想劑型。亞單位疫苗是將真菌的特異性抗原進(jìn)行提純而制成的疫苗。亞單位疫苗具有較好的安全性和標(biāo)準(zhǔn)化方式，但免疫原性較差，往往需要佐劑來(lái)達(dá)到長(zhǎng)期持續(xù)的保護(hù)性免疫作用。前期實(shí)驗(yàn)比較成功的亞單位疫苗主要有：念珠菌疫苗（重組Als3p、重組Sap2p、Hyrlp、β-甘露聚糖肽共軛物）、隱球菌疫苗（葡萄糖醛酸木糖甘露聚糖CRMl97：交叉反應(yīng)物質(zhì)197共軛物、肽模擬表位）、曲霉疫苗（AspF、Crfl）和交叉疫苗（海帶多糖-CRMl97共軛物）等。其中念珠菌疫苗重組Als3p已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。重組Als3p念珠菌疫苗的Ⅰ期臨床研究在40名健康人中開展，結(jié)果顯示30 μg和300μg的劑量都具有安全性和可耐受性，免疫球蛋白水平在接種疫苗后14 d達(dá)到高峰，并且能夠促進(jìn)外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)性的細(xì)胞因子［45］。目前處于研究階段的真菌疫苗眾多，但在動(dòng)物和人類中尚需更多研究來(lái)驗(yàn)證其安全性和有效性，高質(zhì)量的真菌疫苗將大大減少IFD所帶來(lái)的死亡和醫(yī)療負(fù)擔(dān)。

6　抗菌肽（AMPS）

分泌抗菌肽（AMPs）是機(jī)體固有免疫反應(yīng)的一部分。抗菌肽具有細(xì)胞毒性，它能滲透性損傷病原體的細(xì)胞膜、干擾病原體的代謝活動(dòng)、破壞病原體的細(xì)胞質(zhì)和核蛋白。到目前為止，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了約150種具有抗真菌活性的天然抗菌肽及許多合成和半合成抗菌肽。

抗菌肽和傳統(tǒng)抗真菌藥物合用能顯著提高抗真菌治療的療效。Marques等［46］用副球孢子菌抗原gp43衍生出的抗菌肽-P10聯(lián)合兩性霉素B或氟康唑或酮康唑或伊曲康唑治療巴西副球孢子菌感染的小鼠，能改善小鼠的預(yù)后。Petraitis的臨床研究顯示，在口咽、食道念珠菌病患者中，人工合成的抗菌肽PLD-118對(duì)氟康唑耐藥的念珠菌有協(xié)同抗菌作用［47］。中性粒細(xì)胞衍生的陽(yáng)離子型抗菌肽CAP37是一種人工合成的殺菌劑類似物，它對(duì)氟康唑敏感或耐藥的念珠菌屬都有顯著的抗菌活性［48］。Trappin-2是一種中性粒細(xì)胞絲氨酸蛋白酶抑制物，低劑量的Trappin-2對(duì)煙曲霉和白色念珠菌都有極強(qiáng)的抗菌活性［49］。半胱氨酸蛋白酶抑制劑是一種從卵清蛋白中提取純化的抗菌肽，治療濃度的半胱氨酸蛋白酶抑制劑對(duì)唑類敏感的白色念珠菌、近平滑假絲酵母菌及熱帶假絲酵母菌的抗菌效果和氟康唑相當(dāng)，且它不會(huì)拮抗氟康唑或兩性霉素B的抗菌活性，并且它對(duì)唑類耐藥的白色念珠菌也有抗菌作用［50］。

抗菌肽的疏水性會(huì)影響其抗真菌活性。Jiang等［51］報(bào)道增加抗菌肽D-V13K的疏水性會(huì)減弱其抗接合菌的活性，而增強(qiáng)抗子囊菌的活性。含有疏水肽的抗菌肽GKH17、HKH17和不含疏水肽的抗菌肽相比，前者對(duì)白色念珠菌的細(xì)胞毒性明顯強(qiáng)于后者［52］。機(jī)體的內(nèi)環(huán)境也會(huì)影響抗菌肽的抗真菌活性，比如抗菌肽P-113和Ac-KWRRWVRWI-NH（2）只有在低鹽環(huán)境中才有很強(qiáng)的抗真菌活性，而改良的Pac-525抗菌肽的抗真菌活性不受鹽濃度的影響［53］。

7　真菌過(guò)敏反應(yīng)和免疫治療

真菌過(guò)敏反應(yīng)常是真菌孢子或次微米級(jí)的菌絲片段通過(guò)吸入、皮膚接觸或食入等途徑進(jìn)入機(jī)體而引起的變態(tài)反應(yīng)。這些過(guò)敏原能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的IgE或T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。這些變態(tài)反應(yīng)是免疫介導(dǎo)的，因此可以采用免疫治療法治療這些疾病。對(duì)真菌變態(tài)反應(yīng)來(lái)說(shuō)，抗過(guò)敏藥物通過(guò)抑制炎性反應(yīng)能減輕過(guò)敏癥狀，而特異性免疫治療是一種抗原特異性的、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的和能緩解疾病病情的治療方法。低變應(yīng)原性的過(guò)敏原衍生物和變應(yīng)原疫苗類多肽是一種新的免疫治療方法，它們能減少IgE的產(chǎn)生、下調(diào)Th2介導(dǎo)的免疫反應(yīng)、誘導(dǎo)產(chǎn)生更多的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，以此增加機(jī)體對(duì)過(guò)敏原的耐受性，但其安全性尚需更多的臨床研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí)［54］。

綜上所述，真菌免疫機(jī)制的研究和免疫治療方法的探索都取得了巨大進(jìn)步，但目前能用于臨床的真菌免疫治療仍然有限，需要更多的體內(nèi)外試驗(yàn)及大規(guī)模臨床研究進(jìn)一步驗(yàn)證這些免疫治療的可行性。真菌免疫治療的發(fā)展有望在將來(lái)為免疫功能受抑制的IFD高危人群提供有效的免疫防御措施，從而有效減少IFD的發(fā)病率和病死率。

［1］HAMAD M.Antifungal immunotherapy and immunomodulation：a doublehitter approach to deal with invasive fungal infections［J］.Scand J Immunol，2008，67（6）：533-543.

［2］Levitz SM，Dupont MP.Phenotypic and functional characterization of human lymphocytes activated by interleukin-2 to directly inhibit growth of Cryptococcus neoformans in vitro［J］.J Clin Invest，1993，91（4）：1490-1498.

［3］Sun Z，Zhu P，Li L，et al.Adoptive immunity mediated by HLA-A*0201 restricted Asp f16 peptides-specific CD8+T cells against Aspergillus fumigatus infection［J］.Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2012，31（11）：3089-3096.

［4］Ramadan G，Davies B，Kurup VP，et al.Generation of cytotoxic T cell responses directed to human leucocyte antigen Class I restricted epitopes from the Aspergillus f16 allergen［J］.Clin Exp Immunol，2005，140（1）：81-91.

［5］ Zhu F，Ramadan G，Davies B，et al.Stimulation by means of dendritic cells followed by Epstein-Barr virus-transformed B cells as antigen-presenting cells is more efficient than dendritic cells alone in inducing Aspergillus f16-specific cytotoxic T cell responses［J］.Clin Exp Immunol，2008，151（2）：284-296.

［6］ShiD，LiD，YinQ，etal.Silencedsuppressorofcytokinesignaling1（SOCS1）enhances the maturation and antifungal immunity of dendritic cells in response to Candida albicans in vitro［J］.Immunol Res，2015，61（3）：206-218.

［7］Jarvis JN，Casazza JP，Stone HH，et al.The phenotype of the Cryptococcusspecific CD4+memory T-cell response is associated with disease severity and outcome in HIV-associated cryptococcal meningitis［J］.J Infect Dis，2013，207（12）：1817-1828.

［8］Tramsen L，Schmidt TS，Roeger F，et al.Immunosuppressive compounds exhibit particular effects on functional properties of human anti-Aspergillus Th1 cells［J］.Infect Immun，2014，82（6）：2649-2656.

［9］Tramsen L，Schmidt S，Boenig H，et al.Clinical-scale generation of multispecific anti-fungal T cells targeting Candida，Aspergillus and mucormycetes［J］.Cytotherapy，2013，15（3）：344-351.

［10］Stuehler C，Nowakowska J，Bernardini C，et al.Multispecific Aspergillus T cells selected by CD137 or CD154 induce protective immune responses against the most relevant mold infections［J］.J Infect Dis，2015，211（8）：1251-1261.

［11］Khanna N，Stuehler C，Conrad B，et al.Generation of a multipathogenspecific T-cell product for adoptive immunotherapy based on activationdependent expression of CD154［J］.Blood，2011，118（4）：1121-1131.

［12］Grigull L，Beilken A，Schmid H，et al.Secondary prophylaxis of invasive fungal infections with combination antifungal therapy and G-CSF-mobilized granulocyte transfusions in three children with hematologcal malignancies［J］. Support Care Cancer，2006，14（7）：783-786.

［13］Grigull L，Pulver N，Goudeva L，et al.G-CSF mobilised granulocyte transfusions in 32 paediatric patients with neutropenic sepsis［J］.Support Care Cancer，2006，14（9）：910-916.

［14］Seidel MG，Minkov M，Witt V，et al.Granulocyte transfusions in children and young adults：does the dose matter？［J］.J Pediatr Hematol Oncol，2009，31（3）：166-172.

［15］Sachs UJ，Reiter A，Walter T，et al.Safety and efficacy of therapeutic early onset granulocyte transfusions in pediatric patients with neutropenia and severe infections［J］.Transfusion，2006，46（11）：1909-1914.

［16］Wang H，Wu Y，F(xiàn)u R，et al.Granulocyte transfusion combined with granulocyte colony stimulating factor in severe infection patients with severe aplastic anemia：a single center experience from China［J］.PloS One，2014，9（2）：e88148.

［17］Spellberg BJ，Collins M，Avanesian V，et al.Optimization of a myeloid cell transfusion strategy for infected neutropenic hosts［J］.J Leukoc Biol，2007，81（3）：632-641.

［18］Vazquez JA，Hidalgo JA，De Bono S.Use of sargramostim（rh-GM-CSF）as adjunctive treatment of fluconazole-refractory oropharyngeal candidiasis in patients with AIDS：a pilot study［J］.HIV Clin Trials，2000，1（3）：23-29.

［19］Ruan S，Mckinley L，Zheng M，et al.Interleukin-12 and host defenseagainst murine Pneumocystis pneumonia［J］.Infect Immun，2008，76（5）：2130-2137.

［20］Zhou Q，Gault RA，Kozel TR，et al.Immunomodulation with CD40 stimulation and interleukin-2 protects mice from disseminated cryptococcosis［J］. Infect Immun，2006，74（4）：2161-2168.

［21］Matsuzaki G，Umemura M.Interleukin-17 as an effector molecule of innate and acquired immunity against infections［J］.Microbiol Immunol，2007，51（12）：1139-1147.

［22］Unsinger J，Burnham CA，Mcdonough J，et al.Interleukin-7 ameliorates immune dysfunction and improves survival in a 2-hit model of fungal sepsis［J］.J Infect Dis，2012，206（4）：606-616.

［23］Delsing CE，Gresnigt MS，Leentjens J，et al.Interferon-gamma as adjunctive immunotherapy for invasive fungal infections：a case series［J］.BMC Infect Dis，2014，14：166.

［24］Chiou CC，Groll AH，Walsh TJ.New drugs and novel targets for treatment of invasive fungal infections in patients with cancer［J］.Oncologist，2000，5（2）：120-135.

［25］Wildbaum G，Shahar E，Katz R，et al.Continuous G-CSF therapy for isolated chronic mucocutaneous candidiasis：complete clinical remission with restoration of IL-17 secretion［J］.J Allergy Clin Immunol，2013，132 （3）：761-764.

［26］Quezada G，Koshkina NV，Zweidler-Mckay P，et al.Intranasal granulocyte-macrophage colony-stimulating factor reduces the Aspergillus burden in an immunosuppressed murine model of pulmonary aspergillosis［J］. Antimicrob Agents Chemother，2008，52（2）：716-718.

［27］Vora S，Purimetla N，Brummer E，et al.Activity of voriconazole，a new triazole，combined with neutrophils or monocytes against Candida albicans：effect of granulocyte colony-stimulating factor and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor［J］.Antimicrob Agents Chemother，1998，42（4）：907-910.

［28］Jarvis JN，Meintjes G，Rebe K，et al.Adjunctive interferon-gamma immunotherapy for the treatment of HIV-associated cryptococcal meningitis：a randomized controlled trial［J］.Aids，2012，26（9）：1105-1113.

［29］Weinblatt ME，Kremer JM，Bankhurst AD，et al.A trial of etanercept，a recombinant tumor necrosis factor receptor：Fc fusion protein，in patients with rheumatoid arthritis receiving methotrexate［J］.N Engl J Med，1999，340（4）：253-259.

［30］Grubbs JA，Baddley JW.Pneumocystis jirovecii pneumonia in patients receiving tumor-necrosis-factor-inhibitor therapy：implications for chemoprophylaxis［J］.Curr Rheumatol Rep，2014，16（10）：445.

［31］Chirch LM，Cataline PR，Dieckhaus KD，et al.Proactive infectious disease approach to dermatologic patients who are taking tumor necrosis factoralfa antagonists：PartⅡ.Screening for patients on tumor necrosis factoralfa antagonists［J］.J Am Acad Dermatol，2014，71（1）：1.e1-7；quiz 1.e8-9.

［32］Casadevall A，Pirofski LA.Antibody-mediated protection through crossreactivity introduces a fungal heresy into immunological dogma［J］.Infect Immun，2007，75（11）：5074-5078.

［33］Magliani W，Conti S，Giovati L，et al.Antibody peptide based antifungal immunotherapy［J］.Front Microbiol，2012，3：190.

［34］Polonelli L，Beninati C，Teti G，et al.Yeast killer toxin-like candidacidal Ab6 antibodies elicited through the manipulation of the idiotypic cascade［J］. PloS One，2014，9（8）：e105727.

［35］Manfredi M，Mccullough MJ，Conti S，et al.In vitro activity of a monoclonal killer anti-idiotypic antibody and a synthetic killer peptide against oral isolates of Candida spp.differently susceptible to conventional antifungals［J］. Oral Microbiol Immunol，2005，20（4）：226-232.

［36］Cenci E，Mencacci A，Sprecda A，et al.Protection of killer antiidiotypic antibodies against early invasive aspergillosis in a murine model of allogeneic T-cell-depleted bone marrow transplantation［J］.Infect Immun，2002，70（5）：2375-2382.

［37］Hodgetts S，Nooney L，Al-Akeel R，et al.Efungumab and caspofungin：pre-clinical data supporting synergy［J］.J Antimicrob Chemother，2008，61（5）：1132-1139.

［38］Matthews RC，Rigg G，Hodgetts S，et al.Preclinical assessment of the efficacy of mycograb，a human recombinant antibody against fungal HSP90［J］. Antimicrob Agents Chemother，2003，47（7）：2208-2216.

［39］Nooney L，Matthews RC，Burnie JP.Evaluation of Mycograb，amphotericin B，caspofungin，and fluconazole in combination against Cryptococcus neoformans by checkerboard and time-kill methodologies［J］.Diagn Microbiol Infect Dis，2005，51（1）：19-29.

［40］Sutherland A，Ellis D.Treatment of a critically ill child with disseminated Candida glabrata with a recombinant human antibody specific for fungal heat shock protein 90 and liposomal amphotericin B，caspofungin，and voriconazole［J］.Pediatr Crit Care Med，2008，9（4）：e23-25.

［41］Pachl J，Svoboda P，Jacobs F，et al.A randomized，blinded，multicenter trial of lipid-associated amphotericin B alone versus in combination with an antibody-based inhibitor of heat shock protein 90 in patients with invasive candidiasis［J］.Clin Infect Dis，2006，42（10）：1404-1413.

［42］Larden RA，Pappas PG，Perfect J，et al.Phase I evaluation of the safety and pharmacokinetics of murine-derived anticryptococcal antibody 18B7 in subjects with treated cryptococcal meningitis［J］.Antimicrob Agents Chemother，2005，49（3）：952-958.

［43］Bryan RA，Jiang Z，Howell RC，et al.Radioimmunotherapy is more effective than antifungal treatment in experimental cryptococcal infection［J］.J Infect Dis，2010，202（4）：633-637.

［44］Thornton CR.Breaking the mould-novel diagnostic and therapeutic strategies for invasive pulmonary aspergillosis in the immune deficient patient［J］. Expert Rev ClinImmunol，2014，10（6）：771-780.

［45］Schmidt CS，White CJ，Ibrahim AS，et al.NDV-3，a recombinant alumadjuvanted vaccine for Candida and Staphylococcus aureus，is safe and immunogenic in healthy adults［J］.Vaccine，2012，30（52）：7594-7600.

［46］Marques AF，Da Silva MB，Juliano MA，et al.Peptide immunization as an adjuvant to chemotherapy in mice challenged intratracheally with virulent yeastcellsofParacoccidioides brasiliensis［J］.AntimicrobAgents Chemother，2006，50（8）：2814-2819.

［47］Petraitis V，Petraitiene R，Kelaher AM，et al.Efficacy of PLD-118，a novel inhibitor of candida isoleucyl-tRNA synthetase，against experimental oropharyngeal and esophageal candidiasis caused by fluconazole-resistant C. albicans［J］.Antimicrob Agents Chemother，2004，48（10）：3959-3967.

［48］Pereira HA，Tsyshecskaya-Hoover I，Hinsley H，et al.Candidacidal activity of synthetic peptides based on the antimicrobial domain of the neutrophilderived protein，CAP37［J］.Med Mycol，2010，48（2）：263-272.

［49］Baranger K，Zani ML，Chandenier J，et al.The antibacterial and antifungal properties of trappin-2（pre-elafin）do not depend on its protease inhibitory function［J］.FEBSJ，2008，275（9）：2008-2020.

［50］Kolaczkowska A，Kolaczkowski M，Sokolowska A，et al.The antifungal properties of chicken egg cystatin against Candida yeast isolates showing different levels of azole resistance［J］.Mycoses，2010，53（4）：314-320.

［51］Jiang Z，Kullberg BJ，vander Lee H，et al.Effects of hydrophobicity on the antifungal activity of alpha-helical antimicrobial peptides［J］.Chem Biol Drug Des，2008，72（6）：483-495.

［52］Schmidtchen A，Pasupuleti M，Morgelin M，et al.Boosting antimicrobial peptides by hydrophobic oligopeptide end tags［J］.J Biol Chem，2009，284 （26）：17584-17594.

［53］Wang CW，Yip BS，Cheng HT，et al.Increased potency of a novel D-betanaphthylalanine-substituted antimicrobial peptide against fluconazoleresistant fungal pathogens［J］.FEMS Yeast Res，2009，9（6）：967-970.

［54］Twaroch TE，Curin M，Valenta R，et al.Mold allergens in respiratory allergy：from structure to therapy［J］.Allergy Asthma Immunol Res，2015，7（3）：205-220.

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.03.028

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（2015-12-13）