當(dāng)歸補(bǔ)血湯的不同配比對黃芪甲苷、阿魏酸及芒柄花素含量的影響

壽迪文，馬偉斌

浙江省中醫(yī)院，浙江 杭州 310006

當(dāng)歸補(bǔ)血湯的不同配比對黃芪甲苷、阿魏酸及芒柄花素含量的影響

壽迪文，馬偉斌

浙江省中醫(yī)院，浙江 杭州 310006

目的：觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯中當(dāng)歸與黃芪的不同配比對黃芪甲苷、阿魏酸及芒柄花素含量的影響。方法：將當(dāng)歸補(bǔ)血湯進(jìn)行5種當(dāng)歸與黃芪的不同配比（1∶1、1∶2、1∶5、1∶7、1∶10），通過高效液相色譜法對黃芪甲苷、阿魏酸以及芒柄花素分別進(jìn)行線性關(guān)系、精密度、重復(fù)性及回收率檢測。結(jié)果：對照樣品線性關(guān)系良好，精密度、重復(fù)性及回收率均滿足標(biāo)準(zhǔn)；隨著黃芪配比上升，黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素含量上升，至1∶5（當(dāng)歸∶黃芪）時達(dá)最高值，后逐漸降低。結(jié)論：當(dāng)當(dāng)歸補(bǔ)血湯內(nèi)當(dāng)歸與黃芪配比為1∶5時，黃芪甲苷、阿魏酸及芒柄花素的含量最高，可保證配方藥效充分發(fā)揮，需引起臨床重視。

當(dāng)歸補(bǔ)血湯；不同配比；黃芪甲苷；阿魏酸；芒柄花素

中藥方劑的藥效由不同中藥之間配伍與配比所得，藥材的配伍一方面需考慮協(xié)同作用，另一方面應(yīng)考慮拮抗作用，臨床用藥盡可能降低拮抗作用，提高療效并保證用藥安全。中藥配方采用最優(yōu)配比可獲最佳療效，產(chǎn)生這一作用的主要原因是配方內(nèi)藥材的化學(xué)成分含量發(fā)生變化。近年來，藥理學(xué)和化學(xué)分析技術(shù)的成熟為中藥配比、配伍的優(yōu)化提供了許多技術(shù)支持。當(dāng)歸補(bǔ)血湯為臨床常用方劑，具有補(bǔ)血、養(yǎng)氣之功。已有學(xué)者證實(shí)，黃芪甲苷、阿魏酸及芒柄花素為當(dāng)歸、黃芪起效的主要化學(xué)成分。其中，黃芪甲苷有增強(qiáng)免疫力、抗病毒、抗應(yīng)激、改善心肺功能等作用[1]；阿魏酸有鎮(zhèn)靜、保護(hù)心肌缺血、抗炎等功效[2]；芒柄花素則可抗腫瘤、抗氧化、抗病毒[3]。本研究旨在觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯中藥物不同配比對此3種化學(xué)成分含量的影響，以探求當(dāng)歸補(bǔ)血湯的藥物配比規(guī)律，從而提高其治療效果及安全性。

1 資料與方法

1.1 檢測儀器 1100高效液相色譜系統(tǒng)(美國Agilent公司)、AR210電子分析天平(美國OHAUS公司)、METTLRTAB 1355-S萬分之一電子天平(美國METTLER TOLEDO公司)、微孔濾膜(英國Whatman公司)。

1.2 材料 黃芪：豆科植物多年生草本蒙古黃芪的根，產(chǎn)地：甘肅隴西，經(jīng)鑒定為Astragalus membranaceus(Fisvh.)Bge.的根。當(dāng)歸：傘形科植物當(dāng)歸的干燥根，產(chǎn)地：甘肅岷縣，經(jīng)鑒定為Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。

1.3 主要藥品 阿魏酸(生產(chǎn)批號：110773-201012)、黃芪甲苷(生產(chǎn)批號：110781-200613)、芒柄花素(生產(chǎn)批號：111703-20602)，均由中國藥品生物制品鑒定所提供。

1.4 主要試劑 甲醇(天津市博迪化工有限公司)、乙腈(沈陽市德坤化工有限公司)、正丁醇(天津市博迪化工有限公司)、純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)。乙腈為色譜純，其他均為分析純。

1.5 檢測及制備方式

1.5.1 樣品制備 將當(dāng)歸、黃芪碾磨成粉過篩，后進(jìn)行5種不同配比方案(1︰1、1︰2、1︰5、1︰7、1︰10)。每個方案總重均30 g(當(dāng)歸配比量均設(shè)定為1)，每個方案加水350 mL煮沸，時間45 min，重復(fù)煎煮2次后過濾，離心后將2次濾液的上清液保存至冷凍柜中作為樣本待檢。取5種不同配比的樣品各20 mL(精密稱取)，使用水飽和正丁醇溶液萃取4次，每次40 mL，與正丁醇合并，再用氨試液重復(fù)洗滌3次，每次20 mL，正丁醇液使其蒸干，取液殘渣精密加入甲醇定容至5 mL，0.45 μm濾膜濾過，續(xù)濾液選擇供測定黃芪甲苷。精密稱取不同配比樣品20 mL，采取超聲提取法提取40 min，離心后留取上清液，重復(fù)提取，將2次提取液合并，使用甲醇回收至干后精密加入2 mL甲醇溶解。

1.5.2 對照品制備 精密稱取黃芪甲苷、阿魏酸及芒柄花素3種對照品，將甲醇加入，配制為1 mg/mL的待測溶液。

1.6 流動相、色譜條件選擇 采取梯度洗脫法選擇極性差異明顯的成分在同一圖譜內(nèi)進(jìn)行反映。本次研究主要選擇2種流動相系統(tǒng)，分別采用甲醇-水、乙腈-水等進(jìn)行梯度洗脫實(shí)驗(yàn)，將上述對照品及樣品溶液經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過，分別精密稱取10 μL。通過高效液相色譜法完成梯度洗脫程序的優(yōu)化。結(jié)果顯示，乙腈-水流動相系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)顯示的梯度可提供豐富的色譜峰信息，從而實(shí)現(xiàn)基線分離，峰型對稱，且有良好的保留時間。鑒于此，本次研究采取乙腈-水流動相進(jìn)行梯度洗脫。色譜條件：色譜柱為Diamonsil ODS-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相設(shè)定為乙腈-水，流速1 mL/min，柱溫為常規(guī)室溫，進(jìn)樣量為20 μL，檢測波長黃芪甲苷201 nm，阿魏酸及芒柄花素均為280 nm。

1.7 線性關(guān)系、精密度、回收率及重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 線性關(guān)系：取2.5 mL純凈水為空白對照組，精密吸取黃芪甲苷、阿魏酸及芒柄花素的對照品稀釋液，進(jìn)樣量分別為2、4、8、16、32 mL，并依次注入高效液相色譜儀，根據(jù)選擇的色譜條件確定峰面積，對照品進(jìn)樣量及峰面積積分值分別為橫坐標(biāo)X及縱坐標(biāo)Y，后繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密度考察：精密稱取3類化學(xué)元素對照品稀釋液15 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，計算出各成分的峰面積積分值?；厥章蕦?shí)驗(yàn)：精密稱取1∶5樣品5份，每份含量已知，測定黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素回收率，在各批樣品中分別加入黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素對照品，并制備為供試品溶液，檢測各對照品含量獲得回收率。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：取1∶5樣品溶液，平行制備供試品溶液5份，后檢測黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素峰面積積分值。

2 結(jié)果

2.1 精密度、重復(fù)性、回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表1。對照樣品線性關(guān)系良好，重復(fù)性、精密度及回收率均滿足標(biāo)準(zhǔn)。

表1 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 不同配比時黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素的含量 見表2。隨著黃芪配比上升，黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素含量上升，至1∶5時達(dá)最高值，后逐漸降低。

表2 不同配比時黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素的含量

3 討論

當(dāng)歸補(bǔ)血湯最早載于李東垣所著的《內(nèi)外傷辨惑論·署傷胃氣論》，是補(bǔ)氣養(yǎng)血良方，主要治療疲勞內(nèi)傷，氣弱血虛等癥。該方主要由黃芪、當(dāng)歸2味中藥組成。當(dāng)歸味甘、辛，性溫，歸肝、心、脾經(jīng)，可補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便；黃芪味甘，性微溫，歸肺、脾、肝、腎經(jīng)，可益氣固表、斂汗固脫。經(jīng)藥理學(xué)研究證實(shí)，當(dāng)歸對子宮有雙相調(diào)節(jié)作用，可擴(kuò)張冠狀動脈、提高冠脈血流量、抗心律失常、擴(kuò)張血管、抗氧化及清除自由基等[4]；黃芪可作用于免疫系統(tǒng)，提高機(jī)體免疫力，增強(qiáng)機(jī)體耐缺氧、應(yīng)激能力，促進(jìn)機(jī)體代謝，改善心功能并降壓、保肝、調(diào)節(jié)血糖、抗菌、抗病毒等[5]。

當(dāng)歸補(bǔ)血方配方本質(zhì)為藥對，而影響藥對功效的主要因素除了藥材本身質(zhì)量外就是藥物之間配比。本研究借助現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)對傳統(tǒng)中藥方劑不同藥物配比進(jìn)行研究，對不同配伍后化學(xué)成分的動態(tài)變化進(jìn)行分析，有利于提高中藥治療的效果，從而更利于臨床應(yīng)用。

本研究結(jié)果顯示，當(dāng)當(dāng)歸配比含量不變時，逐漸增加黃芪的含量可使黃芪甲苷、阿魏酸、芒柄花素含量逐漸上升，而最高值在1∶5的配比時出現(xiàn)。其原因主要考慮黃芪用量增加后，當(dāng)歸對黃芪的拮抗作用降低[6]。另外，雖然當(dāng)歸內(nèi)阿魏酸易受溫度影響(溫度變高后，氧化分解加快)，但黃芪內(nèi)黃酮類成分對阿魏酸的保護(hù)作用，充分緩解了氧化分解的進(jìn)程[7]。本研究結(jié)果還顯示，配比為1∶7或1∶10時，3種化學(xué)成分含量均降低。由此可見，當(dāng)歸與黃芪的配比方式為1∶5時，可確保3種化學(xué)成分的最優(yōu)有效濃度，而配比超過1∶7時，則2種化學(xué)成分的濃度呈下降趨勢。

綜上所述，本研究為臨床應(yīng)用當(dāng)歸補(bǔ)血湯提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，當(dāng)當(dāng)歸與黃芪配比為1∶5時，可保證配方藥效充分發(fā)揮，需引起臨床重視。

[1] 劉浩文，劉嘉儀，楊妙榮，等．黃芪藥材中黃芪甲苷含量測定的兩種方法的比較研究[J]．中藥新藥與臨床藥理，2011，22(6)：659-662.

[2]歐仕益，包惠燕，藍(lán)志東，等．阿魏酸及其衍生物的藥理作用研究進(jìn)展[J]．中藥材，2001，24(3)：220-221.

[3]石子儀，鮑忠，姜勇，等．不同來源黃芪藥材中毛蕊異黃酮葡萄糖苷和芒柄花素的定量分析[J]．中國中藥雜志，2007，32(9)：779-783.

[4]李曦，張麗宏，王曉曉，等．當(dāng)歸化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]．中藥材，2013，36(6)：1023-1028.

[5]左軍，張文釗，胡曉陽，等．黃芪現(xiàn)代藥理及臨床研究進(jìn)展[J]．中醫(yī)藥信息，2014，31(1)：111-112.

[6] 周向明，周昕，李毅民，等．當(dāng)歸補(bǔ)血湯的研究進(jìn)展[J].世界中醫(yī)藥，2013，8(6)：705-707.

[7]田漢英，國旭丹，李五霞，等．不同處理溫度對苦蕎抗氧化成分的含量及其抗氧化活性影響的研究[J]．中國糧油學(xué)報，2014，29(11)：19-23，50．

（責(zé)任編輯：吳凌，劉迪成）

Effect of Different Proportions of Danggui Buxue Tang on the Content of Astragaloside，F(xiàn)erulic Acid and Formononetin

SHOU Diwen，MA Weibin

Objective：To observe the effect of Danggui Buxue tang with different proportions of Angelica and Astragalus on the content of astragaloside，ferulic acid and formononetin.Methods：Making the Danggui Buxue tang with different proportions of Angelica and Astragalus(1∶1，1∶2，1∶5，1∶7，1∶10)，the linear relation，degree of precision，repeatability and the recovery rate of astragaloside，ferulic acid and formononetin in the way of high performance liquid chromatography were detected.Results：The linear relation of the control sample was well and the repeatability，degree of precision and recovery rate could meet the standard.The content of astragaloside，ferulic acid and formononetin was increased with the rising of the proportion of Astragalus.As the proportion of Angelica and Astragalus being 1∶5，the content was the highest then gradually dropped.Conclusion：The content of astragaloside，ferulic acid and formononetin is the highest as Angelica and Astragalus are in the proportion of 1∶5 in Danggui Buxue tang.It can guarantee the drug efficacy fully realizing and need to draw clinicalattention.

Danggui Buxue tang；Different ratio；Ferulic acid；Astragaloside；Formononetin

R284.1

A

0256-7415（2016）06-0274-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.06.120

2016-02-23

壽迪文（1977-），男，主管中藥師，研究方向：中藥學(xué)。