膠質(zhì)瘤組織中microRNA-200a的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系

季玉陳，李　妍，胡京霞，張紅波，左煥琮#

1)清華大學(xué)玉泉醫(yī)院神經(jīng)外科 北京 100049　2)湖北省新華醫(yī)院神經(jīng)外科 武漢 430015

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膠質(zhì)瘤組織中microRNA-200a的表達(dá)及其與患者預(yù)后的關(guān)系

季玉陳1)，李妍1)，胡京霞1)，張紅波2)，左煥琮1)#

1)清華大學(xué)玉泉醫(yī)院神經(jīng)外科 北京 1000492)湖北省新華醫(yī)院神經(jīng)外科 武漢 430015

關(guān)鍵詞microRNA-200a;膠質(zhì)瘤;預(yù)后

摘要目的：探討膠質(zhì)瘤組織中microRNA-200a的表達(dá)及其在預(yù)測膠質(zhì)瘤患者預(yù)后中的價(jià)值。方法：采用RT-PCR方法檢測63例膠質(zhì)瘤及14例正常腦組織中microRNA-200a的表達(dá)水平。結(jié)果：膠質(zhì)瘤組織中microRNA-200a的表達(dá)水平高于正常腦組織中的表達(dá)水平(P<0.001)。膠質(zhì)瘤組織中microRNA-200a的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤組織學(xué)分級(jí)有關(guān)(P<0.001)，而與患者年齡、性別、KPS評(píng)分、腫瘤直徑等均無關(guān)(P均>0.05)。microRNA-200a高表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者死亡風(fēng)險(xiǎn)較低表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者高(P<0.001)。結(jié)論：microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)增高，可作為評(píng)價(jià)膠質(zhì)瘤預(yù)后的獨(dú)立因素。

AbstractAim: To investigate the relationship between microRNA-200a expression and clinicopathologic factors in glioma tissue and assess its value in predicting the prognosis of glioma patients.Methods: The microRNA-200a expression of 63 cases of glioma and 14 cases of normal brain tissue were detected by RT-PCR.Results: The microRNA-200a expression in glioma tissue was significantly higher than that in normal brain tissue(P<0.001). The high expression of microRNA-200a was related with histological grade(P<0.001), but not with age，gender，tumor size，or KPS scale(P>0.05).The microRNA-200a appeared as an independent prognostic factor(P<0.001).Conclusion: Increased microRNA-200a expression in glioma tissue could be an independent factor predicting poor prognosis.

微小RNA(microRNA)是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)控功能的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA，通過與靶基因mRNA的3’UTR完全或不完全配對(duì)干擾相關(guān)microRNA的翻譯，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后基因的表達(dá)。microRNA表達(dá)水平的改變與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，且microRNA可通過其靶基因發(fā)揮癌基因或抑癌基因作用。該研究采用RT-PCR方法檢測microRNA-200a在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的表達(dá)情況，并分析其與膠質(zhì)瘤臨床病理特征的關(guān)系，探討microRNA-200a在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，從而為膠質(zhì)瘤的早期診斷及治療提供新的思路。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源收集2004年1月至2010年12月清華大學(xué)玉泉醫(yī)院收治的63例膠質(zhì)瘤手術(shù)患者腫瘤切除標(biāo)本，所有病例均具有完整病歷資料(表1)，其中男41例，女22例；年齡17～76(46．9±8.7)歲；根據(jù)WHO 2007年中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí) 11 例，Ⅱ級(jí) 17例，Ⅲ級(jí) 15 例，Ⅳ級(jí) 20 例；所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放化療，術(shù)后行同步放化療：采用直線加速器放療，根據(jù)頭顱MRI定位，采用局部擴(kuò)大放療，總劑量60 Gy，分30次，共6周；同時(shí)口服替莫唑胺，每日75 mg/m2，共42 d。另外14例正常腦組織標(biāo)本取自同期因顱腦損傷或腦出血需行內(nèi)減壓術(shù)的患者，術(shù)后病理檢查證實(shí)均為正常腦組織。該研究獲得清華大學(xué)玉泉醫(yī)院倫理委員會(huì)同意及患者家屬簽字認(rèn)可，操作符合臨床試驗(yàn)倫理規(guī)范。

1.2膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中microRNA-200a的檢測采用Trizol法提取標(biāo)本的總RNA，提取的RNA分裝保存于-80 ℃冰箱或立即用于逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄及RT-PCR按照試劑盒說明書采用兩步法完成，以RNU6B為內(nèi)參，采用相對(duì)定量法進(jìn)行計(jì)算。所用試劑中Trizol購自美國Invitrogen公司，TaqMan microRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、TaqMan 2×PCR Master Mix、逆轉(zhuǎn)錄特異性引物、RT-PCR引物及探針均購自美國ABI公司。

1.3隨訪采用電話或者門診隨訪方式對(duì)患者進(jìn)行隨訪，計(jì)算生存期時(shí)以患者初次手術(shù)治療為起點(diǎn)，以因腫瘤進(jìn)展所致死亡為觀察終點(diǎn)，隨訪至截止日期前已死亡者獲完全數(shù)據(jù)，仍存活者、期間失訪者或死于其他疾病者獲刪失數(shù)據(jù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。根據(jù)膠質(zhì)瘤組織中microRNA-200a表達(dá)水平的均值將其分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的表達(dá)水平比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)；膠質(zhì)瘤組織中microRNA-200a的表達(dá)水平與患者臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析；采用Kaplan-Meier分析、Log-rank檢驗(yàn)和Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型評(píng)價(jià)不同臨床病理特征與生存期的關(guān)系。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的表達(dá)microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的相對(duì)表達(dá)水平分別為(23.42±0.32)和(9.12±0.45)(t=21.520,P<0.001)。

2.2microRNA-200a的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征的關(guān)系microRNA-200a的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，與其他病理特征如年齡、性別、KPS評(píng)分、腫瘤直徑等無關(guān)(表1)。

表1　microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織

2.3microRNA-200a的表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的關(guān)系microRNA-200a高、低表達(dá)組患者的生存曲線見圖1(χ2=9.063，P=0.032)，隨訪截止至2014年12月，共47例患者死亡，其中microRNA-200a高表達(dá)組28例，microRNA-200a低表達(dá)組19例。Cox分析結(jié)果見表2。

圖1　microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系

臨床病理特征單因素分析χ2P多因素分析95%CIPWaldχ2年齡2.3540.3810.692～2.3400.8634.049性別1.5530.8900.535～1.9170.7549.753組織學(xué)分級(jí)12.327<0.0011.064～4.122<0.00113.847KPS評(píng)分1.4060.3241.381～5.2850.3565.093腫瘤直徑2.0050.4450.652～2.6310.2947.127輔助治療5.7800.5170.574～3.682<0.0018.214microRNA-200a表達(dá)水平29.640<0.0011.352～5.421<0.0015.170

3討論

膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，其惡性程度高，易復(fù)發(fā)，預(yù)后較差，5 a生存率為30%～70%,生存期僅為9～12個(gè)月[1]。已有研究[2]表明膠質(zhì)瘤患者的臨床預(yù)后與許多因素有關(guān)，如病理分級(jí)、患者術(shù)前KPS評(píng)分、腫瘤的生長部位等，但是患者的異質(zhì)性使得這些因素不能精確評(píng)估患者預(yù)后。因此深入探討膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，從而為膠質(zhì)瘤的治療提供新的思路非常重要。

目前發(fā)現(xiàn)，microRNA可通過調(diào)控其靶基因在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起到促進(jìn)或者抑制作用，并且與膠質(zhì)瘤臨床病理特征密切相關(guān)，因此通過檢測膠質(zhì)瘤組織中microRNA的表達(dá)情況可為判斷患者預(yù)后提供依據(jù)，如microRNA-34a[3]、microRNA-206[4]、microRNA-200b[5]在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)下調(diào)，microRNA-210[6]、microRNA-155[7]、microRNA-132[8]等在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)上調(diào)均與膠質(zhì)瘤患者預(yù)后密切相關(guān)。microRNA-200a定位于染色體1p36.33[9]。在該研究中作者發(fā)現(xiàn)，microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平高于正常腦組織中的表達(dá)水平。作者進(jìn)一步分析了microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平與患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：microRNA-200a的表達(dá)水平與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，而與膠質(zhì)瘤患者其他臨床病理特征如性別、KPS評(píng)分、腫瘤直徑、患者年齡無關(guān)，與以往研究[10-13]結(jié)果一致。

已有研究[14]表明microRNA-200a在卵巢癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為判斷卵巢癌預(yù)后的獨(dú)立因素。同時(shí)，也有研究者[15]發(fā)現(xiàn)microRNA-200a也可以作為肝細(xì)胞癌預(yù)后判斷的獨(dú)立因素。該研究中作者發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)瘤組織學(xué)分級(jí)直接影響患者總生存期，這與之前的研究[16-17]結(jié)果一致；另外，microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平與患者的總生存期有關(guān)。

總之，在該研究中作者發(fā)現(xiàn)microRNA-200a在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)增高，且與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后有關(guān)，可作為評(píng)價(jià)膠質(zhì)瘤預(yù)后的獨(dú)立因素。但關(guān)于microRNA-200a在膠質(zhì)瘤中的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

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MicroRNA-200a expression in glioma tissue and its value in predicting prognosis

JIYuchen1),LIYan1),HUJingxia1),ZHANGHongbo2)，ZUOHuancong1)

1)DepartmentofNeurosurgery,YuquanHospital,TsinghuaUniversity,Beijing1000492)DepartmentofNeurosurgery,XinhuaHospitalofHubeiProvince,Wuhan430015

Key wordsmicroRNA-200a;glioma;prognosis

中圖分類號(hào)R730.264

通信作者#，男，1945年6月生，碩士，教授，主任醫(yī)師，研究方向：顱腦疾病的臨床與基礎(chǔ)，E-mail:zuohc@tsinghua.edu.cn

doi：10.13705/j.issn.1671-6825.2016.01.027