原花青素對應(yīng)激大鼠hs-CRP、TNF-α和h-FABP表達(dá)的影響

魏　嚴(yán)　吳紅芳　劉安麗　華春秀　王　靜

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校病理學(xué)教研室，河南　南陽　473061)

?

原花青素對應(yīng)激大鼠hs-CRP、TNF-α和h-FABP表達(dá)的影響

魏嚴(yán)吳紅芳劉安麗華春秀王靜

(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校病理學(xué)教研室，河南南陽473061)

摘要〔〕目的探討原花青素對應(yīng)激大鼠超敏C-反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)表達(dá)的作用。方法選擇Wistar雄性大鼠60只，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分成對照組、模型組及原花青素組各20只。對模型組及原花青素組進(jìn)行足底電刺激應(yīng)激建模，對照組不進(jìn)行建模，持續(xù)20 d；造模前對原花青素組胃灌注原花青素(100 mg·kg-1·d-1)，而對照組及模型組均胃灌注等劑量的生理鹽水20 d。另選16只Wistar雄性大鼠進(jìn)行亞組實驗，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分成A1、A2、A3、A4亞組，每組4只，均使用原花青素進(jìn)行干預(yù)，其中A1組使用劑量為100 mg·kg-1·d-1；A2組為50 mg·kg-1·d-1，刺激時間均為20 d；A3和A4組使用劑量均為100 mg·kg-1·d-1，但A3組10 d，A4組的刺激時間為15 d。檢測各組大鼠血漿中的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平以及心肌梗死范圍；并采用多元線性回歸方法分析影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關(guān)因素。結(jié)果原花青素組及模型組的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平均顯著高于對照組，且原花青素組低于模型組(均P<0.05)；對照組大鼠未發(fā)現(xiàn)心肌梗死，原花青素組與模型組的心肌梗死范圍顯著高于對照組，且原花青素組低于模型組(P<0.05)；通過多元線性回歸分析法分析可知，原花青素劑量、足底電刺激時間、灌胃時間及心肌梗死范圍均為影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關(guān)因素。結(jié)論原花青素能夠明顯降低應(yīng)激大鼠的hs-CRP、TNF-α以及h-FABP等指標(biāo)的表達(dá)，具有預(yù)防和治療心臟損傷的作用，值得臨床深入研究。

關(guān)鍵詞〔〕原花青素；超敏C反應(yīng)蛋白；腫瘤壞死因子；心型脂肪酸結(jié)合蛋白

第一作者：魏嚴(yán)(1982-)，女，碩士，講師，主要從事病理學(xué)與病理生理學(xué)、心臟應(yīng)激保護(hù)方面的研究。

近年來有報道發(fā)現(xiàn)原花青素具有清除氧自由基和抗感染性反應(yīng)及抗纖維化等諸多作用，但關(guān)于其對于心臟損傷的影響作用卻無相關(guān)報道〔1〕。超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)是機(jī)體遭受微生物入侵亦或組織損傷等炎性刺激后肝細(xì)胞合成的一種急性時相蛋白，可作為心臟炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物；腫瘤壞死因子(TNF-α)是可直接殺傷機(jī)體內(nèi)腫瘤細(xì)胞而對正常細(xì)胞并無明顯影響的一種細(xì)胞因子，近年來研究顯示二者水平均在心臟病變患者中存在較大變化，可作為患者心臟損傷的評價指標(biāo)。人心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-PABP)在心臟細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含量較高，可對心肌收縮供應(yīng)能量，是一種新型的心臟損傷標(biāo)志物。本研究旨在探索原花青素對心臟損傷的臨床治療效果及機(jī)制。

1資料和方法

1.1臨床資料選擇Wistar雄性大鼠60只(南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校病理學(xué)教研室提供)，8～10周齡，體重220～260 g，平均(250.4±13.5)g。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分成對照組、模型組及原花青素組各20只。另選16只Wistar雄性大鼠進(jìn)行亞組實驗，8～10周齡，體重220～250 g，平均(248.6±12.6)g。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分成A1、A2、A3、A44個亞組，每組4只。各組大鼠的周齡、體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1基礎(chǔ)實驗對模型組及原花青素組大鼠制作足底電刺激應(yīng)激模型，將大鼠于玻璃箱內(nèi)固定30 min，后移至電足休克籠內(nèi)進(jìn)行足底電刺激30 min，持續(xù)20 d；對照組大鼠不進(jìn)行足底電刺激。造模前對原花青素組大鼠行胃灌注原花青素，劑量為100 mg·kg-1·d-1，而對照組及模型組均胃灌注等劑量的生理鹽水，各組灌胃時間均為20 d。

1.2.2原花青素延伸實驗對另16只大鼠均按相同方法建立足底電刺激應(yīng)激模型，并應(yīng)用原花青素進(jìn)行干預(yù)。其中A1和A2組刺激時間均為20 d，但A1組使用原花青素劑量為100 mg·kg-1·d-1；A2組為50 mg·kg-1·d-1。A3和A4組均使用劑量為100 mg·kg-1·d-1原花青素進(jìn)行干預(yù)，但A3組的刺激時間為10 d，A4組的刺激時間為15 d。四組的其他處理方法相同。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1處死大鼠后剔出心房、右室和藍(lán)染區(qū)域利用日立7600型全自動生化分析儀(日本日立公司生產(chǎn))檢測各組大鼠血漿的hs-CRP、TNF-α水平，試劑盒均來自北京科美東亞生物公司，嚴(yán)格依照說明書進(jìn)行操作。

1.3.2冰凍切片后經(jīng)TTC染色、分離、濾紙吸干利用德靈全自動生化免疫分析儀(德靈公司生產(chǎn))檢測h-FABP水平，試劑盒為儀器自配，檢測方法采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法。

1.3.3心肌梗死范圍指標(biāo)稱重計算心肌梗死區(qū)質(zhì)量在左心室質(zhì)量中的比例(IW/WLV)以及缺血區(qū)質(zhì)量在左心室質(zhì)量中的比例(WR/WLV)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析和SNK-q檢驗。相關(guān)因素分析使用多元線性回歸分析法。

2結(jié)果

2.1各組大鼠血漿中hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平比較原花青素組及模型組的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平均顯著高于對照組，且原花青素組低于模型組(均P<0.05)。見表1。

2.2各組大鼠的心肌梗死范圍情況比較對照組大鼠未發(fā)現(xiàn)心肌梗死，且原花青素組WR/WLV〔(33.7±2.2)%〕、IW/WLV〔(21.4±3.5)%〕低于模型組〔(45.2±7.9)%、(31.6±5.8)%〕(P<0.05)。

2.3影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關(guān)因素分析hs-CRP、TNF-α及h-FABP三者之間的變化情況趨于一致，三者均呈現(xiàn)出共同上升(下降)的趨勢，因此將其三者作為一個整體進(jìn)行研究，將原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平作為因變量，將原花青素劑量、足底電刺激時間、灌胃時間、心肌梗死范圍作為自變量，通過多元線性回歸分析法分析可知，原花青素劑量、足底電刺激時間、灌胃時間及心肌梗死范圍均為影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相關(guān)因素(P<0.05)。見表2。

表1　各組大鼠血漿中hs-CRP、TNF-α及

與對照組比較:1)P<0.05；與模型組比較:2)P<0.05

表2　影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的

3討論

為急性心肌梗死患者檢測心肌損傷標(biāo)志物具有一定的防治作用。hs-CRP、TNF-α作為心臟損傷的常用指標(biāo)，近年來研究較多，而h-FABP作為一種新型心臟損傷標(biāo)志物，則未受到足夠關(guān)注，邱潔等〔2，3〕研究指出，h-FABP能在較大程度上反映患者的心臟損傷嚴(yán)重度，對其進(jìn)行檢查具有重要意義。Verardo等〔4〕報道，原花青素能較好地預(yù)防大鼠的心肌損傷，對有心肌梗死的大鼠具有較好的癥狀緩解作用。h-FABP作為心臟細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含量較高的蛋白質(zhì)，可對心肌收縮供應(yīng)能量，若心肌細(xì)胞處于缺血狀態(tài)，則其能夠由心肌細(xì)胞釋放進(jìn)入血液，從而為心肌的收縮供應(yīng)能量。代謝動力學(xué)實驗結(jié)果顯示，h-FABP的血漿含量水平在心肌梗死產(chǎn)生的3 h后即可上升至峰值，同時其在有不穩(wěn)定心絞痛的患者群體中的水平亦有明顯上升，即使是微小性心肌梗死，h-FABP水平也會上升〔5〕。hs-CRP是一類價值較高的心臟標(biāo)志物，其在心肌梗死時的含量明顯上升，同時在心肌缺血時亦有明顯的上升趨勢。同時心臟是形成內(nèi)源性TNF-α的重要區(qū)域，TNF-α能夠經(jīng)過各類途徑誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡，因此上述三類指標(biāo)均可用于評價心臟損傷的情況〔6〕。本研究結(jié)果提示足底電刺激能對大鼠產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，造成hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平顯著增高；而原花青素干預(yù)能夠有效改善其炎性癥狀，抑制心肌細(xì)胞的損傷，與Baselga-Escudero等〔7〕的報道結(jié)果相符合。同時，證實了原花青素能夠明顯改善大鼠的心肌損傷。此外，研究還提示，足底電刺激時間延長可能加重大鼠的心肌損傷，造成心肌梗死范圍增大，從而使hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平增高；而原花青素具有抗氧化作用及對心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，劑量越高、灌胃時間越長，其作用效果越明顯。因此原花青素劑量、灌胃時間、足底電刺激時間及心肌梗死范圍均能在一定程度上影響原花青素組hs-CRP、TNF-α及h-FABP的水平變化。Zhang等〔8〕報道，原花青素的應(yīng)用劑量為100 mg·kg-1·d-1時對心肌損傷的預(yù)防作用明顯大于50 mg·kg-1·d-1時的劑量，這再次證實了本文的研究結(jié)果。

參考文獻(xiàn)4

1Luiz RL，Vila TV，de Mello JC，etal.Proanthocyanidins polymeric tannin from Stryphnodendron adstringens are active against Candida albicans biofilms 〔J〕.BMC Complement Altern Med，2015；19(15)：68-9.

2邱潔，曹愛紅，張萍，等.葡萄籽原花青素聯(lián)合阿托伐他汀治療老年頸動脈粥樣硬化患者的觀察〔J〕.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2012；31(5)：371-5.

3鐘書輝，張艷，李樂雯，等.原花青素對心肌缺血再灌注大鼠血清T-AOC、CRP及NO的影響〔J〕.中國生化藥物雜志，2011；32(3)：228-9.

4Verardo V，Cevoli C，Pasini F，etal.Analysis of oligomer proanthocyanidins in different barley genotypes using high-performance liquid chromatography-fluorescence detection-mass spectrometry and near-infrared methodologies 〔J〕.J Agric Food Chem，2015；63(16)：4130-7.

5趙雅寧，曹書華，郭霞，等.葡萄籽原花青素對慢性間歇性低氧大鼠腦組織炎癥反應(yīng)及學(xué)習(xí)記憶能力的影響〔J〕.鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2014；49(1)：29-32.

6苗智如，廖麗娜，張敏敏，等.原花青素及其組合物對泡沫細(xì)胞形成的影響〔J〕.浙江醫(yī)學(xué)，2013；35(18)：1644-7.

7Baselga-Escudero L，Pascual-Serrano A，Ribas-Latre A，etal.Long-term supplementation with a low dose of proanthocyanidins normalized liver miR-33a and miR-122 levels in high-fat diet-induced obese rats 〔J〕.Nutr Res，2015；35(4)：337-45.

8Zhang H，Sun XQ，Cao JM，etal.Protective effect of epimedium combined with oligomeric proanthocyanidins on exercise-induced renal ischemia-reperfusion injury of rats 〔J〕.Int J Clin Exp Med，2014；7(12)：5730-6.

〔2015-05-11修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

基金項目：南陽市科技攻關(guān)計劃項目(No.2014GG039)

中圖分類號〔〕R541〔

文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2016)01-0040-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.018