食源性病原微生物檢測與控制技術(shù)研究新進展

唐俊妮，湯 承(西南民族大學生命科學與技術(shù)學院，四川 成都 610041)

【特約專稿】

食源性病原微生物檢測與控制技術(shù)研究新進展

唐俊妮，湯 承
(西南民族大學生命科學與技術(shù)學院，四川 成都 610041)

摘 要：最近在食源性病原微生物流行病學調(diào)查，檢測手段以及致病因子控制方面出現(xiàn)了許多新的研究進展.特別是基因組序列以及基因組學和后基因組學工具的廣泛應用，為病原微生物遺傳學和生理學提供了豐富信息，也為病原微生物快速檢測和控制研究提供了大量新手段.主要針對最近關(guān)于食源性病原微生物的檢測和控制技術(shù)研究進展進行綜述.目的是為食品安全管理以及食源性病原微生物控制策略提供技術(shù)支撐和帶來一些新思考.

關(guān)鍵詞：食源性病原微生物；快速檢測技術(shù)；控制技術(shù)

隨著食品工業(yè)的快速發(fā)展，食品安全管理、食品衛(wèi)生及消費者習慣改變，以及氣候和環(huán)境狀況的影響，由病原微生物引起的疾病對公共衛(wèi)生造成了嚴重威脅.食源性病原微生物通過污染的食物進入機體，而食物污染可以出現(xiàn)在食物鏈的任何一個環(huán)節(jié).因此，無論是發(fā)展中國家還是發(fā)達國家食源性疾病時常暴發(fā)[1].我國由病原微生物引起的食物中毒疾病約占整個食物中毒事件的56.1%.近年來，我國針對病原微生物的監(jiān)測取得了很大進步，2000年監(jiān)測覆蓋省份為32.3% (10/31)，覆蓋城市為10.5% (35/334)，到2009年覆蓋的省份已經(jīng)達到71.0% (22/31)，覆蓋的城市達到51.2% (171/334).2000年時我國只監(jiān)測了單增李斯特氏菌，沙門氏菌和大腸桿菌O157: H7三種病原微生物，2009年已經(jīng)增加到九種病原微生物，并且，每年檢測的食物種類也在不斷增加[2].由此可見，食源性病原微生物的監(jiān)測與控制對于保障食品安全具有重要意義.

最近，在食源性病原微生物的流行病學調(diào)查、檢測與控制技術(shù)上出現(xiàn)了許多新的研究進展.本文主要針對這些新進展進行綜述，目的是為食源性病原微生物的檢測和防控提供理論與技術(shù)支撐.

1　食源性病原微生物檢測技術(shù)新進展

食源性病原微生物通過污染的食物傳播疾病，因此，針對病原微生物的檢測是食品標準規(guī)定的常規(guī)必檢項目.目前用于不同食源性病原微生物的檢測方法歸納起來可分為傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測技術(shù)，分子檢測技術(shù)以及免疫學檢測技術(shù)等[3].

1.1 傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測技術(shù)

傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測技術(shù)主要是根據(jù)微生物生長繁殖特性，利用選擇性培養(yǎng)基篩選和分離病原微生物，再結(jié)合形態(tài)學特征和生理生化特性對病原微生物進行鑒定.現(xiàn)行的國內(nèi)和國際標準仍舊以傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測方法為主.但是，為了加快檢測過程，一些公司針對細菌的生化特性鑒定相繼開發(fā)了一系列快速鑒定系統(tǒng)，如Micro-ID系統(tǒng)、Minitek系統(tǒng)和API系統(tǒng)等，能夠結(jié)合傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)技術(shù)對病原微生物進行快速輔助診斷.以食物樣品中分離檢測單增李斯特氏菌為例，通常采用的富集培養(yǎng)基有BLEB(buffered Listeria enrichment broth)，F(xiàn)B(Fraser broth)以及UVM (University of Vermont Medium)等，而通常采用的分離鑒定平板為PALCAM和其它的顯色培養(yǎng)基，關(guān)于單增李斯特氏菌檢測的參考方法如GB 4789.30-2010，F(xiàn)DABAM，ISO 11290方法以及USDA-FSIS等通常采用培養(yǎng)檢測或計數(shù)檢測[4-5].傳統(tǒng)的檢測方法通常需要4 ～7天時間，檢測過程繁瑣，無法滿足快速檢測要求.另外，在傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測過程中，人們逐漸意識到食品中需要檢測的病原微生物種類在逐漸增多.通常只針對單一病原微生物進行富集培養(yǎng).而目前面臨的現(xiàn)實是同時要監(jiān)測多種病原微生物.這樣以來，檢測過程繁瑣，檢測成本高，檢測時間長.如果能針對多種待檢病原微生物同時進行共增菌培養(yǎng)，將大大簡化富集操作，這對于傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測來說應該是非常重要的技術(shù)改進.國內(nèi)外現(xiàn)有研究中，涉及到共增菌培養(yǎng)技術(shù)研究的文獻主要包括沙門氏菌和志賀氏菌的共增技術(shù)[6]，金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及沙門氏菌的共增技術(shù)[7]，金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和單增李斯特桿菌的共增菌技術(shù)[8]，大腸桿菌、沙門氏菌及單增李斯特桿菌的共增菌技術(shù)[9]，副溶血弧菌、霍亂弧菌及沙門氏菌的共增菌技術(shù)[10]，以及筆者實驗室研究的金黃色葡萄球菌、單增李斯特桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌和大腸桿菌O:157共增菌技術(shù)[11].這些研究滿足了背景微生物復雜情形下對部分特定目標病原微生物進行共增菌的要求，為同時檢測多種病原微生物的前期富集平臺奠定基礎.

1.2 分子檢測技術(shù)

分子檢測技術(shù)主要包括常規(guī)PCR技術(shù)，多重PCR技術(shù)，實時/定量PCR技術(shù)，環(huán)介導等溫擴增技術(shù)(LAMP)，DNA微陣列技術(shù)，以及下一代測序技術(shù)等[1].這些技術(shù)具有快速，特異，敏感和節(jié)約時間以及勞動成本的特點而使用廣泛.如Deekshit等[12]針對沙門氏菌SPI-2的兩個毒力島基因(ssaT、sseF)、沙門氏菌特異性基因(invA)、以及三個抗生素抗性基因(floR、sil1、tetG)設計了六對引物，建立了一種多重PCR檢測方法.該方法不僅可直接檢測食品中的沙門氏菌，還能對沙門氏菌的耐藥基因進行調(diào)查.王娉等[13]利用金黃色葡萄球菌nuc基因、耐甲氧西林mecA基因和四種傳統(tǒng)腸毒素基因(sea、sec、sed、see)建立了六重PCR檢測體系，成功應用于牛奶、肉餡和牛肉樣品中金黃色葡萄球菌檢測.筆者實驗室針對金黃色葡萄球菌、單增李斯特氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7和福氏志賀氏菌五種食源性病原微生物建立了一種多重PCR方法.分別針對金黃色葡萄球菌的16S rDNA基因、單增李斯特氏菌的hlyA基因、沙門菌的invA基因、大腸桿菌O157:H7的eaeA基因和福氏志賀菌的ipaH基因設計五對特異性引物，該方法對金黃色葡萄球菌、單增李斯特氏菌、腸炎沙門菌、大腸桿菌O157:H7、福氏志賀菌的檢出限分別為6.4、800、32、32和160 pg基因組DNA.該方法為食品中五種常見病原微生物快速檢測奠定基礎[14-15].Yang 等[16]利用免疫磁性分離技術(shù)與多重PCR技術(shù)開發(fā)了一種能同時檢測大腸桿菌O157:H7、單增李斯特氏菌和鼠傷寒沙門氏菌的方法，可直接用于生菜、番茄和牛肉樣品中，該技術(shù)沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7、單增李斯特氏菌的最低檢測限分別為5.1×103CFU/ g、7.5×103CFU/ ml和8.4×103CFU/ ml.Villamizar-Rodríguez等[17]建立了一種能同時檢測單增李斯特氏菌、金黃色葡萄球菌、空腸彎曲桿菌、沙門氏菌、蠟樣芽胞桿菌等九種常見食源性病原微生物的多重PCR檢測法，該方法包括了細菌預增菌步驟和毛細管電泳，可直接用于肉類、乳制品、罐頭魚、糕點產(chǎn)品等食物樣品檢測.另外，目前應用較廣的實時熒光定量PCR技術(shù)是通過在反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積進行實時監(jiān)測反應進程.與常規(guī)的PCR相比，實時熒光定量PCR能夠?qū)NA模板進行定量檢測，特異性更強，靈敏度更高，還可減少擴增產(chǎn)物的交叉污染.Cremonesi等[18]利用TaqMan熒光探針建立實時PCR對阪崎腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌等二十種常見食源性病原微生物進行檢測，靈敏度達1pg基因組DNA，相當于1cfu/ mL.Niu等[19]建立了基于熔解曲線分析的雙管通路多重實時PCR(MCMRT-PCR)能同時檢測六種食源性病原微生物(大腸桿菌、志賀氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、單增李斯特氏菌、副溶血型弧菌)，該方法用在牛奶樣品中的靈敏度可達105CFU/ mL.基于PCR技術(shù)的廣泛使用，一些儀器公司也在大力開發(fā)便攜式的PCR儀，例如Pockit?公司開發(fā)的現(xiàn)場便攜式實時熒光PCR儀，將PCR系統(tǒng)和電泳系統(tǒng)合二為一，最快能在60 min完成檢測.由于其體積小、重量輕、靈活性強能較好適應特殊地區(qū)樣品快速檢測.但是，便攜式設備也擺脫不了提取樣品核酸的復雜過程，來自不同樣品的核酸快速提取和保存是目前分子檢測需要突破的關(guān)鍵技術(shù).筆者實驗室探索的利用微波加熱原理快速提取細菌DNA技術(shù)可用于常規(guī)PCR檢測，該方法具有廣泛的適用性，提取的DNA能滿足食源性病原微生物的常規(guī)PCR檢測需求，為微生物分子檢測中DNA模板的獲取提供了快速手段[20].

另一個環(huán)介導等溫擴增技術(shù)(LAMP)由日本學者Notomi在2000年提出的一種新型基因診斷技術(shù)，該技術(shù)是利用具有鏈置換特性的Bst DNA聚合酶，以及四條能夠識別靶序列上六個特異區(qū)域的引物，在等溫條件下(63℃)對核酸進行擴增，最后通過觀察白色渾濁對檢測結(jié)果進行判斷[21].LAMP技術(shù)不需要特殊的儀器，肉眼就可觀察結(jié)果.宋濤平[22]利用金黃色葡萄球菌nuc基因的六條引物建立了可視化的LAMP檢測法，檢測靈敏度達0.001 ng/μL.胡惠秩[23]等利用熒光染料PMA與LAMP技術(shù)結(jié)合建立了一種能直接檢測滅菌牛乳中金黃色葡萄球菌的方法，該方法不僅靈敏度高(3.2 CFU/ mL)，還能對體系中死/活菌進行區(qū)分.Oh[24]等結(jié)合鉻黑T(EBT)比色法建立一種用肉眼觀察結(jié)果的LAMP檢測系統(tǒng)，可用于大腸桿菌O157:H7、沙門氏菌和副溶血性弧菌的檢測.Wang 等[25]比較了內(nèi)部實時LAMP系統(tǒng)與商品化的LAMP系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)商品化LAMP系統(tǒng)無假陽性結(jié)果，而內(nèi)部實時LAMP系統(tǒng)假陽性結(jié)果較為嚴重.可見，LAMP系統(tǒng)假陽性問題是目前急需解決的關(guān)鍵問題.

分子雜交技術(shù)和基因芯片技術(shù)也已廣泛應用于食源性病原微生物的檢測中.Wu[26]利用量子點標記DNA探針構(gòu)建了一種大腸桿菌的熒光原位雜交檢測法，首次實現(xiàn)了熒光原位雜交技術(shù)對大腸桿菌的檢測.Almeida等[27]利用肽核酸探針建立一種沙門氏菌的熒光原位雜交檢測法.該方法直接對血液、糞便以及嬰兒奶粉樣品進行檢測，準確度和特異性高達100%.Zadernowska等[28]將酶聯(lián)免疫熒光法、ISO傳統(tǒng)沙門氏菌檢測法以及熒光原位雜交法用于牛肉、豬肉、禽肉樣品中沙門氏菌檢測并進行方法的比較，發(fā)現(xiàn)熒光原位雜交法特異性最強，敏感度較高，更適用于肉類樣品中沙門氏菌快速檢測.基因芯片技術(shù)將探針分子固定于芯片表面，并與標記的樣品分子進行雜交，通過檢測雜交信號強度獲取樣品分子信息，從而鑒定細菌種類[29].Guo等[30]利用沙門氏菌O抗原開發(fā)了一塊能鑒定沙門氏菌46種血清型的高通量基因芯片，靈敏度可達到50 ng基因組DNA.Gomes等[31]在DNA芯片中植入16個由147個堿基組成的探針，可對水中金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等病原微生物進行監(jiān)測.高興等[32]利用Oligo 6.0和Clustal X軟件設計探針并制備基因芯片，用于痢疾志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、單增李斯特氏菌、金黃色葡萄球菌和肉毒梭菌等九種食源性病原微生物的檢測，基因組DNA檢測靈敏度約為102～103pg/μl，芯片重復性變異系數(shù)(CV)值＜15%.但是，基因芯片高成本是限制該方法發(fā)展的一大難題，若想將基因芯片技術(shù)廣泛應用于食源性病原微生物的檢測，還須解決簡化樣品制備、簡化標記操作等技術(shù)核心.

1.3 免疫學檢測技術(shù)

免疫學檢測技術(shù)以病原微生物作為免疫原，制備相應的特異性抗體，通過抗原抗體特異性結(jié)合進行檢測.免疫學方法因操作簡便、快速成為目前研究的主流方向.近些年，關(guān)于酶聯(lián)免疫吸附法檢測食源性病原微生物的報道較多.如Brooks等[33]建立的雙抗夾心ELISA可以對不同血清型沙門氏菌進行檢測，方法敏感性為99.9%，診斷特異性為99.6%.Park等[34]建立雙抗夾心ELISA方法檢測阪崎桿菌，特異性較好，在嬰兒配方奶粉中檢測限達6.3×104cfu/ mL.Tu 等[35]利用重鏈可變區(qū)抗體和單克隆抗體建立的夾心ELISA方法能檢測巴氏殺菌奶中的單增李斯特氏菌，最低檢出限為1×104cfu/ mL.Galikowska等[36]利用噬菌體代替抗體建立ELISA法可用于沙門氏菌和大腸桿菌的檢測，其檢測靈敏度為106cfu/ mL.筆者實驗室也建立了快速檢測金黃色葡萄球菌新型腸毒素SEI 和SEM的雙抗夾心酶聯(lián)免疫方法，能夠定性和定量檢測新型腸毒素SEI和SEM，具有檢測準確度高等優(yōu)點[37-38].目前，酶聯(lián)免疫法作為檢測食源性病原微生物的首選廣泛應用于科研和檢測機構(gòu)，但是存在的問題是試劑盒的穩(wěn)定性需要突破.

另一種免疫熒光法是以熒光素標記的抗體來實現(xiàn)對食源性病原微生物的檢測，該方法由于靠標記物本身發(fā)光，和普通有色物質(zhì)的光吸收相比具有更高的靈敏度.最常用的熒光標記素主要有免疫熒光微球和量子點.McLauchlin等[39]建立間接免疫熒光方法可直接檢測奶酪中的單增李斯特氏菌.Wen等[40]利用免疫磁球微球和免疫熒光微球結(jié)合沙門氏菌，可直接在熒光顯微鏡下檢測夾心免疫復合物，并用熒光光譜儀進行定量，該方法在105～107cfu/ mL線性范圍效果良好，最低檢測限達10 cfu/ mL.張賽等[41]利用免疫磁珠與熒光免疫層析技術(shù)相結(jié)合直接用于單增李斯特氏菌檢測，其特異性強，人工污染樣本最低檢測限為1×104cfu/ mL.量子點因其熒光強度強、穩(wěn)定性好、量子效率高、生物相容性好、波長可控等因素逐漸代替?zhèn)鹘y(tǒng)有機熒光染料.量子點標記抗體后可作為特異性免疫熒光探針，通過與病原微生物結(jié)合復合物的熒光強度來檢測實現(xiàn)病原微生物的定量檢測[42].Wang等[43]利用量子點標記的抗體與免疫磁珠共同作用檢測大腸桿菌O157:H7和沙門氏菌，該方法在人工污染的牛肉中最低檢測限達10 cfu/ mL.Krizkova 等[44]利用量子點與免疫磁珠開發(fā)了一種便攜式小型儀器，能快速檢測樣品中的金黃色葡萄球菌.法國梅里埃公司利用酶聯(lián)熒光測定技術(shù)(ELFA)開發(fā)一種能檢測多種食源性病原微生物的自動免疫分析儀(VIDAS)，該分析儀擺脫傳統(tǒng)酶聯(lián)反應復雜的工序，大大縮短了檢測時間，且操作簡單，可避免加叉污染，也可避免人為操作帶來的誤差.該公司進一步開發(fā)一種袖珍型VIDAS檢測儀器，便于攜帶，能較好應用于偏遠地區(qū)食源性病原微生物的檢測.

免疫膠體金技術(shù)是以膠體金作為示蹤標記物，聯(lián)合免疫層析技術(shù)進行病原微生物的檢測.現(xiàn)階段主要是利用膠體金開發(fā)快速檢測產(chǎn)品.如劉菁等[45]利用醋酸纖維薄膜作為吸附介質(zhì)聯(lián)合膠體金技術(shù)開發(fā)一種直接檢測食品中腸出血性大腸桿菌O157:H7試紙條.張國祖等[46]利用含金黃色葡萄球菌isdB蛋白單克隆抗體墊和金標抗體墊開發(fā)一種檢測金黃色葡萄球菌的檢測試紙卡，該試紙卡特異性強、準確度高，不僅能直接檢測食品污染樣本，還能用于畜禽的快速診斷.膠體金試紙條檢測不需要特殊儀器及復雜的操作，使用方便，易于掌握，檢測成本低.因此，對于檢測單一病原微生物而言免疫膠體金技術(shù)具有部分優(yōu)勢.1.4 生物傳感器

生物傳感器是將酶、抗體、抗原、核酸、細胞、微生物以及組織等生物活性物質(zhì)作為識別材料，與氧電極、場效應管、光敏管、壓電晶體等理化換能器以及信號放大裝置構(gòu)成的一種分析系統(tǒng)，它能將對生物物質(zhì)敏感程度轉(zhuǎn)換為電信號從而對病原微生物進行檢查.具有檢驗量少，分析速度快等優(yōu)點.Abdalhai等[47]開發(fā)了電化學核酸基因組生物傳感器可對新鮮牛肉中的金黃色葡萄球菌進行檢測，其在牛肉樣品中的檢測限達1.23 ng/ mL.Song等[48]利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移以及碳納米粒子結(jié)合分子雜交技術(shù)開發(fā)了一種檢測腸炎沙門氏菌的生物傳感器，其在牛奶樣品中的線性范圍為1.5×102～3×103CFU/ mL.Masdor等[49]利用抗空腸彎曲菌多克隆抗體、單克隆抗體，以及金納米粒子組建了基于石英晶體平臺的免疫傳感器，其能特異性的捕獲樣品中的空腸彎曲菌，從而減少預富集步驟，該方法的檢測限為150 CFU/ mL.Xiao等[50]將DNA探針共價固定于光纖生物傳感器內(nèi)，再利用熒光DNA分子雜交技術(shù)研制了一種便攜式光纖倏逝波傳感器，該傳感器表面可用0.5%十二烷基硫酸鈉進行再生，靈敏度高、特異性強，可代替實時PCR實現(xiàn)志賀氏菌快速檢測.Cho等[51]利用免疫磁珠與目標菌形成的“三明治”復合體和利用蛋白酶K消化釋放熒光的探針技術(shù)研制了一種可用于多種食源性致病菌檢測的原位熒光免疫傳感器，其在菠菜、雞肉、牛奶樣品中最低檢測限達5 CFU/ mL.目前關(guān)于生物傳感器的研究大多只限于實驗室，因其成本高目前還沒有辦法產(chǎn)業(yè)化，真正要實現(xiàn)生物傳感器技術(shù)檢測的多元化和大眾化還有很長的路要走.

2　食源性病原微生物控制技術(shù)新進展

上述的食源性病原微生物檢測技術(shù)新進展大大推進了病原微生物的流行病學調(diào)查和監(jiān)測范圍，為食源性病原微生物的監(jiān)管帶來了技術(shù)突破.針對食品微生物控制技術(shù)的研究也很重要，常見微生物控制技術(shù)有低溫，氣調(diào)，加熱殺菌，非加熱殺菌，干燥脫水、以及化學與生物活性成分殺菌等.本文主要針對其中的非加熱殺菌和生物活性成分殺菌進行綜述.非熱殺菌技術(shù)主要涉及超高壓均質(zhì)化技術(shù)、微波、脈沖電場、超聲波以及輻照殺菌技術(shù)等[52].生物活性成分殺菌研究主要側(cè)重于植物提取物和細菌素.

2.1 非熱殺菌技術(shù)

2.1.1 超高壓均質(zhì)化技術(shù)

超高壓均質(zhì)化技術(shù)(Ultra High-Pressure Homogenization，UHPH)作為一種連續(xù)的冷殺菌技術(shù)，是利用超高壓產(chǎn)生的對液體食品擠壓以及壓力釋放時通過高速撞擊和強烈剪切等方式來處理食品，使微生物的細胞結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞和改變，從而失去或鈍化微生物活性達到殺菌目的[53].Amador-Espejo等[54]研究發(fā)現(xiàn)UHPH條件為300Mpa，入口溫度Ti =85℃時，能夠使(～106CFU/ mL)的蠟樣芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，凝結(jié)芽孢桿菌，熱脂肪芽孢桿菌，耐熱芽孢桿菌以及枯草芽孢桿菌完全失活，并且發(fā)現(xiàn)嗜熱脂肪芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌對超高壓均質(zhì)耐受性較其它幾種微生物強.他們隨后又研究UHPH對牛奶的滅菌效果，發(fā)現(xiàn)當UHPH處理條件為300 Mpa，入口溫度Ti =75和85℃時，處理后的牛奶在30和45℃條件下培養(yǎng)沒有微生物生長，與超高溫瞬時處理(UHT)乳相比較，UHPH處理乳的色澤，乳顆粒大小，粘度，緩沖能力，酒精穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)水解能力相當或更好一些，并且感官評定蒸煮味降低了[55].Dong等[56]研究發(fā)現(xiàn)當UHPH壓力條件為200，300，350 MPa入口溫度Ti約 80℃處理，對初始接菌量為6 log10cfu / ml的磷酸鹽緩沖液PBS(0.01 M，pH 7.0)和低脂牛奶(1.5%，pH 6.7)以及全脂牛奶(3.5%，pH 6.7)中的芽孢失活率進行比較，發(fā)現(xiàn)脂肪的存在并沒有對芽孢提供明顯保護作用.Hang等[57]在壓力為300 Mpa條件下20℃對副溶血性弧菌處理10min，計數(shù)未檢出活細胞.處理后的細胞顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，細胞壁皺縮，細胞質(zhì)外泄，細胞內(nèi)出現(xiàn)大量電子傳輸區(qū)域，細胞膜消失，核酸物質(zhì)以及蛋白質(zhì)聚集凝結(jié)，同時細胞膜蛋白受損，細胞膜通透性增加，造成細胞液外滲.陸海霞等[58]研究單核增李斯特氏菌在壓力為300，350，以及400 Mpa時，25℃處理15 min.細菌數(shù)目從9 Log CFU分別降到5.20，3.27和1.35 Log CFU，壓力為450 Mpa時沒有活菌存在.透射電子顯微鏡檢測發(fā)現(xiàn)細胞膜和細胞壁都被破壞了，細胞質(zhì)聚集，出現(xiàn)大量的電子傳輸區(qū)域.Valencia-Flores等[59]研究UHPH對含卵磷脂的杏仁飲料(AML)和不含卵磷脂的杏仁飲料(AM)的微生物、物理性質(zhì)(分散穩(wěn)定性、粒徑分布和疏水性)、化學性質(zhì)(氫化物指數(shù))等相關(guān)參數(shù)影響的研究發(fā)現(xiàn)UHPH壓力和入口溫度的組合對微生物具有顯著的致死效果.大多數(shù)UHPH處理的杏仁飲料的質(zhì)量比巴氏殺菌樣品高，且當壓力為300 Mpa，入口溫度為65和75℃時，處理時間小于0.7 s后得到的樣品，培養(yǎng)沒有細菌生長.UHPH處理的杏仁飲料顆粒尺寸明顯地減小，物理性質(zhì)比一般熱處理穩(wěn)定.Balamurugan等[60]研究三種不同鹽(NaCl、KCl、CaCl2)濃度對雞肉品質(zhì)以及所含單增李斯特氏菌的滅活作用.結(jié)果表明壓力600Mpa時，鹽種類、濃度和壓力處理時間對單增李斯特氏菌有顯著影響.高壓處理對于提高微生物安全性，減少家禽產(chǎn)品中的鈉鹽添加量是一種可行方法.超高壓均質(zhì)殺菌技術(shù)的研究可以使傳統(tǒng)食品加工方式發(fā)生革命性變化.

2.1.2 微波殺菌技術(shù)

微波殺菌是另一種非熱殺菌技術(shù).Bhasin等[61]采用微波650W作用5 min可以使白色念珠菌和銅綠假單胞菌完全消除，7 min可以完全消除金黃色葡萄球菌.Liu等[62]研究納米ZnO和微波加熱滅菌對真空包裝中國菜心質(zhì)量的影響.發(fā)現(xiàn)在真空包裝菜心中添加0.01～0.02 g/ kg的ZnO納米顆粒懸浮液可以減少細菌菌落數(shù).隨著ZnO納米顆粒量的增加，抗菌活性增強.利用微波加熱(915和2450 MHz)對菜心進行加熱滅菌，樣品具有良好的產(chǎn)品質(zhì)量，且微波處理條件為400 W，150 s(2450 MHz)時，總菌落數(shù)最低.他們認為最好的殺菌條件為微波加熱(400 W，150 s，2450 MHz)聯(lián)合0.02g/ kg的ZnO納米粒子，在這種處理條件下菜心樣品在廚房7天細菌總數(shù)仍＜1 log CFU/ g.微波技術(shù)已經(jīng)廣泛應用在食品工業(yè)中的殺菌方面.但也存在一些問題.如微波殺菌中的非熱效應機理以及如何量化問題.目前還缺乏快速有效的溫度探測和控制系統(tǒng).還有就是微波殺菌技術(shù)工業(yè)化設備成本相當高，影響了其使用的廣度.

2.1.3 高壓脈沖電場殺菌技術(shù)

高壓脈沖電場殺菌技術(shù)是采用高壓脈沖殺滅微生物的一種新技術(shù).Mosqueda-Melgar等[63]研究脈沖電場對大腸桿菌O157:H7、沙門氏菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、單增李斯特氏菌、空腸彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌等病原微生物的滅活作用.脈沖電場處理液態(tài)食品表明能有效消滅李斯特氏菌、大腸桿菌、沙門氏菌、大腸桿菌O157:H7等，達到巴殺滅菌的水平.但是這種殺菌方式也有局限性，脈沖電場對于液體食品中的蠟樣芽孢桿菌，空腸彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌等的殺滅效果不佳.Gurtler等[64]研究了脈沖電場對橙汁中大腸桿菌O157:H7;鼠傷寒沙門氏菌以及20株非致病性細菌的滅活效果.發(fā)現(xiàn)在相同條件下，腸出血性大腸桿菌O157:H7的失活率略高于非致病性大腸桿菌.55℃處理時，腸出血性大腸桿菌O157:H7比非致病性大腸桿菌對脈沖電場更敏感.這為研究殺滅大腸桿菌O157:H7提供一個理想的范圍.與傳統(tǒng)的加熱殺菌相比，脈沖場殺菌具有處理能耗低，時間短，升溫小，對環(huán)境和人類安全等優(yōu)點.以后應加大對該技術(shù)應用的深度和廣度研究.

2.1.4 超聲波殺菌技術(shù)

超聲波殺菌是將要殺菌的食品放在傳送裝置中勻速通過超聲波換能器實現(xiàn)殺菌過程自動化，主要用于牛奶、果汁、醬油、飲用水、水果罐頭以及酒類等液體食品的殺菌.Ayyildiz等[65]研究超聲(US)和二氧化氯(ClO2)聯(lián)合協(xié)同作用提高了廢水中大腸桿菌E-.coli和總大腸菌群的滅活效率.Baumann等[66]研究超聲和臭氧單獨使用以及聯(lián)合使用時對去除不銹鋼片表面單增李斯特氏菌生物被膜的影響.結(jié)果表明功率超聲和臭氧氧化組合可能是一種處理不銹鋼食品接觸表面細菌生物被膜的有效方法.Sesal等[67]研究頻率為30 kHz、功率為100 W超聲對生理鹽水中大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的滅活作用.大腸桿菌在超聲處理條件下死亡率顯著增加，與預期相反，金黃色葡萄球菌的數(shù)目反而增加了.說明超聲波輻照對于金黃色葡萄球菌的消除作用不顯著.Zhang等[68]研究高鐵酸鉀，超聲以及高鐵酸鉀結(jié)合超聲技術(shù)[Fe(VI)-US]對磺胺類抗生素的降解機制.結(jié)果顯示pH值和高鐵酸鉀劑量是影響抗生素降解效果最主要因素.Jiang 等[69]比較熱、微波、超聲波處理三種不同滅菌方法，對黑桑椹汁存儲期間主要生物活性以及抗氧化活性的影響.發(fā)現(xiàn)熱處理過的果汁抗氧化活性被耗盡;超聲滅菌的果汁在貯藏期間相比微波和熱處理的果汁表現(xiàn)出較高的總酚，花色素苷和抗氧化活性.盡管超聲波殺菌具有速度快，對樣品和人無傷害等優(yōu)點，但也存在消毒不徹底的問題.另外，超聲波殺菌一般只適用于液體樣品，并且處理量不能太大.以后應加大評價超聲波滅菌過程中對食品品質(zhì)影響以及超聲波和其他處理方法聯(lián)用時的協(xié)同滅菌機理研究.

2.1.5 輻照殺菌技術(shù)

盡管傳統(tǒng)加熱處理仍舊在食品工業(yè)中占主導地位，但非加熱食品處理技術(shù)如輻照殺菌的應用也較為廣泛，該技術(shù)是利用射線的穿透性殺死或抑制微生物的某些生理活動，起到延長貯藏和保鮮時間的作用.該技術(shù)里面的一種是利用短波長的紫外輻照(UVC)，UV-C具有很多好處，能夠殺滅寬廣范圍果汁中的病原微生物和腐敗微生物，減少營養(yǎng)損失和感官質(zhì)量.UV-C不會產(chǎn)生化學殘留或有毒化合物.UV-C的殺菌特性依賴于DNA吸收UV光，誘導DNA分子結(jié)構(gòu)扭曲，抑制轉(zhuǎn)錄和復制，最終導致細胞的死亡.Gouma等[70]建立了采用UV-C光照和UV-H微熱處理用來滅活接種在雞湯里的常見食源性病原微生物大腸桿菌，傷寒沙門氏菌，單增李斯特氏菌以及金黃色葡萄球菌的處理標準.Aihara等[71]采用紫外線發(fā)光二極管(UVA-LED)輻照接種有大腸桿菌DH5α的蔬菜組織.將蔬菜組織均質(zhì)化并進行細菌菌落計數(shù).UVALED對蔬菜組織的影響進行檢測.結(jié)果表明輻照處理90 min后，細菌數(shù)目減少了3.23 log.存活下來的細菌對比未經(jīng)輻照的細菌生長緩慢.說明UVA-LED在蔬菜生產(chǎn)加工行業(yè)的表面殺菌具有潛在應用價值.目前關(guān)于輻照技術(shù)在殺菌保鮮中的應用已經(jīng)取得了良好進展，但值得注意的是某些病原微生物在輻照后的貯藏時間里仍然會復活，另外，輻照殺菌過程中所產(chǎn)生的輻照味、脂肪氧化和風味損失等影響也應給予重視.

2.1.6 其它殺菌技術(shù)

Hertwig等[72]利用冷源等離子體對胡椒粉中的沙門氏菌、枯草芽胞桿菌孢子以及萎縮芽胞桿菌胞子處理30 min，結(jié)果顯示細菌數(shù)目分別降低了4.1 log CFU / g，2.4 log CFU / g和2.8 log CFU / g，同時對產(chǎn)品的色澤風味等無顯著影響.Loraine等[73]研究空化射流技術(shù)對革蘭氏陰性的大腸桿菌、肺炎克雷伯菌以及革蘭陽性丁香假單胞菌，銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的滅菌效果.結(jié)果顯示空化射流技術(shù)對革蘭陰性菌滅菌效果強于革蘭氏陽性菌.但在相同的條件下，對不同革蘭氏陰性菌的作用也存在顯著性差異.

2.2 生物活性成分殺菌研究

2.2.1 植物提取物抑菌殺菌效果

植物提取物因含有多種抑菌殺菌生物活性成分而廣泛用于病原微生物的研究.如Rakholiya等[74]對苦瓜的四個部分(莖葉，果皮、果肉和種子)進行提取，研究提取物對5株革蘭氏陽性菌株，6株革蘭氏陰性菌株和4株真菌的抑菌效果.他們的結(jié)果認為革蘭陰性桿菌對提取物比革蘭氏陽性菌或真菌菌株更敏感.苦瓜提取物可用于食品中假單胞菌屬的控制.Monu 等[75]研究了白芥子揮發(fā)油提取物對大腸桿菌、腸炎沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、陰溝腸桿菌、單增李斯特氏菌、蠟樣芽孢桿菌等的抗菌活性，以及食品成分對抗菌活性影響.檢測的微生物在白芥子揮發(fā)油濃度為8.3 g/ L時生長被抑制.白芥子揮發(fā)油對革蘭氏陰性菌抑菌活性更強，其中，腸炎沙門氏菌最敏感，2.1 g/ L就會受到抑制.大豆油使白芥子揮發(fā)油對單增李斯特氏菌抑菌活性降低，同樣，與5%大豆油作用48 h，白芥子揮發(fā)油對腸炎沙門氏菌失去抗菌活性.與1%酪蛋白酸鈉作用后，白芥子揮發(fā)油對腸炎沙門氏菌失去抗菌效果，并且對單增李斯特氏菌的抑菌效果降低.但加入淀粉，白芥子揮發(fā)油對單增李斯特氏菌和腸炎沙門氏菌的抗菌活性無顯著影響.Pagliarulo等[76]采用50%(v/ v)的乙醇水溶液提取石榴和果皮中的多酚物質(zhì)，用瓊脂擴散法檢測其對臨床分離的金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌活性.石榴提取物具有明顯的抗菌活性.特別是果汁粗提取物在濃度為20mg時對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌形成明顯的抑菌圈.果皮粗提取物也表現(xiàn)出較高的抗菌活性.Li等[77]也探討了石榴皮單寧對單增李斯特氏菌抗菌活性及其作用機制.石榴皮單寧對不同單增李斯特氏菌株的最小抑菌濃度為1.25-5.0mg/ mL.石榴皮單寧可明顯降低單增李斯特氏菌株細胞內(nèi)的ATP濃度，增加細胞外鉀和ATP濃度，以及引起細胞成分釋放.電子顯微鏡觀察表明單增李斯特氏菌細胞膜結(jié)構(gòu)明顯受損.他們得出石榴皮單寧能夠破壞單增李斯特氏菌細胞膜的完整性，導致細胞失活.認為石榴皮單寧可作為食品防腐劑用來控制食品中李斯特菌污染和減少李斯特菌病的潛在風險.Shimamura等[78]探究了一種茶提取物可降低由金黃色葡萄球菌腸毒素SEA引起疾病的風險.他們利用實時RT-PCR發(fā)現(xiàn)茶提取物明顯抑制了金黃色葡萄球菌腸毒素sea基因的轉(zhuǎn)錄，表明茶提取物可以抑制腸毒素SEA的產(chǎn)生.筆者實驗室也研究了不同食品添加劑對金黃色葡萄球菌腸毒素基因轉(zhuǎn)錄的影響，發(fā)現(xiàn)不同添加劑抑制活性差異比較顯著，茶多酚的效果比較明顯(該數(shù)據(jù)待發(fā)表).Abbassi 等[79]研究了一種歐洲和地中海盆地南部土著植物噴瓜的酚含量以及其對食源性病原微生物的抗菌活性.噴瓜的不同植物器官中總多酚含量不同，葉片和果實中酚含量比根部高6倍.0.004-2.5mg/ ml濃度時觀察到對食品病原微生物有抑菌活性，他們認為噴瓜提取物可以作為食品和制藥行業(yè)的防腐劑.Singab等[80]研究了藍花楹精油的抗菌活性，在MIC值分別為2.2 和2.9mg/ ml時，精油對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有一定的抑菌活性，并對白色念珠菌，鼠傷寒沙門氏菌和志賀氏菌也具有一定的抑制活性.Fournomiti 等[81]對牛至，鼠尾草和百里香精油在不同條件下的抗菌活性進行研究.對臨床分離的27株多重耐藥大腸桿菌，7株產(chǎn)酸克雷伯氏菌，以及16株肺炎克雷伯菌采用微量肉湯稀釋法測定其抗菌活性.研究表明產(chǎn)酸克雷伯菌最敏感，其次是肺炎克雷伯菌，大腸桿菌是對精油抑菌作用不敏感.三種精油中，百里香精油效果最佳.Ozogul等[82]采用紙片擴散法探究了11種精油(松樹油、桉樹、百里香、鼠尾草茶、薰衣草、橙、月桂、檸檬、桃金娘、迷迭香、杜松)對食源性病原微生物(大腸桿菌、甲型副傷寒沙門氏菌、肺炎克雷伯菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、嗜水氣單胞菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌、空腸彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌)的抗菌活性.精油提取的主要成分為單萜烴、α-蒎烯、檸檬烯、單萜酚、香芹酚和含氧萜、樟腦、桉葉素、桉葉素、芳樟醇、乙酸芳樟酯.雖然所測試的精油抗菌效果取決于精油化學成分變化和微生物種類，但大多數(shù)精油對一個或多個菌株都具有抗菌活性.筆者實驗室也探討兩種不同顏色(紫皮洋蔥和白皮洋蔥)的生洋蔥汁對五種常見食源性病原微生物的抑菌效果.GC-MS表明洋蔥汁的主要揮發(fā)性成分是含硫化合物.不同品種的洋蔥原汁對五種常見食源性病原微生物(金黃色葡萄球菌、單增李斯特氏菌、沙門氏菌、志賀氏菌和大腸桿菌)均具有一定的抑菌效果，抑菌效果強弱與洋蔥汁濃度呈正相關(guān)，紫色洋蔥汁的抑菌效果更好[83].在此基礎上，我們又研究了檸檬鮮榨汁對7種常見食源性病原微生物(金黃色葡萄球菌、阪崎腸桿菌、蠟樣芽胞桿菌、腸炎沙門菌、單核細胞增生李斯特菌、福氏志賀菌以及腸出血性大腸桿菌)的抑菌效果以及對細菌生物被膜形成影響.檸檬果皮和果肉主要揮發(fā)性成分以檸檬烯，γ-萜品烯，檸檬醛等為主.檸檬果肉鮮榨汁對七種常見食源性病原微生物均具有明顯抑菌效果，而果皮鮮榨汁均未出現(xiàn)明顯抑菌作用[84].這些研究為植物提取物作為食品添加劑的應用奠定了基礎.但同時也存在一些問題，比如成本問題，盡管天然植物資源十分豐富，但許多植物資源價格貴且有限，規(guī)?；a(chǎn)需要大量原料，僅靠天然采集很難滿足市場需求.另一個需要關(guān)注的問題是提取活性成分的穩(wěn)定性，不同品種和來源的植物，其活性成分差異顯著，因此，如何使提取工藝標準化和明確活性物質(zhì)是關(guān)鍵.

2.2.2 細菌素抑菌殺菌效果

細菌素是微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類具有抑菌活性的蛋白質(zhì)或多肽類物質(zhì).因其不會產(chǎn)生耐藥性，廣泛用于病原微生物的抑菌殺菌研究中.如Wang 等[85]研究了細菌素Thurincin H的抗菌活性及其機制.Thurincin H是由蘇云金芽孢桿菌SF361產(chǎn)生的細菌素.它對大多數(shù)革蘭氏陽性食源性病原微生物及腐敗微生物(如單增李斯特氏菌、蠟樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等)具有抑制活性.其疏水性和結(jié)構(gòu)與現(xiàn)有的細菌素完全不同，蠟樣芽孢桿菌經(jīng)低濃度Thurincin H處理后，通過掃描電子顯微鏡成像發(fā)現(xiàn)細菌仍然呈現(xiàn)常規(guī)桿狀細胞形態(tài)，在高濃度Thurincin H處理后細胞才失去完整性.但這兩種濃度都可導致細胞的存活率降低99%以上.相反，乳酸鏈球菌素在濃度低時可引起顯著的細胞膜通透性變化.這些結(jié)果表明Thurincin H與乳酸鏈球菌素具有不同的抑菌作用機制.產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC)是一個重要的人畜共患食源性病原，益生菌可以減少該菌感染的嚴重程度.Rigobelo EE等[86]對攜帶stx1，stx2和eae基因的非O157的STEC菌株感染進行研究，采用綿羊作為模式動物，利用益生菌(嗜酸乳桿菌、瑞士乳桿菌、保加利亞乳桿菌、乳酸乳桿菌、糞腸球菌和嗜熱鏈球菌)混合物進行治療.在實驗觀察的第三，第五和第六周，每日接受混合益生菌治療的綿羊糞便中非O157的STEC數(shù)量跟未治療動物相比明顯降低.混合益生菌降低了羊糞便中的STEC，從而減小了傳染給人類的機率.植物乳桿菌也已被證明具有增強腸上皮屏障功能，可以調(diào)節(jié)宿主的免疫反應，如Eom等[87]通過刺激宿主腸道上皮細胞的免疫反應，研究植物乳桿菌JSA22菌株對鼠傷寒沙門氏菌和腸炎沙門氏菌誘導的細胞毒性影響.表明植物乳桿菌JSA22具有益生特性，并能抑制腸上皮細胞鼠傷寒沙門氏菌感染.在抗生素耐藥性成為嚴重公共衛(wèi)生問題的時代，植物乳桿菌的抗菌活性將有著廣泛的應用價值.這里面如何準確篩選原核生物中抗菌藥物的生產(chǎn)方法也非常重要.Dubourg等[88]通過擴散法測試八株乳桿菌對臨床分離的十二株常見病原微生物有明顯的抑菌圈.其中植物乳桿菌CIP 106786和鼠李糖乳桿菌CSUR P567具有廣泛的抗菌活性，而嗜酸乳桿菌DSM 20079相對不活躍.Cavicchioli等[89]證實了山羊乳中乳酸菌抗單增李斯特氏菌活性，這些乳酸菌株經(jīng)脈沖場凝膠電泳分型表現(xiàn)出較高的遺傳多樣性.Murdock等[90]對乳鏈菌肽和乳鐵蛋白抑制單增李斯特氏菌和大腸桿菌O157:H7生長是否具有協(xié)同作用進行研究.他們將乳鐵蛋白和乳鏈菌肽單獨或共同接入蛋白胨酵母葡萄糖肉湯中，再接種單增李斯特氏菌或大腸桿菌O157: H7，然后測定乳鏈菌肽和乳鐵蛋白對病原菌生長的抑制作用.發(fā)現(xiàn)1000 μg / ml的乳鐵蛋白能有效抑制單增李斯特氏菌.然而對大腸桿菌O157:H7抑菌效果不明顯.乳鐵蛋白和乳鏈菌肽協(xié)同作用能有效抑制單增李斯特氏菌和大腸桿菌O157:H7生長，500μg / ml乳鐵蛋白和250 IU / ml乳酸鏈球菌素結(jié)合使用能有效抑制大腸桿菌O157:H7生長，而250μg / ml乳鐵蛋白和10 IU / ml乳酸鏈球菌素就可抑制單增李斯特氏菌生長.Grande Burgos等[91]對腸球菌產(chǎn)生的細菌素Enterocin AS-48的抗菌活性進行研究.細菌素Enterocin AS-48構(gòu)象排列形成五個α-螺旋和一個緊湊的球狀結(jié)構(gòu)，含有70個氨基酸殘基由肽鍵首尾相連.這種陽離子肽可以插入到細菌細胞膜上，導致細胞膜通透性增加，最終導致細胞死亡.Enterocin AS-48已被證實對食源性病原微生物(沙門氏菌、大腸桿菌、單增李斯特氏菌、金黃色葡萄球菌以及蠟樣芽孢桿菌)和腐敗微生物(耐熱菌，芽孢桿菌屬、類芽孢桿菌屬、嗜熱脂肪芽孢桿菌、肉葡萄球菌以及清酒乳桿菌等)都具有抗菌活性.Enterocin AS-48結(jié)合精油，酚類化合物，物理化學處理，如高壓脈沖電場等可增加抗菌效果.這些研究為細菌素的應用奠定了很好的基礎.盡管對于細菌素的研究目前取得了很大進步，但是成功進行商品化的細菌素還為數(shù)不多.借助于基因組學，分子生物學和基因工程的新技術(shù)有助于將來發(fā)現(xiàn)和開發(fā)更多的細菌素產(chǎn)品.

3　展望

上述關(guān)于食源性病原微生物檢測和控制技術(shù)的研究進展對于未來食源性病原微生物的流行病學調(diào)查，檢測以及控制都具有很好的借鑒意義.新的知識也發(fā)現(xiàn)病原微生物不僅能夠改變和適應不同環(huán)境條件，這些病原微生物自身還能夠建立適應環(huán)境的網(wǎng)絡響應機制幫助它們在寬廣的條件下存活，甚至刺激它們攜帶毒力的潛力.分子基因組學和后基因組學工具的廣泛應用將來可以進一步揭示食源性病原微生物在食物相關(guān)環(huán)境中的行為，為食源性病原微生物的監(jiān)測研究以及食物鏈的傳播提供新線索.新的基因組序列提供了對微生物遺傳學和生理學的豐富信息，為建立新的檢測技術(shù)和鑒定食源性病原微生物提供更多新策略.所有這些為病原微生物的防控奠定了基礎.另一方面，對食源性病原微生物代謝組學的研究也可為尋找到新的檢測靶標和建立基于代謝組學方法的鑒別技術(shù)帶來新思路.

未來的研究應該著重于建立更加完善的食源性病原微生物及其致病因子監(jiān)測及溯源體系;揭示食源性病原微生物在食品生產(chǎn)鏈中的流行和傳播規(guī)律;找到更加理想的病原微生物綜合防控技術(shù)，為有效控制影響食品安全的食源性病原微生物提供理論與技術(shù)支撐.

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(責任編輯：李建忠，付強，張陽，羅敏；英文編輯：周序林，鄭玉才)

New progress in research on detection and control of foodborne microbial pathogens

TANG Jun-ni，TANG Cheng
(School of Life Science and Technology，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，P.R.C.)

Abstract:There is some recent research progress in the epidemiology，detection，and control of foodborne microbial pathogens.Especially，the growing availability of genome sequences，and the extensive application of genomics and postgenomics tools provide some useful information for bacterial genetics and physiology，and also provide new strategies for foodborne pathogens detection and control.This paper reviews the most recent research on foodborne microbial pathogens detection and control technology，which provides theoretical and technical guidance and brings new thoughts to food safety management and major foodborne pathogens prevention and control.

Key words:foodborne pathogens;rapid detection;control

中圖分類號：R155.5；TS201.3

文獻標志碼：A

文章編號：2095-4271(2016)02-0139-12

doi:10.11920/ xnmdzk.2016.02.004

收稿日期：2015-12-28

作者簡介：唐俊妮(1971-)，女，漢族，湖北棗陽人，教授，博士，研究方向:食品安全與食品微生物.E-mail:junneytang@ aliyun.com

基金項目：國家自然科學基金(31371781);2014年度教育部回國留學啟動項目