代謝綜合征合并哮喘患者TNF-α mRNA表達(dá)基因多態(tài)性的相關(guān)性分析

鞏雪俐 馬琦 孫湛

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，新疆 烏魯木齊，830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究院，新疆 烏魯木齊，830011；3.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能中心，新疆 烏魯木齊，830011)

代謝綜合征合并哮喘患者TNF-α mRNA表達(dá)基因多態(tài)性的相關(guān)性分析

鞏雪俐1馬琦2孫湛3

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，新疆 烏魯木齊，830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究院，新疆 烏魯木齊，830011；3.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能中心，新疆 烏魯木齊，830011)

目的 探討代謝綜合征(MS)合并哮喘患者TNF-αmRNA表達(dá)及其基因多態(tài)性分析。方法 選取119例代謝綜合征患者作為研究對(duì)象，其中合并哮喘的患者有47例(MS哮喘組)、單純代謝綜合癥患者72例(單純MS組)，以同期健正常人群60例作為對(duì)照，比較各組間TNF-α-308位點(diǎn)基因多態(tài)性，并分析其與患者的代謝指標(biāo)間的關(guān)系。結(jié)果 (1)病例組中GG、GA+AA等位基因G、A組間分布無(wú)顯著差異。MS哮喘組患者的GA+AA基因型分布顯著的高于對(duì)照組(P<0.05),單純MS組與MS哮喘組及對(duì)照組間GG、GA+AA、G、A無(wú)顯著差異。(2)MS哮喘組WHR、BMI、TG、LDL-C、FBG、HOMA-IR、FINS、CRP、TNF-ɑ、TNF-ɑmRNA水平均顯著的高于單純MS組患者，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC均低于單純MS組(P<0.05)；其中，與單純MS組相比，MS哮喘組GA+AA基因型患者的差異較MS哮喘組GG基因型患者更為顯著。(3)TNF-ɑmRNA與WHR、BMI、TG、LDL-C、FBG、HOMA-IR、FINS、CRP水平呈顯著的正相關(guān)、與FEV1、FEV1/FVC顯著的負(fù)相關(guān)。結(jié)論 MS合并哮喘患者的代謝指標(biāo)與單純MS患者有顯著的差異，可能與TNF-α-308位點(diǎn)A等位基因的攜帶、TNF-αmRNA表達(dá)有關(guān)。

代謝綜合征； 哮喘； 腫瘤壞死因子-α； 基因多態(tài)性

代謝綜合癥(MS)易引起人體出現(xiàn)代謝異常肥胖、高血壓、高血脂、血糖代謝異常及胰島素分泌障礙等，屬于糖尿病和心腦血管疾病高危致病因素。雖然MS形成機(jī)制尚無(wú)統(tǒng)一定論，但醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為其除了和人們高脂肪、高熱量飲食及缺乏運(yùn)動(dòng)等不健康的生活方式相關(guān)外，還和人體內(nèi)炎癥因子具有密切相關(guān)性，而腫瘤壞死因子-α(TNF-α)可能和其具有一定相關(guān)性[1]。本文通過(guò)檢測(cè)本院收治哮喘合并MS患者血清內(nèi)TNF-α水平的變化情況，同時(shí)檢測(cè)其血清內(nèi)血脂、膽紅素、膽固醇等其他指標(biāo)，以探討TNF-α mRNA表達(dá)、基因多態(tài)性和哮喘合并MS患者具體關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般材料 納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：(1)代謝綜合征的診斷參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)糖尿病學(xué)分會(huì)2004年制定的代謝綜合征的診斷標(biāo)準(zhǔn)，哮喘診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的哮喘防治指南；(2)對(duì)兩組患者均進(jìn)行相關(guān)代謝指標(biāo)的檢查，對(duì)照組研究對(duì)象來(lái)自于本院體檢中心各項(xiàng)檢查指標(biāo)均在正常范圍的健康人群；(3)本研究獲得患者的知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)[3]：(1)合并心、肝、腎功能障礙的患者；(2)近期使用糖皮質(zhì)激素或茶堿類(lèi)藥物進(jìn)行治療的患者；(3)近期使用降血脂類(lèi)藥物治療的患者；(4)合并自身免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病的患者；(5)合并惡性腫瘤的患者。選取本研究收集的119例代謝綜合征患者作為本次研究的病例組，其中合并哮喘的患者有47例(MS哮喘組)、單純代謝綜合征患者72例(單純MS組)，同期健康體檢結(jié)果正常的人群60例作為對(duì)照組。MS哮喘組患者47例，男20例，女27例， 31～65歲，平均(44.3±10.7)歲；單純MS組患者72例，男30例，女42例， 28～67歲，平均(46.2±11.4)歲；對(duì)照組60例健康人，其中男24例、女36例， 34～65歲，平均(45.9±9.2)歲。三組研究對(duì)象的年齡、性別構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有較好的均衡性。

1.2 觀(guān)察指標(biāo) 測(cè)定各組研究對(duì)象的人體參數(shù)指標(biāo)，包括：腰圍、臀圍、腰臀比(WHR)、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、空腹血糖值(FBG)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)、空腹胰島素(FINS)、血清C反應(yīng)蛋白(CRP)、腫瘤壞死因子-ɑ(TNF-ɑ)及其mRNA、第1秒用力呼氣容積(FEV1)與用力肺活量(FVC)及其比值。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 生化檢測(cè) 檢測(cè)前患者保持空腹，無(wú)菌環(huán)境下于其左肘位抽靜脈血6 mL滴入無(wú)抗凝劑試管，靜置約30 min，3 200 r/min離心5 min，取上清液滴入干凈試管，制備好血清樣本，免疫散射比濁法測(cè)定樣本的CRP水平，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)樣本的TNF-α mRNA水平[7]。血清膽紅素、血清膽固醇各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定使用AU2700全自動(dòng)生化分析儀(購(gòu)自日本奧利巴斯公司)，DBi、TBi、ALT、AST試劑均購(gòu)自北京利德曼公司，TG、TC試劑購(gòu)自中生北控生物科技公司，使用高壓液相層析法檢測(cè)血清樣本中FPG、TC、TG，免疫濁度法測(cè)定LDL-C、HDL-C，計(jì)算WC、WHR、BMI、HOMA-IR，所有指標(biāo)檢測(cè)均在全自動(dòng)生物化學(xué)分析儀中完成。

1.3.2 基因多態(tài)性檢測(cè) 常規(guī)提取血清內(nèi)TNF-α mRNA樣本約1 μL，加入Oligo(DT)18試劑1 μL(購(gòu)自上海哈靈生物科技有限公司)，滅菌水蒸12 min，于60 ℃孵育4～6 min，置冰塊上孵育5 min，接著滴入10×反應(yīng)緩沖液5 μL、PTR擴(kuò)增產(chǎn)物約18 μL和Rsal內(nèi)切酶2.5 μL， 反應(yīng)過(guò)夜反應(yīng)。將檢測(cè)樣本凝膠電泳及HB染色，用MSD-2000全自動(dòng)凝膠成像分析儀(購(gòu)自北京麥思奇高科技有限公司)檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度。

2 結(jié) 果

2.1 病例組與對(duì)照組的TNF-α-308位點(diǎn)G/A基因型表達(dá) 病例組中GG、GA+AA(因GA、AA樣本量小，故統(tǒng)計(jì)時(shí)相加)，等位基因G、A分布于對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 病例組與對(duì)照組的TNF-α-308位點(diǎn)G/A基因型表達(dá)[n(%)]

2.2 代謝綜合征患者是否合并哮喘分組TNF-α-308位點(diǎn)G/A基因型表達(dá) MS哮喘組患者的GA+AA基因型分布顯著的高于對(duì)照組(P<0.05),MS哮喘組的等位基因A分布率顯著的高于對(duì)照組(P<0.05)，MS哮喘組與單純哮喘組間GG、GA+AA、G、A比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),單純哮喘組的GG、GA+AA、G、A與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 代謝綜合征患者是否合并哮喘分組TNF-α-308位點(diǎn)G/A基因型表達(dá)[n(%)]

2.3 MS哮喘患者于單純哮喘患者的代謝相關(guān)指標(biāo)比較 MS哮喘組患者的WHR、BMI、TG、LDL-C、FBG、HOMA-IR、FINS、CRP、TNF-α、TNF-αmRNA水平均顯著的高于單純MS組患者，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC均顯著的低于單純MS組且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其余指標(biāo)在兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表3。

表3 MS哮喘患者于單純哮喘患者的代謝相關(guān)指標(biāo)比較(±s)

2.4 MS合并哮喘患者(MS哮喘組)不同基因型患者的代謝相關(guān)指標(biāo)比較 MS哮喘組GA+AA基因型患者的WHR、BMI、TG、LDL-C、FBG、HOMA-IR、FINS、CRP、TNF-α、TNF-αmRNA水平均顯著的高于MS哮喘組GG基因型患者，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC均顯著的低于MS哮喘組GG基因型患者且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其余指標(biāo)在兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表4。

表4 MS不同基因型患者的代謝相關(guān)指標(biāo)比較(±s)

2.5 TNF-αmRNA與MS哮喘患者代謝指標(biāo)的相關(guān)性分析 采用線(xiàn)性相關(guān)分析法(Pearson)分析法，TNF-αmRNA與WHR、BMI、TG、LDL-C、FBG、HOMA-IR、FINS、CRP、TNF-α水平呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(r值分別為：0.302、0.317、0.338、0.391、0.402、0.411、0.382、0.371、0.446，P值均<0.05)；TNF-αmRNA與FEV1、FEV1/FVC呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系(r值分別為：-0.417、-0.406，P均<0.05)。

3 討 論

哮喘屬于慢性呼吸道炎癥，其患者結(jié)構(gòu)廣泛，其中不乏肥胖及中、高齡患者，且多種炎癥因子及呼吸道結(jié)構(gòu)異變均可誘發(fā)該病。哮喘的治療過(guò)程漫長(zhǎng)，復(fù)發(fā)性高，患者預(yù)后性差，嚴(yán)重干擾患者的身體健康及生活質(zhì)量。由于多數(shù)哮喘患者并發(fā)心腦動(dòng)脈血管硬化、高血壓、心肌功能障礙、心律不齊、心臟衰竭、糖尿病及急性腦卒中等疾病，且有研究[5]報(bào)道MS是糖尿病和多種心腦血管疾病的高危因素，顯示哮喘患者并發(fā)MS概率較高，提出MS致病核心是胰島素抵抗。

研究[6]顯示，TNF-α的基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)上游-308位點(diǎn)多態(tài)性與胰島素抵抗及多種類(lèi)型代謝紊亂具有密切關(guān)系，并且該位點(diǎn)也會(huì)提高哮喘發(fā)病率。本研究中MS哮喘組患者的GA+AA、A基因型分布顯著高于對(duì)照組(P<0.05),但其MS哮喘組與單純哮喘組間GG、GA+AA、G、A比較差異及單純哮喘組的GG、GA+AA、G、A與對(duì)照組比較差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。TNF-α-108不同基因段產(chǎn)物的表達(dá)不同，這是因?yàn)橄喈惢蛐头置诘鞍最?lèi)型不同，故對(duì)誘發(fā)炎癥類(lèi)型及影響炎癥程度不同，而環(huán)境、遺傳及種族差異也會(huì)對(duì)哮喘發(fā)病機(jī)制產(chǎn)生影響，但從整體而言哮喘患者的TNF-α水平是呈現(xiàn)高表達(dá)，且并發(fā)MS的患者更明顯。我們認(rèn)為MS本身會(huì)引起細(xì)胞異常，造成細(xì)胞炎癥因子TNF-α濃度升高，同時(shí)高濃度的TNF-α反過(guò)來(lái)加重炎癥程度，進(jìn)一步惡化哮喘程度。

在本研究中，MS哮喘組患者的WHR、BMI、TG、LDL-C、FBG、HOMA-IR、FINS、CRP水平均顯著的高于單純MS組患者，這表明體質(zhì)量、代謝功能障礙、炎性因子水平上升均和哮喘發(fā)病間存在明切關(guān)系，我們認(rèn)為這可能因?yàn)門(mén)NF-α-308位點(diǎn)攜帶的基因可導(dǎo)向細(xì)胞異變及決定細(xì)胞代謝類(lèi)型。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)MS哮喘組GA+AA基因型患者的FEV1、FEV1/FVC顯著低于MS哮喘組GG基因型患者，這可能因?yàn)橄l(fā)MS患者體內(nèi)TNF-α-308位點(diǎn)G向A異變后可提高TNF-α濃度水平，造成代謝紊亂，刺激細(xì)胞包括肺組織細(xì)胞異變，呼吸功能下降，加重哮喘及胰島素抵抗。我們還發(fā)現(xiàn)TNF-α mRNA與各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)水平呈顯著的正相關(guān)性，表明TNF-α對(duì)代謝功能障礙標(biāo)識(shí)具有高敏感性，其可作為治療哮喘及MS的靶點(diǎn)指標(biāo)，我們可通過(guò)降低其在患者體內(nèi)濃度水平達(dá)到治療目的，同時(shí)檢測(cè)其水平可評(píng)價(jià)療效或預(yù)測(cè)病情發(fā)展。

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2015-09-29)