膜莢黃芪中黃酮類化學(xué)成分研究

王雪，唐生安，段宏泉，2

（天津醫(yī)科大學(xué)1.藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心，天津300070）

論著

膜莢黃芪中黃酮類化學(xué)成分研究

王雪1，唐生安1，段宏泉1，2

（天津醫(yī)科大學(xué)1.藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心，天津300070）

目的：研究膜莢黃芪中黃酮類化學(xué)成分。方法：采用硅膠柱色譜和HPLC制備色譜方法分離純化得到單體化合物，采用有機(jī)波譜方法鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：從膜莢黃芪乙醇提取物中分離得到8個(gè)黃酮類化合物，分別為2′，7-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1），3′，4′-二甲基異黃烷（2），芒柄花素（3），芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷（4），毛蕊異黃酮（5），（6aR，11aR）3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷（6），（6aR，11aR）9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷（7），7，2′-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷（8）。結(jié)論：化合物1為首次從該屬植物中分離得到。

膜莢黃芪；化學(xué)成分；色譜分離；黃酮類；2′，7-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷

膜莢黃芪（Astragalus membranceus（Fisch）Bge）是豆科黃芪屬植物，是黃芪的正品之一，為常用中藥［1］，具有補(bǔ)氣固表，利尿脫毒，益氣補(bǔ)中之功效［2］。用于久瀉脫肛，久潰不斂，內(nèi)熱消渴，慢性腎炎蛋白尿糖尿病等［3］。黃芪的化學(xué)成分主要為三萜皂苷類、黃酮類和多糖類［4］，本文主要對膜莢黃芪中黃酮類成分進(jìn)行了研究。

1　材料與方法

1.1儀器、試劑及材料核磁共振儀：Bruker AV 400 instrument（TMS內(nèi)標(biāo)）；液質(zhì)聯(lián)用色譜儀：Alliance 2695，Quattro Micro TM ESI（Waters）；半制備高效液相色譜儀：日本分光公司（JASC O），P U-2089（泵），RI-2031和UV-2075（檢測器）；制備HPLC色譜柱：YMC-Pack SIL SL12S05-2510WT（10 mm×250 mm）；氘代試劑（ALDRICH公司）；柱色譜和薄層色譜用硅膠均系青島海洋化工廠生產(chǎn)，所用試劑均系分析純。

膜莢黃芪于2010年購買于陜西，由天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院唐生安副教授鑒定，標(biāo)本（D20100415）存放于天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。

1.2提取分離將黃芪清膏600 g，加入95%乙醇（1 000 mL）浸泡3次，合并浸泡液，減壓濃縮浸泡液的總提取物143 g。將總提物混懸于水（2 000 mL）中，用乙酸乙酯（2 000 m L）萃取3次，合并萃取液，濃縮干燥稱重，得乙醇萃取物8 g（0101）。

0101經(jīng)HW-40柱分離，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）為流動(dòng)相洗脫，得到6個(gè)組分（0401-0406）；0404經(jīng)HPLC純化，以甲醇-水（8∶2）為流動(dòng)相，得到化合物3（14.1 mg）；0403經(jīng)HPLC純化，以甲醇-水（8∶2）為流動(dòng)相，得到10個(gè)組分（0501-0510）。0503經(jīng)GPC純化，以甲醇為流動(dòng)相，得到12個(gè)組分（1101-1112），其中1101為化合物4（38.9 mg），1109經(jīng)HPLC純化，以甲醇-水（7∶3）為流動(dòng)相，得到化合物7（17.4 mg）；0504經(jīng)GPC純化，以甲醇為流動(dòng)相，得到化合物5（34.2 mg）；0505經(jīng)GPC純化，以甲醇為流動(dòng)相，得到11個(gè)組分（1501-1511），1508經(jīng)制備薄層色譜分離，以二氯甲醇-甲醇（95∶5）為展開劑，得到化合物2（9.5 m g）、化合物6（2.5 mg）；0405經(jīng)GPC純化，以甲醇為流動(dòng)相，得到化合物1（2.0 mg）；0406經(jīng)GPC純化，以甲醇為流動(dòng)相，得到化合物8（5.1 mg）。

2　結(jié)果

從膜莢黃芪中分離得到8個(gè)化合物。

2.1化合物1 2′，7-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，白色粉末。ESI-MS m/ z481［M+H］+（分子式C23H28O11）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：2.64（1H，dd，J=16.0Hz，3.5 Hz，H-4），2.79（1H，dd，J=16.0Hz，3.5 Hz，H-4），3.58（1H，m，H-3），3.72（3H，s，3′-OCH3），3.75（3H，s，4′-OCH3），3.78（1H，t，J=10.0Hz，H-2），4.27（1H，br.d，J= 10.0Hz，H-2），4.87（1H，d，J=6.7Hz，H-1″），6.18（1H，br.d，H-8），6.28（1H，d，J=8.1Hz，H-6），6.80（1H，d，J=8.7Hz，H-5′），6.85（1H，d，J=8.3Hz，H-5），6.90（1H，d，J=8.7Hz，H-6′）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：69.6（C-2），30.3（C-3），30.8（C-4），130.0（C-5），107.8（C-6），156.4（C-7），102.6（C-8），154.7（C-9），112.9（C-10），128.7（C-1′），147.6（C-2′），141.2（C-3′），152.1（C-4′），108.6（C-5′），121.6（C-6′），103.4（C-1″），73.9（C-2″），77.4（C-3″），70.2（C-4″），76.4（C-5″），61.3（C-6″），60.5（3′-OCH3），55.8（4′-OCH3）。

2.2化合物2 3′，4′-二甲基異黃烷，白色粉末。ESI-MS m/z319［M+H］+（分子式C17H18O6）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：2.74（1H，dd，J=15.4Hz，4.6 Hz，H-4），2.85（1H，m，H-4），3.32（1H，m，H-3），3.67（3H，s，H-3′-OCH3），3.75（3H，s，4′-OCH3），3.92（1H，t，J=10.0Hz，H-2），4.16（1H，br.d，J=10.3Hz，H-2），6.18（1H，d，J=2.1Hz，H-8），6.29（1H，d，J=2.2Hz，H-5），6.46（1H，d，J=2.3Hz，H-6），6.78（1H，d，J= 8.6Hz，H-5′），6.86（1H，d，J=8.2Hz，H-6′），8.90（1H，s，2′-OH），9.12（1H，s，7-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：69.1（C-2），31.4（C-3），29.7（C-4），130.0（C-5），108.0（C-6），156.4（C-7），102.5（C-8），154.5（C-9），112.4（C-10），121.0（C-1′），148.1（C-2′），136.1（C-3′），151.6（C-4′），103.1（C-5′），121.4（C-6′），60.2（3′-OCH3），55.6（4′-OCH3）。

2.3化合物3芒柄花素，白色針晶。ESI-MS m/ z269［M+H］+（分子式C16H12O4）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.78（3H，s，-OCH3），6.87（1H，s，H-8），6.94（1H，dd，J=6.9Hz，1.9 Hz，H-6），6.99（2H，d，J= 8.6Hz，H-3′，5′），7.51（2H，d，J=8.6Hz，H-2′，6′），7.98（1H，d，J=8.8Hz，H-5），8.34（1H，s，H-2），10.82（1H，s，7-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：153.1（C-2），124.2（C-3），174.6（C-4），127.3（C-5），115.2（C-6），162.6（C-7），102.1（C-8），157.4（C-9），116.6（C-10），123.1（C-1′），130.0（C-2′），113.6（C-3′），158.9（C-4′），113.6（C-5′），130.0（C-6′），55.1（4′-OCH3）。

2.4化合物4芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷，白色針晶。ESI-MS m/z431［M+H］+（分子式C22H22O9）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.79（3H，s，-OCH3），5.10（1H，d，J=5.9Hz，H-1″），7.00（2H，d，J=8.3Hz，H-3′，5′），7.15（1H，d，J=8.9Hz，H-6），7.25（1H，m，H-8），7.54（2H，d，J=8.2Hz，H-2′，6′），8.06（1H，d，J= 8.8Hz，H-5），8.44（1H，s，H-2）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：154.1（C-2），123.8（C-3），175.1（C-4），127.4（C-5），116.1（C-6），161.9（C-7），103.9（C-8），157.5（C-9），118.9（C-10），124.5（C-1′），130.0（C-2′），114.1（C-3′），159.5（C-4′），114.1（C-5′），130.0（C-6′），100.5（C-1″），73.6（C-2″），77.0（C-3″），69.6（C-4″），77.2（C-5″），61.1（C-6″），55.6（4′-OCH3）。

2.5化合物5毛蕊異黃酮，白色針晶。ESI-MS m/ z285［M+H］+（分子式C16H12O5）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.80（3H，s，-OCH3），6.87（1H，br.s，H-6），6.93（1H，br.s，H-6），6.95（2H，br.s，H-5′，6′），7.06（1H，br.s，H-2′），7.97（1H，d，J=8.8Hz，H-5），8.29（1H，s，H-2）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：153.0（C-2），123.3（C-3），174.5（C-4），127.3（C-5），115.1（C-6），162.5（C-7），102.1（C-8），157.3（C-9），116.6（C-10），124.7（C-1′），116.4（C-2′），146.0（C-3′），147.5（C-4′），111.9（C-5′），119.7（C-6′），55.6（4′-OCH3）。

2.6化合物6（6aR，11aR）3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷，白色粉末。ESI-MS m/z301［M+H］+（分子式C17H16O5）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.61（1H，d，J=6.0Hz，H-6a），3.70（3H，s，10-OCH3），3.73（3H，s，9-OCH3），4.23（1H，dd，J=10.0Hz，6.0 Hz，H-6），5.56（1H，d，J=5.8Hz，H-11a），6.25（1H，br.d，H-4），6.48（1H，dd，J=8.3Hz，2.0Hz，H-2），6.52（1H，d，J= 8.2Hz，H-8），6.98（1H，d，J=8.1Hz，H-7），7.30（1H，d，J=8.4Hz，H-1），9.65（1H，br.d，3-OH）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：132.1（C-1），109.7（C-2），158.8（C-3），102.7（C-4），156.2（C-4a），65.6（C-6），39.2（C-6a），121.8（C-6b），118.7（C-7），104.9（C-8），152.7（C-9），133.3（C-10），151.0（C-11），78.5（C-11a），111.0（C-11b），56.0（9-OCH3），59.8（10-OCH3）。

2.7化合物7（6aR，11aR）9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷，白色針晶。ESI-MS m/z463［M+H］+（分子式C23H26O10）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：3.71（1H，m，H-6a），3.73（3H，s，10-OCH3），3.79（3H，s，9-OCH3），4.28（1H，d，J=7.1Hz，H-6），4.85（1H，d，J=7.4Hz，H-1′），5.63（1H，d，J=6.5Hz，H-11a），6.53（1H，m，H-8），6.55（1H，d，J=3.2Hz，H-4），6.72（1H，d，J=8.6Hz，H-2），7.01（1H，d，J=8.6Hz，H-7），7.42（1H，d，J=8.5Hz，H-1）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：132.0（C-1），110.4（C-2），158.5（C-3），103.9（C-4），156.1（C-4a），65.7（C-6），39.2（C-6a），121.5（C-6b），118.7（C-7），105.1（C-8），152.7（C-9），133.3（C-10），151.0（C-11），78.2（C-11a），114.0（C-11b），100.2（C-1′），73.1（C-2′），76.5（C-3′），69.6（C-4′），77.0（C-5′），60.6（C-6′），59.8（9-OCH3），56.0（10-OCH3）。

2.8化合物8 7，2′-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷，白色粉末。ESI-MS m/z481［M+H］+（分子式C23H28O11）。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δH：2.81（1H，dd，J=15.8Hz，4.7 Hz，H-4），2.94（1H，dd，J=15.9Hz，5.2 Hz，H-4），3.19（1H，t，J= 5.5Hz，H-2”），3.46（1H，t，J=5.9Hz，H-3），3.69（3H，s，3′-OCH3），3.75（3H，s，4′-OCH3），3.97（1H，t，J= 9.9Hz，H-2），4.20（1H，d，J=10.1Hz，H-2），4.77（1H，d，J=9.4Hz，H-1”），5.25（1H，d，J=4.6Hz，H-6），6.47（1H，br.s，H-5′），6.54（1H，d，J=8.2Hz，H-8），6.79（1H，d，J=8.6Hz，H-6′），7.00（1H，d，J=8.4Hz，H-5）；13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δC：69.7（C-2），31.8（C-3），29.5（C-4），130.5（C-5），109.3（C-6），157.2（C-7），104.4（C-8），154.9（C-9），116.2（C-10），121.3（C-1′），148.6（C-2′），136.6（C-3′），152.1（C-4′），103.7（C-5′），121.9（C-6′），101.1（C-1”），73.7（C-2”），77.1（C-3”），70.2（C-4”），77.5（C-5”），61.2（C-6”），60.7（3′-OCH3），56.1（4′-OCH3）。

3　討論

本文對膜莢黃芪進(jìn)行化學(xué)成分分離、純化并得到單體化合物。通過核磁共振波譜、質(zhì)譜等方法確定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，從膜莢黃芪分離得到8個(gè)化合物，1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致，依次鑒定為2′，7-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-2′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）［5］，3′，4′-二甲基異黃烷（2）［6］，芒柄花素（3）［7］，芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷（4）［8］，毛蕊異黃酮（5）［9］，（6aR，11aR）3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷（6）［10］，（6aR，11aR）9，10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷（7）［11］，7，2′-二羥基-3′，4′-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷（8）［12］。其中1為本屬植物中首次分離得到，豐富了豆科黃芪屬植物化學(xué)成分研究。黃酮類成分是黃芪中非常重要的藥理活性成分，具有清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過氧化、維持血中NO濃度和保護(hù)缺血再灌注損傷等多種藥理活性［13］。目前中藥譜效關(guān)系研究中，以多成分協(xié)同作用為主，但各成分對藥效的貢獻(xiàn)程度不同。本文分離制備更多的單體化合物，進(jìn)而對中藥各單體化合物的藥效關(guān)系進(jìn)行研究，為進(jìn)一步深入研究黃芪化學(xué)成分和藥理作用提供理論基礎(chǔ)。

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（2016-01-12收稿）

Studies on flavonoids and related constituents from Astragalus membranceus（Fisch）Bge

WANG Xue1，TANG Sheng-an1，DUAN Hong-quan1，2
（Tianjin Medical University 1.School of Pharmacy，Tianjin Key Laboratory on Technologies Enabling Development of Clinical Therapeutics and Diagnostics（Theranostics）；2.Research Center of Basic Medical Sciences，Tianjin 300070，China）

Objective：To study flavonoids and related constituents from Astragalus membranceus（Fisch）Bge.M ethods：Chemical constituents were isolated and purified by repeated column chromatography（silica geland preparative HPLC）.Their structures were elucidated by spectral data analysis.Results：Eight compounds（1-8）were isolated and their structures were identified by comparing their spectral data with literature values as follows：sphaerophyside SB（1），isomucronulatol（2），formononetin（3），formononetin-7-O-β-D-glycoside（4），calycosin（5），methylnissolin（6），（6aR，11aR）9，10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glycoside（7），7，2′-dihydroxy-3′，4′-dimethoxy-isoflavane-7-O-β-D-glycoside（8）.Conclusion：Compounds 1 could be isolated from this plant for the first time.

Astragalus membranceus（Fisch）Bge；chemical constituents；chromatographic separation；flavonoids；sphaerophyside SB

R91

A

1006-8147（2016）05-0409-03

王雪（1986-），女，實(shí)驗(yàn)師，碩士，研究方向：天然藥物化學(xué)；

段宏泉，E-m ail：duanhq@tmu.edu.cn。