復(fù)方中草藥制劑對斷奶仔豬抗氧化功能的影響

陳張華，鄧俊良，陳倉良

(1.內(nèi)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川內(nèi)江，641100；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，動物疫病與人類健康重點(diǎn)實驗室，環(huán)境公害與動物疾病重點(diǎn)實驗室，四川雅安 625014)

復(fù)方中草藥制劑對斷奶仔豬抗氧化功能的影響

陳張華1,2*，鄧俊良2，陳倉良2

(1.內(nèi)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川內(nèi)江，641100；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，動物疫病與人類健康重點(diǎn)實驗室，環(huán)境公害與動物疾病重點(diǎn)實驗室，四川雅安 625014)

為了研究復(fù)方中草藥對斷奶仔豬抗氧化功能的影響。選取20日齡杜長大三元雜交仔豬50頭，隨機(jī)分為5組，每組10頭。27～31日齡時分別以基礎(chǔ)日糧為對照組、4個實驗組分別為轉(zhuǎn)移因子組和在基礎(chǔ)日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%復(fù)方中草藥組。在35、45、55、65日齡時每組隨機(jī)抽選5頭仔豬，前腔靜脈采血，測定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)。結(jié)果表明，與對照組相比，中藥組和轉(zhuǎn)移因子組均能提高仔豬SOD、GSH-Px活性(P<0.05或P<0.01)和降低MDA含量(P<0.05或P<0.01)，但日糧中添加1.0%復(fù)方中草藥組提高斷奶仔豬抗氧化功能最佳。

復(fù)方中草藥；仔豬；轉(zhuǎn)移因子;抗氧化功能

中藥是我國中醫(yī)學(xué)中的國寶，有幾千年的歷史?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究成果表明，許多中藥含有豐富的多糖類、生物堿類、有機(jī)酸類、甙類、揮發(fā)油類及樹脂類等。這些中藥制劑用于動物，均具有激活免疫細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、抗病毒、抗細(xì)菌、抗應(yīng)激等作用。當(dāng)前豬群發(fā)病主要表現(xiàn)為多種病原混合感染與繼發(fā)感染，同時又存在免疫抑制、病毒不斷變異、細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)的問題，致使臨床上給豬病的診斷與防治帶來很大的困難。近年來，國內(nèi)外學(xué)者在探索用中藥提高豬的免疫力方面已取得了可喜的進(jìn)步。本試驗所用的復(fù)方中草藥制劑是按“扶正祛邪”、“正氣存內(nèi)，邪不可干”的中醫(yī)理論科學(xué)組方而成的純中藥制劑，該方主要是由金銀花、連翹、板蘭根、大青葉、黃連、黃芪、黃柏、忍冬藤、梔子、石膏、知母等17位中藥組成，方中單味中藥如金銀花、板蘭根、大青葉、黃連、黃芪等均具有直接或間接的免疫增強(qiáng)作用，連翹、黃芪等均有很強(qiáng)的清除自由基、中斷脂質(zhì)過氧使抗氧化酶免受攻擊的作用。其中，方劑對仔豬生產(chǎn)性能及細(xì)胞免疫[1]和體液免疫[2]的增強(qiáng)作用均已得到證實。因此，根據(jù)該復(fù)方中草藥的這些組成特點(diǎn)，通過結(jié)合規(guī)?；B(yǎng)豬場的臨床實際用藥程序，測定抗氧化酶的活性和含量，旨在揭示該復(fù)方中藥對斷奶仔豬抗氧化功能影響的機(jī)理，為中草藥的應(yīng)用及推廣提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及分組 四川省邛崍市某豬場提供平均體重約5 kg的20日齡健康杜長大三元雜交仔豬50頭，根據(jù)抗體水平、體重相近、公母各半的原則隨機(jī)分成5個組(Ⅰ-基礎(chǔ)日糧組、Ⅱ-轉(zhuǎn)移因子組、Ⅲ-0.5%中藥組、Ⅳ-1.0%中藥組、Ⅴ-2.0%中藥組)，每組10頭。所有仔豬在21 d時用2頭份/頭劑量豬瘟兔化弱毒苗免疫，其中Ⅱ組轉(zhuǎn)移因子按0.02 mL/kg體重在注射豬瘟苗時混合使用，飼喂基礎(chǔ)日糧，27日齡時Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組開始在基礎(chǔ)日糧中添加中藥“豬康散”，連喂5 d，觀察期45 d。日糧參照NRC(1998)配制，常規(guī)飼養(yǎng)管理。

1.2 藥物及實驗器材 由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院新獸藥研究組提供的復(fù)方中草藥是由金銀花、連翹、板蘭根、大青葉、黃連、黃芪、黃柏、忍冬藤、梔子、石膏、知母等多位中藥組成，按比例配方粉碎過60目篩，塑料袋500 g/袋分裝備用，所有中草藥全部購于成都中藥批發(fā)市場；轉(zhuǎn)移因子(500 mg×1支，批號：20100322)，河南輝騰動物藥業(yè)有限公司；谷胱甘肽過氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)試劑盒，南京建成生物研究所(20101103，20101027，20101004)；水浴鍋、BIO-RID型酶標(biāo)儀(Model 680)、UV-2501PC紫外可見分光光度計。

1.3 指標(biāo)的測定及方法 于35 d、45 d、55 d、65 d時從每個試驗組中隨機(jī)抽取5頭仔豬，前腔靜脈采血1 mL，用于測定抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性和MDA的含量。用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的SOD、GSH-Px、MDA檢測試劑盒進(jìn)行測定。按試劑盒說明書要求操作，采用日本島津公司生產(chǎn)的UV-2501PC紫外可見分光光度計測定各測定管的OD值，最后計算出樣品中SOD、GSH-Px和MDA的值。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析 用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)前處理,用 SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析和LDS多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 對血清超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響 由表1可知，各試驗組仔豬SOD酶活性隨日齡逐漸升高，且均高于對照組；轉(zhuǎn)移因子組除35 d和65 d時顯著高于對照組(P<0.05)，65 d高于0.5%和2.0%中藥組(P<0.05)外，其余均差異不顯著；1.0%中藥組在整個試驗期間都顯著或極顯著高于對照組(P<0.05或P<0.01)。2.2 對血清谷胱甘肽過氧化物酶活性的影響 由表2可知，GSH-Px的活性在整個試驗期間都隨著日齡的增長而逐漸增加(除65 d時0.5%中藥組有所降低外)，且均高于對照組；除35 d外，1.0%中藥組都顯著高于對照組(P<0.05)和其他試驗組(P>0.05)；轉(zhuǎn)移因子組、0.5%中藥組和2.0%中藥組高于對照組(P>0.05)；整個試驗期間血清GSH-Px的活性升高的幅度以1.0%中藥組最為明顯。

表1 血清超氧化物歧化酶(SOD)活性(λ=550 nm)

表中數(shù)據(jù)格式為±SD，同列數(shù)據(jù)間上標(biāo)有相同大寫或小寫字母表示差異不顯著(P>0.05)；字母相同而大小寫不同表示差異顯著(P<0.05)，無相同字母表示差異極顯著(P<0.01)，下表同。

表2 血清谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性(λ=412 nm)

2.3 對血清丙二醛(MDA)含量的影響 由表3可知，各組MDA含量都隨著日齡的增長而逐漸降低，且均低于對照組。1.0%中藥組除35 d外，均低于對照組(P<0.05或P<0.01)；轉(zhuǎn)移因子組、0.5%中藥組、2.0%中藥組與對照組差異不顯著(P>0.05)。在整個試驗期間，所有試驗組MDA含量降低幅度以1.0%中藥組最大，其次為轉(zhuǎn)移因子組、0.5%中藥組、2.0%中藥組。

表3 血清丙二醛(MDA)含量(λ=532 nm)

3 討論與小結(jié)

動物機(jī)體內(nèi)SOD 和 GSH-Px 活性是抗氧化防御體系中的重要組成部分，在清除自由基、抗氧化損傷和維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)方面都起著重要作用。其中超氧化物歧化酶是自由基損害的主要防御酶，可催化超氧陰離子自由基分解為H2O2，其含量可反映出機(jī)體清除自由基能力和細(xì)胞受損的嚴(yán)重程度[3]。谷胱甘肽過氧化物酶可以特異的催化還原型谷胱甘肽對過氧化氫的反應(yīng)，將其轉(zhuǎn)化為O2和H2O，起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整，達(dá)到抗氧化的作用[4]。MDA作為脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之一，其含量不僅反應(yīng)氧自由基介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化程度，而且是各種氧自由基損傷機(jī)體的重要指標(biāo)[5]。同時GSH-Px可加速催化清除生物氧產(chǎn)生的氧自由基，阻斷脂質(zhì)過氧化作用的引發(fā)，使細(xì)胞和組織免受損害，MDA含量隨之降低。因此，通常用這兩種酶活性的高低來評價機(jī)體的抗氧化能力。在體內(nèi)多不飽和脂肪酸經(jīng)酶促反應(yīng)或非酶促反應(yīng)途徑可生成一類過氧化物——脂質(zhì)過氧化物，其主要成分為MDA，MDA又可氧化細(xì)胞膜中的多不飽和脂肪酸，加快脂質(zhì)過氧化物的生成，從而破壞細(xì)胞膜的完整性，導(dǎo)致細(xì)胞膜的嚴(yán)重?fù)p傷[6]。所以，MDA含量高低可以反映該體系中脂質(zhì)過氧化自由基的存在及細(xì)胞膜過氧化的程度，是反應(yīng)機(jī)體抗氧化能力強(qiáng)弱的一項重要指標(biāo)[7]。

生物體許多疾病的發(fā)生都是由于體人不飽和脂肪酸誘導(dǎo)所致，而仔豬斷奶應(yīng)激可損害機(jī)體抗自由基系統(tǒng)及加速體內(nèi)過氧化反應(yīng)，引起機(jī)體生理機(jī)能的紊亂和抗抵力下降，從而引發(fā)各種疾病。本文所用的中草藥在用藥后都顯著或極顯著的提高了仔豬體內(nèi)SOD、GSH-PX的活性，且隨著日齡的增長而不斷增高，其中0.5%中藥組和1.0%中藥組升高較為明顯，表明，0.5%～1.0%中藥添加劑量能夠提高抗氧化酶活性，清除氧自由基，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化物的生成，增強(qiáng)仔豬抗氧化能力，這可能是由于中草藥中含有多種礦物質(zhì)元素，如錳在蛋白質(zhì)、DNA、RNA合成中發(fā)揮作用，是丙酮酸脫羧酶的組成成分，參與體內(nèi)氧化還原過程，也是許多酶系統(tǒng)的重要活化劑，在清除超氧化物、氧自由基，促進(jìn)生長發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能方面均可產(chǎn)生影響[8]。2.0%中藥組SOD、GSH-Px都有所提高，但差異不顯著，可能是該濃度對抗氧化酶活性有抑制作用，但其具體原因有待進(jìn)一步研究；同時在整個試驗期間也有效的降低了MDA含量，且以1.0%中藥組降低幅度最為顯著。轉(zhuǎn)移因子組提升SOD和GSH-PX均高于對照組，MDA均降低，但總體效果都低于中藥添加組，結(jié)果與郝智慧等[9]、曹旭敏等[10]的研究相一致。在本次試驗中以飼料中添加1.0%的復(fù)方中草藥提高抗氧化功能最為顯著。

在基礎(chǔ)日糧中添加復(fù)方中草藥能夠顯著提高仔豬血清SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量，且1.0%的添加組效果明顯優(yōu)于轉(zhuǎn)移因子組和其他實驗組。表明復(fù)方中草藥具有提高仔豬抗氧化能力的作用，能夠改善機(jī)體健康狀況。由于中藥成分復(fù)雜影響因素也較多，因此對仔豬抗氧化能力尚需進(jìn)一步深入研究證實。

[1] 陳張華.復(fù)方中藥“豬康散”對仔豬生產(chǎn)性能及細(xì)胞免疫功能影響的研究[D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2011.

[2] 陳倉良. 復(fù)方中藥“豬康散”對仔豬體液免疫功能及細(xì)胞因子水平影響的研究 [D].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2012.

[3] 劉壘,王永才,周勤飛,等.普生源對斷奶仔豬生長性能、抗氧化能力和細(xì)胞免疫功能的影響[J].飼料工業(yè),2008，29(15):26-28.

[4] 鄒?。y耳多糖對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腸道菌群及免疫功能的影響[D]．雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006．

[5] Pignatelli,P Fabio M Pulcinelli,Celestini A. The flavonoids querc etin and catechin synergistically inhibit platelet function by antagonizing the intracellular production of hydrogen peroxide[J].Am J Clinl Nutri,2007,72:1150.

[6] Halliwell B，Gutteridge J M C．Free Radicals in Biology and Medicine[M]．UK：Clarendon Press Oxford,1989.

[7] 趙克然,楊毅軍,曹道俊．氧自由基與臨床[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2000：529-538．

[8] 韋安陽,周春蘭.微量元素銅、鐵、錳與自由基[J].廣東微量元素科學(xué),2001,(6):15.

[9] 郝智慧,陳仗榴,邱梅,等.不同紫錐菊提取物對肉仔雞免疫功能影響[J].中國獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2010,29(2):7-10.

[10]曹旭敏,盧福山,侯生珍,等.中草藥添加劑對斷奶仔豬抗氧化功能指標(biāo)的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2011，39(3)：1459-1460.

(編輯：陳希)

Effects of Compound Chinese Herbal on Antioxidant Function of Early Weaned Piglets

CHEN Zhang-hua1,2*,DENG Jun-liang2,CHEN Cang-liang2

(1.NeijiangVocationalandTechnicalCollege，Nei’jiang,Sichuan641100,China；2.CollegeofVet.MedofSichuanAgriculturalUniversity,KeyLaboratoryofAnimalDiseaseandHumanHealth,KeyLaboratoryofEnvironmentalHazardandAnimalDisease,Ya’an,Sichuan625014,China)

To investigate the effect of compound traditional Chinese herbal on the antioxidant function in weaned piglets,a total of 50 healthy Duroc×Landrace× Yorkshire weaned piglets at 20- day-old were divided randomly into 5 groups with 10 replicate per pen and fed corn and soybean meal-based diets containing 0, Transfer factor(TF),0.5%,1.0% or 2.0% of Chinese medicine on 27 to 31 d,repectively. SOD，GSH and MDA were measured on 35,45,55 and 65 d in 5 piglets from each group .Compared to the control group the SOD and GSH-Px were significantly increased and the MDA were significantly decreased(P<0.05 orP<0.01)in Chinese medicine and transfer factor groups(P<0.05 orP<0.01).These data indicated that the compound Chinese herbal medicine improves the antioxidant function,but the group of 1.0% is better than others.

compound Chinese herbal medicine；piglets；transfer factor；antioxidant function

內(nèi)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)省級重點(diǎn)專業(yè)建設(shè)項目"川教函(2014)449號";內(nèi)江職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級課題

陳張華,講師,從事動物疾病防治研究。E-mail：chenzh1232@126.com

2016-06-15

A

1002-1280 (2016) 08-0049-04

S853.74