不同劑型五苓散對(duì)磺胺氯丙嗪鈉解毒功效的研究

王改玲，王明成，姜肖軍，宋阿北，郭欣婭

(黃淮學(xué)院生物工程系，河南駐馬店 463000)

不同劑型五苓散對(duì)磺胺氯丙嗪鈉解毒功效的研究

王改玲，王明成，姜肖軍，宋阿北，郭欣婭

(黃淮學(xué)院生物工程系，河南駐馬店 463000)

為探究不同劑型的五苓散對(duì)磺胺氯丙嗪鈉引起腎中毒的解毒功效，分別用五苓散的散劑、煎劑和可溶性粉對(duì)磺胺氯丙嗪鈉中毒的小鼠進(jìn)行治療。通過(guò)觀察其泌尿系統(tǒng)器官的組織學(xué)形態(tài)變化，以及測(cè)定治療前后的小白鼠血清中尿素氮和肌酐的含量。結(jié)果表明：三種劑型的五苓散飼喂腎中毒小鼠3 d后，組織形態(tài)觀察小鼠的腎小管上皮、輸尿管、膀胱黏膜、尿道肌層等泌尿系統(tǒng)的組織病變均消失；血清中尿素氮和肌酐含量顯著下降(P<0.05)，并且各劑型間無(wú)顯著差異，結(jié)果提示在生產(chǎn)中五苓散劑型的選擇可依不同動(dòng)物的用藥習(xí)慣而定。

五苓散；磺胺氯丙嗪鈉；劑型；解毒

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，五苓散主要通過(guò)改善腎臟的生理狀況，提高腎臟機(jī)能治療水腫[1]，對(duì)腎中毒的解毒效果明顯，受到養(yǎng)殖人員的青睞。然而，市場(chǎng)上的五苓散存在多種劑型，不同劑型是否存在療效差異尚不明確?；前仿缺衡c(Sulfachloropyrazine Sodium)屬于磺胺類抗菌藥，它具有抗菌譜較廣、性質(zhì)穩(wěn)定、使用簡(jiǎn)便、生產(chǎn)時(shí)不耗用糧食等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于禽類球蟲病的治療。但是磺胺類藥物屬于弱毒類物質(zhì)，一次性大劑量用藥或者長(zhǎng)期用藥會(huì)損害動(dòng)物的泌尿系統(tǒng)和造血系統(tǒng)，導(dǎo)致中毒[2]。在實(shí)驗(yàn)中，可以利用磺胺氯丙嗪鈉制作動(dòng)物腎中毒的模型，為研究藥物的解毒效果提供病例。為了解五苓散劑型變化是否會(huì)影響療效，試驗(yàn)用不同劑型的五苓散對(duì)磺胺氯丙嗪鈉引起的小白鼠腎中毒進(jìn)行了治療，并對(duì)療效進(jìn)行了比較研究。

1 材料

1.1 儀器設(shè)備 RE-52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；130611E酶標(biāo)儀，美國(guó)伯騰儀器有限公司；Leica RM2016石蠟切片機(jī)，萊卡顯微系統(tǒng)(上海)有限公司；5431R高速低溫離心機(jī)，艾本德(中國(guó))有限公司；RT-25超細(xì)粉碎機(jī)，北京燕山正德機(jī)械設(shè)備有限公司；FD-1A-50真空冷凍干燥機(jī)，北京博弈康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；80i雙目生物顯微鏡，日本尼康(中國(guó))有限公司。1.2 試劑和藥品 肌酐(Cr)試劑盒 (20150815) 、尿素氮(BUN)試劑盒 (201500813)，南京建成生物工程研究所；豬苓、澤瀉、(炒)白術(shù)、茯苓、桂枝等中藥原料由駐馬店市啟元醫(yī)藥有限公司提供。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧配方 健康的普通級(jí)小白鼠100只，雌雄各半，日齡相近，體重30～35 g。由黃淮學(xué)院生物工程實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物房提供。

小白鼠日糧配方為：白面23%，玉米面42%，麩皮26%，酵母粉1%，骨粉2%，魚粉3%，食鹽1%，雞蛋1%，魚肝油1%。

1.4 供試藥物

1.4.1 五苓散組方 由豬苓18.75%，澤瀉31.25%，(炒)白術(shù)18.75%，茯苓18.75%和桂枝12.5%組成[3]。

1.4.2 五苓散散劑的制備 利用超細(xì)粉碎機(jī)將五苓散的中藥粉碎成100目的散劑。

1.4.3 五苓散煎劑的制備 將按比例配制的五苓散藥方，在中藥粉碎機(jī)中粉碎4 min(細(xì)度100 目)，把五苓散煎煮2次。第一次煎煮：中藥1份，水8份，浸泡30 min，武火煮沸，改為文火煎煮60 min；第二次煎煮：中藥1份，水6份，武火煮沸，改為文火煎煮45 min；合并煎液，用真空抽濾機(jī)過(guò)濾，取濾液，放到4 ℃的冰箱中保存[4-5]。五苓散煎劑實(shí)為五苓散粉劑的無(wú)機(jī)成分和水。

1.4.4 五苓散可溶性粉的制備 將制備好的五苓散煎劑在-20 ℃環(huán)境中固化，放入-55 ℃的真空冷凍干燥機(jī)中24 h，制成可溶性粉，制成的可溶性粉移入干燥的棕色試劑瓶中，密封后放到4 ℃的冰箱中保存[6]。五苓散可溶性粉實(shí)為五苓散散劑的無(wú)機(jī)成分。

1.5 藥物使用量計(jì)算方法 結(jié)合畜牧業(yè)生產(chǎn)實(shí)際，中藥的治療使用量一般為蛋雞飼料中添加0.4%，通過(guò)蛋雞(1500 g)和小白鼠(35 g)間體重轉(zhuǎn)換，計(jì)算出每天治療小白鼠的五苓散散劑的使用量為0.045 g/只，五苓散煎劑0.34 mL/只，五苓散可溶性粉0.0073 g/只。

2 方法

2.1 腎中毒模型的復(fù)制 為了復(fù)制出小白鼠腎中毒病理模型，每天灌服2 mg/mL磺胺氯丙嗪鈉0.2 mL，連續(xù)灌服5 d。小白鼠表現(xiàn)出精神沉郁，被毛稀松的臨床癥狀，剖檢出現(xiàn)肝臟色淡，腎臟腫大的病理變化。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法 取100只健康、體重相近的小白鼠，隨機(jī)分為五組，每組20只，分別為對(duì)照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、實(shí)驗(yàn)組Ⅱ、實(shí)驗(yàn)組Ⅲ。各組的處理方法詳見(jiàn)表1。

表1 各組小白鼠的處理方法

治療藥物使用后第二天8∶00～10∶00，各組小白鼠采用去眼球放血處死，采血量1.0～1.5 mL，分離血清；采集泌尿系統(tǒng)的組織器官，放入福爾馬林中固定。2.3 石蠟切片的制作與染色 采集的組織樣品經(jīng)福爾馬林固定，梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，5 μm切片，二甲苯脫蠟、水化、蘇木精染細(xì)胞核，鹽酸酒精分色，伊紅染細(xì)胞質(zhì)，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡觀察并拍照[7]。

2.4 血清指標(biāo)檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析 采集對(duì)照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、實(shí)驗(yàn)組Ⅱ、實(shí)驗(yàn)組Ⅲ小鼠的血液，分離血清，利用尿素氮試劑盒和肌酐試劑盒測(cè)定各組小鼠的血清中尿素氮和肌酐含量。各組數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，P<0.05為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 臨床癥狀 實(shí)驗(yàn)小鼠磺胺氯丙嗪鈉中毒在臨床上表現(xiàn)為：精神不振，食欲減退，飲水量減少，嗜睡，尿量減少，毛發(fā)稀松等。使用五苓散散劑、五苓散煎劑和五苓散可溶性粉治療后，磺胺氯丙嗪鈉中毒癥狀明顯減輕，三者的治療效果無(wú)明顯差異。

3.2 病理剖檢 模型組小鼠出現(xiàn)明顯的中毒癥狀后，進(jìn)行剖檢。中毒小鼠腹腔有積液且氣味酸臭；腎臟有出血點(diǎn)，甚至出血斑；輸尿管萎縮等病理變化。在使用五苓散三種不同的劑型治療后，中毒小鼠的病理變化得到明顯的改善，三者的治療效果無(wú)肉眼可見(jiàn)差異。

3.3 病理學(xué)變化

3.3.1 腎臟的病理學(xué)變化 由圖1可見(jiàn)，模型組小鼠的腎臟出血，腎小球病變萎縮，腎小管管腔增大，管腔結(jié)構(gòu)不完整，腎小管上皮細(xì)胞顆粒脫落、變性和壞死。經(jīng)過(guò)不同劑型五苓散治療的實(shí)驗(yàn)組病理變化不明顯。3.3.2 輸尿管的病理學(xué)變化 由圖2可見(jiàn)，模型組小鼠的輸尿管發(fā)生萎縮，輸尿管固有層變窄，固有層單管腺消失。經(jīng)過(guò)治療的實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯病理變化。

3.3.3 膀胱的病理學(xué)變化 由圖3、4可見(jiàn)，模型組小鼠的膀胱黏膜上皮細(xì)胞脫落，黏膜上皮的細(xì)胞層數(shù)減少，固有層淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。經(jīng)過(guò)治療的實(shí)驗(yàn)組小鼠的膀胱無(wú)明顯病理變化。3.3.4 尿道的病理學(xué)變化 由圖5、6可見(jiàn)，模型組小鼠的尿道黏膜的變移上皮細(xì)胞由扁平細(xì)胞代替，固有層結(jié)締組織變少，出血；尿道肌層出血，核溶解。而經(jīng)過(guò)治療的實(shí)驗(yàn)組無(wú)明顯病理變化。

由表1可知，模型組的血清尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)含量顯著高于實(shí)驗(yàn)組的血清尿素氮含量(P<0.05)，對(duì)照組與模型組的血清尿素氮含量之間差異顯著(P<0.05)，而實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組之間的尿素氮含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

模型組的血清肌酐(creatinine，Cr)含量顯著高于實(shí)驗(yàn)組的血清尿素氮含量(P<0.05)，對(duì)照組與模型組的血清肌酐含量之間差異顯著(P<0.05)，而實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組之間的肌酐含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。

3.4 血清中尿素氮和肌酐的含量測(cè)定結(jié)果

表1 小白鼠血清中尿素氮和肌酐含量

標(biāo)有不同字母者表示組間差異顯著(P<0.05)，標(biāo)有相同字母者表示組間差異不顯著(P>0.05)。

4 討論與小結(jié)

五苓散來(lái)源于《傷寒論》，是治療化氣行水的代表方劑，在臨床上多用來(lái)利水溶石，解腎中毒[3]。市場(chǎng)上可見(jiàn)散劑、煎劑和可溶性粉等劑型，因不明確劑型不同是否影響五苓散的功效，養(yǎng)殖人員選用五苓散時(shí)造成一定的困難?，F(xiàn)將五苓散制成散劑、煎劑和可溶性粉，然后用不同劑型的五苓散對(duì)磺胺氯丙嗪鈉引起的小白鼠腎中毒進(jìn)行了治療，通過(guò)對(duì)臨床癥狀、泌尿系統(tǒng)組織學(xué)結(jié)構(gòu)和血清中尿素氮、肌酐的含量進(jìn)行了比較研究。臨床癥狀和泌尿系統(tǒng)組織學(xué)結(jié)構(gòu)的觀察結(jié)果表明，三種劑型使用3 d后，小白鼠腎中毒癥狀消失，但各劑型之間無(wú)顯著差異。血清中尿素氮、肌酐的含量測(cè)定結(jié)果表明，三種劑型的五苓散飼喂腎中毒小鼠3 d后，血清中尿素氮和肌酐含量顯著下降(P<0.05)，并且各劑型間無(wú)顯著差異(P>0.05)。以上表明，五苓散散劑、煎劑和可溶性粉在治療磺胺氯丙嗪鈉引起的小白鼠腎中毒方面均有較好的療效。

不同劑型取得了相近的療效，可能原因：五苓散煎劑為五苓散散劑的無(wú)機(jī)成分和水，而五苓散煎劑為五苓散散劑的無(wú)機(jī)成分，二者的有效成分沒(méi)有具體的差異，必然取得相近的療效。五苓散散劑由五苓散粉碎而成，有研究表明使用五苓散散劑可以將五苓散全部有效成分投入到小白鼠體內(nèi)，發(fā)揮利水解腎中毒的作用，但因植物細(xì)胞壁的作用，使很多成分不能充分發(fā)揮作用[9]。另外三種劑型中煎劑的吸收最快，而散劑的吸收最慢。散劑雖然將藥物的所有成分都投服到了動(dòng)物體內(nèi)，但因吸收速度慢和成分不能完全發(fā)揮作用，出現(xiàn)了與煎劑、可溶性粉相近療效。

五苓散散劑、五苓散煎劑和五苓散可溶性粉三種劑型治療磺胺氯丙嗪鈉腎中毒，有相近的療效，故可以根據(jù)不同動(dòng)物的用藥習(xí)慣，選擇適宜的劑型。

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(編輯：陳希)

Research of Different Formulations of Wuling Powder on the Detoxification Effects of Sulfachloropyrazine Sodium

WANG Gai-ling, WANG Ming-cheng, JIANG Xiao-jun, SONG A-bei, GUO Xin-ya

(DepartmentofBioengineering,HuanghuaiUniversity,Zhumadian,Henan463000,China)

To explore different formulations of Wuling powder on detoxification effects of nephrotoxicity induced by sulfachloropyrazine sodium. The mice were injected with sulfachloropyrazine sodium for establishing the renal poisoning model. Then they were treated with different formulations of Wuling powder: pulvis, extracts and soluble powder. After treatment, the histological characteristics of the urinary system were observed, urea nitrogen and creatinine levels in the serum of mice were determined. The results showed that three formulations of Wuling powder fed renal poisoning mice after 3 d, the pathological changes of renal tubular epithelial, ureter, bladder mucosa and urethra muscular tissue were disappearing. The urea nitrogen and creatinine levels in serum decreased significantly (P<0.05), and no significant difference among different formulations. Therefore Wuling powder can restore the urinary tract tissue pathological changes caused by sulfanilamide chlorpromazine sodium. In practice, the choice of appropriate formulation of Wuling powder depends on different prescribing habits of animals.

Wuling powder; sulfachloropyrazine sodium; formulation; detoxification

王改玲，博士研究生，講師，從事動(dòng)物疾病和免疫學(xué)的教學(xué)和科研工作。E-mail:wangmc939@126.com

2015-11-18

A

1002-1280 (2016) 01-0047-05

S853.74