趙杰 遼寧省 鞍山市腫瘤醫(yī)院 (鞍山 114033)
?
現(xiàn)代色譜技術(shù)在中藥檢驗中的運用研究
趙杰 遼寧省 鞍山市腫瘤醫(yī)院 (鞍山 114033)
色譜分析技術(shù)是中藥檢驗時主要技術(shù)手段,用于分離、分析中藥中各類、各種有效成分。我國藥典中收錄記載的中藥材和制劑中,60%以上的藥物是使用色譜法檢驗,色譜技術(shù)是中藥檢驗的主要方法[1]。隨著色譜儀器的更新、技術(shù)提高和分離、分析系統(tǒng)的精密度增強(qiáng),現(xiàn)代色譜分析具有高效、快速、微量檢測和自動化分析等優(yōu)勢。現(xiàn)代色譜技術(shù)應(yīng)用于中藥以及制劑的分析、檢驗中,應(yīng)用價值高,需要繼續(xù)發(fā)展和推廣。本文搜集中藥檢驗中有關(guān)色譜技術(shù)的發(fā)展和前景,總結(jié)報道如下:
氣相色譜法是重要的揮發(fā)性中藥成分檢測方法和技術(shù)。直接蒸發(fā)氣相色譜技術(shù)是檢測樣本中揮發(fā)性組分。檢查時,通過加熱等方法使待測物質(zhì)中揮發(fā)性物質(zhì)在短時間內(nèi)蒸發(fā),蒸發(fā)的氣體進(jìn)入氣相色譜柱進(jìn)行分離和分析。直接蒸發(fā)氣相色譜法能夠使用少量樣本,僅需1~2mg,待測樣本處理時間短,在蒸發(fā)容器內(nèi)加熱數(shù)分鐘即可蒸發(fā)成氣體,避免中藥中含量低的成分所需大量樣本的浪費[2]。有機(jī)溶劑提取或蒸餾搜集樣本過程,操作復(fù)雜、過程繁瑣和提取不充分等不足,不適合用于珍貴藥材或藥材中微量成分的搜集和分析。
氣相色譜法彌補了有機(jī)溶劑抽提和蒸餾的不足,適用于珍貴藥材和微量成分的提取和分析。如使用SE-3-熔融石英毛細(xì)管柱聯(lián)合FID檢測系統(tǒng)測定六味地黃丸中丹皮酚的量,使用OV-17彈性石英毛細(xì)管柱以及不銹鋼柱測定牛黃解毒片中冰片的量[3]。
毛細(xì)石英柱分離效果好,聯(lián)合FID檢測系統(tǒng),可以對中藥中多種成分進(jìn)行分組分離和分析鑒定。在檢測中藥油脂組分揮發(fā)實驗時能夠代替填充柱進(jìn)行檢測成分的分離和搜集。毛細(xì)管分離牛黃解毒丸中冰片成分時,可以使用升溫毛細(xì)管分析多個產(chǎn)地、來源的藥材中可揮發(fā)油組分。毛細(xì)管柱法聯(lián)合質(zhì)譜分析結(jié)合了毛細(xì)管柱高效分離、搜集能力,以及質(zhì)樸分析高效的鑒別能力,應(yīng)用計算機(jī)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,快速分離和鑒別中藥材揮發(fā)油組分。又比如使用SE-54石英毛細(xì)管聯(lián)用DS分離新疆阿魏揮發(fā)油的揮發(fā)物質(zhì),揮發(fā)氣體中測出23種化合物,并且可以進(jìn)行定量分析[4]。
氣相色譜聯(lián)合傅里葉變換紅外檢測儀對順反異構(gòu)體檢測具有高度敏感性和準(zhǔn)確性,是中藥揮發(fā)油組分檢測、分析的有一種有效手段。中藥油組分揮發(fā)、使用毛細(xì)管分離后,分離到的組分進(jìn)入氣體收集光管中,將各組分的氣相紅外光圖譜作為數(shù)據(jù)搜集、整理,變換傅里葉干涉圖譜后,將采集到的數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫內(nèi)紅外光譜圖進(jìn)行比對和鑒定[5]。
大口徑厚液膜毛細(xì)管柱結(jié)合填充柱以及毛細(xì)管柱的優(yōu)勢,其容量大、分離柱分離效率高、分析組分時間短、分離柱吸附作用有限等優(yōu)勢。比如,二甲基聚硅氧烷交聯(lián)毛細(xì)管柱定量分析風(fēng)油精成分,其檢測結(jié)果精確度明顯高于填充柱。
高效液相色譜分析法分析速度快、精確度高、重復(fù)性好的優(yōu)勢。隨著對中藥新藥材研發(fā)、質(zhì)量控制的要求越來越嚴(yán)格,紫外檢測儀器只能檢測具有吸收紫外線的物質(zhì)成分,檢測范圍受限制。所以,研發(fā)并應(yīng)用一種通用型檢測器-蒸發(fā)光散射檢測器,可用于所有非揮發(fā)性中藥組份的檢測,其分離速度快、工作效率高、檢測范圍廣泛,與高效液相色譜聯(lián)用,可測定多種有機(jī)大分子物質(zhì)。
蒸發(fā)光散射檢測器使用時,先將色譜分離柱內(nèi)分離出的組分和流動相進(jìn)入霧化器,霧化作用生成霧狀顆粒進(jìn)入蒸發(fā)器,蒸發(fā)器內(nèi)有溶劑,照射顆粒后光束發(fā)生散射,搜集并檢測又光信號轉(zhuǎn)變?yōu)榈碾娦盘?。因為在檢測過程中,流動相已經(jīng)在檢測前蒸發(fā),不存在溶劑峰對結(jié)果的影響,而且對流動相溫度沒有要求,所以,梯度洗脫時基線平穩(wěn),檢測結(jié)果靈敏度高,可用于一次進(jìn)樣后梯度洗脫的復(fù)雜中藥組份檢測分析。使用蒸發(fā)光散射檢測器聯(lián)合高效液相色譜檢測西洋參中含有的皂苷元含量,檢測結(jié)果靈敏度、分離準(zhǔn)確性均顯著高于紫外檢測儀器聯(lián)合高效液相色譜法。使用蒸發(fā)光散射檢測器和高效液相色譜分析膽汁中含有膽酸的種類和含量,使用揮發(fā)性鹽調(diào)節(jié)流動相pH值、甲醇-水洗脫梯度,檢測結(jié)果非常準(zhǔn)確[6]。所以,高效液相色譜法聯(lián)合蒸發(fā)光散射檢測器應(yīng)用于復(fù)雜中藥成分分析、含有效成分藥物部位等檢測分析實驗中,該方法結(jié)果可靠、操作簡便。
超臨界流體萃取技術(shù)是根據(jù)超臨界流體的相似液體高密度、相似氣體的低粘度特點,從固體待測樣本中提取組分。常用CO2作為超臨界流體提取介質(zhì),對中等級性以及非極性組分萃取效果好。需要萃取不同極性物質(zhì)時可以通過調(diào)節(jié)實驗壓力、溫度、改進(jìn)劑等萃取到中藥中有效成分物質(zhì)。超臨界流體萃取技術(shù)能夠在無氧、低溫實驗條件下完成,利于萃取揮發(fā)性、熱不穩(wěn)定、易被氧化的成分。
使用超臨界流體技術(shù)能夠提取同一樣本中性質(zhì)、結(jié)構(gòu)相似組分,提取效果優(yōu)于超聲波提取法,中藥組分提取時可以聯(lián)合色譜儀進(jìn)行分離、測定。超臨界流體色譜分析是將超臨界流體作為流動相的色譜分析方法,分離柱使用交聯(lián)毛細(xì)管柱,對檢測器要求較低,檢測時待測組分傳遞時間短,分析時間短,可用于中藥組分檢測[7]。
毛細(xì)管電泳法也是一種液相分離技術(shù),其檢測結(jié)果靈敏度高、柱效高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣,可聯(lián)合各種檢測儀器、設(shè)置各種分離模式,廣泛應(yīng)用于國內(nèi)外中藥以及天然藥物組分采集和分析中。其中,毛細(xì)管區(qū)帶電泳是最基本、應(yīng)用最廣泛的分離模式,在高壓電作用下,各種分子顆粒在毛細(xì)管電解質(zhì)中因為移動速度不同所以達(dá)到區(qū)分的目的。隨著技術(shù)發(fā)展,毛細(xì)管電泳分離速率提高、定量檢測物質(zhì)種類增多、所需樣本量少、可以聯(lián)合質(zhì)譜分析,可以用于中藥組分分析。
膠束電動毛細(xì)管色譜是毛細(xì)管電泳法的一個重要分支手段,將離子型表面活性劑中加入緩沖液,化學(xué)反應(yīng)后生成內(nèi)核疏水膠束,用于分離離子型化合物的同時分離中性物質(zhì)。毛細(xì)管凝膠電泳根據(jù)不同分子大小、凝膠介質(zhì)達(dá)到分離物質(zhì)的能力,用于分離、分析核酸和蛋白質(zhì)[8]。
綜上所述,氣象色譜法、高效液相色譜法、超臨界流體萃取法以及毛細(xì)管電泳都可以用于中藥檢驗中,可根據(jù)實驗?zāi)康倪M(jìn)行選擇和設(shè)計實驗。
參考文獻(xiàn)
[1] 聶平,肖炳燚,羅暉明,等.超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥指紋圖譜中的應(yīng)用[J].中南藥學(xué),2013,11(7):524-527.
[2] 關(guān)瑾,許文雅,閻峰,等.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物代謝組學(xué)研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].藥物分析雜志,2016,36(1): 9-16.
[3] 陳建琴.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在違法添加物檢測的應(yīng)用進(jìn)展[J],廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2014,17(1): 119-121.
[4] 吳春艷,耿姝,伊?xí)詪?,?中藥質(zhì)量分析與評價的研究進(jìn)展[J].理化檢驗-化學(xué)分冊,2015,51(7):1035.
[5] 陳士林,郭寶林,張貴君.中藥鑒定學(xué)新技術(shù)新方法研究進(jìn)展[J],中國中藥雜志,2012,37(8):1043-1055.
[6] 李佩,李銀峰,王杰晶,等.固相萃取技術(shù)在藥物分析中的應(yīng)用[J],現(xiàn)代藥物與臨床, 2013,28(2):261-264.
[7] 李婷菲,葉斌.生物技術(shù)在中藥及天然藥物研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2015,27(9): 9-11.
[8] 李德強(qiáng),肖媛媛,戴榮源,等.靶分子親和-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在中藥活性成分篩選中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)雜志, 2015,31(21): 2164-2169.
文章編號:1006-6586(2016)01-0022-02 中圖分類號:R286.0
文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A