活菌制劑對2型糖尿病胃腸神經(jīng)病變患者腸道菌群的影響

程曉亮　朱寅榮　于南南　宮　蕓

活菌制劑對2型糖尿病胃腸神經(jīng)病變患者腸道菌群的影響

程曉亮朱寅榮于南南宮蕓

【摘要】目的研究2型糖尿病并胃腸功能紊亂患者服用雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊治療前后腸道雙歧桿菌的變化。方法選取30例2型糖尿病并胃腸神經(jīng)病變患者，給予雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊口服，每次2粒，3次/d，治療1個月，治療前后收集糞便樣品，提取樣品中細(xì)菌DNA，根據(jù)雙歧桿菌總菌的16S rRNA序列設(shè)計特異性引物，并應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)對60份糞便樣品中的雙歧桿菌總菌進(jìn)行定量檢測。結(jié)果2型糖尿病并胃腸功能紊亂患者服用雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊治療后腸道雙歧桿菌總菌數(shù)量較治療前增加（P＜0.05）。結(jié)論2型糖尿病伴胃腸功能紊亂患者口服雙歧桿菌活菌制劑能有效增加腸道雙歧桿菌數(shù)量，改善胃腸道癥狀，雙歧桿菌活菌制劑在2型糖尿病伴胃腸功能紊亂患者的治療上有較好的運(yùn)用前景。

【關(guān)鍵詞】2型糖尿??；胃腸功能紊亂；雙歧桿菌；雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊

Objective To study the influence of intestinal bifidobacteria on the type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction after taking bifid triple viable capsule.Methods Selecting 30 cases of type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction.Taking the bifid triple viable capsule（2 pieces each time，three times a day）for a month.Extracting the bacterial DNA of the fecal samples before and after the treatment.Designing the specific primer of bifidobacteria according to the bacterial 16SrRNA sequence.Quantitatively testing the total volume of bifidobacteria on the two different groups by applying the real-time PCR technology.Results After taking the bifid triple viable capsules，the total amount of bifidobacteria increased compared to the previous case（P＜0.05）for the type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction.Conclusion Bifid triple viable capsules help increase the amount of intestinal bifidobacterium effectively and improve the gastrointestinal symptoms.It is promising for type 2 diabetes patients with gastrointestinal dysfunction by using bifid triple viable capsules as the medical treatment.

【Key words】Type 2 diabetes，Gastrointestinal disorders，Bifidobacteria，Bifidobacterium triple viable capsule

糖尿病胃腸功能紊亂是糖尿病的常見并發(fā)癥之一，其詳細(xì)機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為其發(fā)生可能與自主神經(jīng)病變、胃腸神經(jīng)系統(tǒng)病變、Cajal間質(zhì)細(xì)胞病變、高血糖刺激腸微血管病變及胃腸激素分泌失調(diào)等相關(guān)［1］。研究表明，與無胃腸功能紊亂的2型糖尿病患者相比，2型糖尿病伴胃腸功能紊亂的患者存在更嚴(yán)重的菌群失調(diào)［2］。本實驗通過給予受試者口服雙歧桿菌活菌制劑，分析益生菌制劑口服途徑治療的有效性。

1　材料與方法

1.1研究對象及標(biāo)本收集

選取2014年3月～2014年9月在昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的30例2型糖尿病并胃腸神經(jīng)病變患者，年齡在50～70歲，男20例，女10例，平均年齡（62.50±8.15）歲。采集30例患者治療前后的糞便樣品，收集于無菌采便盒中，并迅速保存于-70℃低溫冰箱內(nèi)。所有患者給予口服雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊，每次2粒，3次/d，治療1個月。

1.2主要實驗試劑和儀器

細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（T?ANampBacterriaDNAKit）、PBS液（0.01 mol/L，pH 7.4）、質(zhì)粒提取試劑盒（T?ANGEN 100次質(zhì)粒小提）、瓊脂糖、瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒均購自北京天根生化科技有限公司，SYBRGreen熒光染料、dNTP、TaqDNA聚合酶、DNA分子標(biāo)準(zhǔn)Marker、T載體試劑盒（TAKARApMD19Tsimple），均購自寶生物工程（大連）有限公司，實驗所用引物、GlodView?染料購自生工生物工程（上海）有限公司。

1.3實驗方法

取濕重糞便樣品1 g加10 ml滅菌PBS（0.01 mol/L，pH 7.4），充分振蕩混勻10 min，隨之低速離心（3000 r/min）5 min，留取上清，上述過程重復(fù)3次。將所收集到的上清液高速離心（12000 r/min）10 min，然后棄上清，收集沉淀，并用10 mlPBS懸浮，12000 r/min離心5 min，沉淀重復(fù)洗滌3次，所得菌體用1 ml無菌水懸浮混勻，裝至1.5 mlEP管中，并以12000 r/min離心5 min。得到的菌體沉淀保存于-20℃。使用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒并嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行提取。選用的引所物序列如下：雙歧桿菌總菌：上游：AGAACCTTACCTGGGCTTGA；下游：CCTTCCTCCGAGTTGACCC，片段大小208 bp。以2型糖尿病伴胃腸神經(jīng)病變患者服藥前糞便樣本提取的細(xì)菌基因組DNA為模板進(jìn)行常規(guī)PCR反應(yīng)，制備質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，通過實時熒光定量得出雙歧桿菌總菌的拷貝數(shù)。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 17.0軟件處理，雙歧桿菌總菌計量資料結(jié)果均經(jīng)正態(tài)性檢驗，以（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（）表示，2型糖尿病伴胃腸神經(jīng)病變組治療前后差異用配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2型糖尿病伴胃腸神經(jīng)病變組患者治療前雙歧桿菌總菌數(shù)量為（7.97±0.63）lgcopies/g，經(jīng)雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊420 mg，3次/d。治療1個月后，雙歧桿菌總菌數(shù)量為（9.07±0.72）lgcopies/g。與治療前相比，2型糖尿病伴胃腸神經(jīng)病變患者服用雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊治療后腸道雙歧桿菌總菌數(shù)量增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3　討論

糖尿病性胃腸功能紊亂患者的治療，主要包括控制血糖及減輕相關(guān)的胃腸道癥狀兩方面［3］。研究顯示［4-6］，補(bǔ)充雙歧桿菌制劑，能夠減少LPS，減輕2型糖尿病個體的低水平炎癥反應(yīng)，改善糖代謝及胰島素抵抗，增加葡萄糖依賴的胰島素分泌。王雪萍等［7］及張宜松等［8］將雙歧桿菌制劑用于2型糖尿病伴胃腸功能紊亂患者，以治療惡心、腹脹、腹瀉、便秘等癥狀，收到了良好的效果。因此，通過增加腸道雙歧桿菌，能夠通過改善內(nèi)毒素血癥，降低全身炎癥反應(yīng)，改善胰島素抵抗，調(diào)節(jié)胃腸激素及滲透壓，維持腸道正常的內(nèi)環(huán)境，協(xié)調(diào)消化道與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的相互作用，從而改善糖尿病胃腸功能紊亂的癥狀。

本實驗中2型糖尿病伴胃腸功能紊亂患者在服用雙歧桿菌制劑1個月后，癥狀改善的同時腸道雙歧桿菌數(shù)量較治療前升高。由此可見，益生菌活菌制劑能通過口服途徑有效提高腸道雙歧桿菌數(shù)量，從而有效改善腹脹、腹瀉、便秘等癥狀，在糖尿病性胃腸功能紊亂的治療上有著良好的運(yùn)用前景。

參考文獻(xiàn)

［1］Yarandi SS，Srinivasan S.Diabetic gastrointestinal motility disorders and the role of enteric nervous system：current status and future directions［J］.Neurogastroenterology&Motility，2014，26（5）：611-624.

［2］任巧.2型糖尿病胃腸功能紊亂患者糞便菌群分析［J］.臨床醫(yī)學(xué)，2013，33（3）：54-55.

［3］Gatopoulou A，Papanas N，Maltezos E.Diabetic gastrointestinalautonomic neuropathy：current status and new achievements for everyday clinical practice［J］.European journal of internal medicine，2012，23（6）：499-505.

［4］Cani PD，Neyrinck AM，F(xiàn)ava F，et al.Selective increases of bifidobacteria in gutmicroflora improve high-fat-diet-induced diabetes in mice through amechanism associated with endotoxaemia［J］.Diabetologia，2007，50（11）：2374-2383.

［5］Cani PD，Amar J，Iglesias MA，et al.Metabolic endotoxemia initiates obesity and insulin resistance［J］.Diabetes，2007，56（7）：1761-1772.

［6］Chen JJ，Wang R，Li XF，et al.Bifidobacteriumlongum supplementation improved high-fat-fed-induced metabolic syndrome and promoted intestinal Reg I gene expression［J］.Experimental Biology and Medicine，2011，236（7）：823-831.

［7］王雪萍，李軍，陳建強(qiáng).雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊治療糖尿病性胃腸功能紊亂60例療效觀察［J］.醫(yī)學(xué)理論與實踐，2012，25（7）：788-789.

［8］張宜松，朱玉林，陳建國，等.雙歧桿菌三聯(lián)活菌膠囊治療2型糖尿病難治性腹瀉的療效觀察［J］.臨床合理用藥雜志，2014，7（13）：74.

【中圖分類號】R587.1

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）11-0101-03

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.11.068

基金項目：2型糖尿病伴或不伴胃腸神經(jīng)功能紊亂患者腸道雙歧桿菌的差異。云南省教育廳項目（2013Y294）

作者單位：昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，云南昆明650101

Effect of Living Bacteria Agent on Intestinal Flora in Type 2 Diabetes Mellitus Patients With Gastrointestinal Dysfunction

CHENG Xiaoliang ZHU Yinrong YU Nannan GONG Yun Department of Endocrinology，The Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University，Kunming Yunnan 650101，China

【Abstract】