不同殺菌劑對防番茄葉霉病木霉菌葉片定殖效率的影響

周勇 于海霞 賈麗慧 李克梅 劉利群

摘 ? ?要：以番茄葉霉病原為靶標(biāo)，研究番茄葉片上木霉菌的生長變化規(guī)律，比較了常見殺菌劑多菌靈、代森錳鋅、腐霉利、甲基硫菌靈對木霉菌株的影響。結(jié)果表明：木霉在番茄葉片上能持續(xù)生長15 d左右，葉片孢子的數(shù)量有明顯的變化。常用殺菌劑對木霉的生長有一定的抑制作用，其中甲基硫菌靈處理對木霉生長的影響最大，代森錳鋅處理對木霉生長的影響最小。藥劑的噴灑先后順序，對木霉的生長有一定影響。

關(guān)鍵詞：木霉;番茄葉霉病;葉片定殖;影響

中圖分類號：S482.2 ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ? ? ? ? ? ? ? DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2016.01.025

Effects of Different Fungicides on Colonization Efficiency of the Leaves of Tomato Leaf Mold

ZHOU Yong1，YU Haixia1，JIA Lihui1，LI Kemei2，3，LIU Liqun1

（1.Xinjiang Agricultural Vocational Technical College，Changji， Xinjiang 831100，China;2.College of Agronomy，Xinjiang Agricultural University，Urumqi， Xinjiang 830052，China;3.Key Laboratory of Harmful Biological Monitoring and Safety Prevention of ?Xinjiang Autonomous Region Agriculture-Forestry Universities，Urumqi， Xinjiang 830052，China）

Abstract：The tomato leaf mould pathogen as a target of tomato leaves on Trichoderma growth variation， and comparison of the common sterilization agent carbendazim， mancozeb， procymidone， methyl sulfur bacteria spirit effect on Trichoderma strains. The results showed that： Trichoderma in leaves of tomato growth could last for 15 days， the leaves of spore number of obvious changes. Commonly used pesticides on Trichoderma growth inhibition， which thiophanate methyl treatment had the greatest influence on Trichoderma， mancozeb on Trichoderma minimal impact. There is a certain effect on the growth of the wood.

Key words：wood mould; tomato leaf mold; collaborative control; leaf coionization; effect

番茄葉霉病是一種世界范圍廣泛分布的病害[1]，病原物為黃褐釘孢（Passalora fulva），有性型為子囊菌門球腔菌科[2]。許多試驗表明，大多數(shù)生防劑在試驗室培養(yǎng)使用時效果很好，但在田間使用時穩(wěn)定性和持效性不理想。除了溫度、濕度、光照條件以外，殺菌劑的大量使用是影響生物制劑田間使用效果的重要因素。木霉菌作為葉表微生物區(qū)系的成員，經(jīng)常和同一生境的其它微生物發(fā)生聯(lián)系，促進(jìn)或削弱生防效果，在農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)中，殺菌劑是影響木霉生防作用的重要因素。因此，研究常用殺菌劑對篩選拮抗木霉在葉片表面定殖效果的影響非常有必要[3-9]。

1 材料和方法

1.1 材 料

拮抗菌株：木霉TCYF4，由新疆農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院微生物實驗室提供。

植物材料：番茄品種為亨氏1100。番茄種子用75%的酒精表面消毒后，浸種催芽。準(zhǔn)備128穴育苗盤，種子露白后，每穴1粒播種于濕潤的基質(zhì)中，覆蓋細(xì)沙，日光溫室內(nèi)培養(yǎng)，溫度25 ℃。出苗1周兩葉一心時，定植于12 cm的塑料盆，按每盆裝無菌栽培基質(zhì)180 g（沙∶園土∶蛭石比例為2∶3∶1）準(zhǔn)備基質(zhì)，每盆定植5棵幼苗。幼苗長至8～10片真葉，挑選長勢基本相同的番茄幼苗，分8組。每周用Hoagland營養(yǎng)液澆灌2次，培養(yǎng)8周。

TSM培養(yǎng)基：MgSO4·7H2O0.2 g;K2HP40.9 g;KCl0.15 g;NH4NO31.0 g;葡萄糖3.0 g;氯霉素0.25 g;玫瑰紅0.033 g;五氯硝基苯（75%可濕性粉劑）0.2 g;瓊脂粉20 g;H2O1 000 mL;pH值6.0（滅菌前調(diào)節(jié)）。

供試藥劑見表1。

1.2 方 法

1.2.1 番茄葉片上木霉的生長變化規(guī)律 采用系列稀釋法將木霉菌株孢子懸浮液稀釋，將濃度調(diào)整到1×106個孢子·mL-1。選取長勢一致的番茄葉片，均勻噴灑配好的木霉孢子懸浮液。將葉片放入25 ℃恒溫箱中培養(yǎng)，對照為噴灑無菌水處理。噴霧后1 h取第1次樣，后每48 h取樣1次，共取樣7次。每次取樣回收葉片。采用稀釋涂布平板法計數(shù)，在木霉半選擇性培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)3 d，顯微鏡觀察木霉菌在番茄葉片上的定殖情況，測定木霉菌落數(shù)。

1.2.2 不同殺菌劑對木霉菌生長的影響 分別將50%多菌靈、75%百菌清、75%代森錳鋅、50%腐霉利、70%甲基硫菌靈采用二次稀釋法分別稀釋到1 500，1 000，1 000，1 500，1 500 倍液待用。

隨機(jī)區(qū)組試驗。選取生長一致的番茄植株，處理1（保護(hù)性試驗），噴灑濃度為108個孢子·mL-1的木霉菌孢子懸液，3 d后噴殺菌劑，清水對照，重復(fù)3次，處理后6 d和30 d，各檢測1次孢子量。處理2（治療性試驗），噴灑不同殺菌劑，3 d后，噴灑濃度為108個孢子·mL-1的木霉菌孢子懸液，清水對照，重復(fù)3次，處理后6 d和30 d，各檢測1次孢子量。

檢測采用震蕩法和半選擇性培養(yǎng)基計數(shù)法。每處理取10片葉，剪成2 cm×2 cm的葉片放入三角瓶中，加入10 mL無菌水和少許洗衣粉，放在振蕩器中振蕩20 min，100 r·min-1，取9 mL振蕩液加入滅菌的TSM培養(yǎng)基，培養(yǎng)6 d和3 0 d，檢測孢子量。

2 結(jié)果與分析

2.1 番茄葉片上木霉的生長變化規(guī)律

試驗結(jié)果表明，番茄葉片上木霉的孢子數(shù)量有明顯的變化（表2）。前4 d，采集的樣本經(jīng)培養(yǎng)，孢子的數(shù)量持續(xù)減少，后又增加，第8天采集的樣本經(jīng)培養(yǎng)，孢子的數(shù)量達(dá)到最大值，后又持續(xù)減少。木霉菌孢子數(shù)量的這種變化趨勢可能與菌本身對環(huán)境的適應(yīng)性和番茄葉片的生活力有關(guān)。

2.2 不同藥劑對木霉TCYF4在番茄葉片表面定殖效率的影響

不同藥劑對木霉TCYF4定殖能力的影響測定結(jié)果見表3、表4。不同的藥劑對木霉在葉片上的定殖能力存在著很大差異，保護(hù)劑效果比治療劑效果好。

保護(hù)性試驗表明，施用多菌靈、代森錳鋅、腐霉利、百菌清6 d，均對木霉HCYF4有一定的刺激作用，甲基硫菌靈處理的影響最大，代森錳鋅處理的影響最小;施用30 d后，代森錳鋅處理的木霉孢子依然保持一定的數(shù)量，百菌清處理對木霉孢子數(shù)量的影響最大。比較6 d和30 d定殖情況后，說明木霉TCYF4菌株適合在代森錳鋅噴灑過的葉片上定殖存活，不適合在百菌清噴灑過的葉片上定殖存活，其它藥劑均對木霉HCYF4有一定的抑制作用。

治療性試驗表明，多菌靈、甲基硫菌靈、腐霉利藥劑對木霉TCYF4均有較強(qiáng)的抑制作用;百菌清前期有部分促進(jìn)作用，后期卻表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用;代森錳鋅的抑制作用最弱。

3 結(jié) 論

木霉在番茄葉片上生長能持續(xù)15 d左右，葉片表面定殖的木霉孢子的數(shù)量有明顯的變化，有兩個高峰期，分別在第1 天和第8 天出現(xiàn)，兩個明顯的減退期，分別在第4 天和15 d出現(xiàn)。這可能與木霉孢子前期對寄主的侵染能力，寄生以后對葉片環(huán)境的適應(yīng)能力，以及后期寄主營養(yǎng)條件情況有關(guān)。人工接種木霉后，木霉孢子濃度大，覆蓋葉片表面，前期因大量孢子沒有與寄主建立寄生關(guān)系，導(dǎo)致數(shù)量減少;之后隨著寄生關(guān)系的建立，孢子迅速在葉面生長，占領(lǐng)氣孔周圍，大量繁殖，數(shù)量達(dá)到最大;最后因寄主營養(yǎng)條件的惡化，菌絲逐漸死亡。

分別用多菌靈、代森錳鋅、腐霉利、百菌清、甲基硫菌靈對木霉TCYF4的定殖能力進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，不同的藥劑對木霉在葉片上的定殖能力存在著很大差異，保護(hù)劑效果比治療劑效果好;多菌靈、代森錳鋅、腐霉利、百菌清對木霉的生長有一定的刺激作用，甲基硫菌靈的處理對木霉的影響最大;代森錳鋅處理的葉片，木霉孢子數(shù)目最多，說明木霉TCYF4菌株適合在代森錳鋅噴灑過的葉片上定殖存活，不適合在甲基硫菌靈噴灑過的葉片上定殖存活。

參考文獻(xiàn)：

[1] 曹廣麗，李啟云，董英山.保護(hù)地番茄葉霉病的發(fā)生與防治研究綜述[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2006，22（4）：352-354.

[2] 王慧君，杜愛華，石延霞，等.李寶聚博士診病手記（六十）兩種蔬菜病原菌分類地位的變更[J].中國蔬菜，2013（11）：21-22.

[3] 井瑞霞.大棚番茄葉霉病的發(fā)生及其防治[J]. 吉林蔬菜，2010（5）：70.

[4] 馮傳榮.日光溫室番茄葉霉病藥劑防治試驗[J].中國植保導(dǎo)刊，2013，20（3）：48-49.

[5] 楊蕊芝，燕孝民，李建玲，等.無公害生產(chǎn)中幾種殺菌劑對番茄葉霉病田間防效的測定[J].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2012（1）：68，70.

[6] 崔彥玲，張環(huán).番茄葉霉病抗性與苯丙氨酸解氨酶的相關(guān)性[J].華北農(nóng)學(xué)報，2003（1）：79-82.

[7] 柴敏，于拴倉，丁云花，等.北京地區(qū)番茄葉霉病菌致病性分化新動態(tài)[J].華北農(nóng)學(xué)報，2005（2）：97-100.

[8] 紀(jì)明山，李艷麗，谷祖敏，等.番茄葉霉病拮抗細(xì)菌H402發(fā)酵條件研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（1）：73-76.

[9] 陳俊美，王美琴，孔令斌.番茄葉霉病菌對多菌靈和乙霉威的抗藥性與電導(dǎo)率關(guān)系的初步研究[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007（4）：61-63.