寧波-舟山港口航道3種致病性細(xì)菌毒力特征與耐藥性

管　峰，高　威，陳吉剛，毛芝娟，楊季芳*

(1. 浙江萬里學(xué)院 生物與環(huán)境學(xué)院 浙江 寧波 315100；2. 寧波市微生物與環(huán)境工程重點(diǎn)實驗室 浙江 寧波 315100)

?

寧波-舟山港口航道3種致病性細(xì)菌毒力特征與耐藥性

管峰1,2，高威1，陳吉剛1,2，毛芝娟1,2，楊季芳*1,2

(1. 浙江萬里學(xué)院 生物與環(huán)境學(xué)院 浙江 寧波 315100；2. 寧波市微生物與環(huán)境工程重點(diǎn)實驗室 浙江 寧波 315100)

摘要:本文調(diào)查分析了寧波-舟山港口航道副溶血弧菌 Vibrio parahemolyticus、溶藻弧菌Vibrio alginolyticus和嗜水氣單胞菌 Aeromonas hydrophila的毒力特征和耐藥性特點(diǎn)。用PCR方法檢測分離菌株的毒力基因分布模式發(fā)現(xiàn)，副溶血弧菌毒力基因型以gyrB+，toxR+，tlh+和tdh+為代表，溶藻弧菌毒力基因型以aspA+，tlh+，collagenase+和toxS+為代表，嗜水氣單胞菌毒力基因型以aerA+，alt+，aha1+和hlyA+為代表；副溶血弧菌、溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌代表菌株相應(yīng)基因的檢出率分別為57.1%、40.0%和50.0%。用24種常見抗生素對3種細(xì)菌的分離代表菌株進(jìn)行藥敏調(diào)查，耐藥率分別為4.17%、8.33%和29.17%。實驗結(jié)果表明寧波-舟山港口航道3種致病性細(xì)菌具備較豐富的毒力基因種類和耐藥性，需要有針對性地制定預(yù)防措施。此外，鑒于毒力基因型與致病性之間的相關(guān)性，毒力基因可作為標(biāo)記基因，用于致病性細(xì)菌的檢測。

關(guān)鍵詞:港口航道；致病菌；毒力基因；耐藥性

0引言

弧菌屬Vibrio和氣單胞菌屬Aeromonas細(xì)菌均屬于革蘭氏陰性菌，廣泛分布于海水中，尤其是近岸海域。這些細(xì)菌主要的感染對象有蝦、魚和貝等，不僅是海洋動物的主要致病菌，而且被認(rèn)為是沿海地區(qū)細(xì)菌性食物中毒的重要病原菌。由于這類細(xì)菌在沿海生態(tài)危害以及食源中毒方面的問題日顯突出，加深對于它們的認(rèn)識，對水產(chǎn)動物細(xì)菌性疾病的防治，人類細(xì)菌性食物中毒的診斷、治療以及微生態(tài)制劑研發(fā)等具有重要意義。

寧波-舟山港是世界上最大貨物吞吐港口之一，在我國國民經(jīng)濟(jì)建設(shè)、物種多樣性保育和海岸帶開發(fā)等方面具有舉足輕重的作用。受人類活動以及洋流影響，該海域海洋微生物種類多，活性高，同時受偏高水溫、多樣漁業(yè)資源和頻繁氣候變化等影響，寧波-舟山港細(xì)菌數(shù)量和差異巨大。因此，研究寧波-舟山港口航道致病性細(xì)菌的毒力基因分布情況及耐藥規(guī)律，對深入探討致病菌的防控具有重要意義。

在國外，關(guān)于海洋細(xì)菌學(xué)的研究較早就已經(jīng)開展[1-6]，我國微生物研究者對沿海港口航道海水細(xì)菌致病性的研究也有相關(guān)報道[7-16]。而對于寧波-舟山港口航道副溶血弧菌、溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌毒力基因型與藥物敏感性的研究工作此前鮮見報道。這3種細(xì)菌是我國沿海常見的人-畜-魚共患病原菌，可引起魚類出血性敗血癥、腸炎等，也會導(dǎo)致人急性疾病，但病原菌的流行規(guī)律及毒力特征至今仍不明確。本研究通過毒力基因和耐藥性檢測，分析了寧波-舟山港口3種致病菌的毒力特性和耐藥特征，以期為海洋細(xì)菌致病機(jī)理和耐藥性研究提供參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1采樣區(qū)信息

設(shè)置鎮(zhèn)海碼頭、橫山碼頭、白峰碼頭、沈家門碼頭和朱家尖大橋等5個樣品采集點(diǎn)。按春(4月)、夏(7月)、秋(10月)和冬(1月)四季采集海水表層下30 ~50 cm處水樣。每處采集500 mL水樣，采樣過程均按照無菌要求，樣品4 ℃保存，由滅菌管保存并帶回實驗室，于16 h內(nèi)處理完畢。采集點(diǎn)信息見表1。

1.1.2主要試劑

所有培養(yǎng)基、生化鑒定試劑均購自青島海博生物公司；2×Taq MasterMix(含染料)購自北京康為世紀(jì)生物公司；pMD18-T載體和DL 2000 marker購自Takara公司；藥敏紙片購自英國Oxoid公司；無菌脫纖維綿羊全血(瓶裝)購自杭州新銳生物工程有限公司。

1.1.3標(biāo)準(zhǔn)菌株

標(biāo)準(zhǔn)菌株副溶血弧菌ATCC 17802、溶藻弧菌ATCC 17749和嗜水氣單胞菌ATCC 7966等由寧波市微生物與環(huán)境工程重點(diǎn)實驗室保存。

表1　采樣點(diǎn)位置

1.2方法

1.2.1菌株分離

樣品25 mL無菌接種225 mL堿性蛋白胨水28 ℃增菌培養(yǎng)6~8 h。取培養(yǎng)物接種TCBS瓊脂，置28 ℃培養(yǎng)18~24 h。從被檢材料分離目標(biāo)菌株，純培養(yǎng)后-70 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2常規(guī)生理生化鑒定

參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊》[17]和《伯杰氏細(xì)菌學(xué)鑒定手冊》[18]方法，以標(biāo)準(zhǔn)菌株作為參照對分離菌株進(jìn)行生理生化特征測定。

1.2.316S rDNA分子鑒定

將新鮮培養(yǎng)的菌液煮沸后離心取上清液作為基因組模板。用16S rDNA通用引物27 F和1492 R擴(kuò)增細(xì)菌基因組，將PCR產(chǎn)物連接到pMD18-T載體上進(jìn)行克隆測序。用Clustal X2軟件進(jìn)行序列比對，再用Mega 6.0軟件構(gòu)建N-J系統(tǒng)發(fā)育樹，并進(jìn)行1 000次Bootstraps重復(fù)檢驗。

1.2.4毒力基因檢測

將毒力基因引物擴(kuò)增PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，目的片段回收純化，T載體連接克隆轉(zhuǎn)化，鑒定無誤送上海生工測序。

1.2.5耐藥性檢測

根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)制定的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)，耐藥性檢測采用Kirby-Bauer 紙片瓊脂擴(kuò)散法，選擇24 種常用的抗生素進(jìn)行實驗。以標(biāo)準(zhǔn)菌株作為質(zhì)控菌株。結(jié)果判定按NCCL 2003 版執(zhí)行，耐藥性分為3個層次：敏感(S)、中度敏感(I)和耐受(R)。

1.2.6溶血性實驗

將無菌的10%脫纖維綿羊全血平板或者哥倫比亞血平板(自制)復(fù)溫至25 ℃后，挑取分離菌株劃線接種于綿羊全血平板或者哥倫比亞血平板上，28 ℃培養(yǎng)，24~48 h后觀察溶血現(xiàn)象。若菌落周圍出現(xiàn)溶血環(huán)，表明該細(xì)菌具溶血能力，是潛在的病原菌；溶血環(huán)越大，其致病力也可能越強(qiáng)。若菌落周圍未出現(xiàn)溶血環(huán)，表明該細(xì)菌無溶血能力。

2結(jié)果與分析

2.1菌株鑒定結(jié)果

本研究分離出致病性副溶血弧菌7株，致病性溶藻弧菌3株，致病性嗜水氣單胞菌4株，實驗室分別編號為VP(1~7)、VA(1~3)和AH(1~4)。由表2可見VP(3、5、7)、VA(1、2、3)和AH-1分別是副溶血弧菌、溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌中溶血性能最強(qiáng)的菌株，選擇VP-3(VP LWW01109)、VA-1(VA LWW01106)和AH-1(AH LWW17749)作為后續(xù)實驗菌株。由表3可見實驗菌株生理生化結(jié)果與陸源同種細(xì)菌結(jié)果基本一致[17-18]。

表2　3種細(xì)菌分離菌株的溶血特征

注：+++++：溶血能力最強(qiáng)；++++：溶血能力較強(qiáng)；+++：溶血能力中等；++：溶血能力較弱；+：溶血能力弱；-：無溶血能力。

表3　代表菌株的生理生化特性

注：“+”代表陽性；“-”代表陰性

2.2序列分析

圖1　代表菌株16S rDNA基因核苷酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析Fig.1　Phylogenetic trees of 16S rDNA ofrepresentative strains

分離菌株經(jīng)16S rDNA擴(kuò)增產(chǎn)物純化，克隆并測定序列。細(xì)菌16S rDNA基因1 466個核苷酸序列比對表明，菌株VP LWW01109與副溶血弧菌核苷酸序列相似性超過98%，菌株VA LWW01106與溶藻弧菌核苷酸序列相似性最高，菌株AH LWW17749與嗜水氣單胞菌核苷酸序列相似性最為接近(圖1)。序列分析結(jié)合生理生化特性結(jié)果表明，菌株VP LWW01109為副溶血弧菌，菌株VA LWW01106為溶藻弧菌，菌株AH LWW17749為嗜水氣單胞菌。

2.3毒力基因分布模式

分離菌株基因組DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后，毒力基因擴(kuò)增片段與預(yù)期片段大小一致。將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆測序，經(jīng)Blast序列比對，擴(kuò)增片段均為目的基因。

對所有分離株細(xì)菌毒力基因進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，每株細(xì)菌的毒力基因型都不相同，副溶血弧菌均能檢出gyrB+和tlh+，最復(fù)雜的毒力基因型是gyrB+、tlh+、toxR+和tdh+；每株溶藻弧菌只含有1~2種毒力基因；每株嗜水氣單胞菌含有1~4種毒力基因不等，最復(fù)雜的是aerA+、hlyA+、aha1+和alt+，多樣性較為豐富。代表菌株的毒力基因種類及檢出率如表4所示。

2.4耐藥性特征

對具有強(qiáng)溶血能力的VP LWW01109、VA LWW01106和AH LWW17749進(jìn)行抗生素耐藥性檢測，耐藥性特征見表5。為便于統(tǒng)計，耐藥性處于中度敏感(I)并入耐藥(R)分析代表菌株對抗生素的耐受性，計算耐藥性時僅統(tǒng)計耐藥(R)的數(shù)量。結(jié)果表明具有強(qiáng)溶血能力的細(xì)菌普遍存在耐藥性。VP LWW01109對氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)脂類、多肽類、部分β-內(nèi)酰胺類、利福霉素類和香豆素類抗生素具有耐受性，耐藥率為4.17%。VA LWW01106對氨基糖苷類、多肽類、大部分β-內(nèi)酰胺類、香豆素類抗生素以及克拉霉素、克林霉素和磷霉素等有一定耐受性，耐藥率為8.33%。AH LWW17749對大環(huán)內(nèi)脂類、四環(huán)素類、多肽類、部分β-內(nèi)酰胺類、利福霉素類和香豆素類抗生素等有耐受性，耐藥率為29.17%。

表4　代表菌株的毒力基因種類

表5　代表菌株對24種抗生素的耐藥性特征

注：R表示耐受，I表示中度敏感，S表示敏感

3討論

在我國大榭港[9]、秦皇島港[12, 14]、煙臺港[13]和鹽田港[15]等地分別發(fā)現(xiàn)致病性弧菌(如副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌)、致病性單胞菌(如嗜水氣單胞菌、銅綠假單胞菌)和致病性腸桿菌(如大腸埃希氏菌、陰溝腸桿菌)等。本研究中分離的副溶血弧菌和溶藻弧菌是寧波-舟山港口航道的優(yōu)勢弧菌種(數(shù)據(jù)另文發(fā)表)，這與我國沿海五省——山東、上海、浙江、廣東和海南發(fā)現(xiàn)的致病性弧菌構(gòu)成以溶藻弧菌和副溶血弧菌占多數(shù)[19]基本相符。鹽田港海水優(yōu)勢弧菌種為溶藻弧菌(39.13%)和創(chuàng)傷弧菌(17.39%)[15]，珠海港海區(qū)多達(dá)10種弧菌為主要分離菌[8]，與寧波-舟山港區(qū)檢出情況略有不同，表明不同的海域優(yōu)勢菌種也存在區(qū)域性差異。鹽田港壓艙水優(yōu)勢弧菌種為溶藻弧菌(34.69%)和副溶血性弧菌(28.57%)[15]；珠海港壓艙水中致病性弧菌比海水中種類更多、污染更為嚴(yán)重[8]；山東日照港、煙臺港和青島港壓艙水中氣單胞菌和溶藻弧菌有較高檢出率，而副溶血弧菌檢出率較低[13, 16]，說明港區(qū)中致病菌種類和數(shù)量很可能受壓艙水排放影響，可通過病原菌溯源追查兩者之間的聯(lián)系。

我國沿海細(xì)菌耐藥性的研究較少，而寧波-舟山港口航道細(xì)菌的耐藥性更缺乏研究?；【鷮俸蜌鈫伟鷮偌?xì)菌分布于海洋，耐藥屬性普遍存在，尤其沿海生活、醫(yī)用廢水將大量抗生素帶入海中更是激發(fā)細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。本研究顯示在寧波-舟山港口航道具備強(qiáng)致病性的細(xì)菌也具有廣譜的耐藥性。ROQUE et al[20]的研究發(fā)現(xiàn)副溶血弧菌對氨芐西林耐藥率超過65%。胡瓏玉 等[21]發(fā)現(xiàn)溶藻弧菌具有嚴(yán)重的多種耐藥性，對四環(huán)素和青霉素類抗生素耐藥率超過90%。本研究發(fā)現(xiàn)，分離菌株對紅霉素、青霉素等具有較強(qiáng)耐受性，說明分離海水受到臨床抗生素以及水產(chǎn)抗生素的污染，并使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。例如新霉素、克拉霉素、萬古霉素等一般僅用于臨床治療，而卡那霉素和新生霉素可用于水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病預(yù)防。本研究發(fā)現(xiàn)嗜水氣單胞菌分離株對新生霉素和四環(huán)素具有耐藥性，這與新生霉素和四環(huán)素作為預(yù)防性抗生素添加劑在飼料中投放入海水，導(dǎo)致海洋細(xì)菌對它們產(chǎn)生普遍抗藥性有關(guān)，特別是弧菌屬和氣單胞菌屬[22]。KABIR et al[23]研究表明霍亂弧菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素可形成具有抗性的L型形態(tài)，在一定程度上解釋了未接觸過抗生素的弧菌屬細(xì)菌對氨芐青霉素具有耐藥性的原因。喹諾酮類抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用較為廣泛，已被證明具有高效治療效果，其耐藥性發(fā)生的頻率也較低，并且針對弧菌屬具有殺菌活性[24]，這也與本研究結(jié)果一致。值得注意的是，3株代表細(xì)菌都發(fā)現(xiàn)具備中等以上耐受萬古霉素的能力，而這種抗生素通常被認(rèn)為與其他抗生素?zé)o交叉耐藥性，并且較難形成耐藥菌株，通常用于耐藥致病菌的治療。這可能與寧波-舟山沿海養(yǎng)殖防治弧菌病或者氣單胞菌引發(fā)的綜合征有關(guān)，建議交叉使用環(huán)丙沙星等既廉價又高效的抗生素，可減少海洋細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。

雖然普遍認(rèn)為致病菌的檢出與疾病發(fā)生之間并沒有必然的聯(lián)系，暴發(fā)細(xì)菌性疾病需要致病菌在一定的環(huán)境中達(dá)到最低致病量以上，但是致病菌的檢出提示了感染風(fēng)險和危害，因此不宜在寧波-舟山港口航道附近進(jìn)行海產(chǎn)養(yǎng)殖，以防人-魚蝦貝的食源性細(xì)菌傳播。根據(jù)實地調(diào)查，由于可利用的海岸帶有限，客運(yùn)碼頭1 km外存在圍網(wǎng)養(yǎng)殖和魚排養(yǎng)殖現(xiàn)象，危害性風(fēng)險較大，一方面養(yǎng)殖海洋生物會增加帶菌風(fēng)險，另一方面養(yǎng)殖廢水中超標(biāo)的有機(jī)物也會造成水體的富營養(yǎng)化，進(jìn)一步刺激細(xì)菌的增生。而且人類的醫(yī)療、工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)以及飼用抗生素引起水體中的病原菌耐藥性的問題也亟需關(guān)注，由此需要更多監(jiān)測近海微生物致病基因和耐藥性的變化，發(fā)展新型控制病原菌技術(shù)以及制劑，保證生產(chǎn)、生活安全。

4小結(jié)

本研究發(fā)現(xiàn)在寧波-舟山港口航道分離獲取的副溶血弧菌、溶藻弧菌和嗜水氣單胞菌菌株的毒力基因分布呈現(xiàn)多樣性，代表菌株的毒力基因檢出率分別達(dá)到57.1%、40.0%和50.0%。3種細(xì)菌對常見抗生素耐藥譜較廣，代表菌株的耐藥率分別為4.17%、8.33%和29.17%。耐受的藥物主要分布于常用的氨基糖苷類、β-內(nèi)酰胺類等抗生素。另外，3種細(xì)菌的代表菌株都對萬古霉素產(chǎn)生或強(qiáng)或弱的耐藥性，說明港口航道中致病菌危害較大，需要加強(qiáng)對此海域細(xì)菌的監(jiān)管。

參考文獻(xiàn)(References)：

[1] MESSI P, GUERRIERI E, BONDI M. Antibiotic resistance and antibacterial activity in heterotrophic bacteria of mineral water origin [J]. The Science of the Total Environment,2005,346(1-3):213-219.

[2] BHUPATHIRAJU V K, MCINERNEY M J, WOESE C R, et al.Haloanaerobiumkushnerisp. nov., an obligately halophilic, anaerobic bacterium from an oil brine [J]. International Journal of Systematic Bacteriology,1999,49(3):953-960.

[3] JANDA J M, ABBOTT S L. The genusAeromonas: taxonomy, pathogenicity, and infection[J]. Clinical Microbiology Reviews,2010,23(1):35-73.

[4] NAKA H, DIAS G M, THOMPSON C C, et al. Complete genome sequence of the marine fish pathogenVibrioanguillarumharboring the pJM1 virulence plasmid and genomic comparison with other virulent strains ofV.anguillarumandV.ordalii[J]. Infection and Immunity,2011,79(7):2 889-2 900.

[5] ADKINS J P, MADIGAN M T, MANDELCO L, et al.Arhodomonasaquaeoleigen. nov., sp. nov., an aerobic, halophilic bacterium isolated from a subterranean brine[J]. International Journal of Systematic Bacteriology,1993,43(3):514-520.

[6] TARDY-JACQUENOD C, MAGOT M, PATEL B K, et al.Desulfotomaculumhalophilumsp. nov., a halophilic sulfate-reducing bacterium isolated from oil production facilities [J]. International Journal of Systematic Bacteriology,1998,48(2):333-338.

[7] LIN Ji-can, YANG Ze, WU Bo-ci, et al. Investigation of ship ballast water of entry or exit of pathogenicVibrio[J]. Modern Preventive Medicine,2005(7):761-762,767.

林繼燦,楊澤,吳博慈,等.進(jìn)出境船舶壓艙水致病性弧菌的調(diào)查[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2005(7):761-762,767.

[8] YE Li-qing, YANG Ze, LIN Ji-can, et al. Investigation on the distribution of pathogenicVibrioin ballast water of ships in port of Zhuhai[J]. Modern Preventive Medicine,2005(3):225-226.

葉立青,楊澤,林繼燦,等.珠海港船舶壓艙水中致病性弧菌分布的調(diào)查[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2005(3):225-226.

[9] HU Qun, HAN hui, LEI Lei, et al. Identification and molecular subtyping ofVibiroVulnificusintroduced in ballast water[J]. Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine,2012(2):118-120.

胡群,韓輝,雷磊,等.海港口岸輸入性創(chuàng)傷弧菌分離鑒定與分子分型研究[J].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志,2012(2):118-120.

[10] XIE Z Y, HU C Q, ZHANG L P, et al. Identification and pathogenicity ofVibrioponticusaffecting cultured Japanese sea bass,Lateolabraxjaponicus(Cuvier in Cuvier and Valenciennes) [J]. Letters in Applied Microbiology,2007,45(1):62-67.

[11] YIN Qi, SONG Ding-bo, ZOU Xing-lin. Investigation of bacterial hygiene in hands of employees in Zhuhai Jiuzhou Port [J]. Science of Travel Medicine,1998(1):41-42.

尹琦,宋定波,鄒醒林.珠海九州港口岸地區(qū)食品從業(yè)人員雙手細(xì)菌衛(wèi)生學(xué)情況調(diào)查[J].旅行醫(yī)學(xué)科學(xué),1998(1):41-42.

[12] LI Jun-cheng, NIE Wei-zhong, LI De-xin, et al. Investigation report on biological monitoring of ship ballast water of international voyage[J]. Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine,2003(S1):46-48.

李俊成,聶維忠,李德昕,等.國際航行船舶壓艙水生物監(jiān)測調(diào)查報告[J].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志,2003(S1):46-48.

[13] JIA Jun-tao, LI Wei-cai, ZHAO Li-qing, et al. Hierarchical clustering analysis of bacterial composition in ballast water on ships in shangdong main harbors[J]. Marine Environmental Science,2010(4):541-544.

賈俊濤,李偉才,趙麗青,等.山東主要港口入境船舶壓載水中細(xì)菌組成的等級聚類分析[J].海洋環(huán)境科學(xué),2010(4):541-544.

[14] FENG Yun-xiao, ZHANG Le, FANG Zhen-dong, et al. Investigation of microbe taken by ballast water of entry ships in Qinhuangdao port[J]. Environmental Science Survey,2011(2):58-61.

馮云霄,張樂,方振東,等.秦皇島口岸入境船舶壓載水中微生物攜帶情況調(diào)查[J].環(huán)境科學(xué)導(dǎo)刊,2011(2):58-61.

[15] LI Xiao-hong, LIU Wen-zheng, YANG Yan-qiu, et al. Analysis on invasion risk of pathogenic microorganisms in ship’s ballast water at Yantian seaport[J]. Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine,2013(3):179-184,191.

李小洪,劉文正,楊燕秋,等.鹽田港船舶壓載水致病微生物入侵風(fēng)險分析[J].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志,2013(3):179-184,191.

[16] ZHAO Li-qing, JIA Jun-tao, JIANG Ying-hui, et al. MDS analysis on the pathogenic bacterias in Shandong mian Harbor water and entry ship ballast water [J]. Chinese Journal of Frontier Health and Quarantine,2013(5):334-337.

趙麗青,賈俊濤,姜英輝,等.山東主要港口海域及入境船舶壓艙水中病原菌調(diào)查結(jié)果的多維尺度分析[J].中國國境衛(wèi)生檢疫雜志,2013(5):334-337.

[17] DONG Xiu-zhu, CAI Miao-ying. Systematic determinative manual of general bacteria [M]. Beijing：Science Press,2001:192-245.

東秀珠,蔡妙英.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊[M].北京：科學(xué)出版社，2001:192-245

[18] BOONE D R, GARRITY G,CASTENHOLZ R W. Bergey’s manual of systematic bacteriology[M]. second edition. Springer Verlag,2004：474-491.

[19] WU Ling, ZHANG Jing-long, NI Yu-xing, et al. Study and investigation on the distribution of pathogenicVibrioof the five coastal provinces in China[J]. Chinese Journal of Epidemiology,1998(5):46-48.

吳玲,張景隆,倪語星,等.我國沿海五省市致病性弧菌的分布調(diào)查及病原學(xué)研究[J].中華流行病學(xué)雜志,1998(5):46-48.

[20] ROQUE A, MOLINA-AJA A, BOLAN-MEJIA C, et al.Invitrosusceptibility to 15 antibiotics ofvibriosisolated from penaeid shrimps in Northwestern Mexico[J]. International Journal of Antimicrobial Agents,2001,17(5):383-387.

[21] HU Long-yu, NING Xi-bin, JIA Ling-hua. Isolation，identification and antimicrobial resistance research ofVibrioalginolyticusisolated from seawater[J]. Science and Technology of Food Industry,2013(16):195-199.

胡瓏玉,寧喜斌,賈玲華.海水中溶藻弧菌的分離、鑒定及其耐藥性分析[J].食品工業(yè)科技,2013(16):195-199.

[22] NASH G, NITHIMATHACHOKE C, TUNGMANDI C, et al.Vibriosisand its control in pond-rearedPenaeusmonodonin Thailand[C]//SHARIFF M, SUBASINGHE R P, ARTHUR J R. Diseases in Asian aquaculture I. Fish health section. Manila: Asian Fisheries Society,1992:143-155.

[23] KABIR S, MANN P. Immunological properties of the cell envelope components ofVibriocholerae[J]. Journal of General Microbiology,1980,119(2):517-525.

[24] MARTINSEN B, OPPEGAARD H, WICHSTROM R, et al. Temperature-dependentinvitroantimicrobial activity of four 4-quinolones and oxytetracycline against bacteria pathogenic to fish[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy,1992,36(8):1 738-1 743.

Virulence characteristics and antimicrobial susceptibility of

王騰飛，郭曉鴿，谷江穩(wěn)，等.饑餓及過量投喂下銀鯧幼魚形態(tài)學(xué)指標(biāo)及體成分變化[J].海洋學(xué)研究,2015,33(4):83-89,doi:10.3969/j.issn.1001-909X.2015.04.010.

WANG Teng-fei, GUO Xiao-ge, GU Jiang-wen, et al. Research on morphological indexes and body composition change under starvation and excessive feeding situation for juvenilePampusargenteus[J]. Journal of Marine Sciences,2015,33(4):83-89,doi:10.3969/j.issn.1001-909X.2015.04.010.

three pathogenic bacteria isolated from the channels and

ports in Ningbo and Zhoushan

GUAN Feng1, 2，GAO Wei1，CHEN Ji-gang1, 2，MAO Zhi-juan1, 2，YANG Ji-fang*1, 2

(1.FacultyofBiological&EnvironmentalScience,ZhejiangWanliUniversity,Ningbo315100,China;

2.MunicipalKeyLaboratoryofMicroorganismandEnvironmentalEngineering,Ningbo315100,China)

Abstract:Virulence characteristics and antimicrobial susceptibility of Vibrio parahaemolyticus(VP), Vibrio alginolyticus(VA) and Aeromonas hydrophila(AH) isolated from the channels and ports in Ningbo and Zhoushan were investigated. The distribution patterns of virulent genes in isolated pathogenic bacteria are found that VP is represented by tlh+, toxR+, gyrB+and tdh+; VA is represented by aspA+, tlh+, collagenase+and toxS+; AH is represented by aerA+, alt+, aha1+and hlyA+. The detection rates of relevant genes in representative strains for these three kinds of bacteria are 57.1%, 40.0%, 50.0%. 24 common kinds of drug resistance rates of representative strains are 4.17%, 8.33% and 29.17% respectively. The results show that harmful characteristics of the pathogenic bacteria are found in Ningbo-Zhoushan, and the right defense measures needed to make to prevent them. Moreover, the correlation of virulence genotypes and pathogenicity of the bacteria show that virulent genes can be chosen as gene-markers to detect pathogenic strains of bacteria.

Key words:channels and ports; pathogenic bacteria; virulent gene; antimicrobial susceptibility

通訊作者：*徐善良(1962-)，男，教授，主要從事海水魚類苗種繁育研究。E-mail:xushanliang@nbu.edu.cn

作者簡介:王騰飛(1989-)，男，安徽阜陽市人，主要從事海水魚類健康養(yǎng)殖研究。E-mail:15267850309@163.com

基金項目:寧波市科技重大專項項目資助(2015C110003)

收稿日期:2015-01-23修回日期:2015-07-30

Doi:10.3969/j.issn.1001-909X.2015.04.009

中圖分類號:Q938.8

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

文章編號:1001-909X(2015)04-0077-06