基質(zhì)金屬蛋白酶-9在宮頸癌血清中表達(dá)及臨床意義①

吳英杰,李　影

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

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基質(zhì)金屬蛋白酶-9在宮頸癌血清中表達(dá)及臨床意義①

吳英杰,李影

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要：目的:檢測(cè)宮頸鱗癌患者血清中MMP-9表達(dá)水平,探討MMP-9與宮頸癌患者相關(guān)的臨床意義,為宮頸癌的臨床診斷、監(jiān)測(cè)、治療及其預(yù)后的情況提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)了46例宮頸鱗癌患者、23例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者(CIN)和26例正常健康婦女的血清中MMP-9水平,并進(jìn)行對(duì)照分析。結(jié)果：宮頸鱗癌患者的血清當(dāng)中MMP-9水平明顯高于宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)患者及健康婦女(P<0.01),MMP-9水平與患者的臨床分期(P<0.05)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)(P<0.01),術(shù)后血清MMP-9表達(dá)水平較術(shù)前明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：通過檢測(cè)宮頸癌患者血清MMP-9表達(dá)水平，可做為臨床判斷宮頸癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移可靠指標(biāo)。對(duì)宮頸鱗癌疾病診斷、治療及其預(yù)后等提供一定良好的臨床實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：宮頸鱗癌；血清；CIN；MMP-9

宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤，其發(fā)生率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第一位。近年來我國(guó)調(diào)查、統(tǒng)計(jì)宮頸癌發(fā)病率有所增高，目前仍在持續(xù)上升[1],并呈年輕化趨勢(shì)，且年輕患者預(yù)后差易復(fù)發(fā)，每年大約3萬余名婦女死于宮頸癌[2]，對(duì)女性的健康及生命了構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此，尋找其生物學(xué)行為的指標(biāo)對(duì)臨床診斷、治療具有極其重要意義。MMP-9的異常表達(dá)和人類惡性腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]。它是降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)成分的蛋白水解酶，在促進(jìn)腫瘤血管形成、腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移過程中起到主導(dǎo)作用。近年來多數(shù)研究都注重MMP-9在宮頸癌組織中的表達(dá)水平，但在宮頸癌患者血清中表達(dá)情況研究仍較少,本實(shí)驗(yàn)研究宮頸癌患者血清中的MMP-9表達(dá)水平，探討血清MMP-9在宮頸癌發(fā)病機(jī)制，診斷、治療及預(yù)后中的關(guān)系、分析其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

本實(shí)驗(yàn)采集95例女性血清。年齡28~62歲，中位年齡為42歲，其中46例宮頸鱗癌患者(來自佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科、佳木斯市中心醫(yī)院2013-11~2014-12期間的住院患者，通過病理診斷確診宮頸鱗癌)。采用FIGO,2009年的臨床分期：Ⅰ期17例(ⅠA 7例、ⅠB、10例)、Ⅱ期18例(ⅡA 13例、ⅡB 5例)、Ⅲ期11例(ⅢA 8例、ⅢB 3例)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者21例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者25例。所有ⅠA-ⅡA的患者采用全子宮切除術(shù)或廣泛子宮切除術(shù)及盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)，ⅡB-ⅢB采用放療。 23例為宮頸上皮內(nèi)瘤變患者(CIN)，并且都排除了身體其他部位的腫瘤。26例為正常無宮頸疾病非妊娠健康婦女為對(duì)照組，肝功能、腎功能正常，均無心、肺、肝、胃、腎等重要器官的疾病，并無腫瘤家族史。所有的被檢者均取得了研究對(duì)象的知情同意。

1.2主要試劑及儀器

(1)人MMP-9酶聯(lián)免疫試劑盒購于長(zhǎng)春廣邁醫(yī)療器戒有限公司； (2)TGW16離心機(jī)，振蕩器(美國(guó)Beekman公司)； (3)全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國(guó)ThermoEleetron)； (4)-80℃低溫冰箱(佳木斯大學(xué)提供)。

1.3試驗(yàn)方法

采集所有宮頸鱗癌患者46例、宮頸上皮內(nèi)瘤變23例及健康非妊娠無宮頸疾病婦女對(duì)照組26例血清標(biāo)本。入院后術(shù)前各組在未經(jīng)過任何治療的情況下，清晨空腹采集了外周靜脈血5mL,術(shù)后組與術(shù)后第7天采集了患者外周靜脈血5mL，3000r/min離心20min，后取上清分別裝于無菌的干燥試管，置于-80℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?，采用酶?lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) (ELISA) 法檢測(cè)MMP-9，操作步驟嚴(yán)格按說明書操作。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2　結(jié)果

見表1~4。

表1　3組血清中MMP-9表達(dá)水平

分 組例數(shù)(n)濃度(ng/mL)正常健康對(duì)照組2697.98±12.73CIN組23156.92±17.33宮頸癌組46180.27±14.87

注： 宮頸癌-CIN P<0.01; 宮頸癌-正常 P<0.01; CIN-正常 P<0.01; 各組間比較 F=252.556， P<0.01。

臨床分期組間比較， 隨臨床期別增高M(jìn)MP-9水平增高，各組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

無淋巴轉(zhuǎn)移組與有淋巴轉(zhuǎn)移比較，有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

MMP-9在宮頸癌術(shù)前和術(shù)后及正常健康對(duì)照組比較均有顯著差異(P<0.01)。

3　討論

宮頸癌是嚴(yán)重危害婦女健康、生命的最常見婦科惡性腫瘤，惡性腫瘤主要表現(xiàn)在侵襲和轉(zhuǎn)移，它是導(dǎo)致患者死亡的主要原因?，F(xiàn)研究從宮頸感染高危型 HPV病毒后經(jīng)宮頸癌前病變(CIN)、原位癌最終形成浸潤(rùn)型宮頸鱗癌，是一個(gè)多因素、多步驟共同參與的復(fù)雜過程,在此過程中癌細(xì)胞需要穿透細(xì)胞外基質(zhì)屏障、基底膜以及血管壁進(jìn)入人體的生存微環(huán)境等多個(gè)復(fù)雜過程[4]。MMP -9是一種明膠酶型基質(zhì)金屬蛋白酶，,它能降解Ⅳ、Ⅴ型膠原和Ⅰ、Ⅴ型明膠，侵蝕正常組織表面的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜,促使癌細(xì)胞沿著破壞的基底膜向周圍組織浸潤(rùn)，并促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[5，7]。此外，MMP-9還參與腫瘤新血管形成，其機(jī)制與降解血管基底膜和周圍間質(zhì)以及VEGF的合成和分泌有密切相關(guān)[8]。

江忠清等[9]、杜曉燕等[10]研究證明：MMP-9在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)促進(jìn)腫瘤新血管形成，并與臨床分期、盆腔淋巴轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分化程度存在相關(guān)性。MMP -9在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展及癌細(xì)胞擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移過程中可能起至關(guān)重要作用。本研究顯示宮頸癌患者血清中 MMP-9水平較正常健康人和宮頸CIN患者血清中MMP-9水平明顯升高,說明宮頸癌組織具有分泌MMP-9的能力,隨臨床分期增高血清中MMP-9水平升高;有轉(zhuǎn)移的患者血清中MMP-9水平較無轉(zhuǎn)移者明顯升高。表明：宮頸癌癌細(xì)胞可分泌大量MMP-9進(jìn)入血環(huán)系統(tǒng),其降解基底膜及細(xì)胞外基質(zhì),為癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移過程中突破各種屏障奠定了一定基礎(chǔ),為癌細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利的環(huán)境。綜合本研究及上述研究結(jié)果，血清MMP-9水平與癌組織MMP-9表達(dá)一樣可以反映宮頸癌的形成、侵襲和轉(zhuǎn)移。徐希等[11]研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者血清中MMP-9 水平顯著高于健康人，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，腫瘤浸潤(rùn)突破漿膜層者顯著高于未突破漿膜層者，晚期胃癌(Ⅲ、Ⅳ) 顯著高于早期胃癌(Ⅰ、Ⅱ期)，MMP-9是值得重視的胃癌監(jiān)測(cè)指標(biāo)。以上研究與本研究結(jié)果相似。

本實(shí)驗(yàn)研究中,在30例行宮頸癌手術(shù)的患者中,術(shù)后血清中MMP-9表達(dá)水平較術(shù)前明顯下降,考慮手術(shù)祛除了MMP-9宮頸癌細(xì)胞分泌源，因此術(shù)后MMP-9下降，可見宮頸癌細(xì)胞及其引起其它分泌MMP-9在血清中占據(jù)一定重要比例，所以,檢測(cè)血清中MMP-9水平對(duì)預(yù)測(cè)癌細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷具有重要價(jià)值。因此,我們認(rèn)血清中MMP-9的表達(dá)水平能夠反映宮頸癌患者機(jī)體腫瘤的負(fù)荷狀態(tài),檢測(cè)血清中MMP-9的表達(dá)水平,對(duì)于宮頸癌的診斷治療可能是一個(gè)較好的參考指標(biāo);能夠?yàn)榕R床研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Missaoui Nabiha, Hmissa Sihem, Trabelsi Amel, et al.Asian Pacific.Cervix cancer in Tunisia: clinical and pathological study[J].Journal of Cancer Prevention, 2010, 11 (1)：235-238

[2]Racey C S,Withrow D R,Gesink D.Self-collected HPV testing improves participation in cervical cancer screening:a systematic review and meta-analysis [J].Can J Public Health,2013,104(2):159-166

[3]Zhang H, Wu J, Meng L, et al. Expression of vascular endo-thelial growth factor and its receptors KDR and Flt-1 in gastriccancer cells[J]. World J Gastro Enterol, 2002, 8 : 994-998

[4]宋繼榮,潘月娜,董穎.MMP26、MMP14蛋白在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變及浸潤(rùn)性宮頸鱗癌中的表達(dá)及意義[J]. 黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2011, 34(6):81-82

[5]Li X,WuJF.Recent developments in patent.anti-caner agents targeting the matrix:metalloproteinases .(MMPs)[J].Recent Pat Anticaner Drug Disov,2010,5(2):109-141

[6]Fingleton B,Matrix.metalloproteinases:roles in caner and metastasis [J].Front Bioseci,2006,11:479-491

[7]Libra M,Scalisi A,Vella N,et al .Uterine cervical cavcinoma :role of matrx metalloproteinases [J].Int J Oncol，2009,34:897-903

[8] 胡明，劉振平， 黃世杰，等.MMP-9在胃癌中的表達(dá)及與臨床病理因素的關(guān)[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2013，36(5):18-19

[9]江忠清， 朱鳳川， 曲軍英， 等.宮頸癌MMP-9表達(dá)與腫瘤血管生成、癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J] .癌癥，2003，22(2):178-184

[10]杜曉燕,孔衛(wèi)平,張景麗,等.宮頸鱗癌組織中MMP-9和VEGF的表達(dá)與微血管密度相關(guān)性研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013, 22(26):2857-2860

[11]徐希，陳偉昌，朱一凡，等.胃癌患者血清MMP-9、NGAL 水平及其臨床意義[J].Chin J Gastroenterol,2014,19(8):468-171

中圖分類號(hào)：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1008-0104(2015)06-0107-02

作者簡(jiǎn)介：①吳英杰(1964～)女，黑龍江佳木斯人，學(xué)士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。

通訊作者：李影(1974～)女，吉林長(zhǎng)春人，在讀碩士研究生，E-mail：598872593@qq.com。

(收稿日期：2015-03-09)