電針胃俞募穴對單純性肥胖大鼠下丘腦和血清神經(jīng)肽Y的影響

尹　剛，申國明，王　浩，方正清，許冠蓀

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院，安徽 合肥　230038；

2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)護理學(xué)院，安徽 合肥　230012)

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電針胃俞募穴對單純性肥胖大鼠下丘腦和血清神經(jīng)肽Y的影響

尹剛1，申國明1，王浩1，方正清2，許冠蓀1

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院，安徽 合肥230038；

2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)護理學(xué)院，安徽 合肥230012)

[摘要]目的觀察電針胃俞募穴對單純性肥胖大鼠脂代謝及神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y，NPY)水平的影響。方法選用清潔級SD雄性大鼠80只，隨機選10只為空白組，采取普通飼料喂養(yǎng)，其余大鼠采用高脂飼料飼養(yǎng)。6周后，篩選40只單純性肥胖大鼠，將其隨機分為模型組、中脘組(電針中脘)、胃俞組(電針胃俞)、胃俞募穴組(電針中脘配胃俞)，持續(xù)電針3周。計算Lee指數(shù)，采用全自動生化分析儀檢測血清三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)和低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein- cholesterol，LDL-C)水平，采用放射免疫法檢測下丘腦和血清NPY含量。結(jié)果模型組大鼠Lee指數(shù)，血清TG、TC、LDL-C水平，以及下丘腦和血清NPY含量均較空白組顯著升高(P<0.01)。兩因素析因設(shè)計的方差分析結(jié)果顯示，針刺中脘和針刺胃俞對降低Lee指數(shù)，血清TG、TC、LDL-C水平，及下丘腦和血清NPY含量的主效應(yīng)均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；針刺中脘和針刺胃俞對降低Lee指數(shù)、血清TG及下丘腦和血清NPY的交互作用均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，或P<0.01)。結(jié)論單獨電針中脘和胃俞均具有顯著的減肥降脂作用，其機制與降低下丘腦和血清NPY有關(guān)，俞募配穴對減肥及降低血清TG和下丘腦、血清NPY具有顯著的協(xié)同作用。

[關(guān)鍵詞]單純性肥胖；電針；中脘；胃俞；俞募配穴；神經(jīng)肽Y

肥胖癥是指由多種原因引起的體內(nèi)熱量攝入大于消耗，脂肪組織在體內(nèi)貯存過多而造成體質(zhì)量超常的一種病癥，是一個復(fù)雜的生理和病理學(xué)過程，臨床上以單純性肥胖多見[1]。單純性肥胖是無內(nèi)分泌代謝性疾病為基礎(chǔ)疾病的肥胖，約占肥胖人群的95%。2013年美國醫(yī)學(xué)協(xié)會通過了肥胖是一種疾病，并且需要對其多個病理生理方面采取一系列干預(yù)以促進肥胖治療和預(yù)防的決議。針灸減肥具有較好的效果，臨床應(yīng)用頗廣。俞募配穴法是針灸臨床常用的有效配穴方法之一，是以背俞穴與募穴相配治療本臟本腑有關(guān)疾病的配穴法。筆者觀察了電針胃俞募穴對單純性肥胖大鼠脂代謝及對下丘腦和血清神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y，NPY)水平的影響，為臨床針灸治療單純性肥胖的配穴方法提供實驗依據(jù)。

1材料

1.1實驗動物清潔級SD雄性大鼠80只，體質(zhì)量180~230 g，6周齡。購自安徽醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，生產(chǎn)許可證號為SCXK(皖)2013-002，適應(yīng)性喂養(yǎng)，自由活動、自由進食、自然照明。

1.2主要試劑及儀器檸檬酸、檸檬酸三鈉、NPY放射免疫藥盒(批號 2004-7-25)：解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放射免疫所生產(chǎn)；三酰甘油(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)和低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein- cholesterol，LDL-C)試劑盒(批號 20040610)：北京福瑞生物工程公司；華佗牌SDZ-Ⅳ型電子針療儀、針灸針(規(guī)格：0.30 mm×25 mm)：蘇州醫(yī)療用品廠有限公司；800型離心沉淀器：上海市手術(shù)器械廠；UV-754型紫外可見分光光度計：上海第三分析儀器廠；DP70型熒光顯微鏡/JD801型圖像采集分析系統(tǒng)：日本奧林巴斯/南京捷達。

2方法

2.1模型復(fù)制及分組實驗過程中對動物的各種處置符合《關(guān)于善待實驗動物的指導(dǎo)性意見》[2]。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機選10只為空白對照組(空白組)，采取普通飼料喂養(yǎng)；其余大鼠采用高脂飼料單籠飼養(yǎng)，自由進食和飲水。普通飼料配方：由標(biāo)準(zhǔn)粉、麩皮、魚皮粉等組成。高脂飼料配方：每100 g飼料中含標(biāo)準(zhǔn)粉17.5 g，豬油15.0 g，玉米粉12.0 g，雞蛋、蔗糖、大豆粉各10.0 g，麩皮7.0 g，花生、奶粉、麻油5.0 g，魚粉2.5 g、食鹽、酵母粉各0.5 g。飼料由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程責(zé)任有限公司提供(蘇A飼監(jiān)字2012-009)。實驗開始后，每周固定時間稱大鼠體質(zhì)量、測大鼠體長各1次。6周后，篩選體質(zhì)量超出正常喂養(yǎng)大鼠20%者為單純性肥胖大鼠[3]，將模型復(fù)制成功的大鼠隨機分為模型組、中脘組(電針中脘)、胃俞組(電針胃俞)、胃俞募穴組(電針中脘配胃俞)。

2.2電針干預(yù)空白組和模型組：僅將大鼠捆綁于自制的固定器中，不做其他處理，捆綁時間同電針組。中脘組、胃俞組和胃俞募穴組：每天將大鼠捆綁于自制的固定器中，按照華興邦《大鼠穴位圖譜》和體表的骨性標(biāo)志，“胃俞”取第13胸椎下旁開5 mm，毫針直刺4～6 mm；“中脘”取臍上約20 mm，采用平補平瀉手法。針柄接SDZ-Ⅳ型電子針療儀，10～100 Hz疏密方波，強度以穴位部肌肉微微顫動為宜，連續(xù)刺激20 min，每天1次，持續(xù)3周。

2.3觀察指標(biāo)及方法

2.3.2測定血清TC、TG、LDL-C含量最后1次治療后，各組大鼠禁食24 h，10%水合氯醛(10 mL/kg)腹腔注射麻醉，腹主動脈取血5 mL，以3 000 r/min離心10 min，分離血清，置于全自動生化分析儀上測定TG、TC、LDL-C含量。

2.3.3放射免疫法檢測下丘腦、血清NPY含量取血漿0.5 mL加1 mL酸性無水乙醇(100 mL無水乙醇加冰乙酸1.2 mL)，置于振蕩器上振蕩1 min，4 ℃、3 500 r/min離心15 min，取上清200 μL測定血清NPY。經(jīng)心臟以生理鹽水灌洗全腦，迅速取出下丘腦組織，以0.2 mol/L醋酸溶液煮沸10 min以滅活酶，然后加入上述醋酸溶液勻漿(20 mg腦組織∶1 mL醋酸溶液)，4 ℃、3 000 r/min離心15 min，取上清液測定下丘腦NPY水平。操作過程嚴格按照放射免疫試劑盒說明書進行。

3結(jié)果

3.1各組大鼠Lee指數(shù)比較治療前模型組Lee指數(shù)顯著高于空白組(P<0.01)；模型組與其他3組Lee指數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。對4組(除空白組)治療前后差值進行兩因素析因設(shè)計的方差分析，結(jié)果顯示，針刺中脘、針刺胃俞對治療前后Lee指數(shù)差值的主效應(yīng)及兩者對Lee指數(shù)差值的交互作用均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，提示單獨針刺中脘或針刺胃俞均可顯著降低Lee指數(shù)，且兩者具有協(xié)同作用。見表1。

表1　各組大鼠Lee指數(shù)比較

注：與空白組比較，**P<0.01；

與模型組差值比較，##P<0.01。

3.2各組大鼠血清TG、TC、LDL-C含量比較模型組TG、TC和LDL-C水平均顯著高于空白組(P<0.01)。對4組(除空白組)的TG、TC、LDL-C水平進行兩因素析因設(shè)計的方差分析，結(jié)果顯示，針刺中脘和針刺胃俞對降低TG、TC、LDL-C的主效應(yīng)均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，或P<0.01)，其中針刺中脘和針刺胃俞對降低TG的交互作用具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果提示，單獨針刺中脘或單獨針刺胃俞均可以顯著降低TG、TC和LDL-C，其中聯(lián)合針刺中脘和胃俞對降低TG具有協(xié)同作用。見表2。

表2　各組大鼠血清TG、TC、LDL-C含量比較

注：與空白組比較，**P<0.01；

與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01。

3.3各組大鼠下丘腦和血清NPY含量比較模型組下丘腦和血清NPY水平顯著高于空白組(P<0.01)。對4組(除空白組)的下丘腦和血清NPY水平進行兩因素析因設(shè)計的方差分析，結(jié)果顯示，針刺中脘和針刺胃俞對降低下丘腦和血清NPY的主效應(yīng)及兩者的交互作用均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果提示，單獨針刺中脘和單獨針刺胃俞均可顯著降低下丘腦和血清NPY水平，且兩者具有顯著的協(xié)同作用。見表3。

表3　各組大鼠下丘腦和血清NPY含量比較±s)

注：與空白組比較，**P<0.01；

與模型組比較，##P<0.01。

4討論

我國目前肥胖人口達3.25億人，增幅超過美國、英國和澳大利亞。這個數(shù)字在未來20年還可能增加1倍。肥胖的發(fā)病與能量代謝有關(guān)[4]，單純性肥胖主要是由于人體攝入的能量超過其消耗，導(dǎo)致脂肪在體內(nèi)聚集，引起體質(zhì)量過大、體脂超出正常范圍的一種病癥，屬于中醫(yī)學(xué)的“水腫”“痰證”“虛勞”等范疇[5]。其中脾虛濕盛證者最為常見，在治療時以健脾利濕、祛濁降脂為主。

針刺作為一種相對安全、簡便易行的減肥方法越來越受到醫(yī)務(wù)工作者和患者的重視。臨床實踐也證明，針刺減肥具有很好的療效，相比較其他治療手段具有較大的優(yōu)勢[6-8]。在針刺減肥的選穴中，由于俞穴是五臟六腑之氣輸注于背部的特定穴位，募穴是臟腑之氣匯集之處，滑伯仁《難經(jīng)本義》說：“陰陽經(jīng)絡(luò)，氣相交貫，臟腑腹背，氣相通應(yīng)，所以陰病有時而行陽，陽病有時而行陰也。”在生理上俞、募穴是五臟六腑之氣轉(zhuǎn)輸和匯聚的處所；在病理上俞、募穴是內(nèi)臟和體表病氣出入的部位；在解剖上俞、募穴位置對應(yīng)于相應(yīng)的內(nèi)臟。俞、募二穴一前一后、一陰一陽、剛?cè)嵯酀?、相輔相成[9]，是針灸臨床治療本臟本腑相關(guān)疾病的常用配穴法[10]。本實驗中，單純性肥胖大鼠經(jīng)電針干預(yù)后，Lee指數(shù)、脂代謝與模型組比較有明顯下降，說明電針中脘、胃俞有一定的減肥效果，其中聯(lián)合針刺中脘和胃俞對上述指標(biāo)的下降具有協(xié)同作用。

下丘腦是機體重要的攝食調(diào)節(jié)中樞和能量平衡調(diào)控中心[11]。NPY是下丘腦分泌的一種含有36個氨基酸的肽類物質(zhì)，廣泛分布于中樞和外圍神經(jīng)系統(tǒng)，在調(diào)控攝食的生理行為中起著重要作用[12-13]，是已知的最強有力的促攝食因子。應(yīng)用NPY抑制劑或NPY基因敲除后的大鼠與正常大鼠相比NPY誘導(dǎo)的攝食效應(yīng)明顯減弱[14-15]。近來研究發(fā)現(xiàn)，肥胖的成年人血漿下丘腦NPY水平增高，且與體質(zhì)量呈正相關(guān)，肥胖動物下丘腦NPY mRNA及蛋白的表達也明顯增高[16-18]，說明NPY在攝食控制中起著重要作用。在本實驗中，單純性肥胖大鼠下丘腦和血清NPY水平顯著高于空白組。電針干預(yù)后，對除空白組外其余4組大鼠的下丘腦和血清NPY水平進行兩因素析因設(shè)計的方差分析，結(jié)果提示，單獨針刺中脘或胃俞均可顯著降低下丘腦和血清NPY水平，且聯(lián)合針刺中脘和胃俞則表現(xiàn)出顯著的協(xié)同作用。說明電針胃俞募穴能夠降低肥胖大鼠中樞和外周NPY水平，抑制肥胖大鼠亢進的食欲，使脂肪合成減少，達到減肥的目的。另外，從對單純性肥胖大鼠脂代謝及NPY水平的影響的結(jié)果，可以看出電針俞募配穴較電針中脘或胃俞單穴有更好的減肥效應(yīng)。

針刺減肥的機制是通過刺激某些特定穴位，來調(diào)節(jié)內(nèi)臟神經(jīng)系統(tǒng)，達到對糖脂代謝雙向調(diào)節(jié)的作用。一方面抑制食欲，減少進食量，另一方面促進能量代謝，增加能量消耗，促進脂肪分解，最終達到減肥的效果。本研究采用電針俞募配穴的方法應(yīng)用于治療單純性肥胖，取得滿意的效果。因此，積極開展俞募配穴協(xié)同效應(yīng)的研究，尋找俞募配穴的中樞機制，以此來指導(dǎo)臨床，將更有利于針灸臨床的發(fā)展。

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Effect of Electroacupuncture at Gastric Back-Shu and Front-Mu Points on Neuropeptide Y in Hypothalamus and Serum in Rats with Simple Obesity

YINGang1,SHENGuo-ming1,WANGHao1,FANGZheng-qing2,XUGuan-sun1

(1.ClinicalSchoolofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230038,China; 2.SchoolofNursing,AnhuiUniversityofChineseMedicine,AnhuiHefei230012,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of electroacupuncture at gastric Back-Shu and Front-Mu points on the lipid metabolism and neuropeptide Y (NPY) level in rats with simple obesity.MethodsEighty clean male Sprague-Dawley rats were selected in the study. Ten rats were selected from the 80 rats as blank group to be fed a normal diet, and other rats were fed a high-fat diet. Six weeks later, 40 rats with simple obesity were screened out and randomly divided into model group, Zhongwan group (electroacupuncture at Zhongwan), Weishu group (electroacupuncture at Weishu), and gastric Back-Shu and Front-Mu points group (electroacupuncture at Zhongwan and Weishu points); electroacupuncture was performed for 3 weeks. Lee index was calculated; serum levels of triglyceride (TG), total cholesterol (TC), and low-density lipoprotein-cholesterol (LDL-C) were measured by an automatic biochemical analyzer; the content of NPY in the hypothalamus and serum was determined by radioimmunoassay. ResultsThe model group had significantly increased Lee index, serum levels of TG, TC, and LDL-C, and content of NPY in the hypothalamus and serum (P<0.01). The results of two-way factorial design ANOVA showed that electroacupuncture at Zhongwan and electroacupuncture at Weishu showed significant main effects in reducing Lee index, serum levels of TG, TC, and LDL-C, and the content of NPY in the hypothalamus and serum (P<0.01); electroacupuncture at Zhongwan and electroacupuncture at Weishu had significant interaction in reducing Lee index, serum TG level, and the content of NPY in the hypothalamus and serum (P<0.05 or P <0.01).ConclusionElectroacupuncture at Zhongwan and electroacupuncture at Weishu have significant slimming and antihyperlipidemic effects, which is related to decreased NPY levels in the hypothalamus and serum. Acupuncture using a combination of Back-Shu and Front-Mu points shows a synergistic effect in reducing the body weight, serum TG level, and the content of NPY in the hypothalamus and serum.

[Key words]simple obesity; electroacupuncture; Zhongwan; Weishu; acupuncture using a combination of Back-Shu and Front-Mu points; neuropeptide Y

收稿日期：(2015-01-29；編輯：曹健)

作者簡介：尹剛(1981-)，男，碩士，講師

[中圖分類號]R589[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.02.016

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目(81072871)；安徽中醫(yī)藥大學(xué)自然科學(xué)基金項目(2012qn008)