• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS的相關性研究

    2016-01-25 06:15:22劉元偉鄧妙岑加萍張紅艷張治芬
    浙江醫(yī)學 2016年8期
    關鍵詞:肥胖者抵抗多態(tài)性

    劉元偉 鄧妙 岑加萍 張紅艷 張治芬

    ●論 著

    PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS的相關性研究

    劉元偉 鄧妙 岑加萍 張紅艷 張治芬

    目的 探討纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與浙江地區(qū)漢族多囊卵巢綜合征(PCOS)發(fā)病、胰島素抵抗及肥胖的關系。方法選擇浙江地區(qū)漢族PCOS患者120例和健康對照者102例,分別測量兩組身高、體重、腰圍,并計算BMI和腰臀比;采用PCR技術檢測兩組PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性分布;采用ELISA法檢測PCOS患者空腹胰島素,采用葡萄糖氧化酶法檢測PCOS患者空腹血糖,并計算胰島素抵抗指數(Homa-IR)。再根據BMI、Homa-IR將PCOS患者分為肥胖組(54例)與非肥胖組(66例),以及胰島素抵抗組(49例)與非胰島素抵抗組(71例),分別比較兩組基因型頻率。結果PCOS患者組PAI-1基因啟動子區(qū)4G/4G基因型頻率明顯高于健康對照組(P<0.05)。PCOS患者PAI-1基因啟動子區(qū)4G/4G基因型頻率為胰島素抵抗者、非肥胖者分別高于非胰島素抵抗者、肥胖者(P<0.05)。結論PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與浙江地區(qū)漢族PCOS發(fā)病、胰島素抵抗及肥胖有關;其中4G/4G基因型可能是PCOS發(fā)病、PCOS患者胰島素抵抗的危險因素,且可能影響非肥胖型PCOS患者病情發(fā)展。

    多囊性卵巢綜合征 纖溶酶原激活物抑制劑1 基因多態(tài)性胰島素抵抗 肥胖

    多囊卵巢綜合征(PCOS)是一種復雜的神經內分泌、代謝系統(tǒng)和卵巢局部調控因素異常的異質性疾病,主要病理生理機制是高胰島素血癥和胰島素抵抗,在育齡期女性中發(fā)病率為4%~18%,在無排卵性不育癥患者中發(fā)病率高達30%~60%[1-2],臨床上主要表現為不同程度的月經異常、不孕、多毛、痤瘡、肥胖等[2-3]。PCOS確切病因尚未明確,有研究認為PCOS患者存在一定的血栓傾向,纖溶系統(tǒng)受損是重要原因,其中血漿纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)與PCOS發(fā)生、發(fā)展密切相關[4]。有研究表明PCOS患者PAI-1水平明顯高于正常組。PAI-1是纖溶系統(tǒng)活性的主要調控者,是防止血栓形成的重要保護機制,在胰島素抵抗狀態(tài)下,高胰島素血癥與PAI-1水平升高、活性增強同時存在[4-5]。隨著分子生物學技術的發(fā)展,研究發(fā)現PAI-1基因啟動子區(qū)域一個堿基插入或缺失,均會影響PAI-1水平及活性,其中4G/ 4G基因型會升高PAI-1水平及活性,促進PCOS、糖尿病、冠心病和心肌梗死等心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展[4-7]。本研究旨在探討浙江地區(qū)漢族PCOS患者PAI-l基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS發(fā)病、胰島素抵抗及肥胖的關系。

    1 對象和方法

    1.1 對象 選擇2013年6月至2014年6月在杭州市第一人民醫(yī)院婦科門診就診的PCOS患者120例為PCOS組;選擇同期健康體檢婦女102例作為健康對照組;PCOS診斷標準參照2003年歐洲人類生殖協會和美國生殖協會共同推薦的診斷標準[8]。PCOS組與健康對照組均排除高血壓、下丘腦性閉經、卵巢腫瘤、感染和自身免疫性疾病;接受試驗前3個月未使用影響生殖激素、胰島素、血糖、血脂等藥物,未實行計劃性減肥,無手術及創(chuàng)傷史,無影響凝血功能改變的疾??;所有對象均為漢族,無親緣關系。參照2000年WHO制定的亞太地區(qū)診斷標準(BMI≥25 kg/m2為肥胖),將PCOS患者分為肥胖組54例和非肥胖組66例。采用穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(Homa-IR)評估胰島素敏感性(Homa-IR≥2.0為胰島素抵抗),并將PCOS患者分為胰島素抵抗組49例和非胰島素抵抗組71例。

    1.2 方法

    1.2.1 標本采集 采集空腹靜脈血,離心,分別提取血漿和血細胞,分離血漿用于檢測空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FINS),要求所有受試者在采血前晚低糖、低脂飲食,采血當日清晨空腹。

    1.2.2 體格測量 測量身高、體重、臀圍、腰圍。BMI=體重/身高2;腰臀比=腰圍/臀圍。

    1.2.3 生化檢測 采用ELISA法檢測FINS,采用葡萄糖氧化酶法檢測FBG;均由我院中心實驗室檢測。

    1.2.4 基因分析 (1)細胞DNA的提?。菏褂肈NA純化試劑盒(美國AXYGEN公司)抽提DNA;(2)PCR法目的片段擴增;(3)引物設計:參照文獻設計PCR引物序列(上海輝睿生物科技有限公司),PAI-1基因啟動子區(qū)引物序列:①5G引物:5′-GTCTGGACACGTGGGGG-3′;②4G引物:5′-GTCTGGACACGTGGGGA-3′;③共同下游引物序列:5′-CAGGTCACTGTGGAGTTATC-3′;④陽性對照上游引物:5′-AGCTTTTACCATGGTAACCCCTGGT-3′。4G和5G分別在2個反應體系中進行:一管加入引物①、③、④;另一管加入引物②、③、④。經PCR反應、瓊脂糖凝膠電泳,電泳分型:含4G、5G的PCR產物長度均為135bp,陽性對照段PCR產物長為256bp,若只出現4G則為4G/4G基因型;只出現5G則為5G/ 5G基因型;4G、5G同時出現為4G/5G基因型。由于本研究5G/5G基因型較少,故將4G/5G和5G/5G合并為5G基因型、4G/4G基因型作為4G基因型進行分析。

    1.3 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件。計量資料用表示,組間比較采用t檢驗;計數資料用率表示,組間比較采用χ2檢驗。

    2 結果

    2.1 PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS發(fā)病的關系 PCOS組與健康對照組平均年齡為(24.10±5.51)、(26.10±5.21)歲,兩組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);兩組患者BMI分別為(24.62±8.07)、(21.03±4.96)kg/m2,兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。222例漢族婦女基因分析結果顯示,PAI-1基因啟動子區(qū)4G基因型頻率為42.79%(95/222),5G基因型頻率為57.21%(127/222);其中PCOS組與健康對照組5G基因型頻率分別為53.33%(64/120)和61.76%(63/102);4G基因型頻率分別為46.67%(56/120)和38.24%(39/102),兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    2.2 PAI-l基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與胰島素抵抗的關系 胰島素抵抗組與非胰島素抵抗組PCOS患者腰臀比分別為0.83±0.45、0.79±0.12,兩組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);兩組患者BMI分別為(25.14±4.76)、(23.26±1.97)kg/m2,兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);兩組患者Homa-IR分別為2.71±0.81、1.98±0.54,兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。胰島素抵抗組與非胰島素抵抗組5G基因型頻率分別為48.98%(24/49)和56.34%(40/71);4G基因型頻率分別為51.02%(25/49)和43.66%(31/71),兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    2.3 PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與肥胖的關系 肥胖組BMI、腰臀比和Homa-IR分別為(28.3± 3.0)kg/m2、0.87±0.14和2.6±1.3,均分別高于非肥胖組(22.1±1.2)kg/m2、0.81±0.06和2.1±0.9,差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。肥胖組與非肥胖組5G基因型頻率分別為59.26%(32/54)和48.48%(32/66);4G基因型頻率分別為40.74%(22/54)和51.52%(34/66),兩組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    3 討論

    PAI-1基因啟動子區(qū)上游675堿基位點上存在鳥嘌呤插入或缺失,表現出4G/4G、4G/5G和5G/5G等3種基因型;而PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與血漿PAI-1水平升高、活性增高有關。4G等位基因附近只有轉錄激活物作用位點;5G等位基因附近不僅有轉錄激活物作用位點,還有轉錄抑制物作用位點;因此,4G等位基因轉錄活性高于5G等位基因。

    PCOS患者血漿PAI-1活性明顯增高,可能與PAI-1 4G等位基因密切相關,因此推測PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS發(fā)病有關。目前國內外相關研究存在爭議:Sales等[9]對巴西地區(qū)PCOS患者與健康對照人群各79例進行PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性檢測,PCOS組4G/4G基因型頻率明顯高于健康對照組,但兩組間4G/5G、5G/5G基因型頻率差異均無統(tǒng)計學意義,提示4G基因型可能與PCOS發(fā)病相關。Kilicci等[10]對土耳其地區(qū)PCOS患者與健康對照組各100例的相同基因位點進行基因型檢測,兩組間4G、5G等位基因和3種基因型頻率差異均無統(tǒng)計學意義。國內研究發(fā)現PCOS患者PAI-1基因啟動子區(qū)4G/4G基因型頻率明顯高于健康人群,5G/5G基因型頻率低于健康人群,亦提示4G基因型可能與PCOS發(fā)病有關[11-12]。Lee等[13]報道在歐洲、土耳其及亞洲人群中,PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS易感性顯著相關。Liu等[14]報道在亞洲人群中PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS發(fā)病具有明顯相關性,但在高加索人群中差異無統(tǒng)計學意義;提示PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性分布存在種族和地域的差異。本研究對浙江地區(qū)漢族PCOS患者PAI-1基因型進行檢測,發(fā)現PCOS組以4G基因型為主,健康對照組以5G基因型為主,提示4G基因型可能與浙江地區(qū)漢族PCOS發(fā)病有關;但本研究PCOS組與健康對照組間BMI差異有統(tǒng)計學意義,不能排除BMI對PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性分布的影響。

    胰島素可激活人肝癌細胞株HepG2細胞的信號轉導系統(tǒng),從而影響PAI-1的生物合成;這揭示了胰島素誘導下絲裂原活化蛋白激酶的激活對PAI-1的調節(jié)作用。Lopez-Alemany等[15]首次在研究中提及PAI-1與胰島素信號轉導的關系,以及αvβ3整合素對胰島素信號轉導而起到調節(jié)作用;PAI-1與αvβ3整合素競爭,與玻璃體結合蛋白結合,在小鼠胚胎成纖維細胞中PAI-1阻止αvβ3整合素與胰島素轉導的協同作用,減弱胰島素誘導的蛋白激酶B磷酸化作用,使得血管內皮生長因子表達和細胞遷移,進一步加重胰島素抵抗。PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性通過升高血漿PAI-1水平及活性,從而影響胰島素的敏感性,與胰島素抵抗密切相關。胰島素抵抗是PCOS重要的生理、病理機制,且PCOS患者存在纖溶系統(tǒng)失衡、血漿PAI-1水平升高等,間接提示PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性可能與PCOS患者胰島素抵抗有關。本研究發(fā)現PCOS胰島素抵抗組4G/4G基因型頻率明顯高于非胰島素抵抗組,差異有統(tǒng)計學意義;這提示PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS患者胰島素抵抗存在一定聯系。Sales等[9]在探討PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與PCOS的關系中指出,PCOS患者PAI-1水平為4G/4G基因型高于4G/5G、5G/5G基因型,且與胰島素抵抗的發(fā)生有關,與本研究結果一致。

    近年來研究表明,脂肪組織分泌的多種細胞因子可促進PAI-1合成,推測PAI-1與肥胖關系密切[16]。Ma等[17]一項動物研究發(fā)現,缺乏PAI-1的老鼠可完全防止肥胖的發(fā)生,提示PAI-1與肥胖可能存在直接的因果關系。Tarkun等[18]研究發(fā)現PCOS患者無論是否肥胖,PAI-1水平及活性均明顯升高;瘦型PCOS患者PAI-1水平及活性升高不依賴于BMI,與胰島素抵抗直接相關。趙君利等[19]研究表明PCOS肥胖患者的Homa-IR、BMI和腰臀比均高于非肥胖者,肥胖者的Homa-IR低于非肥胖者,這說明肥胖者胰島素抵抗程度較非肥胖者嚴重,而非肥胖患者PAI-1基因啟動子區(qū)4G基因型頻率高于肥胖者。本研究發(fā)現PCOS肥胖患者BMI、Homa-IR均明顯高于非肥胖者,表明PCOS肥胖患者胰島素抵抗程度明顯高于非肥胖者;非肥胖者4G/4G基因型頻率明顯高于肥胖組。以上結果與Tarkun等[18]、趙君利等[19]報道一致。因此,我們推測4G基因型可能是PCOS非肥胖患者血漿PAI-1水平及活性升高的重要因素,肥胖和胰島素抵抗可能是影響PCOS肥胖患者PAI-1水平及活性的重要因素。此外,本研究發(fā)現PCOS患者4G/ 4G基因型頻率為胰島素抵抗組高于非胰島素抵抗組、非肥胖組高于肥胖組,差異均有統(tǒng)計學意義,可能是本研究樣本量偏小、PCOS患者非肥胖且胰島素抵抗患者的比例偏高所致。因此,重視PCOS肥胖患者的體重控制外,應長期監(jiān)測帶有4G基因型的PCOS非肥胖患者的Homa-IR及PAI-1水平,并及時關注血糖、纖溶凝血系統(tǒng)等改變,這對預防糖尿病、心腦血管疾病等遠期并發(fā)癥具有重要意義。

    綜上所述,PAI-1基因啟動子區(qū)4G/5G多態(tài)性與浙江地區(qū)漢族PCOS的發(fā)病有關,而4G/4G基因型可能是PCOS發(fā)病的危險因素。4G/5G基因型分布與PCOS胰島抵抗、肥胖等因素有關,其中4G/4G基因型可能是影響浙江地區(qū)漢族PCOS患者糖代謝異常發(fā)生、PCOS非肥胖患者病情發(fā)展的危險因素。因此,對不利基因型個體進行隨訪與深入研究,將有利于PCOS患者的防治。此外,我們認為測定血漿PAI-1水平對早期發(fā)現血栓前狀態(tài)、早期預防和早期治療,提高PCOS患者遠期生存質量具有良好的指導作用。

    [1] Li R,Zhang Q,Yang D,et al.Prevalence of polycystic ovary syndrome in women in China:a large community-based study[J].Human Reproduction,2013,28(9):2562-2569.

    [2] 華克勤,豐有吉.實用婦產科學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:430-431.

    [3] 王麗娜,李美芝.與卵巢疾病有關的綜合征-多囊卵巢綜合征的臨床診斷和治療[J].中國實用婦科與產科雜志,2006,22(5):325-327.

    [4] Orio F Jr,Palomba S,Cascella T,et al.Is plasminogen activator inhibitor-1 a card-iovascular risk factor in young women with polycysticovarysyndrome?[J].RrprodBiomedOnline,2004,9:505-510.

    [5] Furumoto,Tomoo,Fujii Satoslli,et al.Maladaptive arterial remodeling with systemic hypertension associated with increased concentrations in blood of plasminogen activator inhibitortype-l (PAI-1)[J].TheAmericanJournalof Cardiology,2014(93):997-1001.

    [6] Diamanti-Kandarakis E,Palioniko G,Alexandraki K,et al.The prevalence of 4G/5G polymorphism of plasminogen activator inhibitor-1(PAI-1)gene in polycystic ovarian syndrome and its association with plasma PAI-1 levels[J].Eur J EndocrInol,2004,15: 793-798.

    [7] Glueck C J,Sieve L,Zhu B,et al.Plasminogen activator inhibitor activity,4G/5G polymorphism of the plasminogen activator inhibitor-l gene,and first-trimester miscarriage in women with polycystic ovary syndrome[J].Metabolism,2006,55:345-352.

    [8] Fr D D,Tarlatzis R.Revised 2003 consensus on diagnostic criteria and long-term health risks related to polycystic ovary syndrome [J].Fertil Steril,2004,81(1):19-25.

    [9] Sales M F,Sóter M O,Candido A L,et al.Correlation between plasminogen activeateor inhibitor-1 (PAI-1)promoter 4G/5G polymorphism and metabolic/proinflammatory factors in polycystic ovary syndrome[J].Gynecological Endocrinology,2013,29(10): 936-939.

    [10] Kilicci C,Bayram B,Ozkurt M,et al.Plasminogen Activator Inhibitor Type-1 Gene 4G/5G Polymorphism and Polycystic Ovary Syndrome[J].Genetic Testing and Molecular Biomarkers,2013, 15(7-8):565-567.

    [11] 莊朝輝,沈宗姬,黃亞珍,等.PAI-1基因4G/5G多態(tài)性與肥胖型多囊卵巢綜合征的相關性研究[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2013,10(21):1-3.

    [12] 張朝暉,楊金蘭,田玉栓,等.PAI-1基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征的研究[J].中國婦幼健康研究,2008,19(6):541-543.

    [13] Lee Y H,Song G G.Plasminogen activator inhibitor-1 4G/5G and the MTHFR 677C/T polymorphis-ms and susceptibility to polycystic ovary syndrome:a meta-analysis[J].Obstet Gynecol Reprod Biol,2014,175(4):8-14.

    [14] Liu Y,Sun M G,Jiang R,et al.Plasminogen Activator Inhibitor-1-675 4G/5G Polymorphism and Polycystic Ovary Syndrome Risk:A Meta Analysis[J].Assist Reprod Genet,2014,31 (3):363-370.

    [15] Lopez-Alemany R,Redondo J M,Nagamine Y,et al.Plasminogen activator inhibitor type-1 inhibits insulin signaling by competing with alphavbeta3 integrin for vitronectin binding[J].Eur J Biochem,2003,270(5):814-821.

    [16] Michalska M,Iwan-Zie tek I,Gnilka W,et al.PAI-1 and a2-AP in Patients with Morbid Obesity[J].Clin Exp Med,2013,22(6):801-807.

    [17] Ma L J,Mao S L,Taylor K L,et al.Prevention of obesity and insulin resistance in mice lacking plasminogen activator inhibitor 1 [J].Diabetes,2004,53(2):336-346.

    [18] Tarkun I,Canturk Z,Arslan B C,et al.The plasminogen activator system in young and lean women with polycystic ovary syndrome[J].Endocr J,2014,51(5):467-472.

    [19] 趙君利,陳子江,趙躍然,等.纖溶酶原激活物抑制因子1基因啟動子區(qū)4G和5G多態(tài)基因型分布及其多囊卵巢綜合征的相關性研究[J].中華婦產科雜志,2005,40:528-531.

    Correlation of 4G/5G polymorphism of plasminogen activator inhibitor-1 gene promoter region with polycystic ovarian syndrome

    LIU YuANWEI. DENG Miao. CEN Jiaping. et al. Department of Gynecology. Hangzhou Women's Hospital. Hangzhou 310008. China

    Objective To investigate the correlation of 4G/5G polymorphism of plasminogen activator-1(PAI-1)gene promoter region with polycystic ovary syndrome(PCOS)in Zhejiang Han population.MethodsOne hundred and twenty patients with PCOS and 102 healthy women(control group)were enrolled from Zhejiang Han population.Body mass index(BMI)and waist-to-hip ratio(WHR)were determined.The 4G/5G polymorphism of the PAI-1 gene promoter region was amplified by the polymerase chain reaction(PCR).Blood samples of PCOS patients were obtained,fasting insulin was detected by ELISA and fasting glucose was measured by glucose oxidase method,and insulin resistance index(Homa-IR)was calculated.Based on the BMI,PCOS patients were divided into obese(n=54)and non-obese(n=66)groups.Based on Homa-IR,the patients were divided into insulin resistant(IR,n=49)and non-IR(n=71)groups.ResultsThe rate of PAI-1 gene promoter region 4G/4G genotype was significantly higher in the PCOS patients than that in control group(P<0.05).The rate of 4G/4G genotype was significantly higher in the IR and non-obese groups than that in non-IR and obese groups(P<0.05).ConclusionThe genotype 4G/4G in PAI-1 gene promoter region may be associated with the pathogenesis of PCOS in Zhejiang Han population,which may be involved in the development of IR and PCOS,especially in non-obese patients.

    Polycystic ovary syndrome Plasminogen activator inhibitor-1 Gene polymorphism Insulin resistance Obese

    2015-04-20)

    (本文編輯:陳丹)

    浙江省科技計劃項目(2009C33114)

    310008 杭州市第一人民醫(yī)院集團杭州市婦產科醫(yī)院婦產科

    張治芬,E-mail:zhangzf@zju.edu.cn

    猜你喜歡
    肥胖者抵抗多態(tài)性
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關性研究進展
    鍛煉肌肉或有助于抵抗慢性炎癥
    中老年保健(2021年5期)2021-08-24 07:06:20
    做好防護 抵抗新冠病毒
    中年肥胖者應常食紅豆
    iNOS調節(jié)Rab8參與肥胖誘導的胰島素抵抗
    有沒有健康的肥胖者
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測
    GlobalFiler~? PCR擴增試劑盒驗證及其STR遺傳多態(tài)性
    減肥能改善睡眠
    分憂(2015年6期)2015-06-09 08:23:09
    一级毛片aaaaaa免费看小| 中文字幕制服av| 久久久久久伊人网av| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲av二区三区四区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日韩人妻高清精品专区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 黑人高潮一二区| 18+在线观看网站| 国精品久久久久久国模美| 精华霜和精华液先用哪个| 成年av动漫网址| 大片电影免费在线观看免费| 免费少妇av软件| 国产视频首页在线观看| 岛国毛片在线播放| 亚洲人与动物交配视频| 草草在线视频免费看| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 91精品国产九色| 一级毛片久久久久久久久女| 国产精品一区二区性色av| 国产高清三级在线| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久精品人妻少妇| 欧美高清性xxxxhd video| 卡戴珊不雅视频在线播放| 中文字幕av成人在线电影| 一个人免费看片子| 丝袜脚勾引网站| av免费在线看不卡| 久久亚洲国产成人精品v| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美成人午夜免费资源| av播播在线观看一区| 久久人人爽人人片av| 亚洲精品视频女| 尾随美女入室| 亚洲精品国产成人久久av| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一级二级三级毛片免费看| 国产精品人妻久久久久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 午夜福利高清视频| 亚洲无线观看免费| 国产深夜福利视频在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 精品一区二区免费观看| 成人黄色视频免费在线看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 能在线免费看毛片的网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美zozozo另类| 欧美zozozo另类| 国产高清有码在线观看视频| 黄色配什么色好看| 久久国产精品大桥未久av | 精品久久久久久久久av| 男人舔奶头视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 最近中文字幕2019免费版| 熟妇人妻不卡中文字幕| 一本久久精品| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| av专区在线播放| 青春草国产在线视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 91久久精品国产一区二区成人| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲三级黄色毛片| 欧美精品亚洲一区二区| 国产亚洲最大av| 国产高潮美女av| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 777米奇影视久久| 大陆偷拍与自拍| tube8黄色片| 午夜激情福利司机影院| 成人特级av手机在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 尾随美女入室| 99热这里只有是精品在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 插逼视频在线观看| 精品一区二区三卡| 国产精品久久久久久久久免| 美女内射精品一级片tv| av免费在线看不卡| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产深夜福利视频在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 久久婷婷青草| 亚洲成人一二三区av| 毛片女人毛片| 毛片一级片免费看久久久久| 一边亲一边摸免费视频| 日韩精品有码人妻一区| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| av在线播放精品| 日韩av不卡免费在线播放| av专区在线播放| 国产精品久久久久久久久免| 久久99热6这里只有精品| 少妇的逼好多水| 国产黄频视频在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 人妻 亚洲 视频| 美女视频免费永久观看网站| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 一边亲一边摸免费视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 寂寞人妻少妇视频99o| 岛国毛片在线播放| 蜜桃在线观看..| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲无线观看免费| 99视频精品全部免费 在线| av网站免费在线观看视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 日韩视频在线欧美| 国产爽快片一区二区三区| 中文字幕制服av| 国产精品伦人一区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 一区二区三区乱码不卡18| 国产高清国产精品国产三级 | 熟女人妻精品中文字幕| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 天美传媒精品一区二区| 亚洲内射少妇av| 一本色道久久久久久精品综合| 久久精品国产自在天天线| 午夜福利在线在线| 1000部很黄的大片| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品国产露脸久久av麻豆| av视频免费观看在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久人妻熟女aⅴ| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 黑丝袜美女国产一区| 少妇高潮的动态图| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产白丝娇喘喷水9色精品| 99re6热这里在线精品视频| 国产在线男女| 熟女av电影| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 午夜老司机福利剧场| 六月丁香七月| 国产高清国产精品国产三级 | 青青草视频在线视频观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 午夜福利高清视频| 全区人妻精品视频| 国产熟女欧美一区二区| 熟女电影av网| 全区人妻精品视频| 日本-黄色视频高清免费观看| av.在线天堂| 99视频精品全部免费 在线| 在线看a的网站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲第一区二区三区不卡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲经典国产精华液单| 夫妻性生交免费视频一级片| 网址你懂的国产日韩在线| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲电影在线观看av| 高清午夜精品一区二区三区| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 下体分泌物呈黄色| 国产在视频线精品| 一区二区三区免费毛片| 91久久精品国产一区二区成人| 国产综合精华液| 久久99热这里只频精品6学生| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日本vs欧美在线观看视频 | 永久网站在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产av一区二区精品久久 | 国产在线视频一区二区| 国产又色又爽无遮挡免| 日韩成人伦理影院| 高清视频免费观看一区二区| 高清视频免费观看一区二区| 久久久久国产网址| 国产高清不卡午夜福利| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| av又黄又爽大尺度在线免费看| 色网站视频免费| 极品少妇高潮喷水抽搐| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 高清日韩中文字幕在线| 老司机影院毛片| 国产日韩欧美亚洲二区| 成人无遮挡网站| 在线观看免费日韩欧美大片 | 精品一区二区三卡| 成人无遮挡网站| 一区二区av电影网| 国产伦在线观看视频一区| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产成人免费无遮挡视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲综合精品二区| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 大码成人一级视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美日韩在线观看h| 在线观看一区二区三区| 黑丝袜美女国产一区| 欧美一级a爱片免费观看看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 超碰97精品在线观看| 国产视频内射| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 女人十人毛片免费观看3o分钟| 伦理电影免费视频| 国产高清有码在线观看视频| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产综合精华液| 深爱激情五月婷婷| 欧美少妇被猛烈插入视频| av.在线天堂| .国产精品久久| 成人亚洲精品一区在线观看 | 成人免费观看视频高清| 人妻一区二区av| 黄色日韩在线| 99re6热这里在线精品视频| 国产探花极品一区二区| 午夜视频国产福利| 欧美97在线视频| 嘟嘟电影网在线观看| 青春草国产在线视频| 男男h啪啪无遮挡| 欧美精品一区二区免费开放| 丝袜喷水一区| 亚洲国产最新在线播放| 日韩欧美 国产精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产成人a∨麻豆精品| 777米奇影视久久| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久精品国产亚洲av天美| 男女国产视频网站| 国产极品天堂在线| 欧美97在线视频| 国产高清国产精品国产三级 | 免费播放大片免费观看视频在线观看| 赤兔流量卡办理| 少妇熟女欧美另类| 视频中文字幕在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美精品国产亚洲| 精品一区在线观看国产| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产精品三级大全| 久久久久久伊人网av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 街头女战士在线观看网站| 这个男人来自地球电影免费观看 | 日韩 亚洲 欧美在线| 美女福利国产在线 | av免费在线看不卡| 国产精品久久久久久久久免| 天堂俺去俺来也www色官网| 春色校园在线视频观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲av综合色区一区| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲三级黄色毛片| 一个人免费看片子| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲成人av在线免费| 亚洲熟女精品中文字幕| 日韩三级伦理在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 成人无遮挡网站| 下体分泌物呈黄色| 我要看黄色一级片免费的| 啦啦啦啦在线视频资源| 新久久久久国产一级毛片| 日韩一区二区视频免费看| 成人美女网站在线观看视频| 国产在线免费精品| 在线观看av片永久免费下载| 草草在线视频免费看| 2022亚洲国产成人精品| 久久99蜜桃精品久久| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美成人一区二区免费高清观看| 美女福利国产在线 | 国产综合精华液| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产 精品1| 超碰97精品在线观看| 美女中出高潮动态图| 黄色配什么色好看| 欧美区成人在线视频| 免费观看在线日韩| 亚洲精品,欧美精品| 一区二区三区精品91| 精品国产三级普通话版| 成人国产av品久久久| 三级国产精品欧美在线观看| 91久久精品电影网| 国产极品天堂在线| 亚洲自偷自拍三级| 毛片一级片免费看久久久久| 国产美女午夜福利| av在线老鸭窝| 少妇的逼水好多| 大陆偷拍与自拍| 国产精品国产三级专区第一集| 草草在线视频免费看| 男女国产视频网站| 老司机影院成人| 午夜免费观看性视频| 人妻 亚洲 视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 伦理电影大哥的女人| 婷婷色麻豆天堂久久| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产一区二区三区av在线| 草草在线视频免费看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产精品一区二区在线不卡| 久久国内精品自在自线图片| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 最近最新中文字幕免费大全7| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品女同一区二区软件| 人妻少妇偷人精品九色| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品一区二区在线观看99| 国产亚洲5aaaaa淫片| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品爽爽va在线观看网站| 黄色视频在线播放观看不卡| 乱码一卡2卡4卡精品| 极品教师在线视频| 在线 av 中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 成人综合一区亚洲| 午夜免费男女啪啪视频观看| 直男gayav资源| 在线免费观看不下载黄p国产| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久av网站| 亚洲经典国产精华液单| 永久网站在线| 成人国产麻豆网| 精品久久久久久久久av| 亚洲精品国产av成人精品| 国产在线一区二区三区精| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久久久国产网址| 亚洲欧美精品专区久久| 久久影院123| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 天堂8中文在线网| 乱系列少妇在线播放| 国产淫语在线视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品人妻久久久影院| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲人与动物交配视频| 日韩视频在线欧美| kizo精华| 免费观看在线日韩| av免费观看日本| av国产精品久久久久影院| 国产精品熟女久久久久浪| av黄色大香蕉| 国产黄片美女视频| 街头女战士在线观看网站| 搡老乐熟女国产| a 毛片基地| 国产在线一区二区三区精| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产成人freesex在线| 国产极品天堂在线| av卡一久久| 亚洲三级黄色毛片| av网站免费在线观看视频| 国产高清国产精品国产三级 | 99久久人妻综合| 在线精品无人区一区二区三 | 成人免费观看视频高清| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 麻豆成人午夜福利视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 老司机影院毛片| 亚洲,欧美,日韩| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲内射少妇av| 国产熟女欧美一区二区| 中文字幕av成人在线电影| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 有码 亚洲区| 国模一区二区三区四区视频| 性色av一级| 国产伦精品一区二区三区四那| 人妻 亚洲 视频| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 深爱激情五月婷婷| 超碰97精品在线观看| 久久婷婷青草| 亚洲精品aⅴ在线观看| 最新中文字幕久久久久| 亚洲av日韩在线播放| 22中文网久久字幕| 国产精品免费大片| 99久久精品国产国产毛片| 国产成人aa在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品久久久久久av不卡| 干丝袜人妻中文字幕| kizo精华| 两个人的视频大全免费| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成人国产av品久久久| 日本黄色日本黄色录像| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲无线观看免费| 日韩视频在线欧美| 国产成人a区在线观看| 成人综合一区亚洲| 久久久久久久久久久丰满| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久久视频综合| 午夜福利影视在线免费观看| 久久久久久人妻| av福利片在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久久色成人| 精品久久久噜噜| av网站免费在线观看视频| 日韩av免费高清视频| 国产 精品1| 国产精品国产av在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 激情 狠狠 欧美| 青春草国产在线视频| 色5月婷婷丁香| 一区在线观看完整版| 亚洲,一卡二卡三卡| 丝瓜视频免费看黄片| 在线天堂最新版资源| 精品久久久久久电影网| 水蜜桃什么品种好| 熟女av电影| 国产精品无大码| 国精品久久久久久国模美| 日日啪夜夜爽| 亚洲国产高清在线一区二区三| 大码成人一级视频| 在线免费十八禁| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 只有这里有精品99| 久久久久久久精品精品| 欧美成人午夜免费资源| 国产午夜精品一二区理论片| 国产又色又爽无遮挡免| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产乱来视频区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 最后的刺客免费高清国语| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 色综合色国产| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久6这里有精品| 九九爱精品视频在线观看| av.在线天堂| 多毛熟女@视频| 久久精品久久久久久久性| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲av成人精品一二三区| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 十八禁网站网址无遮挡 | 在线观看免费视频网站a站| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品女同一区二区软件| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲经典国产精华液单| 久久国产乱子免费精品| 免费观看性生交大片5| 国产一级毛片在线| 色综合色国产| 成人国产av品久久久| 视频中文字幕在线观看| 久久精品久久久久久久性| 99国产精品免费福利视频| 亚洲av男天堂| 性色avwww在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲精品日本国产第一区| 熟女av电影| 又大又黄又爽视频免费| 麻豆成人午夜福利视频| 91狼人影院| 久久久成人免费电影| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲性久久影院| 男女下面进入的视频免费午夜| 在线观看免费高清a一片| 成人美女网站在线观看视频| 午夜福利高清视频| 久久99热这里只频精品6学生| 又爽又黄a免费视频| 日韩av不卡免费在线播放| 六月丁香七月| 九九爱精品视频在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产精品久久久久成人av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 男的添女的下面高潮视频| 欧美一区二区亚洲| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲精品aⅴ在线观看| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲欧洲日产国产| 日韩一区二区三区影片| 亚洲精品一二三| 久久国产乱子免费精品| 丰满少妇做爰视频| 在线观看免费视频网站a站| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲人成网站在线播| 99热这里只有是精品50| 高清视频免费观看一区二区| 男的添女的下面高潮视频| 免费观看性生交大片5| 免费少妇av软件| 在线观看免费日韩欧美大片 | 九色成人免费人妻av| 少妇熟女欧美另类| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美日韩在线观看h| 一区二区三区四区激情视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日韩中字成人| av国产久精品久网站免费入址| 欧美最新免费一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 日韩欧美一区视频在线观看 | 黄色一级大片看看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产91av在线免费观看| 一个人看视频在线观看www免费| 国产一区二区在线观看日韩| 性色avwww在线观看| 内射极品少妇av片p| 欧美一区二区亚洲| 国产免费又黄又爽又色| 最黄视频免费看| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av二区三区四区| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 嘟嘟电影网在线观看| 国产黄频视频在线观看| 国产精品久久久久成人av| 亚洲欧美日韩东京热| 少妇人妻 视频| 国产精品久久久久久精品古装| 精品熟女少妇av免费看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲在久久综合| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产成人a区在线观看|