大豆飼料產(chǎn)品中主要抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的檢測(cè)與分析

周天驕 譙仕彥 馬 曦 賀平麗（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193）

大豆飼料產(chǎn)品中主要抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的檢測(cè)與分析

周天驕 譙仕彥 馬 曦 賀平麗?
（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100193）

摘 要：本試驗(yàn)旨在應(yīng)用間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法以及色譜法測(cè)定不同加工工藝的大豆飼料產(chǎn)品中主要大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子以及大豆中蔗糖、棉子糖和水蘇糖的含量。采用ELISA試劑盒對(duì)國(guó)內(nèi)257份大豆制品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量進(jìn)行檢測(cè)與分析；利用離子色譜建立了大豆產(chǎn)品中蔗糖、棉子糖和水蘇糖的靈敏、準(zhǔn)確的同步測(cè)定法，并對(duì)國(guó)內(nèi)92份大豆制品中寡糖含量進(jìn)行檢測(cè)與分析。結(jié)果表明：發(fā)酵豆粕、膨化大豆、大豆?jié)饪s蛋白和大豆分離蛋白中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量相對(duì)較低；本試驗(yàn)所建立的離子色譜同步測(cè)定大豆中蔗糖、棉子糖和水蘇糖的方法具有靈敏度和準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)，適用于大豆寡糖的測(cè)定；通過(guò)對(duì)實(shí)際樣品的檢測(cè)和分析，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵豆粕和大豆分離蛋白中3種大豆寡糖含量均相對(duì)較低。本試驗(yàn)所得到不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中主要抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的相關(guān)數(shù)據(jù)將為大豆在畜禽飼料中的高效利用提供很好的技術(shù)支撐。

關(guān)鍵詞：ELISA；離子色譜；抗?fàn)I養(yǎng)因子；大豆產(chǎn)品

大豆因其富含蛋白質(zhì)且氨基酸平衡而成為人類(lèi)和動(dòng)物優(yōu)質(zhì)的植物蛋白質(zhì)源。隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)和飼料業(yè)的快速發(fā)展，豆粕作為主要植物性蛋白質(zhì)原料，其需求量逐年遞增。然而，豆粕中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，如蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白以及寡糖等，這在一定程度上限制了其在飼料中的應(yīng)用，尤其是幼畜飼料。近幾十年來(lái)，科研工作者致力于研究通過(guò)不同的加工工藝來(lái)消除或降低大豆中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，如通過(guò)加熱法鈍化蛋白酶抑制因子、微生物發(fā)酵以及膨化法降低大豆蛋白致敏性等，以期大豆及大豆制品能夠在食品和飼料領(lǐng)域得到更廣泛的應(yīng)用。但由于技術(shù)水平、工藝參數(shù)等的不同，造成大豆產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，之前由于檢測(cè)技術(shù)的限制，很難直觀準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)其鈍化消除效果，因此如何快速準(zhǔn)確測(cè)定大豆中的各種抗?fàn)I養(yǎng)因子水平已成為了大豆制品質(zhì)量評(píng)定以及大豆制品加工工藝監(jiān)控等工作中必須解決的問(wèn)題。

大豆中胰蛋白酶抑制因子與脲酶有相似的含量和活性，可通過(guò)檢測(cè)脲酶活性間接反映胰蛋白酶抑制因子活性［1］，但該法靈敏度低且對(duì)于過(guò)度加熱豆粕測(cè)定準(zhǔn)確度很低，此外還有酶化學(xué)檢測(cè)法、免疫化學(xué)測(cè)定法等，其中酶化學(xué)法靈敏度低且對(duì)加熱過(guò)度的豆粕測(cè)定結(jié)果變異較大，而通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法直接測(cè)定胰蛋白酶抑制因子的靈敏度、準(zhǔn)確性和重復(fù)性均較好［2］。大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白的檢測(cè)方法包括電泳法、色譜法、質(zhì)譜法、液質(zhì)聯(lián)用、免疫化學(xué)法、實(shí)時(shí)PCR（real?time PCR）以及多重PCR（multiplex?PCR）［3－6］等，其中電泳法多用于定性和半定量，不能用于準(zhǔn)確定量大豆球蛋白及β－伴大豆球蛋白含量；雖然色譜法、質(zhì)譜法、液質(zhì)聯(lián)用的靈敏度和準(zhǔn)確性高，但需要較為昂貴的儀器和復(fù)雜的操作和分析過(guò)程，無(wú)法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)；基于PCR技術(shù)的檢測(cè)方法雖簡(jiǎn)便，特異性和靈敏度高，但由于結(jié)果可能出現(xiàn)交叉污染造成假陽(yáng)性等限制了該方法的廣泛應(yīng)用，而基于免疫學(xué)所建立的ELASA法具有特異性強(qiáng)和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，推廣性強(qiáng)。早期大豆寡糖的分析方法一般采用紙色譜法、薄層色譜法及柱色譜法，能夠在糖類(lèi)分離的基礎(chǔ)上對(duì)樣品中的各種糖類(lèi)逐一定量分析，但存在分離效力有限且非專(zhuān)一性響應(yīng)的問(wèn)題，隨著現(xiàn)代分析技術(shù)的進(jìn)步，先進(jìn)的儀器分析方法已經(jīng)應(yīng)用于糖類(lèi)的檢測(cè)和分析中，如氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）和毛細(xì)管電泳法（CE）、質(zhì)譜（MS）［7－8］等，這些方法分離能力高，且靈敏、準(zhǔn)確。近年來(lái)，離子色譜以其特異的陰離子交換分離技術(shù)和靈敏的脈沖安培檢測(cè)技術(shù)，在糖的檢測(cè)領(lǐng)域得到越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，逐漸取代了其他的糖檢測(cè)技術(shù)。此方法簡(jiǎn)單，不需衍生和復(fù)雜的樣品前處理就能分析幾乎所有的單糖和大部分的寡糖及低聚糖，這不僅節(jié)約了大量的時(shí)間和成本，而且避免了一些有毒的衍生試劑的使用，減少了環(huán)境污染［9－10］。脈沖安培檢測(cè)器具有非常高的靈敏度，低至pmol級(jí)的糖類(lèi)也可得到很好的檢測(cè)。隨著離子色譜分析技術(shù)的發(fā)展及其在寡糖和多糖方面出色的分離能力，使其能夠在對(duì)寡糖的研究過(guò)程起到更重要的作用。

本試驗(yàn)建立了檢測(cè)大豆產(chǎn)品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量的靈敏、準(zhǔn)確的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，同時(shí)建立了蔗糖、棉子糖和水蘇糖的靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的離子色譜檢測(cè)方法，利用上述建立的方法分析測(cè)定了257份不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量，為大豆及大豆加工產(chǎn)品在畜禽飼料中的高效利用提供技術(shù)保障。

1　材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

1．1．1 試劑

大豆球蛋白定量檢測(cè)試劑盒、β－伴大豆球蛋白定量檢測(cè)試劑盒和胰蛋白酶抑制因子定量檢測(cè)試劑盒均由北京龍科方舟生物工程技術(shù)有限公司提供。

D－蔗糖（≥99．5%，Sigma公司），D－棉子糖（≥98%，Sigma?Aldrich公司），D－水蘇糖（≥98%，Sigma公司），NaOH溶液（50%，W／W，F(xiàn)luka公司），其他試劑為分析純?cè)噭Ｋ杏盟鶠殡娮杪省?8．2 MΩ·cm的超純水，0．22 μm微孔尼龍膜（天津富集司）。

1．1．2 主要儀器

ICS－3000型離子色譜儀（美國(guó)Dionex公司），Chromeleon 6．80色譜工作站，AS自動(dòng)進(jìn)樣器，Milli?QAdvantageA10超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司），離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司），JB－12多磁力攪拌器（榮華儀器制造廠），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Thermo公司），酶標(biāo)儀（美國(guó)BIO?RAD公司），隔水式培養(yǎng)箱（常州恒德儀器有限公司）。

1．1．3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和淋洗液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取蔗糖、棉子糖和水蘇糖標(biāo)準(zhǔn)品各25．00 mg溶于50 mL超純水中，并用超純水將該母液稀釋到5 μg／mL，搖勻，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，備用。

NaOH淋洗液的配制（250 mmol／L）：在1 L容量瓶中加入987 mL超純水，再移入13．0 mL 50%NaOH溶液，搖勻備用。

1．2 樣品采集

257份大豆樣品，包括去皮豆粕、發(fā)酵豆粕、膨化大豆、大豆?jié)饪s蛋白、大豆分離蛋白等不同加工工藝的大豆產(chǎn)品，采集自全國(guó)各地的飼料生產(chǎn)企業(yè)。

1．3 間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子

1．3．1 大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白檢測(cè)的樣品前處理

將待測(cè)樣品粉碎后，收集能夠通過(guò)孔徑小于0．25 mm標(biāo)準(zhǔn)篩的顆粒，稱取0．3 g樣品于50 mL離心管中，加入30 mL 1×樣品提取工作液，于25℃振蕩提取16 h，靜置2 min。取上層液體于4 000 r／min離心5 min，取上清液用1×樣品稀釋工作液稀釋70倍（稀釋方法：先取100 μL上清液加到裝有600 μL 1×樣品稀釋工作液的容器中混勻，然后再取混合液100 μL加到裝有900 μL 1×樣品稀釋工作液的容器中混勻待用）。

1．3．2 胰蛋白酶抑制因子檢測(cè)的樣品前處理

將待測(cè)樣品粉碎后，收集能夠通過(guò)孔徑小于0．25 mm標(biāo)準(zhǔn)篩的顆粒，稱取0．1 g樣品加入到已配好的30 mL 1×樣品提取工作液中，于25℃振蕩提取16 h，靜置2 min。取上層液體于4 000 r／min離心5 min，取上清液用樣品稀釋液稀釋到適合的工作濃度（豆粕、發(fā)酵豆粕、膨化大豆等樣品建議稀釋比例為1∶300。稀釋方法：取30 μL上清液加到裝有270 μL樣品稀釋液的容器中混勻，量取30 μL混合液加到裝有870 μL樣品稀釋液的容器中混勻待用）。

1．3．3 蛋白定量檢測(cè)及結(jié)果判定

分別以每種大豆抗原蛋白或胰蛋白酶抑制因子的標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度（μg／mL）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以百分吸光率為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)試樣進(jìn)行定量，其中百分吸光率等于校準(zhǔn)品或樣品的吸光度值的平均值（雙孔）除以第1個(gè)校準(zhǔn)品（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100。

1．4 離子色譜法測(cè)定大豆及大豆制品中的3種寡糖

1．4．1 大豆制品寡糖的提取

稱取粉碎后待測(cè)樣品0．5 g左右，先加入20 mL無(wú)水乙醇，振蕩混勻，接著加入80%甲醇30 mL，磁力攪拌1 h，提取液用8 000 r／min離心5 min，取1 mL上清定容于50 mL容量瓶中，0．22 μm尼龍濾膜過(guò)濾，濾液用于離子色譜測(cè)定。

1．4．2 色譜條件

分析柱：CarboPac PA10（250 mm×4 mm）；保護(hù)柱：CarboPac PA10（50 mm×4 mm）；淋洗液條件：梯度洗脫0～15 min，23 mmol／L NaOH；15．1～25．0 min，23～150 mmol／L NaOH；25．1～30．0 min，150 mmol／L NaOH；30．1～35．0 min，23 mmol／L NaOH；流速1．0 mL／min；檢測(cè)器：ED 3000脈沖安培檢測(cè)，Au工作電極，Ag／AgCl參比電極模式，四電位波形檢測(cè)；進(jìn)樣量：25 μL；進(jìn)樣方式：自動(dòng)進(jìn)樣；柱溫：30℃。

1．4．3 結(jié)果計(jì)算

分別以每種寡糖的標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度（μg／mL）為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，按外標(biāo)法用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)試樣進(jìn)行定量。

1．5 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2　結(jié)果與分析

2．1 大豆加工產(chǎn)品中大豆抗原蛋白以及胰蛋白酶抑制因子含量的檢測(cè)與分析

2．1．1 方法校正曲線繪制及回收率測(cè)定

按照試劑盒測(cè)定程序測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到β－伴大豆球蛋白定量檢測(cè)試劑盒濃度在0．4～28 μg／mL內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2≥0．99）；大豆球蛋白定量檢測(cè)試劑盒濃度在0．2～25．6 μg／mL內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2≥0．98）；胰蛋白酶抑制因子定量檢測(cè)試劑盒濃度在0．015～1．220 μg／mL內(nèi)，線性關(guān)系良好（R2≥0．99）。同時(shí)分別用回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差考察了試劑盒的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，所得回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表1。結(jié)果表明，上述3種大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子的平均回收率在86．9%～107．3%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7%，該方法滿足定性鑒別和定量測(cè)定的需要，檢測(cè)限、準(zhǔn)確度和精密度均滿足規(guī)定要求，所以該方法是用來(lái)測(cè)定大豆中大豆抗原蛋白以及胰蛋白酶抑制因子含量的可靠方法。

表1　3種大豆主要抗?fàn)I養(yǎng)因子在大豆樣品中的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 1 Recoveries and RSD of three main soybean antinutritional factors from soybean samples（n＝6）

2．1．2 大豆加工產(chǎn)品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量的測(cè)定結(jié)果

257份樣品可分為7類(lèi)（去皮豆粕、帶皮豆粕、發(fā)酵豆粕、去皮膨化豆粕、膨化大豆、大豆?jié)饪s蛋白、大豆分離蛋白），表2詳細(xì)列舉了這些大豆產(chǎn)品的產(chǎn)地及3種蛋白類(lèi)抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的最大值、最小值和平均值。由表2可知，同一種大豆加工產(chǎn)品，不同地區(qū)之間大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量的最小值或最大值差異較大，如與黑龍江和山東相比，京津冀和浙江的去皮豆粕中β－伴大豆球蛋白含量的最小值較低。因此，采用平均值表示不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子的含量可以較為直觀地比較出不同加工工藝對(duì)抗原蛋白的鈍化效果，雖然變異較大，但仍具有一定的參考價(jià)值。圖1更直觀地展示了不同大豆加工產(chǎn)品中3種蛋白類(lèi)抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量及鈍化降解效果。由圖1可知，豆粕經(jīng)發(fā)酵、膨化或濃縮等工藝處理后，3種抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量明顯降低，其中發(fā)酵豆粕、膨化大豆、大豆?jié)饪s蛋白和大豆分離蛋白中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白含量均降至53．9 mg／g以下，胰蛋白酶抑制因子含量降低至21．6 mg／g以下，與帶皮豆粕相比，這3種抗?fàn)I養(yǎng)因子含量均至少降低了60%。然而，去皮的膨化豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子含量沒(méi)有明顯下降，其去除抗?fàn)I養(yǎng)因子的效果不明顯。

2．2 大豆加工產(chǎn)品中蔗糖、棉子糖和水蘇糖含量的檢測(cè)與分析

2．2．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

分別配制5個(gè)不同濃度的3種寡糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。分別得到蔗糖、棉子糖和水蘇糖的工作曲線的線性范圍為0．2～100．0 μg／mL，R2＞0．995，檢出限在0．02～0．05 μg／mL之間。

2．2．2 方法的準(zhǔn)確度和精確度

本試驗(yàn)對(duì)樣品進(jìn)行了100和50 mg／g 2個(gè)水平的添加濃度，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)平行，所得回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表3。結(jié)果表明，3種寡糖的平均回收率在80%～99%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于6%，該方法滿足定性鑒別和定量測(cè)定的需要，檢測(cè)限、準(zhǔn)確度和精密度均滿足規(guī)定要求，所以該方法是用來(lái)測(cè)定大豆中寡糖含量的可靠方法。此外，樣品的色譜峰見(jiàn)圖2，從圖2中可以看出，樣品中寡糖的分離效果很好。

2．2．3 大豆加工產(chǎn)品中蔗糖、棉子糖和水蘇糖含量的測(cè)定與分析

92份樣品可分為5類(lèi)（豆粕、發(fā)酵豆粕、膨化大豆、大豆?jié)饪s蛋白和大豆分離蛋白），利用本試驗(yàn)所建立的離子色譜方法對(duì)上述樣品進(jìn)行檢測(cè)，所得到的每一類(lèi)樣品中3種大豆寡糖的含量和平均值如表4所示。由表4可知，大豆3種寡糖中蔗糖含量最多，水蘇糖含量次之，棉子糖含量最少，同一大豆加工工藝，不同廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品中同一寡糖的含量也差異較大。對(duì)于不同加工工藝產(chǎn)品，結(jié)果表明豆粕經(jīng)發(fā)酵工藝處理后，其中蔗糖和水蘇糖的含量均明顯下降，比發(fā)酵前降低了70%，大豆分離蛋白中3中寡糖的含量也明顯降低，但膨化豆粕中3種大豆寡糖含量沒(méi)有明顯下降；大豆?jié)饪s蛋白大豆寡糖含量反而升高，這與前人研究的醇法大豆?jié)饪s蛋白中可溶性低聚糖約占干物質(zhì)10%的結(jié)果相吻合［11］。

3　討 論

大豆中因含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，如大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白、胰蛋白酶抑制因子和寡糖等，這些物質(zhì)的存在一定程度上影響了大豆產(chǎn)品的質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。通過(guò)膨化、微生物發(fā)酵以及大豆?jié)饪s蛋白等加工工藝可有效降低大豆中抗?fàn)I養(yǎng)因子含量，但是由于技術(shù)水平、工藝參數(shù)等的不同，造成大豆產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊。本試驗(yàn)通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)了不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量，分析發(fā)現(xiàn)同一種大豆加工產(chǎn)品，不同地區(qū)之間大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量的差異較大，其原因可能是不同企業(yè)生產(chǎn)的大豆產(chǎn)品，即使是同一種加工工藝，但由于具體工藝參數(shù)不同，對(duì)大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子等抗?fàn)I養(yǎng)因子的鈍化降解效果差異很大。但綜合比較，發(fā)酵豆粕、膨化大豆、大豆?jié)饪s蛋白和大豆分離蛋白中上述3種抗?fàn)I養(yǎng)因子含量較低，產(chǎn)生上述結(jié)果原因是：1）微生物發(fā)酵產(chǎn)生的酶類(lèi)可降解胰蛋白酶抑制因子和大豆過(guò)敏蛋白［12］；2）胰蛋白酶抑制因子具有熱不穩(wěn)定性，熱加工（蒸汽處理、膨化）可使其失活，膨化過(guò)程中的高溫高壓和機(jī)械剪切可以使抗?fàn)I養(yǎng)因子鈍化［13］；3）工業(yè)上普遍采用醇法大豆?jié)饪s蛋白加工工藝，而大豆過(guò)敏蛋白和胰蛋白酶抑制因子等經(jīng)乙醇浸出后可被去除或失活［14］，大豆分離蛋白加工過(guò)程中的堿萃取的高pH體系可引起蛋白質(zhì)聚集體發(fā)生解聚，甚至引起蛋白質(zhì)的肽鍵斷裂，降低大分子蛋白質(zhì)組分的含量［11］。然而，去皮的膨化豆粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子含量沒(méi)有明顯下降，原因可能是大部分膨化豆粕樣品嚴(yán)格意義上屬于膨脹豆粕，壓力、溫度和機(jī)械剪切力沒(méi)有膨化工藝強(qiáng)，因此去除抗?fàn)I養(yǎng)因子的效果不明顯［15］。此外，本試驗(yàn)還分析發(fā)現(xiàn)發(fā)酵工藝可降低寡糖的含量，其原因可能是微生物發(fā)酵過(guò)程中需要消耗糖。

表2 大豆加工產(chǎn)品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子的含量范圍Table 2 The content range of glycinin, β-conglycinin and trypsin inhibitor in soybean products

續(xù)表2

圖1　大豆加工產(chǎn)品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量分析圖Fig．1 The analysis graphics of the contents of glycinin，β?conglycinin and trypsin inhibitor in soybean products

表3　3種寡糖在大豆樣品中的添加回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 3 Recoveries and RSD of three kinds of oligosaccharides from soybean samples（n＝6）

圖2　大豆樣品的色譜分離圖Fig．2 The chromatograms of soybean sample

4　結(jié) 論

①本試驗(yàn)通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)了不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白和胰蛋白酶抑制因子含量，分析發(fā)現(xiàn)發(fā)酵豆粕、膨化大豆、大豆?jié)饪s蛋白和大豆分離蛋白中上述3種抗?fàn)I養(yǎng)因子含量較低。

②本試驗(yàn)建立了一種離子色譜同步測(cè)定大豆中蔗糖、棉子糖和水蘇糖含量的簡(jiǎn)便快捷、靈敏度和準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好的方法，適用于大豆寡糖的測(cè)定。通過(guò)該方法分析比較了不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中大豆寡糖含量，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵豆粕和大豆分離蛋白中3種大豆寡糖含量較低，推薦使用發(fā)酵以及大豆蛋白分離技術(shù)來(lái)鈍化大豆球蛋白、β－伴大豆球蛋白、胰蛋白酶抑制因子以及大豆中蔗糖、棉子糖和水蘇糖。

③本試驗(yàn)所得到不同加工工藝的大豆產(chǎn)品中主要抗?fàn)I養(yǎng)因子含量的相關(guān)數(shù)據(jù)可為大豆產(chǎn)品在畜禽飼料中的高效利用提供參考。

表4　大豆加工產(chǎn)品中蔗糖、棉子糖和水蘇糖的含量范圍Table 4 The content ranges of sucrose，raffinose and stachyosein in soybean products　%

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（編輯 武海龍）

Detection and Analysis of Main Antinutritional Factors Content in Soybean Products

ZHOU Tianjiao QIAO Shiyan MA Xi HE Pingli?
（State Key Laboratory of Animal Nutrition，College of Animal Science and Technology，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

?Corresponding author，professor，E?mail：hepingli＠cau．edu．cn

Abstract：This experiment was conducted to determine the content of main soybean antinutritional factors（gly?cinin，β?conglycinin and trypsin inhibitor）and the content of sucrose，raffinose and stachyose in soybean used the competitive indirect enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）method and chromatographic method．The contents of glycinin，β?conglycinin and trypsin inhibitor in 257 soybean products were detected and ana?lyzed by ELISA reagent kits．A high sensitivity and accurate detection system for the sucrose，raffinose and stachyose was established which used ion chromatography，and the content of oligosaccharide in 92 soybean products were detected and analyzed．The results showed that the contents of glycinin，β?conglycinin and tryp?sin inhibitor in fermented soybean meal，extruded soybean，soybean protein concentrate and soybean protein i?solate were lower than those in the others．The ion chromatography method which used for detected the su?crose，raffinose and stachyose had high sensitivity and accurate and good repeatability，and suiTable for detec?ted the oligosaccharide in soybean．The contents of sucrose，raffinose and stachyose in fermented soybean meal and soybean protein isolate were lower than those in the others．These data of main soybean antinutritional fac?tors in soybean products with different processing technology can be useful for the high efficient utilization of soybean in feeds for livestock．［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（1）：221?229］

Key words：ELISA；ion chromatography；antinutritional factor；soybean products

通信作者：?賀平麗，研究員，博士生導(dǎo)師，E?mail：hepingli＠cau．edu．cn

作者簡(jiǎn)介：周天驕（1989—），男，河南三門(mén)峽人，博士研究生，從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料安全研究。E?mail：ztj＿cau0116＠outlook．com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目（31101745）

收稿日期：2014－08－13

doi：10．3969／j．issn．1006?267x．2015．01．027

文章編號(hào)：1006?267X（2015）01?0221?09

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類(lèi)號(hào)：S816．17