蓮蓬殼提取物不同極性部位的生物活性

蓮蓬殼提取物不同極性部位的生物活性

何靜1,2，吳磊2，李鵬霞3，胡衛(wèi)成2，張閆閆2，劉帥2，劉恩雪2，尤龍2，王新風(fēng)2，白羽嘉1，馮作山1

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052;2.淮陰師范學(xué)院/江蘇省環(huán)洪澤湖生態(tài)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇淮安223300；3.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，江蘇南京210014)

摘要：為了確定蓮蓬殼的生物活性物質(zhì)，采用有機(jī)溶劑萃取法將蓮蓬殼提取物分為正己烷相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相5個(gè)不同極性部位，測定不同極性部位提取物中總黃酮及多酚含量，分析其還原能力及對過氧化氫、超氧陰離子自由基和DPPH自由基的清除能力，比較蓮蓬殼提取物不同極性部位提取物的抗氧化作用。同時(shí)還考察了蓮蓬殼不同極性部位提取物對乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)的抑制作用。結(jié)果顯示：蓮蓬殼提取物的不同極性部位提取物均有抗氧化活性作用，其中乙酸乙酯部位提取物和正丁醇部位提取物抗氧化能力較強(qiáng)于其他萃取相部位提取物;正己烷相提取物和二氯甲烷相提取物可顯著抑制MCF-7細(xì)胞的增殖。

關(guān)鍵詞：蓮蓬殼；極性部位；自由基；細(xì)胞增殖

doi:10.3969/j.issn.1000-4440.2015.03.034

收稿日期：2014-11-26

基金項(xiàng)目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新基金項(xiàng)目

作者簡介：何靜(1989-)，女，新疆輪臺(tái)人，碩士研究生，主要從事食品生物化學(xué)的研究。(E-mail)hejing2012279@163.com

通訊作者：李鵬霞，(E-mail)jsnky203@163.com;馮作山,(E-mail)fengzuoshan@126.com

中圖分類號：S645.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號：1000-4440(2015)03-0679-06

Abstract：Five fractions of lotus receptacle, hexane, dichloromethane(CH2Cl2)， ethyl acetate(EtOAc), n-butanol (N-BuOH) and water (H2O)， extracted with ethanolic were determined for their total phenolic and flavonoid contents and antioxidative activities. Total phenolic and flavonoid contents exhibited the highest contents in EtOAC fraction, followed by N-BuOH fraction and water fraction in order. Antioxidations of all five fractions were shown by the strong scavenging abilities to hydrogen peroxide, superoxide anion and 1-dipheny1-2-picrylhydrazy1. The two fractions, EtOAC and N-BuOH, outperformed other three in antioxidation, while other two fractions, CH2Cl2 and hexane, were superior in inhibiting the proliferation of human breast cancer cell(MCF-7).

Bioactivities of different fractions of lotus receptacle

HE Jing1,2,WU Lei2,LI Peng-xia3,HU Wei-cheng2,ZHANG Yan-yan2,LIU Shuai2,LIU En-xue2,YOU Long2,WANG Xin-feng2,BAI Yu-jia1,FENG Zuo-shan1

(1.CollegeofFoodScienceandPharmacology,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi830052,China;2.HuaiyinNormalUniversity/JiangsuKeyLaboratoryforEco-AgriculturalBiotechnologyaroundHongzeLake,Huai’an223300,China;3.InstituteofAgriculturalProductsProcessing,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences,Nanjing210014,China)

Key words：lotus receptacle;fraction;free radical;cell proliferation

自由基是一類具有高度活性的物質(zhì)，在人體新陳代謝中起著重要的作用。正常情況下，人體內(nèi)的自由基處于穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)平衡中，當(dāng)這一平衡被打破時(shí)，機(jī)體內(nèi)的器官將會(huì)發(fā)生病變，引發(fā)疾病和衰老。近年來，尋找和制備特效自由基清除劑和抗氧化劑愈發(fā)受到人們的重視，其中從中藥植物中提取天然抗氧化劑已成為熱點(diǎn)話題[2-3]。

蓮蓬殼為蓮科植物蓮(NelumbonuciferaGaertn.)的成熟花托，又名蓮房。據(jù)《本草綱目》記載，“蓮房，消淤散血。酒煮服之，治血漲腹痛及產(chǎn)后胎衣不下?！?，民間常用炭制蓮房作為一種止血藥使用。蓮主要分布于中國長江、黃河、珠江以及洪湖等湖的淺水區(qū)?，F(xiàn)代藥理試驗(yàn)結(jié)果表明，蓮蓬殼能有效地清除自由基的生成，且對二苯基苦味酰基苯肼(DPPH)自由基和·OH自由基的清除能力均高于維生素C，其對Fe3+的還原能力與維生素C基本一致[5-6]。除此之外，大量文獻(xiàn)報(bào)道蓮蓬殼具有改善小鼠記憶性障礙[7-8]，抑制黑色素瘤細(xì)胞[9-10]，延緩衰老[11]，調(diào)解血脂和保護(hù)心血管系統(tǒng)等生物活性[12-14]。國內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)蓮蓬殼含有豐富的蓮房原花青素和以金絲桃苷、槲皮素為主的黃酮類化合物以及少量的生物堿等活性成分[15]。蓮蓬殼作為蓮的非可食用部分，通常作為廢棄物直接丟棄，造成生物資源的極大浪費(fèi)和環(huán)境的嚴(yán)重污染。本試驗(yàn)采用萃取分離方法獲得蓮蓬殼萃取物，通過采用化學(xué)發(fā)光法、還原能力測定法及DPPH自由基清除等方法，對蓮蓬殼萃取物抗氧化活性進(jìn)行研究，旨在揭示蓮蓬殼的抗氧化能力及其活性部位，為蓮蓬殼的合理開發(fā)利用提供理論依據(jù)，也為天然抗氧化劑和功能性食品開發(fā)提供新的資源。

1材料與方法

1.1　材料與試劑

蓮蓬殼(采自江蘇省金湖縣，2013年9月)，經(jīng)干燥脫水后，粉碎過80目篩，得蓮蓬殼粉末，置常溫干燥處備用。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品、DPPH、魯米諾(luminol)、5-氟尿嘧啶、甲氮甲唑藍(lán)(MTT)及臺(tái)盼藍(lán)均購于Sigma公司。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購于Gibco公司。抗壞血酸、鄰苯三酚、過氧化氫、硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、氯化鐵、鐵氰化鉀、三氯乙酸、無水乙醇、正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、正丁醇、十二烷基硫酸鈉(SDS)均為分析純試劑。

MTT工作液配制：精密稱取0.10 g甲氮甲唑藍(lán)試劑后，加入到20 ml水中，混勻避光過濾，配制成5 mg/ml MTT溶液。

MTT終止液配制：精密稱取20.00 g SDS試劑，加入0.176 ml的鹽酸溶液后，用水定容至20 ml即可。

1.2　儀器與設(shè)備

分析天平，購自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；Tecan infinite M200PRO酶標(biāo)儀，購自瑞士Tecan公司；KQ-500B超聲波清洗器，購自昆山市超聲儀器有限公司；二氧化碳培養(yǎng)箱，購自日本SANYO公司；倒置顯微鏡，購自日本Olympus公司。

1.3　試驗(yàn)方法

1.3.1蓮蓬殼不同極性溶劑提取物制備在乙醇體積分?jǐn)?shù)80%、料液比1∶20、溫度50 ℃條件超聲提取1 h，提取2次，過濾；將濾液低壓濃縮至膏狀物質(zhì)，取部分冷凍干燥，得到醇提物干樣；加入定量的水將上述剩余的膏狀物質(zhì)溶解后，充分搖勻，轉(zhuǎn)入分液漏斗中。以1∶1的配比依次用正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇溶劑各萃取3次，得到正己烷部位、二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水提部位的萃取物。將各組萃取物減壓濃縮后，真空冷凍干燥至恒質(zhì)量，密封置于冰箱冷藏備用。

1.3.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液制備準(zhǔn)確稱取經(jīng)120 ℃烘干至恒質(zhì)量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g，80%乙醇溶解后定容至50 ml，搖勻，得1 mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.3蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制作參照Hossain等[16]的方法加以改進(jìn)。分別精密量取1 mg/ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 ml、0.2 ml、0.3 ml、0.4 ml、0.5 ml置于10.0 ml試管中，各加80%乙醇溶液至1.0 ml，再加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉溶液，搖勻，避光靜置反應(yīng)5 min后，加入0.3 ml的10%硝酸鋁，搖勻，靜置6 min，加入2.0 ml的4%氫氧化鈉，搖勻放置15 min后，于波長510 nm處測定其吸光值。以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)方程Y=0.003x+0.017，R2=0.995。式中Y為吸光度；x為黃酮質(zhì)量濃度。

1.3.4沒食子酸溶液制備準(zhǔn)確稱取經(jīng)120 ℃烘干至恒質(zhì)量的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g，80%乙醇溶解定容至50 ml，得到1 mg/ml沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.5沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線制作采用Ghimeray等[17]方法加以改進(jìn)。用80%乙醇配制不同濃度的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg/ml、0.2 mg/ml、0.3 mg/ml、0.4 mg/ml、0.5 mg/ml),各吸取200 μl后加入1.0 ml蒸餾水、福林酚試劑0.2 ml混勻，靜置3 min后，加入7.5%碳酸鈉溶液0.6 ml后混勻，室溫靜置40 min后，于波長765 nm下測定器吸光值。以沒食子酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)方程Y=0.004x+0.101，R2=0.998。式中Y為吸光度；x為多酚質(zhì)量濃度(mg/ml)。

1.3.6蓮蓬殼不同極性部位中總黃酮、多酚含量測定準(zhǔn)確稱取蓮蓬殼萃取物0.01 g，溶于10 ml 80%乙醇中，配制成1 mg/ml溶液，代入到各標(biāo)準(zhǔn)曲線中，測定萃取物中總黃酮、多酚含量。

1.3.7抗氧化能力測定

1.3.7.1蓮蓬殼不同極性部位清除DPPH自由基的測定[18]分別向板孔內(nèi)加入100 μl不同質(zhì)量濃度蓮蓬殼萃取段溶液和100 μl 0.2 mmol/L DPPH溶液，混勻后避光反應(yīng)30 min，在波長517 nm處測定吸光度，重復(fù)3次，取平均值。

DPPH清除率=[1-(A1-A2)/A3]×100%

式中，A1:DPPH溶液與待測液的吸光度之和；A2:待測液與溶劑的吸光度之和；A3:DPPH溶液與溶劑的吸光度之和。

1.3.7.2還原能力測定[18]量取0.2 ml不同質(zhì)量濃度蓮蓬殼萃取段溶液(0.05 mg/ml、0.10 mg/ml、0.20 mg/ml、0.40 mg/ml)，依次加入0.5 ml 0.2 mol/L pH 6.6磷酸緩沖溶液、1%鐵氰化鉀溶液0.5 ml，于50 ℃下水浴30 min后，加入10%三氯乙酸溶液(TCA)0.5 ml搖勻，10 000r/min 5 min離心，吸取上清溶液0.5 ml，加入0.5 ml蒸餾水和0.1 ml 0.1%氯化鐵溶液，混合均勻，靜置10 min。于波長700 nm處測定吸光度，重復(fù)3次，取平均值。

1.3.7.3清除H2O2能力測定[19]配制不同濃度(0.1 μg/ml、0.5 μg/ml、1.0 μg/ml、10.0 μg/ml、100.0 μg/ml)蓮蓬殼萃取物溶液100 μl，加入0.03 mol/L H2O250 μl和0.04 mmol/L魯米諾碳酸鹽緩沖液(0.05 mol/L Na2CO3-NaHCO3pH 9.4)50 μl后，立即啟動(dòng)反應(yīng)。每間隔2 s計(jì)數(shù)1次，記錄180 s內(nèi)的發(fā)光強(qiáng)度。重復(fù)3次，取平均值。發(fā)光抑制率按下式計(jì)算：

發(fā)光抑制率=[(對照發(fā)光強(qiáng)度-樣品發(fā)光強(qiáng)度)/對照發(fā)光強(qiáng)度]×100%。

1.3.7.4清除O2·-能力[19]配制不同濃度(10 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml、400 μg/ml)蓮蓬殼萃取物溶液100 μl，加入50 μl 1 mmol/L鄰苯三酚，以及50 μl 1 mmol/L魯米諾碳酸鈉緩沖液(0.05 mol/L Na2CO3-NaHCO3pH 10.16)后，立即啟動(dòng)反應(yīng)。每間隔2 s計(jì)數(shù)1次，測定180 s內(nèi)的發(fā)光強(qiáng)度。重復(fù)3次，取平均值。

1.3.8蓮蓬殼不同極性部位對乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞增殖的影響[20]

1.3.8.1MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)于含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100 μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液(4.5 g/L葡萄糖、4.5 g/LL-谷氨酸胺、110 mg/L 丙酮酸鈉)中，置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞生長至融合率達(dá)80%時(shí)，用1 ml 0.25%胰酶+0.02%EDTA消化2 min，按1∶7進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1.3.8.2蓮蓬殼萃取部分對MCF-7細(xì)胞存活率的影響取對數(shù)生長期細(xì)胞MCF-7，調(diào)整細(xì)胞數(shù)至1 ml 4×105個(gè)，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100 μl，置37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h后，加入濃度為100 μg/ml蓮蓬殼萃取物共培養(yǎng)，每孔均設(shè)3復(fù)孔。處理24 h、48 h后，吸取上清液，每孔加入100 μl MTT工作液，于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4 h后，加入100 μl MTT終止液，待完全溶解后，在酶聯(lián)免疫檢測儀上于550 nm處測量各孔的吸光值，計(jì)算細(xì)胞生長率。

2結(jié)果與分析

2.1　蓮蓬殼提取物不同極性部位總黃酮和多酚含量

蓮蓬殼不同極性部位多酚和總黃酮結(jié)果(表1)顯示，不同極性部位中總黃酮含量為 54.03～351.58 mg/g，含量差異較大。其含量從高到低依次為乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水提部位，而正己烷部位和二氯甲烷部位則未檢測到含有黃酮物質(zhì)。多酚含量為 13.69～564.21 mg/g，按照含量從高到低依次為乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水提部位>二氯甲烷部位>正己烷部位。值得注意的是二氯甲烷部分和正己烷部分可檢測出含有少量活性物質(zhì)多酚，可能是少量的多酚物質(zhì)溶于弱極性溶劑中。

表1蓮蓬殼提取物不同極性部位總黃酮和多酚含量

Table 1Total flavonoids and phenolics contents of different fractions extracted from lotus receptacle

樣 品總黃酮含量(mg/g)多酚含量(mg/g)正己烷部位ND13.69±0.52二氯甲烷部位ND53.36±2.97乙酸乙酯部位351.58±18.87564.21±8.80正丁醇部位137.53±4.47484.88±3.42水提部位54.03±5.17156.25±7.70

ND:未檢測到。

2.2　蓮蓬殼不同極性部位提取物抗氧化作用

2.2.1對DPPH自由基清除能力DPPH是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，當(dāng)體系中存在抗氧化劑時(shí)，DPPH自由基由紫色還原為黃色的非自由基DPPH-H形式，在517 nm處的吸光度發(fā)生變化，一定范圍內(nèi)，其變化程度與自由基清除程度呈線性關(guān)系。為了便于比較不同抗氧化劑能力的強(qiáng)弱，常用IC50值表示，即對自由基清除率為50%時(shí)所對應(yīng)抗氧化劑的質(zhì)量濃度。IC50值越小，表明該物質(zhì)清除自由基的能力越強(qiáng)。此方法已普遍被運(yùn)用于中藥材抗氧化能力的測定中[21]。由表2可知，蓮蓬殼不同極性部位提取物對DPPH均具有較強(qiáng)的清除能力，且清除DPPH能力大小依次為乙酸乙酯部位提取物>正丁醇部位提取物>水提部位提取物>正己烷部位提取物>二氯甲烷部位提取物。其中乙酸乙酯部位提取物和正丁醇部位提取物對DPPH清除的能力均高于叔丁基對苯二酚和維生素C，具有很強(qiáng)清除DPPH自由基的能力，IC50分別為 (3.79±0.40) μg/ml和 (4.22±1.50)μg/ml?？赡艿脑蚴乔宄鼶PPH自由基活性成分主要富集在乙酸乙酯部位和正丁醇部位。

表2蓮蓬殼不同極性部位提取物對DPPH自由基清除能力

Table 2DPPH free radical scavenging activities of different fractions extracted from lotus receptacle

樣 品對DPPH清除率,IC50(μg/ml)正己烷部位提取物87.25±1.89二氯甲烷部位提取物94.51±9.47乙酸乙酯部位提取物3.79±0.40正丁醇部位提取物4.22±1.50水提部位提取物36.34±4.88叔丁基對苯二酚提取物8.57±0.29維生素C7.89±0.15

2.2.2還原能力采用鐵離子還原能力(FRAP)法測定抗氧化物質(zhì)氧化還原的潛力，其作用機(jī)理是在較低pH值環(huán)境下，抗氧化物質(zhì)能將三吡啶三嗪三價(jià)鐵的物質(zhì)還原為藍(lán)色的三吡啶三嗪二價(jià)鐵。還原能力大小通過在700 nm處的吸光值來檢測，吸光度越大還原能力越強(qiáng)即抗氧化能力越強(qiáng)[22]。如圖1所示，蓮蓬殼不同極性部位提取物均表現(xiàn)出不同程度的還原能力，且具有明顯的量效關(guān)系?？梢钥闯錾徟顨げ煌瑯O性部位提取物的還原能力最強(qiáng)的是乙酸乙酯部位提取物，正丁醇部位提取物和水提部位提取物次之，二氯甲烷部位和正己烷部位還原能力最弱，均弱于陽性對照。

圖1　蓮蓬殼不同極性部位提取物Fe 3+還原能力 Fig.1　Reducing power abilities of different fractions extracted from lotus receptacle

2.2.3對過氧化氫清除能力過氧化氫(H2O2)在有氧和堿性的條件下，能夠氧化體系中的魯米諾，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。由表3可知，在測定濃度范圍內(nèi)，蓮蓬殼不同極性部位提取物對H2O2均有一定的清除能力，且對H2O2的清除率隨著蓮蓬殼不同極性部位提取物濃度的增加而提高，具有一定劑量依賴關(guān)系。其中以乙酸乙酯部分提取物、正丁醇部分提取物對H2O2清除能力最強(qiáng)，100 μg/ml乙酸乙酯部分提取物和正丁醇部分提取物對過氧化氫清除率分別為99.88%和99.25%，接近于維生素C(陽性對照，99.58%)。說明在乙酸乙酯部位提取物和正丁醇部位提取物清除H2O2的活性可能較高。

2.2.4對超氧陰離子自由基清除能力采用鄰苯三酚-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系檢測樣品對超氧陰離子的清除作用。鄰苯三酚在堿性條件自動(dòng)氧化生成超氧陰離子(O2·-)，O2·-向化學(xué)發(fā)光劑魯米諾發(fā)起進(jìn)攻，魯米諾受到激發(fā)后處于激發(fā)態(tài)，繼而會(huì)從激發(fā)態(tài)返回到基態(tài)，同時(shí)伴隨著能量的釋放，產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)[23]。由表4可以看出，在測定范圍內(nèi)，蓮蓬殼不同極性部位提取物對O2·-均具有一定的清除作用，且隨著蓮蓬殼不同極性部位提取物濃度的升高，清除率也逐漸增強(qiáng)，呈一定的劑效關(guān)系。清除O2·-能力依次為乙酸乙酯部位提取物>水提部位提取物>正丁醇部位提取物>正己烷部位提取物>二氯甲烷部位提取物。其中400 μg/ml維生素C具有很強(qiáng)清除O2·-的能力，清除率達(dá)到96.78%，而乙酸乙酯部位提取物略低于維生素C，清除率為85.39%。

表3蓮蓬殼不同極性部位提取物對過氧化氫的清除作用

Table 3The scavenging abilities of different fractions from lotus receptacle on H2O2

樣 品 過氧化氫清除率(%)0.1μg/ml0.5μg/ml1.0μg/ml10.0μg/ml100.0μg/ml正己烷部位提取物26.97±2.5941.99±1.5145.52±1.0748.54±3.2184.73±1.26二氯甲烷部位提取物27.05±1.6831.56±1.2139.25±2.9177.99±1.5489.21±3.32乙酸乙酯部位提取物75.02±5.6091.98±2.4795.16±1.1697.84±1.0799.88±0.06正丁醇部位提取物27.81±2.5266.13±2.8074.61±2.8693.75±0.8299.25±0.06水提部位提取物34.27±3.3639.18±5.9046.34±3.9783.02±0.4492.94±0.72維生素C78.61±2.7792.79±0.3494.96±0.5498.47±0.2699.58±0.33

表4蓮蓬殼不同極性部位提取物對超氧陰離子自由基的清除作用

Table 4The scavenging abilities of different fractions from lotus receptacle on O2·-

樣 品 超氧陰離子自由基清除率(%)0.1μg/ml0.5μg/ml1.0μg/ml10.0μg/ml100.0μg/ml正己烷部位提取物3.47±1.794.97±2.2912.33±2.5922.65±1.7225.18±1.69二氯甲烷部位提取物6.08±2.7618.04±2.7119.47±3.7920.58±3.8723.97±1.25乙酸乙酯部位提取物19.93±1.0538.19±3.5856.97±0.6674.36±0.9685.39±1.01正丁醇部位提取物16.54±1.0027.88±5.5434.66±0.7453.14±2.0072.20±1.91水提部位提取物6.37±2.6025.18±3.7944.11±2.5261.33±1.3679.50±1.00維生素C14.74±1.1044.08±1.0267.36±0.0788.89±0.3996.78±0.59

2.3　MTT法檢測細(xì)胞增殖率

以未加藥物的細(xì)胞為對照，加入抗癌藥物5-氟尿嘧啶作為陽性對照。由圖2所示，當(dāng)細(xì)胞與藥物共同孵育24 h時(shí)，蓮蓬殼不同極性部位提取物與對照相比，乙酸乙酯部位提取物、正丁醇部位提取物和水提部位提取物均有促進(jìn)細(xì)胞生長的趨勢，而正己烷部位提取物和二氯甲烷部位提取物對MCF-7細(xì)胞增殖有一定的抑制作用，且正己烷部位提取物抑制作用高于二氯甲烷部位提取物，兩者細(xì)胞存活率分別為34.00%和73.00%。當(dāng)細(xì)胞與藥物共同孵育48 h時(shí)，與對照相比，蓮蓬殼不同極性部位提取物均對MCF-7細(xì)胞生長有不同程度的抑制作用，且正己烷部位提取物和二氯甲烷部位提取物抑制作用最強(qiáng)，其細(xì)胞存活率分別為3.57%和7.80%。

a:對照;b:正己烷部位提取物;c:二氯甲烷部位提取物;d:乙酸乙酯部位提取物;e:正丁醇部位提取物;f:水提部位提取物;g:5-氟尿嘧啶。 圖2　蓮蓬殼不同極性部位提取物處理下MCF-7細(xì)胞存活率 Fig.2　Cell survival rate of MCF-7 treated by different fractions extracted from lotus receptacle

3討論

由于不同抗氧化檢測方法的反應(yīng)機(jī)理不同，為獲得可靠的試驗(yàn)結(jié)果，本試驗(yàn)采用DPPH自由基清除法、還原能力測定法、清除H2O2和O2·-的方法對蓮蓬殼不同極性溶劑提取物的抗氧化能力進(jìn)行評價(jià)。研究發(fā)現(xiàn)蓮蓬殼不同極性部位提取物對DPPH、Fe3+、H2O2和O2·-均具有良好的抗氧化活性。在對DPPH自由基、H2O2清除和還原Fe3+試驗(yàn)中，以中等極性乙酸乙酯部位提取物和正丁醇部位提取物的活性最強(qiáng)，強(qiáng)極性水提物的抗氧化活性中等，而弱極性二氯甲烷部位提取物和正己烷部位提取物抗氧化作用最弱。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蓮蓬殼不同極性部位提取物中的總黃酮和多酚含量與抗氧化活性間呈正相關(guān)性，即總黃酮、多酚含量越高，提取物的抗氧化活性越強(qiáng)。細(xì)胞試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)正己烷部位提取物和二氯甲烷部位提取物對MCF-7細(xì)胞具有很強(qiáng)的抑制作用。研究結(jié)果表明乙酸乙酯部位提取物和正丁醇部位提取物為蓮蓬殼提取物中主要抗氧化活性物質(zhì)，可通過進(jìn)一步分離提取其有效活性成分，確定蓮蓬殼抗氧化作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，為蓮蓬殼的開發(fā)利用提供依據(jù)。

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(責(zé)任編輯：袁偉)

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