• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    北五味子果實有效部位的連續(xù)制備技術(shù)研究

    2016-01-13 03:24:52王安華,韓志福,胡高升
    藥學(xué)研究 2015年3期
    關(guān)鍵詞:木脂素多酚五味子

    ·實驗研究·

    北五味子果實有效部位的連續(xù)制備技術(shù)研究

    王安華1,韓志福2,胡高升1

    (1.沈陽藥科大學(xué)中藥資源教研室,遼寧 沈陽 110016;2.哈藥集團技術(shù)中心,黑龍江 哈爾濱 150020)

    摘要:目的建立北五味子中不同組分的制備方法。方法通過CO2超臨界流體萃取(SFE)技術(shù)得到北五味子油;油中的3種主要木脂素含量及亞油酸含量的檢測方法為高效液相色譜法和氣相色譜法;SFE提取后的殘渣用來提取多酚類成分,提取工藝用響應(yīng)曲面法優(yōu)化,提取物中的多酚含量用Folin-cicalteu′s試劑進行測定;多酚提取殘渣再進行水提醇沉,得到北五味子粗多糖,用苯酚硫酸法進行多糖含量測定。結(jié)果北五味子油的出油率為14.1%,油中亞油酸含量為58.4%,3種主要木脂素(五味子醇甲、五味子乙素、五味子甲素)總含量為9.44%;北五味子多酚最佳提取條件為60%乙醇,溶液倍量25,提取時間31 min,在此提取條件下,出膏率為41.2%,其中多酚含量為2.56%;北五味子粗多糖提取率為3.88%。結(jié)論本制備工藝提高了北五味子的利用率,同時也為開發(fā)北五味子中不同藥品及保健功能產(chǎn)品提供了原材料。

    關(guān)鍵詞:五味子;木脂素;多酚;多糖

    基金項目:國家科技支撐計劃(No.2011BAI03B04)

    作者簡介:王安華,男,研究方向:中藥資源學(xué),E-mail:sywanganhua@163.com

    通訊作者:胡高升,男,博士研究生,研究方向:中藥生物技術(shù),Tel:024-23986501,E-mail:115644862@qq.com

    中圖分類號:R284.2文獻標(biāo)識碼:A

    Studies on continuous preparation of effective fractions from FructusSchisandraeChinensis

    WANGAn-hua1,HANZhi-fu2,HUGao-sheng1

    (1.SchoolofTraditionalChineseMaterialMedica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang

    110016,China;2.HarbinPharmaceuticalGroupTechnologyCenter,Harbin150020,China)

    Abstract:ObjectiveTo establish preparative method of the different fractions from Fructus Schisandrae chinensis(FSC).MethodsThe FSC oil was obtained by CO2 supercritical fluid extraction (SFE).The contents of three main lignans and linoleic acid in oil were determined using HPLC and GC,respectively.The debris was subsequently used to extract phenolic compounds,in which,the condition was optimized using response-surface method.The content of phenolic compound was determined using Folin-cicalteu′s reagent.Finally,debris after phenolic compounds extraction was used to extract polysacharrides by water extraction and ethanol precipitation and the content of polysaccharides was determined by phenol-sulfate method.ResultsThe oil yield rate was 14.1%,in which,the sum content of three main lignans reached 9.44% and the content of linoleic acid content in oil was 58.4%.The optimized condition for phenolic compounds extraction was 60% ethanol,solvent/material ratio as 25,sonication time as 31 min.The yield rate was 41.2% and the content of phenolic compounds was 2.56%.The yield of polysaccharide reached 3.88%.ConclusionOur continuous extract method improved the exploration rate of FSC and facilitated the preparation of different extract meeting the different need of medicine and health foods development.

    Key words:FructusSchisandraechinensis;Lignan;Polyphenols;Polysaccharides

    北五味子[Schisandrachinensis(Turcz.) Baill]為木蘭科(Magnoliaceae)五味子屬(SchisandraMichx.)藥用植物,藥用部位為干燥成熟果實。北五味子主產(chǎn)于亞洲東部和歐洲北部,秋季采摘后,烘干或曬干,除去果梗和雜質(zhì),即為北五味子藥材。主要功效為收斂固澀,益氣生津,補腎寧心。主要用于久嗽虛喘、久瀉不止、心悸失眠等[1]。

    在《中國藥典》2010年版[1]中收載的制劑中有60個處方制劑含有北五味子藥材,經(jīng)過調(diào)查發(fā)現(xiàn)北五味子的國內(nèi)產(chǎn)量超過90%應(yīng)用在醫(yī)藥領(lǐng)域(包括中成藥,飲片和提取物),在藥品行業(yè)中的需求量屬于穩(wěn)步提高狀態(tài)。在保健品開發(fā)方面,國內(nèi)在北五味子保健品和食品領(lǐng)域的研究和產(chǎn)品較少,目前主要是五味子果酒、猴頭菇羊肚菌五味子膠囊和靈芝五味子膠囊等幾種較小規(guī)模的產(chǎn)品。國外對北五味子的保健品開發(fā)較成熟,僅韓國北五味子產(chǎn)品每年在國內(nèi)的銷售額超過1千萬元,其北五味子原材料及提取物主要來自中國,產(chǎn)品形態(tài)以化妝品,保健品和食品為主。北五味子果實傳統(tǒng)的提取方法主要的提取目標(biāo)是木脂素類成分,多用高濃度乙醇提取,提取后的殘渣往往被丟棄,造成了較大的原料浪費,本文對北五味子不同有效部位的提取工藝進行了摸索和優(yōu)化,旨在得到一種能夠綜合利用五味子資源的提取方法,為開發(fā)具有不同功能的保健品提供原料。

    1儀器與材料

    1.1主要儀器超臨界萃取設(shè)備(沈陽東宇藥物技術(shù)研究院超臨界制造分公司);日立高效液相色譜儀(UV-VIS Detector L-2420 Autosampler L-2200 Pump L-2130 Column Heater AT-330),D2000色譜工作站;Agilent 7890 A型氣相色譜儀(美國安捷倫公司);毛細管柱DB-WAX(30 m×0.25 mm,0.25 μm)。

    1.2主要材料北五味子果實采自遼寧省本溪市清源縣,經(jīng)過沈陽藥科大學(xué)賈景明教授鑒定為北五味子[Schisandrachinensis(Turcz.) Baill]果實。正己烷,乙醇(山東禹王試劑公司);三氟化硼-甲醇溶液(美國Sigma公司);氫氧化鉀(天津市大茂試劑廠)和亞油酸(美國Sigma公司);液相用乙腈,水均為色譜純;苯酚、碳酸鈉(山東禹王試劑公司),F(xiàn)olin-cicalteu′s試劑(上海生物生工有限公司);五味子醇甲對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110857-200709);五味子乙素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110765-200710);五味子甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110764-200609);綠原酸(Sigma-Aldrich 公司)。

    2實驗方法

    2.1超臨界萃取法提取五味子果實油脂北五味子果實經(jīng)干燥粉碎后,過20目篩,精密稱定,均勻填裝進萃取釜,超臨界萃取設(shè)備型號(CLJ-B-120-35-1)。萃取條件(萃取釜溫度40 ℃,速率7.5 ℃·min-1,壓力30 MPa;分離釜溫度30 ℃,壓力4.5 MPa;萃取時間3 h)。每隔30 min,收集五味子油脂類成分。

    2.2運用響應(yīng)曲面法優(yōu)化五味子多酚提取工藝以經(jīng)過超臨界提取后的北五味子果實粉末為原材料,再根據(jù)響應(yīng)曲面法[2],提取液為不同濃度的乙醇,各組取0.3 g粉末,精密稱定,置具塞錐形瓶中,超聲振蕩提取1次,混勻后離心10 min,轉(zhuǎn)速4 000 rpm,吸取上清液,測定多酚含量。

    2.3五味子果實中多糖的提取精密稱取北五味子粉末5 g(提取完油脂及多酚的五味子果實粉末),置于150 mL錐形瓶中,加入100 mL蒸餾水,充分混懸,超聲處理20 min,吸取上清液,沉淀再加入100 mL蒸餾水,再充分混懸,超聲處理20 min,合并上清液。在溶液中加入適量 95%乙醇,使溶液中的乙醇濃度為80%,混勻,置于4 ℃下沉淀12 h后,在3 000 rpm,室溫下離心5 min,棄去上清液,加入10 mL丙酮重新混懸沉淀,離心,棄上清液,加入10 mL乙醚重新混懸沉淀,離心,棄上清液,反復(fù)多次,然后在室溫下?lián)]干沉淀中的有機溶劑,得到北五味子果實粗多糖干燥粉末。

    2.4五味子醇甲、甲素、乙素的含量測定方法

    2.4.1色譜條件梯度洗脫條件見表1,Platisil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相:乙腈-水溶液,流速:1.0 mL·min-1,檢測波長:250 nm,進樣量:10 μL,柱溫:30 ℃。

    表1 高效液相梯度洗脫條件

    2.4.2對照品溶液的制備分別精密稱取五味子醇甲、五味子甲素及五味子乙素對照品適量,置于10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成含0.37 mg·mL-1五味子醇甲,0.34 mg·mL-1五味子甲素及0.54 mg·mL-1五味子乙素的標(biāo)準品溶液。

    2.4.3供試品制備精密稱定北五味子果實油脂0.2 g,精密加入乙腈(正己烷飽和)20 mL,混勻,超聲提取20 min,補足失重,室溫離心5 min,轉(zhuǎn)速4 000 rpm,取上清液過0.45 μm濾膜,得樣品溶液。

    2.4.4線性關(guān)系考察取對照品,加甲醇制成含60、120、180、240和300 μg·mL-1五味子醇甲;34、68、102、136和170 μg·mL-1五味子甲素及36、72、108、144和180 μg·mL-1五味子乙素的5種不同濃度對照品溶液,進樣體積為10 μL,以峰面積(X)對濃度(Y)進行線性回歸,五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的回歸方程分別為:Y=6.3×10-5X+8.413 5,r=0.999 9;Y=9.8×10-5X+8.366 4,r=0.999 6;Y=1.0×10-4X+11.285,r=0.999 5。實驗結(jié)果表明,五味子醇甲在60~300 μg·mL-1,五味子甲素在34~170 μg·mL-1和五味子乙素在36~180 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,3種木脂素對照品與五味子樣品HPLC液相色譜圖見圖1。

    圖1 北五味子油脂類成分液相色譜圖 A.木脂素標(biāo)準品; B.超臨界提取的五味子種子油脂 1.五味子醇甲;2.五味子甲素;3.五味子乙素

    2.4.5方法學(xué)考察精密度試驗:取同一對照品溶液,連續(xù)注入高效液相色譜儀6次,進行分析。五味子醇甲的平均峰面積為2 755 906.56,RSD為1.78%,五味子乙素的平均峰面積為963 119.20,RSD為1.84%,五味子甲素的平均峰面積為715 207.50,RSD為1.65%。結(jié)果表明,測定方法精密度良好。

    穩(wěn)定性試驗:取同一北五味子油脂供試品溶液,分別在0、3、6、9、12、24 h進樣,五味子醇甲的平均峰面積為1 775 850.23,RSD為1.00%,五味子乙素的平均峰面積為769 914.50,RSD為1.42%,五味子甲素平均峰面積為733 284.32,RSD為1.71%。結(jié)果表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    重現(xiàn)性試驗:精密稱取同一北五味子種子油脂0.2 g,平行6份,按 “2.4.3” 項下操作,制得供試品溶液,各10 μL 分別注入高效液相色譜儀。計算求得五味子醇甲的平均含量為6.19 mg·g-1,RSD為1.61%;五味子乙素的平均含量為2.57 mg·g-1,RSD為1.58%;五味子甲素的平均含量為3.80 mg·g-1,RSD為1.21%。結(jié)果表明,測定方法重現(xiàn)性良好。

    加樣回收率試驗:精密稱取已知含量的北五味子種子油脂樣品0.1 g,共6份,分別加入等同于樣品中五味子醇甲,五味子甲素及五味子乙素含量50%的混合對照品溶液,按供試品項下操作并按含量測定方法進行測定,計算求得五味子醇甲平均加樣回收率為101.08% ,RSD為1.88%;五味子乙素平均加樣回收率為99.45%,RSD為1.12%;五味子甲素平均加樣回收率為99.85%,RSD為0.98%。

    樣品測定:按上述色譜條件進行分析,以外標(biāo)一點法分別計算測定五味子醇甲,五味子甲素和五味子乙素含量。

    2.5五味子油脂類成分亞油酸測定方法

    2.5.1氣相色譜條件色譜柱:DB-WAX 毛細管柱(30 m×0.25 mm,0.25 μm);升溫程序:100 ℃,維持3 min,以60 ℃·min-1升至180 ℃·min-1,維持4 min,再以20 ℃·min-1升至250 ℃,維持8 min;加熱器溫度:250 ℃;載氣(N2)壓力:8.586 8 Psi;進樣量:1 μL;分流比:5∶1。

    2.5.2樣品處理根據(jù)“2.1”項下制備方法得到北五味子果實油脂。精密稱定北五味子果實油脂9 mg,置于2 mL離心管中,加入300 μL 0.5 mol·L-1氫氧化鉀-甲醇溶液,搖勻,置于60 ℃恒溫水浴中皂化反應(yīng)30 min。將皂化反應(yīng)物冷卻至室溫,加入600 μL 14%三氟化硼-甲醇溶液,在60 ℃恒溫水浴中加熱3 min,冷卻至室溫后,加入600 μL正己烷萃取,上層溶液供氣相色譜分析用,樣品溶液進樣前稀釋20倍。

    2.5.3標(biāo)準品溶液配制精密吸取亞油酸對照品8.3 mg,按“2.4.2”項下方法配制20.75 mg·mL-1標(biāo)準品溶液。

    2.5.4線性范圍考察精密吸取亞油酸標(biāo)準品溶液10、20、30、40和50 μL,加正己烷定容至1 mL,配制成亞油酸含量為0.207 5、0.415 0、0.622 5、0.830 0和1.037 5 mg·mL-1的4種溶液,分別精密吸取1 μL進樣,以峰面積(A)對濃度(C)進行線性回歸,得回歸方程:C= 0.000 8A+0.016 9,r=0.998 9。結(jié)果表明:在濃度為0.207 5~1.037 5 mg·mL-1范圍內(nèi),線性范圍良好。

    2.5.5樣品含量測定取亞油酸標(biāo)準品,北五味子油脂各1 μL進樣,檢測結(jié)果圖2。

    圖2 北五味子油脂樣品氣相色譜圖 A.油酸標(biāo)準品;B.北五味子油脂 a.亞油酸

    2.6五味子多酚測定方法

    2.6.1Folin-cicalteu′s試劑配制及碳酸鈉溶液配制取Folin-cicalteu′s試劑500 μL置于1.5 mL離心管中,精密加入500 μL重蒸水,配制成50%的Folin-cicalteu′s試劑。再取無水碳酸鈉粉末適量,加重蒸水配制成質(zhì)量分數(shù)為2%的碳酸鈉溶液[3]。

    2.6.2對照品溶液的制備精密稱取綠原酸適量,置于1 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成含5.0 mg·mL-1綠原酸的標(biāo)準品溶液。

    2.6.3線性關(guān)系考察取對照品,加甲醇制成含0、75、100、150、200和500 μg·mL-1綠原酸的6種不同濃度對照品,取上述溶液各30 μL,加入碳酸鈉溶液600 μL后,搖勻,靜置5 min,再加入30 μL Folin-cicalteu′s試劑,搖勻,靜置30 min,750 nm處測吸光度,對吸光度(A)與綠原酸濃度(C)進行線性回歸,回歸方程分別為:C=9.0×10-4A+0.108 6,r=0.999 5。實驗結(jié)果表明綠原酸在75~500 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

    2.6.4供試品溶液的制備精密稱取北五味子果實粉末0.8 g,置于50 mL具塞錐形瓶,加甲醇20 mL,超聲提取40 min(功率250 W,頻率40 kHz),補足失重,轉(zhuǎn)速4 000 rpm,離心10 min后吸取上清液,過孔徑0.45 μm微孔濾膜,續(xù)濾液為供試品溶液[4]。

    2.6.5方法學(xué)考察精密度試驗:取同一對照品溶液連續(xù)測定6次,平均吸光度為0.43,RSD為1.24%。結(jié)果表明,測定方法精密度良好。

    穩(wěn)定性試驗:取同一樣品溶液再0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h進行測定,平均吸光度為0.53,RSD為1.85%,結(jié)果表明樣品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

    重現(xiàn)性試驗:精密稱取同一產(chǎn)地北五味子粉末0.80 g,平行6份,按供試品項下操作,制得供試品溶液,進行測定,平均含量為70.49 mg·g-1,RSD為1.30%。結(jié)果表明,測定方法重現(xiàn)性良好。

    加樣回收率試驗:精密稱取已知含量的北五味子樣品0.40 g,共6份,分別加入等同于樣品中50%總酚含量的綠原酸標(biāo)準品,按供試品項下操作,制得供試品溶液,進行測定,平均含量為70.98 mg·g-1,RSD為0.97%。

    2.7五味子多糖測定方法

    2.7.1五味子粗多糖制備[5]見“2.3”項下操作。

    2.7.2苯酚溶液的制備取苯酚100 g,加鋁片0.1 g和碳酸鈉蒸餾,收集180 ℃餾分,吸取此餾分16 mL加蒸餾水200 mL,置于棕色瓶中放冰箱備用。

    2.7.3葡萄糖標(biāo)準溶液制備精密稱取無水D-葡萄糖10 mg,定容于1 mL容量瓶中,制成濃度為10 mg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準溶液,分別精密吸取該濃度標(biāo)準品溶液,配制成濃度為20、40、80、100、120和150 μg·mL-1的標(biāo)準品溶液。

    2.7.4標(biāo)準曲線的制備精密量取20 μL葡萄糖各標(biāo)準品溶液,用蒸餾水補足至200 μL,加入100 μL 5%苯酚溶液,混勻后,再加入98%濃硫酸500 μL,混勻后置于40 ℃水浴反應(yīng)15 min,流水冷卻至室溫,在紫外可見分光光度計中測定490 nm處的吸光度,以蒸餾水為空白對照,測定3次,取平均值,對吸光度(A)與葡萄糖濃度(C)進行線性回歸,回歸方程為C=3.9×10-3A+0.033 3,r=0.997 1。

    2.7.5方法學(xué)考察精密度試驗:取同一對照品溶液連續(xù)測定6次,平均吸光度為0.49,RSD為1.74%。結(jié)果表明,測定方法精密度良好。

    穩(wěn)定性試驗:取同一樣品溶液再0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0 h進行測定,平均吸光度為0.46,RSD為1.12%,結(jié)果表明樣品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

    重現(xiàn)性試驗:精密稱取北五味子粉末0.8 g,平行6份,按“2.7.1”項下操作,制得供試品溶液,進行測定,平均含量為14.20 mg·g-1,RSD為1.23%。結(jié)果表明,測定方法重現(xiàn)性良好。

    加樣回收率試驗:精密稱取已知含量的北五味子樣品0.4 g,共6份,分別加入等同于樣品中50%粗多糖含量的葡萄糖標(biāo)準品,按供試品項下操作,制得供試品溶液,進行測定,平均回收率為99.21%,RSD為0.89%。

    3結(jié)果

    3.1超臨界提取物中木脂素、亞油酸含量及油脂收率北五味子干燥成熟果實粉末中油脂和木脂素提取效率結(jié)果如表2所示,超臨界提取北五味子果實后,所得到的油脂成分中亞油酸含量約占51.84%,木脂素類成分的含量分別為五味子醇甲58.37 mg·g-1、五味子甲素12.49 mg·g-1和五味子乙素23.55 mg·g-1,3種木脂素含量之和為94.41 mg·g-1。說明通過超臨界提取法可以得到以亞油酸為主要成分,同時富含木脂素的油脂類成分。

    表2 北五味子果實中亞油酸和木脂素提取效率表

    3.2北五味子粗多糖提取率經(jīng)過提取油脂及多酚成分后的北五味子果實粉末,再運用水提醇沉的方法得到北五味子粗多糖,運用苯酚硫酸法,測定粗多糖得率為3.88%。

    3.3響應(yīng)曲面法優(yōu)化五味子多酚提取工藝本試驗采用Design 8.0.6設(shè)計,采用Central Composite設(shè)計試驗優(yōu)化最佳提取方法,選取3個主要因素:乙醇濃度、提取時間和溶液倍量作為自變量,以多酚提取率作為響應(yīng)函數(shù),采用響應(yīng)曲面法[2],通過回歸得出自變量與響應(yīng)函數(shù)之間的統(tǒng)計模型,確定提取北五味子多酚的最佳工藝參數(shù)。其中,乙醇濃度、提取時間和溶液倍量分別以A,B,C表示,并以+1.682、+1、0、-1、-1.682分別表示自變量的高、較高、中、較低和低水平,水平及因素編碼見表3。

    表3 試驗因素水平及編碼表

    表4 得率試驗值與模型預(yù)測值

    續(xù)表4:

    序號乙醇濃度(%)提取時間(min)倍量(倍)實測值(%)預(yù)測值(%)195020350.670.71205020150.740.87

    表5 回歸模型方差分析

    表6 回歸方程系數(shù)顯著性檢驗

    通過對乙醇濃度,提取時間和倍量進行試驗優(yōu)化設(shè)計,由表4可知,得到相應(yīng)的二次方程模型:Y=1.28+0.019A+0.049B-0.026C-0.067AB+0.038AC+0.030BC-0.38A2-0.079B2-0.17C2。

    A/B/A2/B2/BC對提取率的影響極顯著,由表6可知,C/C2對提取率顯著,表明試驗因子對響應(yīng)值不是簡單的線性關(guān)系,因子間一次項的影響相對較小,而二次項影響較顯著。這和回歸方程中的二次項影響較為顯著一致。因素A、B、C都對提取效率的線性效應(yīng)顯著,因素A2、B2、C2對提取效率的曲面效應(yīng)顯著,AB、AC、BC對提取效率的交互影響顯著。

    在溶液倍量是25倍時,如圖3所示,乙醇濃度和提取時間的交互作用顯著,當(dāng)乙醇濃度不變時,多酚提取率隨著提取時間的增加,呈現(xiàn)先增加而后遞減的趨勢,當(dāng)提取時間固定時,多酚提取率隨乙醇濃度的增加也是先增加而后減小,說明當(dāng)乙醇濃度和提取時間都處于中間水平時,多酚提取率最高。

    在提取時間是30 min時,如圖4所示,乙醇濃度和溶液倍量的交互作用顯著,當(dāng)乙醇濃度不變時,多酚提取率隨著提取時間的增加,呈現(xiàn)先增加而后減少的趨勢,只是變化范圍較小,當(dāng)倍量固定時,多酚提取率隨著乙醇濃度的變化,先增加后下降,變化范圍遠大于倍量,說明,在一定倍量以后,對多酚提取率的影響不大。在兩者同時處于中間水平時,多酚的提取效率達到最大。

    在乙醇濃度為60%時,如圖5所示,提取時間和溶液倍量的交互作用顯著,當(dāng)提取時間不變時,多酚提取率隨著溶液倍量的增加,也呈現(xiàn)先增加后下降的趨勢,當(dāng)溶液倍量不變時,多酚提取率隨提取時間的變化,先增加而后下降。結(jié)果與上文乙醇濃度和溶液倍量的交互作用類似,充分說明溶液倍量是這3個因素中,對多酚提取率影響最小的。

    圖3 乙醇濃度和提取時間交互影響多酚得率的響應(yīng)曲面圖及等高線圖

    圖4 乙醇濃度和倍量交互影響多酚得率的響應(yīng)曲面圖及等高線圖

    圖5 倍量和提取時間交互影響多酚得率的響應(yīng)曲面圖及等高線圖

    通過對二次多項式數(shù)學(xué)模型的解逆矩陣,求出最大多酚提取率的工藝條件是乙醇濃度59%、提出時間31 min和溶液倍量25倍,預(yù)測北五味子多酚提取率達到1.28%。為了進一步驗證回歸模型的有效性,根據(jù)得出的最佳工藝參數(shù)以及實際操作過程中的可行性進行驗證試驗,在乙醇濃度59%、提出時間31 min、溶液倍量25倍的條件下,實測得率1.25%±0.03%,與預(yù)測值相接近,結(jié)果表明該模型具有合理性。

    4討論

    研究證明五味子小極性成分具有一定的毒副作用[6,7],這是五味子保健品開發(fā)過程中的巨大障礙。對韓國的部分五味子產(chǎn)品進行了檢測,結(jié)果表明,這些產(chǎn)品中僅含有微量的醇甲,其他的小極性木脂素更是微乎其微。另外,在這些產(chǎn)品中均發(fā)現(xiàn)了520 nm下的吸收峰,以及明顯的五味子辛香氣和酸澀口感,這些現(xiàn)象表明,國外五味子開發(fā)過程中所應(yīng)用的提取部位不含或含有很少的木脂素類成分,借鑒這一特點,對五味子的提取工藝進行了以上優(yōu)化,將五味子提取物多樣化,藥品生產(chǎn)可用油脂和木脂素提取部位,保健品生產(chǎn)可用多酚與有機酸部位以及多糖部位,當(dāng)然,之前必須要有相應(yīng)的毒理與藥效學(xué)評價。這一提取工藝在國內(nèi)外尚未系統(tǒng)見報道,我們對其進行了專利申請保護(專利號:ZL201210456113.3)。

    通過超臨界提取法得到的北五味子油脂類成分具有環(huán)保,提取率高,無有機溶劑殘留等優(yōu)點,而且其中亞油酸含量為58%,三種主要木脂素類成分含量高達9.4%以上,該油狀提取物中還有其他木脂素,因為對照品缺乏,未對其進行定量,因為都為同類型木脂素,我們對其進行了粗略估計,以醇甲計,油狀物中總木脂素含量約為20%,遠高于目前市面上的五味子提取物中木脂素含量(總木脂素含量為2%~9%),且雜質(zhì)類成分干擾少,可開發(fā)為多種劑型。

    采用響應(yīng)曲面法優(yōu)化北五味子多酚提取工藝,是為了確定最佳提取工藝,并且與正交試驗相比,響應(yīng)曲面法可以給出全面的數(shù)據(jù)以供評價研究。通過分析發(fā)現(xiàn),影響北五味子多酚提取效率的主要因素是乙醇濃度和提取時間,而倍量影響相對較小,說明在中試生產(chǎn)中,可以重點優(yōu)化前兩者的條件,而倍量只要在適量的范圍內(nèi)即可。

    已經(jīng)提取過油脂和多酚的北五味子粉末,然后再提取得到粗多糖的得率為3.88%。與之前果實直接提取的粗多糖得率相比有所減少,分析原因可能與提取多酚的溶劑、溶劑轉(zhuǎn)移和容器殘留等方面有關(guān)系,但是考慮到北五味子果實已經(jīng)提取過油脂和多酚,因此粗多糖得率是在合理范圍內(nèi)。

    由于人們對北五味子中藥材資源的不重視,導(dǎo)致北五味子野生資源的不斷減少,如何有效地利用現(xiàn)有資源是目前發(fā)展中藥產(chǎn)業(yè)的一大問題[8]。同時,也有很多關(guān)于五味子在抗HIV和抗腫瘤[9]、抗老年癡呆[10]的研究,其應(yīng)用前景非常樂觀。與以前單一考察某一類成分的提取效率相比,綜合地把北五味子果實中每一步提取之后的殘渣再提取一次,得到其中的主要成分,這樣既可以節(jié)約成本,又有利于二次開發(fā)北五味子資源。

    參考文獻:

    [1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:61-62.

    [2] 徐衛(wèi)東,王佩香,歐陽臻,等.響應(yīng)曲面法優(yōu)化桑枝多糖提取工藝[J].中國藥房,2011,22(43):4064-4067.

    [3] 郭志欣,顧地周,宋宇輝,等.五味子藥渣中多糖提取工藝研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(5):254-255.

    [4] 趙豐麗,張云鴿,龐冠蘭.柿葉多酚測定條件及其抗氧化活性的研究[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2012,18(11):173-176.

    [5] 陶移文,田庚文,張文峰.比較兩種提取方法對元胡粗多糖制備及理化性質(zhì)的影響[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2011,17(1):17-20.

    [6] 何來英,馮曉蓮,孫明,等.五味子的急性毒性和遺傳毒性研究[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué),2004,11(4):645-648.

    [7] 陳曉銘,謝珣,孫晶晶,等.五味子與遠志醇提物的急性毒性和益智藥效研究[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,13(4):807-809.

    [8] 高劍鋒,劉春山.五味子藥材資源的研究概況[J].中國醫(yī)藥指南,2010,8(18):66-69.

    [9] Hwanga DS,Shin SY,Lee YN,et al.A compound isolated fromSchisandrachiensisinduces apoptosis[J].Bioorg Med Chem Lett,2011,21(20):6054-6057.

    [10] Hu D,Li C,Han N,et al,Deoxyschizandrin isolated from the fruits ofSchisandrachinensisameliorates Aβ1-42-induced memory impairment in mice[J].Planta Med,2012,78:1332-1336.

    猜你喜歡
    木脂素多酚五味子
    木莢紅豆葉中1個新的木脂素
    中草藥(2022年3期)2022-02-14 03:16:50
    HPLC-DAD法快速篩查五味子顆粒(糖漿)中南五味子代替五味子
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:02
    五味子醇甲提取純化方法的研究進展
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:06
    北五味子化學(xué)成分的研究
    中成藥(2017年3期)2017-05-17 06:09:01
    澳洲堅果果皮不同溶劑提取物的含量和抗氧化活性
    香蕉果實發(fā)育成熟過程中多酚物質(zhì)的變化規(guī)律
    木脂素生物學(xué)特性及分離提取研究進展
    HPLC法同時測定五酯膠囊中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素的含量
    大葉白麻總多酚提取工藝研究
    百蕊草根系總RNA提取方法比較及優(yōu)化
    亚洲欧美清纯卡通| 丝袜喷水一区| 欧美最新免费一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美一区二区精品小视频在线| av天堂中文字幕网| 内射极品少妇av片p| 校园春色视频在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 中出人妻视频一区二区| 欧美丝袜亚洲另类| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 午夜激情欧美在线| 男插女下体视频免费在线播放| a级毛色黄片| 性欧美人与动物交配| 校园春色视频在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 又爽又黄a免费视频| 欧美潮喷喷水| 婷婷色av中文字幕| 中文字幕免费在线视频6| 青春草国产在线视频 | 毛片一级片免费看久久久久| 1024手机看黄色片| 中文资源天堂在线| 看黄色毛片网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲在线自拍视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| av在线蜜桃| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜a级毛片| 欧美一区二区国产精品久久精品| 两个人视频免费观看高清| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 蜜臀久久99精品久久宅男| 3wmmmm亚洲av在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 精品一区二区免费观看| 麻豆国产97在线/欧美| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩欧美精品免费久久| 美女 人体艺术 gogo| 国产v大片淫在线免费观看| 老女人水多毛片| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲真实伦在线观看| 舔av片在线| 亚洲国产色片| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99九九线精品视频在线观看视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 看十八女毛片水多多多| www.色视频.com| 精品久久久久久久末码| 国产成人a区在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 成年女人永久免费观看视频| 成年免费大片在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| 五月伊人婷婷丁香| av在线观看视频网站免费| 国产伦精品一区二区三区视频9| 卡戴珊不雅视频在线播放| 极品教师在线视频| 波野结衣二区三区在线| 国产成年人精品一区二区| 亚洲欧美清纯卡通| 青春草视频在线免费观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲精品色激情综合| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美最黄视频在线播放免费| 蜜臀久久99精品久久宅男| 深爱激情五月婷婷| 欧美极品一区二区三区四区| 伦理电影大哥的女人| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久6这里有精品| 中文字幕制服av| 亚洲色图av天堂| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久综合国产亚洲精品| 午夜精品国产一区二区电影 | 床上黄色一级片| 国产精品一区www在线观看| 麻豆一二三区av精品| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲无线在线观看| 91精品国产九色| 亚洲欧美日韩东京热| eeuss影院久久| 日韩av在线大香蕉| 亚洲美女搞黄在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 一级av片app| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 精品一区二区三区人妻视频| 听说在线观看完整版免费高清| 久久人人爽人人片av| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 老师上课跳d突然被开到最大视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲av.av天堂| 给我免费播放毛片高清在线观看| kizo精华| 久久99热这里只有精品18| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲三级黄色毛片| 日韩av不卡免费在线播放| 一级二级三级毛片免费看| 午夜福利在线观看吧| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| .国产精品久久| 99久久中文字幕三级久久日本| 深爱激情五月婷婷| 国产日本99.免费观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 99热网站在线观看| 久久久久性生活片| 国产探花极品一区二区| 久久中文看片网| 午夜福利视频1000在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 91av网一区二区| 亚洲国产精品成人综合色| 直男gayav资源| 成人特级黄色片久久久久久久| 深夜精品福利| 久久精品国产亚洲网站| 天天一区二区日本电影三级| 国产一区亚洲一区在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 三级经典国产精品| 国产精品,欧美在线| 老司机影院成人| 欧美变态另类bdsm刘玥| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久国内精品自在自线图片| 日韩成人伦理影院| 久久久久久久久大av| 国内精品宾馆在线| 免费看光身美女| 亚洲av.av天堂| 人妻少妇偷人精品九色| 国产精品1区2区在线观看.| 亚州av有码| 国产中年淑女户外野战色| 久久鲁丝午夜福利片| 久久久久久久久大av| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲欧洲国产日韩| 日韩 亚洲 欧美在线| 欧美日韩国产亚洲二区| 免费电影在线观看免费观看| 久99久视频精品免费| 国产伦理片在线播放av一区 | 日韩一区二区三区影片| 在线观看免费视频日本深夜| 舔av片在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产高清有码在线观看视频| 一本精品99久久精品77| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日日摸夜夜添夜夜爱| 一本精品99久久精品77| 日韩欧美精品v在线| 能在线免费看毛片的网站| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产真实伦视频高清在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 91精品一卡2卡3卡4卡| 搡女人真爽免费视频火全软件| 99在线视频只有这里精品首页| 91精品一卡2卡3卡4卡| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久久久网色| 免费av不卡在线播放| 长腿黑丝高跟| 国产精品久久电影中文字幕| av天堂在线播放| 欧美在线一区亚洲| 国产探花在线观看一区二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲性久久影院| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久久久性生活片| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 舔av片在线| 亚洲第一电影网av| 久久精品人妻少妇| 禁无遮挡网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产精品日韩av在线免费观看| 99久国产av精品| 国产精品福利在线免费观看| 最新中文字幕久久久久| 色综合站精品国产| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产成人91sexporn| 99久久无色码亚洲精品果冻| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 91狼人影院| 亚洲自拍偷在线| 日本免费a在线| 欧美丝袜亚洲另类| 久久久久久久久久成人| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产亚洲精品久久久com| 色5月婷婷丁香| 少妇人妻 视频| 人妻少妇偷人精品九色| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 午夜久久久在线观看| 自线自在国产av| 久久免费观看电影| 国产在视频线精品| 九草在线视频观看| 国产高清国产精品国产三级| 一级爰片在线观看| 久久精品国产自在天天线| 午夜激情av网站| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲三级黄色毛片| 日韩大片免费观看网站| 午夜精品国产一区二区电影| 黄片无遮挡物在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 两个人免费观看高清视频| 极品人妻少妇av视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产免费现黄频在线看| 人人澡人人妻人| 国产一区有黄有色的免费视频| 制服诱惑二区| 三级国产精品片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久久a久久爽久久v久久| 国产 一区精品| 亚洲精品日本国产第一区| 久久久久久久久久久免费av| 人人澡人人妻人| 精品一区二区三卡| 国产伦精品一区二区三区视频9| 麻豆乱淫一区二区| 日韩一本色道免费dvd| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 色5月婷婷丁香| 一本色道久久久久久精品综合| 性色av一级| 九草在线视频观看| 黑人高潮一二区| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产在线视频一区二区| av免费在线看不卡| 如何舔出高潮| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美日韩av久久| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲精品久久午夜乱码| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 中文字幕最新亚洲高清| 午夜影院在线不卡| 亚洲精品乱久久久久久| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 黄色怎么调成土黄色| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 极品人妻少妇av视频| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 日韩成人伦理影院| av天堂久久9| 成年女人在线观看亚洲视频| 美女国产视频在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产 一区精品| 免费黄色在线免费观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 看十八女毛片水多多多| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜免费男女啪啪视频观看| 激情五月婷婷亚洲| 精品一品国产午夜福利视频| xxx大片免费视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久99蜜桃精品久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 22中文网久久字幕| a级毛片黄视频| 高清午夜精品一区二区三区| 插阴视频在线观看视频| 波野结衣二区三区在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久热这里只有精品99| 一级毛片 在线播放| 如何舔出高潮| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 热99国产精品久久久久久7| 欧美最新免费一区二区三区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 免费高清在线观看日韩| 99九九在线精品视频| 少妇高潮的动态图| 亚洲,一卡二卡三卡| 在线播放无遮挡| 一级毛片电影观看| 久久久欧美国产精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 免费人成在线观看视频色| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 97在线人人人人妻| 五月伊人婷婷丁香| 狠狠精品人妻久久久久久综合| av播播在线观看一区| 久久人人爽人人片av| 久久热精品热| 在线免费观看不下载黄p国产| 男的添女的下面高潮视频| 99久久精品国产国产毛片| 99精国产麻豆久久婷婷| 最后的刺客免费高清国语| 久久鲁丝午夜福利片| 色视频在线一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 天堂8中文在线网| 热99久久久久精品小说推荐| 国国产精品蜜臀av免费| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕最新亚洲高清| 人妻一区二区av| 制服人妻中文乱码| a级片在线免费高清观看视频| 国产亚洲最大av| 在线观看免费视频网站a站| 日韩中文字幕视频在线看片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 在线观看三级黄色| 在线观看免费视频网站a站| 一级片'在线观看视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲av男天堂| 一个人免费看片子| 精品午夜福利在线看| 日本91视频免费播放| 国产成人免费观看mmmm| av在线老鸭窝| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 成年av动漫网址| 婷婷色综合大香蕉| 午夜精品国产一区二区电影| 极品人妻少妇av视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 精品卡一卡二卡四卡免费| av专区在线播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 九色亚洲精品在线播放| 国产在线免费精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产69精品久久久久777片| 九九在线视频观看精品| 9色porny在线观看| 日韩视频在线欧美| 亚洲熟女精品中文字幕| 色婷婷久久久亚洲欧美| 精品酒店卫生间| 国产精品三级大全| 亚洲av在线观看美女高潮| 18在线观看网站| 国产在视频线精品| 黄色配什么色好看| 97在线视频观看| 午夜福利视频在线观看免费| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲精品第二区| 男女免费视频国产| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲性久久影院| √禁漫天堂资源中文www| 日本欧美视频一区| 91久久精品国产一区二区三区| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 一区二区三区免费毛片| 国产成人精品久久久久久| 成年人午夜在线观看视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 一边摸一边做爽爽视频免费| 观看av在线不卡| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产成人91sexporn| 久久久久久久亚洲中文字幕| xxx大片免费视频| av专区在线播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 午夜福利,免费看| av在线播放精品| 五月开心婷婷网| 国模一区二区三区四区视频| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 成人手机av| 18禁动态无遮挡网站| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲av.av天堂| 夜夜爽夜夜爽视频| 在线观看国产h片| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 只有这里有精品99| 久热久热在线精品观看| 久久久久久伊人网av| 国产高清三级在线| 男女国产视频网站| 看免费成人av毛片| 最后的刺客免费高清国语| 三级国产精品欧美在线观看| 人妻系列 视频| 中文欧美无线码| 国产爽快片一区二区三区| 一级毛片 在线播放| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 多毛熟女@视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲色图综合在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| av女优亚洲男人天堂| 国产精品 国内视频| 久久精品国产亚洲网站| 最新中文字幕久久久久| 日本欧美视频一区| 一级二级三级毛片免费看| 九草在线视频观看| 久久国内精品自在自线图片| 国产永久视频网站| 如何舔出高潮| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 精品一品国产午夜福利视频| 国产成人av激情在线播放 | 免费大片18禁| 色网站视频免费| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产一区二区三区av在线| 妹子高潮喷水视频| 少妇人妻 视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久ye,这里只有精品| 99re6热这里在线精品视频| 丝袜美足系列| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产精品久久久久久久久免| 99热网站在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 在线免费观看不下载黄p国产| 五月伊人婷婷丁香| 久久久久久久亚洲中文字幕| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品.久久久| 最近手机中文字幕大全| 日韩av不卡免费在线播放| 另类精品久久| 久久久久久伊人网av| 99久久精品一区二区三区| 免费观看性生交大片5| 黑丝袜美女国产一区| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩中字成人| 中文字幕久久专区| 黄片播放在线免费| 国产av码专区亚洲av| 丝袜脚勾引网站| 91国产中文字幕| 日日啪夜夜爽| 国产视频首页在线观看| 波野结衣二区三区在线| 最近2019中文字幕mv第一页| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 搡老乐熟女国产| 亚洲成色77777| 欧美日韩av久久| 国产熟女午夜一区二区三区 | 欧美性感艳星| 在线天堂最新版资源| 久久人人爽人人片av| 一区二区av电影网| 午夜视频国产福利| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 我的老师免费观看完整版| 亚洲精品中文字幕在线视频| 女人精品久久久久毛片| 日韩成人伦理影院| 国产在视频线精品| av播播在线观看一区| 丁香六月天网| 欧美性感艳星| 中文字幕人妻丝袜制服| 超碰97精品在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 一级毛片我不卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 99热这里只有精品一区| 国国产精品蜜臀av免费| 久久女婷五月综合色啪小说| 在线免费观看不下载黄p国产| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩一区二区视频免费看| 91久久精品国产一区二区成人| 男的添女的下面高潮视频| 中文字幕免费在线视频6| 精品久久久久久久久av| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品一区www在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 一级毛片aaaaaa免费看小| xxxhd国产人妻xxx| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 如何舔出高潮| 午夜久久久在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲国产色片| 亚洲欧洲国产日韩| 热99久久久久精品小说推荐| 一级毛片我不卡| 街头女战士在线观看网站| 国产色爽女视频免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品三级大全| 波野结衣二区三区在线| 国产视频内射| av免费在线看不卡| 99re6热这里在线精品视频| 五月天丁香电影| 26uuu在线亚洲综合色| 日韩电影二区| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品亚洲一区二区| av线在线观看网站| 国产亚洲最大av| 国产熟女欧美一区二区| 婷婷成人精品国产| 国产男女内射视频| 免费高清在线观看日韩| 国产亚洲一区二区精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 99热网站在线观看| 亚洲久久久国产精品| 美女国产高潮福利片在线看| 日本wwww免费看| 欧美激情 高清一区二区三区| 大香蕉97超碰在线| 欧美bdsm另类| 免费看不卡的av| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 99久国产av精品国产电影| 国产免费一级a男人的天堂| 99热全是精品| 国产一区二区在线观看日韩| 新久久久久国产一级毛片| 精品久久久久久久久av| 国产成人一区二区在线| 毛片一级片免费看久久久久| 天堂中文最新版在线下载| a 毛片基地| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产在线一区二区三区精| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产精品人妻久久久久久| 久久97久久精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产精品国产三级专区第一集| 18禁观看日本| 777米奇影视久久| 久久av网站| av国产久精品久网站免费入址| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日日撸夜夜添| 考比视频在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 蜜桃国产av成人99| 日韩大片免费观看网站| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日日摸夜夜添夜夜爱|