非諾貝特及二甲雙胍對非酒精性脂肪性肝病大鼠的干預作用及機制 *

非諾貝特及二甲雙胍對非酒精性脂肪性肝病大鼠的干預作用及機制*

黎瑤唐明薇邱平蘭天梅希

(成都醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院 內分泌科， 四川 成都 610500)

【摘要】目的比較過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)和腺苷一磷酸激活蛋白激酶α(AMPKα)的配體非諾貝特和二甲雙胍對非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的干預作用并探討其可能機制。方法Wistar大鼠分別予正常飼料喂養(yǎng)(對照組，Control)和高脂飲食喂養(yǎng)16周后又分為高脂飲食組(HF)、高脂飲食加非諾貝特組(FF)及高脂飲食加二甲雙胍組(Met)每組12只，并繼續(xù)喂養(yǎng)4周后檢測：①測血清甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、谷丙轉氨酶(ALT)、空腹血糖、胰島素含量。②取肝組織測TG含量。③肝組織HE染色觀察病理形態(tài)。④RT-PCR及Western-blot分別檢測肝臟AMPKα1和2、PPARα、乙酰輔酶A羧化酶(ACC)、肉堿酯酰轉移酶1(CPT-1)的mRNA及蛋白含量。⑤測肝組織丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。結果①高脂飲食可升高血脂質譜、ALT和空腹血糖(P<0.05)，非諾貝特及二甲雙胍均能改善血脂(P<0.05)，但非諾貝特不能糾正ALT、空腹血糖(P>0.05)，而二甲雙胍可改善上述指標(P<0.05)。②高脂飲食可使肝臟TG含量增加(P<0.05)，非諾貝特不能糾正高脂飲食誘導的肝臟TG增加(P>0.05)，而二甲雙胍則使其降低(P<0.05)。③高脂飲食組肝臟病理學形態(tài)提示NAFLD改變；給予非諾貝特病理學較單純高脂飲食組形態(tài)無改善，而二甲雙胍病理學形態(tài)有所改善。④高脂飲食組AMPKα1、CPT-1的蛋白及mRNA表達下降、PPARα和ACC蛋白及mRNA表達升高(P<0.05)；非諾貝特顯著升高PPARα及CPT-1蛋白及mRNA表達(P<0.05)，而二甲雙胍以升高AMPK及恢復ACC的蛋白及mRNA表達為主(P<0.05)。⑤高脂飲食組肝組織MDA含量增加、SOD含量下降(P<0.05)，非諾貝特使得下降的MDA回升(P<0.05)，二甲雙胍降低則進一步降低MDA、升高SOD(P<0.05)。結論非諾貝特雖能降低血脂，但不能改善NAFLD，而二甲雙胍可改善NAFLD，可能與非諾貝特過度激活PPARα導致脂質過氧化損傷，而二甲雙胍則以激活AMPK為主，導致胰島素抵抗改善、脂肪合成下降、分解適度增加有關。

【關鍵詞】非諾貝特; 二甲雙胍; 過氧化物酶體增殖物激活受體α; AMP激活的蛋白激酶; 非酒精性脂肪性肝病

【中圖分類號】R 575.2`+9

【文獻標志碼】A

doi：10.3969/j.issn.1672-3511.2015.10.003

Abstract【】ObjectiveTo compare the different effects on NAFLD of Metformin and fenofibrate, the ligand of PPARaαand AMPKαrespectively. MethodsWistar rats received normal diet (control group) and high fat diet. After 16 weeks, the latter group was divided into high diet group (HF), high fat diet pulse fenofibrate group (FF), and high fat diet pulse metformin group (Met). All rats were feed for the next 4 weeks. TG, CHO, LDL-C, ALT, fast glucose and insulin were measured. TG in hepatic tissue was detected. The pathological change of hepatic tissue was observed with HE staining. The mRNA and protein contents of AMPKα1, 2, PPARα, ACC and CPT-1 were detected with RT-PCR and Western-blot. ⑤ The contents of MDA and SOD in hepatic tissue were detected. Results High fat diet would elevate blood lipid, ALT, and fasting glucose(P<0.05), while fenofibrate and metformin could correct the change of blood lipid induced by high fat diet(P<0.05). Metfirmin could improve blood glucose and ALT, but fenofibrate could not(P>0.05). High fat diet elevated liver TG. Fenofibrate could not correct the increased liver TG(P>0.05), but metformin could(P<0.05). High fat diet induced the liver steatosis. Metformin improved liver pathology morphology, while fenofibrate could not. The mRNA and protein expression of AMPKα1 and CPT-1 were decreased in High fat diet group (P<0.05),

基金項目：四川省衛(wèi)生廳科研課題(120478)

收稿日期：( 2015-04-09； 編輯： 陳舟貴)

The effects and mechanism of Fenofibrate and Metformin on nonalcoholic fatty liver disease in ratsLI Yao, TANG Mingwei, QIU Ping,etal

(DepartmentofEndocrinology,ChengduMedicalCollegeHospital,Chengdu610500,China)

while that of PPARαand ACC were increased(P<0.05). Fenofibrate raised mRNA and protein of PPARα and CPT-1(P<0.05), while metformin mainly rised AMPK and restored the ACC protein and mRNA expression(P<0.05). High fat diet could elevate MDA content in liver and decline SOD(P<0.05). Fenofibrate raised MDA further, while metformin reduced MDA and raised SOD(P<0.05). ConclusionsFenofibrtae could reduced blood lipid, but cannot improved NAFLD, while metformin could improve NAFLD, which may be concerned with the oxidative damage induced by excessive activation of PPARα by fenofibrate. Metformin was mainly activating AMPK, resulting in an improvement of insulin resistance, and a decline of fat synthesis, and a modest increase of fat decomposition.

【Key words】Fenofibrate; Metformin; PPARaα; AMPKα; NAAFLD

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外飲酒、病毒性肝炎、自身免疫性肝炎以及遺傳性肝病等病因，以彌漫性肝細胞脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征[1]。甘油三酯(TG)在肝臟中沉積是NAFLD的使動因素，如何促進肝細胞中TG的分解、抑制其合成是治療NAFLD的重要研究方向。臨床廣泛使用的調脂藥非諾貝特能促進脂肪酸β氧化，降低血TG，理論上能改善肝臟脂肪沉積，但目前尚無有利的臨床證據(jù)支持其在NAFLD中的應用。胰島素抵抗(IR)在NAFLD的發(fā)病機制中起著重要作用[2]，二甲雙胍作為胰島素增敏劑，主要通過激活AMP蛋白激酶AMPK( AMP Activated Potein Kinase) 發(fā)揮作用[3], AMPK是細胞內能量代謝的調節(jié)因子[4]，同時參與了胰島素敏感性的調節(jié)[5]，在脂代謝中也有重要調節(jié)作用。本研究擬比較非諾貝特及二甲雙胍對大鼠NAFLD的作用并探討可能機制，為NAFLD的治療提供臨床思路。

1材料和方法

1.1實驗分組將48只5周齡180～200g清潔二級雄性Wistar大鼠(購自四川大學動物實驗中心)適應性喂養(yǎng)1周后隨機分為4組，對照組12只(Control)給予標準飼料，其中碳水化合物熱卡占61%，脂肪熱卡占11%。剩余36只給予高脂飲食，其中脂肪熱卡占59%，以飽和脂肪酸(豬大油)為主，共16周后隨機分為3組，分別為高脂飲食組12只(HF組)，繼續(xù)給予高脂飲食；高脂飲食加非諾貝特組12只(FF組)，給予高脂飲食加非諾貝特80mg/kg[6](0.2g/粒，法國利博福尼制藥公司)，每天定時灌胃，持續(xù)4周和高脂飲食加鹽酸二甲雙胍組12只(Met組)，給予高脂飲食加鹽酸二甲雙胍50mg/d·kg(0.5g/粒，中美上海施貴寶制藥有限公司),每日定時灌胃，持續(xù)4周。共20周后稱重、腹腔注射麻醉后，腹腔靜脈取血以制備血清行生化檢測后處死動物，取出肝臟，取肝組織冰凍切片備用，余肝組織在-70℃低溫冰箱保存。

1.2　檢測方法

1.2.1生化指標測定全自動生化儀測定血清甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)，葡萄糖氧化酶法測空腹葡萄糖(GLU)。

1.2.2肝臟組織中TG(Liver-TG)含量測定大鼠同一部位肝臟組織準確稱量100mg，加入氯仿一甲醇(1:1)抽提液，組織勻漿，靜置18h后，3000/pm離心10min，上層為水相，吸取下層有機相，4℃冰凍保存，采用全自動生化分析儀，檢測肝勻漿甘油三醋(TG)。

1.2.3病理切片觀察肝細胞形態(tài)學改變取肝組織冰凍切片，行常規(guī)HE染色，觀察肝細胞形態(tài)學改變。

1.2.4AMPK, PPARα, 乙酰輔酶A羧化酶(ACC), 肉堿酯酰轉移酶1(CPT-1)mRNA和蛋白表達改變采用Trizol試劑提取總RNA，取100mg肝組織，按說明書操作，RNA于紫外分光光度計定量后于-80℃保存。采用反轉錄反應試劑盒合成cDNA，按照說明書操作。PCR反應條件：95℃3min，93℃1min，55℃1min，72℃1min，40個循環(huán)；72℃10min。于每個循環(huán)延長反應最后時刻收集熒光信號。溶解曲線設置：95℃1s，60℃2min，以0.2℃/s的升溫速度升溫至95℃，升溫是連續(xù)收集熒光信號。應用實時熒光定量PCR儀(ABI Prism 7500 Detection System)檢測。PCR引物由上海生物工程公司合成，引物設計，見表1。

表1　RT-PCR引物設計.

Western blot方法監(jiān)測蛋白水平表達在冰凍緩沖液中研碎肝臟組織，提取蛋白，在4℃20000r/min,離心20min,小心吸取上清，用BCA法，用標準蛋白擬合曲線，計算蛋白濃度，確定上樣量。取50μg蛋白在95℃溫度下變性5min，SDS-PAGE電泳并轉移到PVDF膜。封閉1h，應用AMPKα1，AMPKα2(Abcam)抗體孵育， 加5ulⅡ抗(1∶2000稀釋)與10ml封閉緩沖液中充分混勻，加入硝纖膜，吸干過多液體，保鮮膜包裹硝纖膜，置于曝光合中曝光、顯影、定影。GAPDH為內參照，用多功能數(shù)字像分析儀Kodak Digital Science ID軟件分析。

1.2.5肝組織丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)測定肝組織100mg，常規(guī)4℃制備10%肝勻漿，MDA采用TBA法按試劑盒操作步驟進行檢測；SOD采用黃嘌呤氧化酶法，按試劑盒操作。

2結果

2.1血生化檢測結果(見表2)大鼠給予高脂飲食喂養(yǎng)4月后，出現(xiàn)明顯的血脂譜升高，TG、CHO 及LDL-C 較正常對照組分別升高63.1%、45.18%和151.42%(均P<0.01)。FF組較HF組血脂譜有明顯改善(P<0.01)，TG、CHO下降尤為明顯(P<0.05)，與正常對照組相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；FF組LDL-C也明顯降低，與HF組相比有差異(P<0.05)，但與正常對照組相比尚高(P<0.05)。同樣，Met組相比HF組，TG, CHO全面下降(P<0.05)；但相比FF組下降幅度較低，尚有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

HF組較對照組血清葡萄糖水平升高(P<0.05)，F(xiàn)F組與HF組相比血糖無明顯下降(P>0.05)，Met組與HF組比較血糖明顯下降(P<0.05)，與對照組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

HF組較對照組血清胰島素水平增加(P<0.01)；FF組較對照組仍明顯升高(P<0.01)；但與Met組比較胰島素水平明顯降低。

表2　各組大鼠血脂、血糖、空腹胰島素、ALT及肝臟TG含量檢測結果比較

注：與對照組相比，①P<0.05，②P<0.01;與HF組相比，③P<0.05,④P<0.01;與FF組相比，⑤P<0.05,⑥P<0.01

2.2肝臟形態(tài)學改變對照組肝小葉結構完整，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝細胞分界清晰，細胞內未見明顯脂滴，形態(tài)未見異常(見圖1a)。高脂飲食的HF組肝小葉結構不清，肝細胞索紊亂，肝細胞廣泛濁腫變性，細胞氣球樣變，胞漿內小脂滴形成(見圖1b)。高脂飲食的FF組肝小葉鏡下形態(tài)相似于高脂飲食組，肝細胞腫脹變性、細胞內脂滴形成，可見少量炎細胞浸潤(見圖1c)。高脂飲食的Met組肝小葉結構較完整，相似于正常對照組，細胞結構基本恢復正常，但小灶區(qū)域仍可見肝細胞索輕度紊亂，肝細胞輕度水腫(見圖1d)。

2.3各組大鼠肝臟TG含量高脂喂養(yǎng)后大鼠肝臟TG含量明顯增加(P<0.05)；但給予非諾貝特后雖然血中TG含量明顯下降，肝組織中TG含量與HF組相比無明顯改善(P>0.05)；而給予二甲雙胍后肝臟中TG明顯減少，接近正常飲食組，與HF組及FF組相比均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

2.4各組大鼠MDA和SOD含量高脂飲食增加MDA含量，HF組與對照及HF組相比均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，二甲雙胍能降低高脂飲食誘導的MDA含量的上升Met組，與HF組及FF組相比均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

高脂飲食及非諾貝特均降低SOD含量，二甲雙胍能基本恢復高脂飲食導致的SOD的下降，Met組與HF組及FF組相比差異顯著(P<0.05)。見表3。

表3　各組大鼠MDA和SOD含量比較

注：與對照組相比，①P<0.05;與HF組相比，②P<0.05;與FF組相比，③P<0.05

圖1肝臟的形態(tài)學改變(HE染色，×400)

Figure 1Morphological changes of the liver

注：a.正常對照;b.HF組：細胞腫脹、胞漿內脂滴形成;c. FF組：細胞腫脹、胞漿內脂滴形成，可見少量炎性細胞;d. Met組：細胞結構基本恢復正常，但箭頭處仍可見小灶區(qū)域肝細胞輕度水腫。

2.5RT-PCR檢測AMPKmRNA、 PPARαmRNA、 ACCmRNA和CPT-1mRNA表達ACC是催化脂肪酸合成代謝第一步反應的限速酶，是評估脂肪酸合成代謝的重要酶；CPT-1催化脂肪酸轉運至線粒體基質進行β氧化，是脂肪酸氧化分解的限速酶。本實驗選擇ACC和CPT-1分別作為脂肪酸合成和分解代謝的指標，見圖2。

2.5.1AMPKα1mRNA在各組的變化與對照組比較，高脂飲食能明顯降低其表達(P<0.05)；非諾貝特能部分恢復單純高脂飲食導致的改變，但與HF及對照組相比均未達到統(tǒng)計學差異；而二甲雙胍則能更顯著的引起表達的上升，與HF組相比有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

2.5.2AMPKα2mRNA在各組的變化HF組與對照相比無明顯變化(P>0.05), 但FF組相比對照及HF組均升高(P<0.05);二甲雙胍引起更顯著的升高，與對照、HF及FF組相比均P<0.01。

2.5.3PPARαmRNA在各組的變化與對照相比，高脂飲食能增加其表達(P<0.01)，而FF組增加更為顯著，與正常對照及HF組相比分別P<0.01、P<0.05；二甲雙胍也能增加表達量，與正常對照及HF組相比分別P<0.01、P<0.05，但相較FF組有所降低(P<0.05)。

2.5.4ACCmRNA在各組的變化高脂飲食能明顯增加其表達量，相比對照組(P<0.05)；菲諾貝特能部分恢復其表達，但與HF相比未達到統(tǒng)計學差異(P>0.05)；而二甲雙胍明顯恢復其表達量，與對照相比無差異，與HF相比P<0.05。

2.5.5CPT-1mRNA在各組的表達高脂飲食降低其表達(P<0.05)；FF組與對照及HF組相比分別P<0.05、P<0.01；二甲雙胍相比對照無差異，相比FF組有所降低，與HF及FF組均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

2.6Western blotting方法監(jiān)測蛋白水平表達,見圖3。

2.6.1AMPKα1高脂飲食能降低其表達；相比HF組，F(xiàn)F組及Met組均能升高其表達(P<0.05),Met組升高更顯著，與對照組及FF組相比(P<0.05)。

2.6.2AMPKα2高脂飲食能顯著降低其表達，相比HF組，F(xiàn)F組及Met組均能升高其表達(P<0.05)，但FF組尚未達到對照組水平(P<0.05)，而Met組與對照無差異，與HF組及FF組相比均明顯升高(P<0.05)。

圖2RT-PCR檢測各組大鼠肝臟AMPKα1、AMPKα2、PPARα、ACC、CPT-1的mRNA相對表達

Figure 2The relative mRNA levels of AMPKα1，AMPKα2，PPARα，ACC and CPT-1 by RT-PCR

注：與對照組相比，①P<0.05，②P<0.01；與HF組相比，③P<0.05,④P<0.01；與FF組相比，⑤P<0.05

2.6.3PPARα高脂飲食能升高其表達相比HF組，F(xiàn)F組及Met組其表達進一步升高，分別為P<0.01和P<0.05，Met相比FF組有所下降(P<0.05)。

2.6.4ACC高脂飲食增加ACC蛋白表達；與HF組相比，F(xiàn)F組及Met組表達均下降(P<0.05)，Met組進一步降低，與FF組相比表達有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

2.6.5CPT-1高脂飲食降低CPT-1蛋白表達；FF組及Met組升高其表達，與HF組相比，分別為P<0.01和P<0.05；FF組升高更為明顯，相比Met組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

圖3Western-blot檢測各組大鼠肝臟AMPKα1、AMPKα2、PPARα、ACC、CPT-1的蛋白表達

Figure 3The protein expressions of AMPKα1，AMPKα2，PPARα，ACC and CPT-1 by Western-blot

注：與對照組相比，①P<0.05，②P<0.01;與HF組相比，③P<0.05或P<0.01;與FF組相比，④P<0.05

3討論

NAFLD隨著肥胖、脂代謝紊亂等的流行，已成為肝功能異常、慢性肝臟疾病最常見的原因[7，8]。其發(fā)病率有年輕化趨勢，患病率在10%左右[9]。其病理改變從最初的單純肝脂肪變可進展為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、最終可致肝硬化、肝癌[1]。其典型病理特征為大量中性脂質，尤其是甘油三酯(TG)在肝細胞的沉積而導致的肝細胞脂肪變性，以及過量脂質氧化產(chǎn)生的活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)導致的肝細胞炎癥及纖維化等改變。肝臟的脂質沉積及IR在NAFLD的發(fā)病中有著重要作用，大量的資料證實，高脂環(huán)境可以損害包括肝臟、骨骼肌、脂肪組織等在內的胰島素靶器官對胰島素和敏感性[10]，在肝臟則引起肝臟組織的IR，是NAFLD的重要原因。本研究采用高脂飲食喂養(yǎng)大鼠4月，使大鼠血TG, CHO,LDL-C全面升高，血ALT升高，空腹胰島素水平升高，提示IR的存在；此外，肝臟病理學檢查提示肝細胞脂肪變性，提示成功誘導NAFLD動物模型。

盡管NAFLD進展緩慢，但隨訪10～20年NASH患者肝硬化的發(fā)生率高達15%～29%[11,12],且部分可進展為肝細胞肝癌,故及早防治NAFLD具有重要意義。但遺憾的是目前尚無有確切證據(jù)的NAFLD治療藥物，Oh MK[8]綜述了目前的幾種針對NAFLD可能有潛在治療作用的藥物的臨床實驗，其中包括二甲雙胍及PPARα配體類藥物，提示二甲雙胍可能對NAFLD有治療作用，但缺乏大樣本的臨床實驗驗證；而調脂藥物由于缺乏臨床數(shù)據(jù)，對NAFLD的治療尚不明確。有研究[13]提示非諾貝特雖能明顯改善NAFLD患者的血脂譜，甚至能降低轉氨酶，但NAFLD的程度并未得到改善。Bajaj M[14]發(fā)現(xiàn)吡格列酮能降低Ⅱ型糖尿病患者肝臟脂肪含量，而非諾貝特并無此作用。臨床研究顯示二甲雙胍能改善NAFLD患者的胰島素抵抗，降低ALT,AST，減小肝臟體積[15]。上述實驗提示提示對于改善肝臟脂質沉積而言提高胰島素敏感性可能較改善血脂譜更重要。

本實驗發(fā)現(xiàn)，高脂飲食加二甲雙胍能改善單純高脂飲食誘導的血脂譜的升高，降低血ALT水平，降低血胰島素水平；同時能降低肝組織中的TG含量；此外，通過病理學的證據(jù)也證實，相比較單純高脂飲食組，高脂飲食加二甲雙胍能改善肝臟病理形態(tài)，減少肝臟組織中TG含量，減輕肝臟脂質沉積。本實驗證實，二甲雙胍對NAFLD有治療作用。而相比較單純高脂飲食，高脂飲食加非諾貝特雖能全面降低血中的TG、CHO、LDL-C,但肝臟中的TG含量并未改善，ALT水平無變化，空腹胰島素水平無改善，病理學檢查提示肝細胞脂肪變性無改善，炎癥改變似乎更明顯。上述結果提示非諾貝特雖能降低血脂，但并不能改善IR, 不能減輕肝臟脂肪沉積及NAFLD。二甲雙胍及非諾貝特均能改善血脂。

二甲雙胍作為一種臨床應用已有50余年歷史的降糖藥物，其主要作用為改善胰島素敏感性，特別是肝臟和肌肉組織的IR，其藥理學機制主要是經(jīng)由AMPK途徑調節(jié)體內糖及脂質代謝，由Zhou等[16]首次發(fā)現(xiàn)。其實驗發(fā)現(xiàn)在大鼠離體肝臟細胞和骨骼肌組織中，二甲雙胍可以激活AMPK，使AMPK底物乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)活性降低，增加脂肪酸氧化，抑制脂肪合成，促進骨骼肌的葡萄糖攝取。后來的研究發(fā)現(xiàn)AMPK是細胞內能量代謝的重要調控因子，可通過感受ATP/AMP的變化來調節(jié)細胞內糖及脂肪的代謝[17,18]，研究發(fā)現(xiàn)[19]其與糖脂代謝紊亂有關的疾病如代謝綜合征、Ⅱ型糖尿病、肥胖、FAFLD等疾病密切相關。AMPK與胰島素敏感性密切相關，發(fā)現(xiàn)，肥胖的IR患者較同樣肥胖的非IR患者AMPK活性降低，氧化應激水平增高，提示激活AMPK可以改善IR，降低氧化應激。PPARα是脂肪酸氧化調節(jié)的重要因子，近年來認為AMPK與PPARα之間存在一定聯(lián)系[20]，二者均參與了脂代謝過程中的一些重要酶的調節(jié)。本實驗證實，二甲雙胍能增加明顯肝臟組織中AMPKα1、2的mRNA的改變，改善高脂飲食誘導的AMPK1、2蛋白表達的下降，相較非諾貝特而言輕度增加PPARαmRNA及蛋白表達；此外，促進脂肪合成的酶ACCmRNA及其蛋白表達水平均下降，而促進脂肪分解的CPT-1mRNA及其蛋白表達均升高，提示二甲雙胍對NAFLD的改善可能源于對脂肪合成的抑制以及對脂肪分解的增強，而脂肪代謝的改變可能與其對AMPK及PPARα的調節(jié)有關。

非諾貝特作為過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)的配體，通過激活PPARα，增強脂肪酸的氧化，理論上能抑制TG在肝臟的聚集，改善NAFLD。Motawi TM等[21]發(fā)現(xiàn)非諾貝特同時也能激活高脂飲食喂養(yǎng)的大鼠的肝臟AMPK1α的表達，上調CPT-1mRNA的表達，促進脂肪酸氧化，降低血脂質譜，但并未觀察肝臟病理形態(tài)上的改變。本實驗也證實非諾貝特不能改善肝臟病理形態(tài)。同時還發(fā)現(xiàn)，非諾貝特導致的的AMPKα1和2的mRNA及蛋白水平較HF組雖有所增加，但不及二甲雙胍組明顯，而PPARαmRNA及蛋白水平卻比二甲雙胍組更明顯，促進脂肪分解的CPT-1的表達遠較二甲雙胍增高明顯，而促進脂肪合成的ACC的下降則不如二甲雙胍明顯。通過上述對比不難發(fā)現(xiàn)，非諾貝特較二甲雙胍激活PPARα的能力更強，更能促進脂肪分解，脂肪合成抑制作用相對較弱，提示非諾貝特組存在脂肪過度分解，脂質過氧化反應增強，可能與非諾貝特組的肝臟病理學形態(tài)改變有關。Chitturi 等[22]認為，PPAR 活化后會導致脂肪性肝炎的發(fā)生; Nishimura J等[23]也發(fā)現(xiàn)非諾貝特能增加CPT等活性，促進脂肪分解，但同時劑量依賴性地增加肝臟ROS含量，降低SOD水平，從而促進脂肪性肝炎的發(fā)生。本實驗同時也監(jiān)測了血中的脂質過氧化產(chǎn)物MDA及抗氧化物SOD水平，結果提示高脂飲食能明顯增加肝臟MDA含量，降低SOD含量，F(xiàn)F組較HF組MDA含量進一步升高，而二甲雙胍較非諾貝特能明顯降低MDA含量，增加SOD。上述結果提示FF組脂質過氧化損傷的存在，二甲雙胍能部分糾正單純高脂飲食的脂質過氧化狀態(tài)，與肝臟病理學形態(tài)結果相一致。

4結論

本文結果顯示，非諾貝特不能改善高脂飲食誘導的NAFLD，可能與PPARα過度激活，導致脂肪分解增強，從而導致脂質過氧化損傷的出現(xiàn)；而二甲雙胍能適當調節(jié)AMPK及PPARα的活性，改善IR，抑制脂肪合成，還可促進脂肪分解，避免肝臟脂肪沉積，同時避免脂質過氧化損傷的出現(xiàn)，從而改善NAFLD。

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